第三章動物實驗基本操作技能第一節(jié)實驗動物的種類實驗動物(experimentalanimal)指通過科學(xué)方法培育、繁殖和飼養(yǎng)而成并供醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實驗使用的動物。通過遺傳學(xué)與微生物學(xué)的控制，培育出來的個體具有較好的遺傳均一性以及對外來刺激的敏感性和實驗重復(fù)性，這些動物屬于高質(zhì)量的實驗動物。常用實驗動物的種類及其特點如下：一、青蛙與蟾蜍兩者均屬于兩棲綱，無尾目。是教學(xué)實驗中常用的小動物。青蛙和蟾蛛的心臟具有明顯的自律性，即使在離體情況下仍能保持較長時間的、有節(jié)奏地搏動，可用于機能學(xué)的實驗；其坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本常用于觀察各種刺激或藥物對外周神經(jīng)、橫紋肌或神經(jīng)-肌接頭的作用；蛙舌與腸系膜能作為觀察炎癥反應(yīng)和微循環(huán)變化的標本；蛙的腹直肌可用于鑒定膽堿能神經(jīng)藥物的作用。此外，還能用于水腫和腎功能不全實驗。二、小白鼠屬于哺乳綱，嚙齒目，鼠科。是醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實驗中用途最廣泛和最常用的動物。因其生長快，飼養(yǎng)消耗少，繁殖周期短，產(chǎn)仔多，溫順易捉，能復(fù)制出多種人類疾病的模型，適用于需大量動物的實驗。如半數(shù)致死量或半數(shù)有效量的測定、藥物的篩選、藥物效價比較等。也適用于避孕藥、抗腫瘤藥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、缺氧等方面的研究。三、大白鼠同屬于哺乳綱，嚙齒目，鼠科。牙齒鋒利，性情較兇，當(dāng)受驚、被挑逗或較強的刺激時容易發(fā)怒咬人。雄性大白鼠之間常發(fā)生毆斗和咬傷。大白鼠也具有小白鼠的其他優(yōu)點。因為可復(fù)制出多種的病理過程和疾病模型，對創(chuàng)傷的耐受性較強以及個體較小白鼠大，所以用途廣泛。一些在小白鼠身上不便進行的實驗可選用大白鼠進行研究，如水腫、炎癥、休克、胃酸分泌、胃排空、高血壓、心功能不全、臟器的缺血-再灌注損傷、黃疸、腎功能不全等。大白鼠的踝關(guān)節(jié)還用于觀察藥物抗炎作用等實驗。四、豚鼠又名天竺鼠、荷蘭豬。哺乳綱，嚙齒目，豚鼠科。性情溫順。對組胺敏感并易于致敏，故常選用于復(fù)制變態(tài)反應(yīng)性疾病的動物模型和研究抗過敏藥如平喘藥和抗組胺藥的實驗。豚鼠對結(jié)核菌敏感，故也常用于抗結(jié)核病藥的治療研究。此外，還用于鉀代謝障礙、酸堿平衡紊亂的實驗研究，豚鼠的心房和乳頭肌可用于心肌電生理等實驗。五、家兔屬哺乳綱，嚙齒目，兔科。品種多，常用的有青紫藍兔、中國本地兔（白家兔）、新西蘭白兔和大耳白兔。青紫藍兔體質(zhì)強壯，適應(yīng)性強，易于飼養(yǎng)，生長較快。中國本地兔（白家兔）抵抗力較青紫藍兔差。新西蘭白兔是引進的大型優(yōu)良品種，成熟兔體重在4?5.5kg。大耳白兔耳朵較長較大、血管清晰、皮膚白色，但抵抗力較差。家兔性情溫順，個體較大，便于靜脈注射、灌胃和取血。是機能學(xué)教學(xué)實驗中最常用的動物。可用于影響呼吸、血壓、尿生成和中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的因素以及藥物的實驗研究；還可用于水腫、炎癥、鉀代謝障礙、酸堿平衡紊亂、缺氧、DIC、休克、心力衰竭等研究。由于兔體溫變化較敏感，也常用于體溫實驗及致熱原檢測、發(fā)熱的實驗研究。六、貓與家兔相比，貓的血壓比較穩(wěn)定，對手術(shù)創(chuàng)傷的耐受性較好，故常用于觀察血壓的實驗。此外，貓也用于心血管藥、鎮(zhèn)咳藥和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物的實驗研究。七、狗哺乳綱，食肉目，犬科。對外環(huán)境適應(yīng)力強。嗅覺靈敏，血液、循環(huán)、消化和神經(jīng)系統(tǒng)均很發(fā)達，與人類較接近。狗易于馴養(yǎng)，經(jīng)過訓(xùn)練能很好地配合實驗；適用于多種急、慢性實驗，是最常用的大動物。狗作為實驗動物常用于胃腸蠕動及消化液的分泌、條件反射、高血壓模型的制作及治療、慢性毒理等慢性實驗。此外，還可用于血壓和呼吸的測量、酸堿平衡紊亂、DIC、休克以及實驗動物外科等實驗。由于狗的價格較昂貴，在教學(xué)實驗中不如一些中小動物常用。第二節(jié)實驗動物的品系關(guān)于實驗動物品系的分類，尚待統(tǒng)一明確；目前的分類命名有以下幾種。一、按遺傳學(xué)特征分類.近交系指通過連續(xù)20代或以上全兄弟姊妹或親子（子女與年青的父母）進行交配后進行培育而成的品系。近交系能消除動物種群的雜合性，因為經(jīng)過20代或以上近交培育后，動物個體之間有98%的遺傳位點是純合的，個體間遺傳差異很少。據(jù)此，近交系動物也稱為“純種”。近交系動物的生育能力和生活能力都降低甚至衰退，對外界環(huán)境因素的變化也比較敏感，從而增加飼養(yǎng)和繁殖的難度。由于近交系動物遺傳純合性高、個體間遺傳性狀差異小、特征穩(wěn)定等優(yōu)點，在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究的用途廣泛，如組織的移植以及腫瘤的研究等。某些近交系動物能自發(fā)或容易誘發(fā)某些疾病或腫瘤，成為相關(guān)方面研究的動物模型。.突變品系突變品系是在近交系動物的繁殖、培育過程中，由于下列原因而建立的動物品系：單個基因的突變、人為地將某個基因?qū)?、采用特定的交配方式使個別位點的基因處于雜合狀態(tài)。其中，某個位點上發(fā)生突變而培育出來的近交系亞系稱為突變同源近交系；通過基因?qū)敕椒ò岩粋€特定基因植入近交系的基因組內(nèi)培育出來的品系稱為同源近交系；采用特定交配方式保持個別位點的基因處于雜合狀態(tài)，這種方法培育出來的品系稱為分離近交系。同一突變品系的個體間遺傳特性極相似，表現(xiàn)出相同的遺傳缺陷或病態(tài)，如侏儒、無毛等。目前已培育出多種的自然具有某些疾病的突變品系，例如腫瘤鼠、白血病鼠、貧血鼠、糖尿病鼠、高血壓鼠和裸鼠（無胸腺、無毛）等。這些品系的動物大量應(yīng)用于相應(yīng)疾病的發(fā)病機制和防治研究，具有重大的價值。.雜交一代雜交一代又稱為系統(tǒng)雜交性動物，指由兩個近交系動物雜交生育的第一代后代。其遺傳性狀均等地決定于親本品系，每個位點上的等位基因分別來自父系和母系。假如親本品系間基因相同，雜交一代這個位點成為純合基因，否則便是雜合基因。雜交一代會攜帶許多雜合基因，但是其個體間在遺傳上是一致的。雜交一代能保持近交系動物的特點和雜交優(yōu)勢。近交系動物的適用范圍同樣適用于雜交一代，且有同樣的實驗效果。由于雜交一代具有雜合的遺傳組成，同時能接受2個親本品系的細胞、組織、器官以及腫瘤的移植，適用于免疫學(xué)等方面的研究。.封閉群又稱遠交群。是一個長時期與外界隔離，雌雄個體之間能夠隨機交配的動物群。1973年日本實驗動物研究會規(guī)定：5年以上不從外部弓I種,只在一定的群體中進行繁殖，為經(jīng)常提供實驗動物而進行生產(chǎn)的群體叫做封閉群。封閉群動物具有雜合特性并避免了近交，避免了出現(xiàn)近交衰退現(xiàn)象，可以大量繁殖生產(chǎn)。目前已培育出的封閉群動物有：昆明種小鼠、LACA小鼠、Wistar大鼠、NIH小鼠、青紫蘭兔、新西蘭兔等。中國昆明種小鼠，是目前使用最多的實驗動物。封閉群個體間存在雜合性，故反應(yīng)性具有差異；個體間的重復(fù)性和一致性不如近交系動物好。根據(jù)這些特點，封閉群動物一般適用于藥物篩選、毒理實驗和教學(xué)實驗使用。.非純系即一般任意交配繁殖的雜種動物。雜種動物具有旺盛的生命力，適應(yīng)性強，繁殖率高，生長快，易于飼養(yǎng)管理。個體差異大，反應(yīng)性不一致，實驗結(jié)果的重復(fù)性差；包含有最敏感的與最不敏感的兩種極端的個體，適用于篩選性實驗。雜種動物較經(jīng)濟，在教學(xué)實驗中最常用。.轉(zhuǎn)基因動物(transgenicanimal) 是指以實驗方法導(dǎo)入外源DNA(包括同一物種DNA),在基因組內(nèi)穩(wěn)定整合并能遺傳給后代的一類動物。1981年，人類第一次成功地將外源基因?qū)雱游锱咛ィ瑒?chuàng)立了轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)。次年獲得轉(zhuǎn)基因小鼠。此后相繼成功地培育了轉(zhuǎn)基因兔、綿羊、豬、魚、昆蟲、牛、雞、山羊、大鼠等轉(zhuǎn)基因動物。根據(jù)不同的目的，轉(zhuǎn)基因動物可以簡單地劃分為四種類型：①疾病型轉(zhuǎn)基因動物；②利用轉(zhuǎn)基因動物制藥；③動物改良型；④基礎(chǔ)生物學(xué)研究。二、按微生物學(xué)特征分類根據(jù)對于微生物的控制狀況，一般分卷四個等級：第一級是無菌動物、第二級為特定病原體動物、第三級即為無特定病原體動物、第四級為一般動物。.無菌動物無菌動物是指體表、體內(nèi)各系統(tǒng)任何部位都檢不出微生物、寄生蟲的實驗動物。這種動物是在無菌條件下剖腹產(chǎn)出，在無菌的、恒溫、恒濕的條件下飼養(yǎng)，食品飲料等全部無菌，成本極為昂貴。.特定病原體動物是指附有特定而明確的微生物和寄生蟲的動物，由前述無菌動物與原有的此種特定病原動物同居，或符特定菌種人為地給予無菌動物身上，生羥成本亦甚昂貴。.無特定病原體動物（Specificpathogenfreeanimal,SPF動物）是指實驗動物沒有附存特定微生物或寄生蟲的動物。SPF動物飼養(yǎng)於隔離系統(tǒng)中，允^常態(tài)微生物自然定著，動物帶有已知的非病原微生物。以上三種動物統(tǒng)稱為悉生動物。因其繁殖飼養(yǎng)條件復(fù)雜，價格昂貴，故不適用于教學(xué)。但對某些醫(yī)學(xué)和生物研究具有重要意義。.帶菌動物這類動物可能帶有多種微生物和寄生蟲，甚至是致病的病原體。這類動物直接飼養(yǎng)于開放的環(huán)境中，其培育和飼養(yǎng)的成本低，常用于教學(xué)實驗。第三節(jié)實驗動物的選擇在醫(yī)學(xué)研究中實驗動物常作為人的替身，接受各種實驗。選擇實驗動物的原則如下。一、3R原則3R是指Reduction（減少）、Replacement（替代）和Refine-ment（優(yōu)化）。它們分別指減少試驗用的動物和實驗的次數(shù)；盡可能用替代物代替實驗動物，如用細胞組織培養(yǎng)方法等；對待實驗動物和動物實驗工作應(yīng)做到盡善盡美。二、從病原體的標準去選擇實驗動物科研實驗要選用三級或以上的實驗動物。這些動物已經(jīng)排除了人獸共患疾病，排除了實驗動物本身的傳染病以及影響實驗研究的相應(yīng)病原體；這樣能使實驗研究在沒有或很少有外源性干擾的情況下進行，保障實驗的順利進行和獲得可靠的數(shù)據(jù)。三、從遺傳學(xué)選擇實驗動物科研實驗應(yīng)參照實驗的要求分別選擇使用近交系、突變系、封閉群、雜交系及轉(zhuǎn)基因動物。如選擇近交系動物，應(yīng)參照其遺傳基因表達的表型。要求能在它們的行為、生理生化、壽命、疾病、解剖、藥物反應(yīng)、免疫、對病原體的感受性和生殖等方面表現(xiàn)出來。如A系與BALB/c兩個品系的小鼠在存活期、自發(fā)腫瘤、藥物反應(yīng)和生殖上都有明顯的差異。轉(zhuǎn)基因動物可根據(jù)其具體用途而選擇。例如，用轉(zhuǎn)基因技術(shù)等方法去掉豬的合成G抗原的半乳糖昔轉(zhuǎn)移酶基因可能克服器官移植排斥反應(yīng)。以上3項原則對于醫(yī)學(xué)科研實驗尤為重要。四、從效果上來選擇實驗動物實驗效果與選用的動物種屬、品系有密切關(guān)系。因此，應(yīng)先決定使用哪種類型動物；其次，選擇動物的品系類型，如是用近交系還是封閉群；最后，具體選擇實驗動物的品系。.種屬的選擇動物的種系不同，實驗效果也不相同。兔、雞、鴿、豬、狗、猴等動物飼以高膽固醇飲食，都可以誘發(fā)動物的高脂血癥或動脈粥樣硬化，但發(fā)病情況各不相同。家兔主要表現(xiàn)為主動脈粥樣硬化；而猴、豬除有主動脈粥樣硬化外，心冠狀動脈前降支也形成明顯的斑塊，可引起大片的心肌梗塞，情況與人較相似。盡管靈長類動物取得的實驗結(jié)果最有說服力；然而醫(yī)學(xué)實驗往往先考慮容易獲得且便宜的小型動物，如小鼠、大鼠、豚鼠、家兔等。必要時再過渡至狗、猴等大型動物。不同的動物可用于目的不同的實驗。例如，豚鼠易于致敏而成為過敏或變態(tài)反應(yīng)研究的首選動物；家兔體溫變化靈敏而常用于發(fā)熱及其相關(guān)實驗研究；大白鼠、家兔、狗常用于高血壓的研究；小白鼠和大白鼠常作為腫瘤研究的首選動物；家兔主動脈弓壓力感受器的傳入神經(jīng)在頸部自成一束的減壓神經(jīng)，成為研究減壓反射的首選動物；雄蛙常用作妊娠試驗觀察激素對排精的影響。.品系的選擇對同一致病刺激物，即使同一種系的不同品系動物，反應(yīng)也不同。例如，津白II號小鼠容易致癌；津白I號小鼠就不易致癌。五、個體的選擇同一品系的動物，對相同的刺激因素的反應(yīng)會存在著個體差異，其原因與性別、年齡、生理狀態(tài)和健康情況等有關(guān)。.性別不同性別對同一致病因素的反應(yīng)可不同。與雌性大鼠相比，采用雄性大鼠進行心臟缺血再灌注實驗容易成功。即使對性別無特殊需要，實驗設(shè)計的各組動物仍宜選用雌雄各半。若性別對實驗結(jié)果沒有影響，亦可雌雄不拘。.年齡一般而言，年幼動物較成年動物敏感。動物年齡可按體重來估計。大體上，成年小白鼠為20?30g；大白鼠為180?250g；豚鼠為450?700g；兔為2.2?2.5kg；貓為1.5?2.5kg；狗為9?15kg。急性實驗首選成年動物；慢性實驗最好選用年輕一些的動物。.生理及精神狀態(tài)妊娠、授乳等特殊生理狀態(tài)使動物的反應(yīng)性變化明顯。精神因素對實驗結(jié)果也有明顯的影響。當(dāng)動物遭遇恐嚇、虐待、創(chuàng)傷、疼痛等情況下，交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)高度興奮，從而明顯影響循環(huán)系統(tǒng)、機體的代謝以及免疫功能，甚至引致應(yīng)激性潰瘍等應(yīng)激性疾病。.健康性動物處于衰弱、饑餓、寒冷、疾病等情況下，實驗結(jié)果可信性下降。因此，應(yīng)該選用健康動物進行實驗；可參照下列外部特征判斷哺乳動物的健康狀況。(1)一般狀態(tài)：發(fā)育良好，眼睛有神，愛活動，反應(yīng)靈活，食欲良好。(2)頭部：眼結(jié)膜不充血，瞳孔明亮；眼和鼻無分泌物；呼吸均勻，無羅音，無鼻翼扇動和噴嚏。(3)皮毛：柔軟、有光澤、清潔，無脫毛和蓬亂現(xiàn)象；皮膚無真菌感染。(4)腹部：不膨大，肛門區(qū)清潔無稀便或分泌物。(5)外生殖器：無損傷，無膿痂或分泌物。(6)爪趾：無潰瘍和結(jié)痂。嚴格來說，動物健康的判斷應(yīng)包括微生物和寄生蟲的檢測、組織學(xué)的檢測等。第四節(jié)實驗動物的編號、抓拿與固定一、實驗動物的編號對實驗動物編號是為了辨認。狗、兔等大動物可用特制的金屬號碼牌固定于耳上。白色家兔和小動物可用黃色苦味酸溶液涂于身體特定部位的毛上標號。如編號1?10將小白鼠背部分前肢、腰部、后肢的左、中、右部共九個區(qū)域。從右到左為1?9號，第10號不涂黃色（圖3-1）。圖3-2圖3-2小鼠的捉拿及固定法圖3-1小白鼠背部的編號二、實驗動物的捉拿方法.蛙和蟾蜍用左手握持動物，以食指和中指夾住雙側(cè)前肢。搗毀腦和脊髓時，左手食指和中指夾持蛙或蟾蜍的頭部，右手將探針經(jīng)枕骨大孔向前刺入顱腔，左右擺動探針搗毀腦組織。然后退回探針向后刺入椎管內(nèi)破壞脊髓。固定方法根據(jù)實驗要求。.小鼠右手提起尾部，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，向后上方輕拉；此時小鼠前肢緊緊抓住粗糙面，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠頸背部皮膚并用小指和手掌尺側(cè)夾持其尾根部固定手中（圖3-2）。.大鼠捉拿及固定方法基本同小鼠。捉拿時，右手抓住鼠尾，將大鼠放在粗糙面上。用厚布蓋住大鼠，左手戴上防護手套；用左手抓住整個身體并用拇指和食指緊捏大鼠的下頜骨兩側(cè)，固定其頭部以防咬傷。捉拿時勿用力過猛，勿捏其頸部，以免窒息。大鼠在驚恐或激怒時易將實驗操作者咬傷，在捉拿時應(yīng)注意（圖3-3）。.豚鼠捉拿時以拇指和中指從豚鼠背部繞到腋下抓住豚鼠，另一只手托住其臀部。體重小者可用一只手捉拿，體重大者捉拿時宜用雙手（圖3-4）。.家兔一手捏住其頸背部皮膚，將兔輕輕提起，另一手托住其臀部（圖3-5）。.貓捉拿時先輕聲呼喚，慢慢將手伸入貓籠中，輕撫貓的頭、頸及背部，抓住其頸背部皮膚并以另一手抓其背部（圖3-6）。如遇兇暴的貓，可用套網(wǎng)捉拿。貓的爪和牙齒鋒利，勿被其抓傷或咬傷，必要時可用固定袋將貓固定。圖3-3大白鼠抓拿方法圖3-3大白鼠抓拿方法圖3-4豚鼠抓拿取方法圖3-6圖3-6貓抓拿方法圖3-5家兔抓拿方法三、實驗動物的固定.狗的固定方法(1)狗的捆綁抓狗時，二人需協(xié)作用特制的鉗式長柄夾分別夾住狗頸部和腰部并將狗掀翻在地，按下述方法捆綁其嘴，以免咬人：用一根粗繩兜住下頷，繞往上頷打一結(jié)(亦可不打結(jié))，然后將兩繩端繞向下頷再作一結(jié)，最后將兩繩端引至耳后，在頸項上打第三結(jié)，在該結(jié)上再打一活結(jié):圖3-7)。捆綁后可對狗麻醉，爾后立即解綁。狗嘴被捆綁后，動物只能用鼻呼吸，若鼻腔有多量粘液填積，可能造成窒息。有些麻醉藥可引起嘔吐，尤應(yīng)注意。(2)頭部的固定待狗處于麻醉狀態(tài)，將其固定在手術(shù)臺上。固定的姿勢，依手術(shù)或?qū)嶒瀮?nèi)容而定，一般多采取仰臥位或俯臥位。前者便于頸、胸、腹、股等部的實驗，后者便于腦和脊髓實驗。鐵制的狗頭夾用于固定狗頭并將狗固定于手術(shù)臺上。(3)四肢的固定四肢的固定一般在頭部固定以后。若動物取仰臥位，可將兩后肢分開，先用粗棉繩的一端繞成活結(jié)(圖3-8)縛扎于踝關(guān)節(jié)的上方；再將另一端分別縛在手術(shù)臺兩側(cè)的木鉤上。固定前肢時，前肢須平直放在軀干兩側(cè)。按上述方法用粗棉繩分別鈄綁縛左右前肢，再從狗背后交叉穿過，壓住對側(cè)前肢小腿，分別縛在手術(shù)臺兩側(cè)的木鉤上。圖3-7捆綁狗嘴的步驟 圖3-8綁扎動物四肢的扣結(jié).貓和兔的固定方法(1)頭部的固定固定貓頭和兔頭可分別用特制的貓頭夾和兔頭夾。兔頭夾為附有鐵柄的半圓形鐵圈和一可調(diào)鐵圈。固定時，先將麻醉好的兔頸部放在半圓形的鐵圈上，再把嘴伸入可調(diào)鐵圈內(nèi)，調(diào)節(jié)適當(dāng)位置后旋緊螺絲，最后將兔頭夾的鐵柄固定在實驗臺上。固定兔頭可用粗棉繩，一端栓在家兔的兩只上門齒，另一端栓在實驗臺的鐵柱上。以上方法較適于仰臥位固定。(2)四肢的固定貓和兔取仰臥位時，方法與上述狗仰臥位四肢固定方法相同；若動物取俯臥位，前肢縛繩即不必左右交叉，將四肢縛繩直接固定在實驗臺兩側(cè)前后固定鉤上即可?，F(xiàn)在的兔手術(shù)臺兩邊常有可調(diào)的螺旋夾，使用方便。應(yīng)用時要夾在家兔四肢的適當(dāng)部位，減輕動物的疼痛。第五節(jié)實驗動物的給藥方法一、經(jīng)口給藥法

.灌胃法適用于急性實驗，用量準確。(1)小鼠灌胃法小鼠灌胃管由1?2cm注射器連接尖端磨鈍并稍加彎曲的7號注射針頭組成，長4?5cm,直徑約1mm。灌胃時，左手拇指和食指捏住小鼠頸背部皮膚，無名指或小指將尾部緊壓在手掌上，使小鼠腹部向外。右手持灌胃管沿口角插入口腔，用胃管輕壓小鼠頭部，使口腔和食道成一直線，再將胃管前端插入約到達膈肌水平(體重20g左右的小鼠約3?4cm),此時可稍感有抵抗。如動物無呼吸異常，即可將藥注入；如遇阻力或動物蹩氣時，則應(yīng)抽出重插。小鼠的灌藥量一般為每次0.2?0.8ml。如誤插入氣管時可引起動物立即死亡。注完藥液后，輕輕退出胃管。動作宜輕柔，細致，切忌粗暴，以免損傷食道及膈肌(圖3-9)。圖3-9圖3-9小鼠灌胃法圖3-10家兔灌胃法(2)大鼠灌胃法大鼠的灌胃管長約6?8cm,直徑約為1.2mm,尖端呈球狀，插入灌胃管長度約為4?6cm。灌胃時，左手的拇指和食指固定大鼠下頜骨兩側(cè)，其余三個手指握住動物。大鼠灌胃法與小鼠基本相同。為防止插入氣管，可先回抽注射器針栓，若無空氣抽出說明不在氣管內(nèi)，即可注藥。每次灌藥量約為1?4ml。(3)豚鼠灌胃法助手以左手從動物背部把后肢伸開，握住腰部和雙后肢，用右手拇、食指夾持兩前肢。術(shù)者右手持灌胃管沿豚鼠上腭壁滑行，插入食道，輕輕向前推進4?6cm插入胃內(nèi)。插管時亦可用木制或竹制的開口器，將導(dǎo)尿管穿過開口器中心的小孔插入胃內(nèi)。插管完畢回抽注射器針栓，無空氣抽出時，慢慢推注藥液；如有空氣抽出時，說明插入氣管，應(yīng)拔出重插。豚鼠每次灌藥量約為1?5ml。(4)兔灌胃法 用兔固定箱，可一人操作。右手將開口器旋轉(zhuǎn)地進入兔口并固定，左手將導(dǎo)尿管經(jīng)開口器中央小孔插入。如無固定箱，則需兩人協(xié)作進行，一人坐好，腿上墊好圍裙，將兔的后肢夾于兩腿間，左手抓住雙耳，固定其頭部，右手抓住其兩前肢。操作者將開口器橫放于兔口中，將兔舌壓在開口器下面。此時助手的雙手應(yīng)將兔耳、開口器和兩前肢同時固定好，操作者將導(dǎo)尿管自開口器中央的小孔插入，慢慢沿兔口腔上腭壁插入食道約15?18cm（圖3-10）。插管完畢將胃管的外口端放入水杯中，切忌伸入水過深。如有氣泡從胃管逸出，說明不在食道內(nèi)而是在氣管內(nèi)，應(yīng)拔出來重插。如無氣泡逸出，則可將藥推入，每次灌入液量可達80?120ml。灌畢，可用少量清水沖洗胃管，然后拔出。拔出胃管時，應(yīng)捏住導(dǎo)尿管的開口端，慢慢抽出；接近咽喉部時，動作應(yīng)加快，迅速通過，以防殘留液體進入咽喉、氣管。.口服法適用于慢性實驗和固體劑型藥物。如藥物為固體劑型時，可直接將藥物放入實驗動物口中，設(shè)法使其口服咽下。二、注射給藥法.皮下注射（圖3-11）（1）小鼠皮下注射通常在背部皮下注射。注射時以左手拇指和中指將小鼠頸背部皮膚輕輕提起，食指輕按其皮膚，使其形成一個三角形小窩；右手持注射器從三角窩下部刺入皮下，輕輕擺動針頭，如易擺動時則表明針尖在皮下，此刻可將藥液注入。針頭拔出后，以左手在針刺部位輕輕捏住皮膚片刻，以防藥液流出。大批動物注射時，可將小鼠放在鼠籠蓋或粗糙平面上，左手拉住尾部，小鼠自然向前爬行，此時右手持針迅速刺入背部皮下，推注藥液。圖3-11皮下注射示意圖 圖3-12小鼠腹腔注射示意圖（2）大鼠皮下注射注射部位可在背部或后肢外側(cè)皮下，操作時輕輕提起注射部位皮膚，將注射針頭刺入皮下，推注藥液。(3)豚鼠皮下注射部位可選用兩肢內(nèi)側(cè)、背部、肩部等皮下脂肪少的部位。通常在大腿內(nèi)側(cè)注射針頭與皮膚呈45度角的方向刺入皮下，確定針頭在皮下推入藥液，拔出針頭后，拇指輕壓注藥部位片刻。(4)兔皮下注射法參照小鼠皮下注射法。.腹腔注射法(1)小鼠左手固定動物，使腹部向上，頭呈低位。右手持注射器，在小鼠左側(cè)下腹部刺入皮下，沿皮下向前推進3?5mm,然后刺入腹腔。此時有抵抗力消失之落空感，在針頭保持不動的狀態(tài)下推入藥液(圖3-12)。一次可注射量為0.1?0.2ml/10g體重。腹腔注射時切勿使針頭向上注射，以防刺傷內(nèi)臟。(2)大鼠、豚鼠、兔、貓這些動物的腹腔注射皆可參照小鼠腹注射法。但應(yīng)注意家兔與貓在腹白線兩側(cè)注射，離腹白線約1cm處進針。3.肌肉注射法(1)小鼠、大鼠、豚鼠由于肌肉少，對這些動物一般不作肌肉注射。如果需要，可將動物固定后，一手拉直動物一側(cè)后肢，用5?7號針頭刺入后肢大腿外側(cè)肌肉內(nèi)注液。小鼠一次注射量不超過0.1ml/只。(2)兔固定動物后，右手持注射器并與肌肉成60。刺入肌肉中；然后回抽針栓，若無回血時將藥液注入，注射后輕按摩注射部位，幫助藥液吸收。4.靜脈注射法(1)小鼠、大鼠多采用尾靜脈注射。先將動物固定于固定器內(nèi)(可采用筒底有小口的玻璃筒、金屬或鐵絲網(wǎng)籠)。將尾巴留在外面，以右手食指輕輕彈尾尖部，必要時可用45?50℃的溫水浸泡尾部或用75%乙醇擦析，使尾部血管擴張充血、表皮角質(zhì)軟化。以食指與中指夾住尾巴根部，阻斷尾靜脈血流，使之充盈;以拇指和小指夾持尾尖部，無名指從下托起尾巴。用連接4?5號針頭的注射器與尾部呈30。刺入靜脈，推注藥液無阻力、沿靜脈血管可見一條白線說明在血管內(nèi)，可注藥。注射完畢后，拔出針頭，輕按注射部止血。一般選擇尾兩側(cè)靜脈，并宜從尾尖端開始，漸向尾根部移動，以備反復(fù)應(yīng)用。一次注射量為0.05?0.1ml/10g體重(圖3-13)。大鼠亦可采舌下靜脈注射；或者將其麻醉，切開其大腿內(nèi)側(cè)皮膚進行股靜脈注射；亦可采頸外靜脈注射。圖3-13圖3-13小鼠尾靜脈注射（2）豚鼠可選用多部位的靜脈注射，如前肢皮下頭靜脈、后肢小隱靜脈、耳殼靜脈或雄鼠的陰莖靜脈，偶可采心內(nèi)注射。一般前肢皮下頭靜脈穿刺易成功。也可先將后肢皮膚切開，暴露脛前靜脈，直接穿刺注射，注射量不超過2ml。圖3-14家兔耳緣靜脈注射法（3）家兔一股采用耳緣靜脈。耳緣靜脈沿耳背后緣行走、較粗、固定，剪除其表面皮膚上的毛并用水濕潤局部，血管即顯現(xiàn)出來。注射前可先輕彈或揉擦耳尖部并用左手食指和中指輕壓耳根部，使耳緣靜脈充血。盡可能從遠心端進針（以便為以后的進針留有余地），先刺破皮膚再刺入靜脈，后順著血管平行方向深入0.5?1cm,松開食指和中指，左手拇指和中指移至針頭刺入部位壓住，將針頭與兔耳固定。隨后可進行藥物注射（圖3-14圖3-14家兔耳緣靜脈注射法圖3-15狗后肢靜脈注射法（4）狗抓取狗時，要用特制的鉗式長柄夾夾住狗頸部和腰部，將它壓倒在地。由助手將其固定好，剪去前肢或后肢皮下靜脈部位的被毛（前肢多取內(nèi)側(cè)的頭靜脈，后肢多取外側(cè)面的小隱靜脈），靜脈注射麻藥或?qū)嶒炈幬铮▓D3-15）。（5）淋巴囊注射法蛙及蟾蜍常用淋巴囊給藥。它們有數(shù)個淋巴囊（圖3-16）,該處注射藥物易吸收。一般多為腹淋巴囊作為注射部位，將針頭先經(jīng)蛙后肢上端刺入，經(jīng)大腿肌肉層，再刺入腹壁皮下腹淋巴囊內(nèi)，然后注入藥液。這種注射方法可防止拔出針頭后藥液外逸。注射量為0.25?1.0ml/只。圖3-16蛙和蟾蛛的皮下淋巴囊第六節(jié)實驗動物的用藥量和換算一、實驗動物用藥量的確定動物實驗常牽涉藥物的使用，用藥量與實驗效果密切相關(guān)。劑量過小，效果不明顯；劑量過大，動物會中毒、死亡。用藥的劑量可按下列方法確定：①根據(jù)文獻（包括實驗教材、參考書和發(fā)表的論文等）提供的劑量；②根據(jù)臨床使用的劑量換算而成。由于藥品的生產(chǎn)的廠家、批號不同，動物的種系、飼養(yǎng)環(huán)境各異，應(yīng)該在正規(guī)實驗前進行預(yù)試驗確定用藥劑量。實驗時可根據(jù)動物的年齡、體質(zhì)和給藥途徑加以調(diào)整。年幼的動物適當(dāng)減少用藥劑量；如口服量為1時，灌腸量約為1?2,皮下注射量約為0.3?0.5,肌肉注射量約為0.2?0.3,靜脈注射量約為0.25。二、實驗動物與人用藥量的換算人與動物對同一藥物的耐受性相差很大。一般而言，動物的耐受性要比人大，單位體重的用藥量動物比人要大。人的各種藥物的用量容易在書上查到，但動物用藥量可查的資料較少；與人相比，動物應(yīng)用的藥物種類少得多。因此，必須將人的用藥量換算成動物的用藥量。一般可按下列比例換算：若人用藥量為1,小白鼠、大白鼠則為25?50,兔、豚鼠為15?20,狗、貓為5?10。此外，也可參照下列方法換算。.按人與動物的體表面積計算法來換算（1）人體體表面積計算法計算我國人的體表面積，一般認為許文生氏公式較適用，即：體表面積（m2）=0.0061x身高（cm）+0.0128x體重（kg）-0.1529（2）動物的體表面積計算法 一般認為Meeh-Rubner氏公式較適用，即：A（體表面積，以m2計算）=KxW（體重，以g計算）2/3+10000式中的K為一常數(shù)，隨動物種類而不同：小白鼠和大白鼠9.1、豚鼠9.8、家兔10.1、貓9.8、狗11.2、猴11.8、人10.6（上列K值各家報導(dǎo)略有出入）。這樣計算出來的表面積是粗略的估計值，不一定完全符合于每個動物的實測數(shù)值。（3）人及不同種類動物之間藥物劑量的換算先按Meeh-Rubner氏公式先算出2種動物的體表面積，再根據(jù)單位體表面積用藥量相等的原理換算成公斤體重的用藥劑量。例：某利尿藥大白鼠灌胃給藥時的劑量為250mg/kg,試粗略計算狗灌胃給藥時可以試用的劑量。解：實驗用大白鼠的體重一般在200g左右，其體表面積（A）為：A=9.1x2002/3+10000=0.0311m2250mg/kg的劑量如改以mg/m2表示，即為：250x0.2+0.0311=1608mg/m2實驗用狗的體重一般在10kg左右，其體表面積（A）為：A=11.2x100002/3+10000=0.5198m2???狗的適當(dāng)試用劑量為1608x0.5198+10=84mg/kg。.按mg/kg折算mg/m2轉(zhuǎn)移因子計算mg/kg的相應(yīng)轉(zhuǎn)移因子可由表3-1查得，即為按mg/m2計算的劑量。然后按下列公式計算動物用藥劑量：劑量（mg/kg）x甲動物轉(zhuǎn)移因子+乙動物轉(zhuǎn)移因子。例：同上。請計算出狗的適當(dāng)試用劑量。解：查表3-1得知，大鼠的轉(zhuǎn)移因子為6,狗的轉(zhuǎn)移因子為19,代入上式。結(jié)果是：250x6（大白鼠的轉(zhuǎn)移因子）+19（狗的轉(zhuǎn)移因子）=79mg/kg.按人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表計算等效劑量比值表見表3-2。按下列公式計算：欲求動物的用藥劑量=已知動物用藥劑量x體重（kg）x2種動物的等效劑量比值/欲求動物的體重（kg）。例：同上。查表3-2知，12kg狗的體表面積為200g大白鼠的17.8倍。該藥大白鼠的劑量為250mg/kg,200g的大白鼠需給藥250x0.2=50mgo???狗的適當(dāng)試用劑量為50x17.8+12=74mg/kg。表3-1進行不同種類動物間劑量換算時的常用數(shù)據(jù)動物種類K值體重(kg)體表面積（m2）mg/kg-mg/m2轉(zhuǎn)換因子每kg體重占有體表面積相對比值小白鼠9.10.0180.00662.9粗略值30.020.00673.01.00.0220.00713.1(0.02kg)0.0240.00763.2大白鼠9.10.100.01965.1粗略值60.150.02575.80.470.200.03116.4(0.20kg)0.250.07616.9豚鼠9.80.300.04396.8粗略值80.400.05327.50.400.500.06178.1(0.40kg)0.600.06978.6家兔10.11.500.132311.3粗略值0.242.000.160812.412(2.0kg)2.500.186013.4貓9.02.000.157112.7粗略值0.222.500.132413.714(2.5kg)3.000.205914.6狗11.25.000.327515.3粗略值0.1610.000.519919.219(10.0kg)15.000.681222.0猴11.82.000.187810.7粗略值0.243.000.245512.212(3.0kg)4.000.297313.5

人10.6 40.00 1.2398 32.2 粗略值 0.0850.00 1.4386 34.8 35 (50.0kg)60.00 1.6246 36.9表3-2人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表小白鼠大白鼠豚鼠家兔貓猴狗人(20g)(200g)(400g)(1.5kg)(2.0kg)(4.0kg)(12kg)(70kg)小白鼠1.07.012.2527.829.764.1124.2378.9(20g)大白鼠0.141.01.743.94.29.217.856.0(200g)豚鼠0.080.571.02.252.45.24.231.5(400g)家兔0.040.250.441.01.082.44.514.2(1.5kg)貓0.030.230.410.921.02.24.113.0(2.0kg)猴0.0160.110.190.420.451.01.96.1(4.0kg)狗0.0080.060.100.220.230.521.08.1(12kg)人0.00260.0180.0310.070.0780.160.821.0(70kg)三、藥物濃度和給藥容量的換算動物實驗所用的藥物劑量，一般按mg/kg體重或g/kg體重計算，應(yīng)用時須從已知藥液的濃度換算出相當(dāng)于每kg體重應(yīng)注射的藥液量（ml數(shù)），以便給藥。換算的步驟分為：①算出動物需用藥量；②按下列比例式計算用藥量（X）：g（mg）:100ml二動物用藥量g（mg）:X（欲求用藥ml數(shù)）。（藥品百分比濃度）例1：計算給體重1.8kg的家兔，靜脈注射20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉，按每kg體重1g的劑量注射，應(yīng)注射多少ml？計算方法：①兔每用藥量=1g/kgx1.8kg=1.8g；②按下列公式算出用藥量：20(g):100(ml)=1.8(g):X(ml)X=1.8x100/20=9mlo即體重為1.8kg的家兔，應(yīng)注射20%氨基甲酸乙酯溶液9ml。第七節(jié)實驗動物的麻醉一、麻醉前的準備及麻醉藥的選擇狗和貓要在麻醉前應(yīng)禁食12h以上，以減輕麻醉可能引起的嘔吐反應(yīng)。需在全麻下手術(shù)的慢性實驗動物，應(yīng)予以適當(dāng)?shù)穆樽砬坝盟?。這可使動物麻醉過程平穩(wěn)，減少麻醉藥的副作用和藥量，有利于手術(shù)順利進行和術(shù)后恢復(fù)。一般急性實驗，通常麻醉前不需給藥，因這類藥物可能干擾擬觀察的生理活動，給分析實驗結(jié)果帶來困難或影響實驗的正確性。不同麻醉藥對動物的生理機能影響不同，它們的副作用和麻醉效果也不同；因此，選擇適當(dāng)?shù)穆樽硭幠鼙ＷC實驗的順利進行和獲得正確的結(jié)果。例如嗎啡對狗有很好的止痛鎮(zhèn)靜作用，可用作麻醉前給藥；然而嗎啡能引起貓的強烈、持久的興奮作用，故不適用于貓的麻醉前給藥。嗎啡具有很強的抑制中樞和減少胰液、膽汁等消化液的分泌，影響消化道的蠕動，抗利尿作用；因此，嗎啡不適宜用于呼吸、消化、泌尿等機能實驗。理想的麻醉藥物應(yīng)具備以下三個條件：①麻醉完善，使動物完全無痛；②對動物的毒性及所研究的機能影響最?。虎蹜?yīng)用方便。二、常用麻醉藥的種類.局部麻醉以0.5?2%普魯卡因給動物作皮下浸潤麻醉，可進行局部手術(shù)。.全身麻醉(1)吸入麻醉乙醚(Ether)醮在棉球并放入玻璃罩內(nèi)，利用其揮發(fā)而經(jīng)呼吸道進入肺泡吸收，適用于各種動物麻醉。尤其是短時間的手術(shù)或?qū)嶒灒牒蠹s15?20min開始發(fā)揮作用。乙醚麻醉的優(yōu)點是麻醉的深度易于掌握且較安全，麻醉后蘇醒快。缺點是需要專人管理；在麻醉初期常出現(xiàn)強烈興奮現(xiàn)象，對呼吸道有較強的刺激作用；對于欠缺經(jīng)驗的操作者，容易因乙醚麻醉過深而使動物死亡。此外，乙醚易燃、易爆，對人亦有作用，使用時應(yīng)避火、通風(fēng)、注意安全。(2)注射麻醉巴比妥類各種巴比妥類藥物的吸收和代謝速度不同，其作用時間亦長短不一。戊巴比妥納(SodiumPentobarbital)作用時間為1?2h,屬中效巴比妥類，實驗中最為常用。常配成1?3%的水溶液，由靜脈或腹腔給藥。環(huán)乙烯巴比妥類(SodiumHexobarbital)作用時間為15?20min,硫噴妥鈉(SodiumThiopental)作用時間僅10?15min,屬短效或超短效巴比妥類，適用于較短時程的實驗。巴比妥類對呼吸中樞有較強的抑制作用，故應(yīng)防止給藥過多過快。對心血管系統(tǒng)有復(fù)雜的影響，故這類藥物最好不用于研究心血管機能的實驗動物麻醉。氯醛糖本藥溶解度較小，常配成2%水溶液。使用前需先在水浴鍋中加溫至60?70C使其溶解；但加熱溫度不宜過高，以免降低藥效。本藥的安全度大，能導(dǎo)致持久的淺麻醉，對植物性神經(jīng)中樞的機能無明顯抑制作用，對痛覺的影響也極微，特別適用于研究要求保留生理反射(如心血管反射)或研究神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)的實驗。烏拉坦又名氨基甲酸乙酯(urethane)。與氯醛糖類似，可導(dǎo)致較持久的淺麻醉，對呼吸無明顯影響。烏拉坦對兔的麻醉作用較強，常用于家兔急性實驗；對貓和狗則奏效較慢；對大鼠和兔能誘發(fā)腫瘤，不是需長期存活的慢性實驗動物麻醉的最佳選擇。本藥易溶于水，使用時常配成10?25%的溶液。機能學(xué)實驗中常將氯醛糖與烏拉坦混合使用。以加溫法將氯醛糖溶于25%的烏拉坦溶液內(nèi)，使氯醛糖的濃度為5%。狗和貓靜脈注射劑量為1.5?2ml/kg混合液，其中氯醛糖劑量為75?100mg/kg。兔也可用此劑量作靜脈注射。與乙醚比較，巴比妥類、氯醛糖和烏拉坦等非揮發(fā)性麻醉藥的優(yōu)點是：使用方法簡便；一次給藥(硫噴妥鈉和環(huán)乙烯巴比妥鈉除外)可維持較長時間的麻醉狀態(tài)；手術(shù)和實驗過程中不需要專人管理麻醉；而且麻醉過程比較平穩(wěn)，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。缺點是：蘇醒較慢。常用麻醉藥的劑量和給藥途徑見表3-3。表3-3注射麻醉藥的劑量與給藥途徑藥物 動物給藥法劑量 維持時間 備注

（常用濃度）(mg/kg)（小時）戊巴比妥鈉 犬、貓、兔 I.V.301?2(1?3%) I.P.301?2I.H.501?2豚鼠 I.P.451?2大鼠 I.P.451?2小鼠 I.P.451?2犬、貓 I.V.I.P20?300.25?0.5抑制呼吸較硫噴妥鈉嚴重，宜慢，(5%) 兔、大鼠 I.V.I.P30?500.25?0.5 連續(xù)用藥有蓄積性。烏拉坦貓、兔I.V.I.P.900?10002?4毒性小，較(20%)大鼠、小鼠I.M.13002?4安全。蛙淋巴囊20002?4氯醛糖貓、兔I.V.I.P.805?6安全，肌松(2%)大鼠I.V.I.P.805?6不全，聽覺抑制不深。加溫溶解。氯醛糖烏拉坦貓、兔I.V.氯醛糖755?6合劑I.P.烏拉坦750*I.V.靜脈注射I.P.腹腔注射I.M.肌肉注射I.H.皮下注射三、各種動物的麻醉方法.小白鼠根據(jù)需要選用吸入麻醉或注射麻醉。注射麻醉時多采用腹腔注射法。.大白鼠多采用腹腔麻醉，也可用吸入麻醉。.豚鼠可進行腹腔麻醉，也可將藥液注入背部皮下。.貓多用腹腔麻醉，也可用前肢皮下靜脈注射法。.兔多采用耳緣靜脈麻醉。注射麻藥時應(yīng)先快后慢，并密切注意兔子的呼吸及角膜反射等的變化。.狗多用前肢或后肢皮下靜脈注射。四、麻醉時的注意事項.動物個體對麻醉藥的敏感性不同動物個體對麻醉藥的敏感性有差異。因此，在麻醉過程中，除參照上述一般藥物用量標準外，還必須密切注意動物的狀態(tài)，以決定麻藥的用量。麻醉的深淺，可根據(jù)呼吸的深度和快慢、角膜反射的靈敏度和有無四肢和腹壁肌肉的緊張性以及痛覺反射等進行判斷。當(dāng)呼吸突然變深變慢、角膜反射遲鈍或消失，四肢和腹壁肌肉松弛，夾捏皮膚無明顯疼痛反應(yīng)時，應(yīng)立即停止給藥。靜脈注藥時應(yīng)堅持先快后慢的原則，避免動物因麻醉過深而死亡。.麻醉意外的處理麻醉藥過多、注射的速度過快或動物個體敏感等因素會引致麻醉過深，表現(xiàn)為呼吸極慢甚至停止，此時仍有心跳。對此，首要的搶救措施是馬上進行人工呼吸：用手交替地壓迫和放松胸廓或推壓腹腔臟器，保證肺通氣。同時，迅速切開氣管并行氣管插管。繼而連接人工呼吸機，直至自主呼吸恢復(fù)。還可給予蘇醒劑以促恢復(fù)。常用的蘇醒劑有咖啡因(1mg/kg)、尼可剎米(2?5mg/kg)和山梗菜堿(0.3?1mg/kg)等。心跳停止時應(yīng)進行心臟按摩，注射溫?zé)嵘睇}水和腎上腺素等。麻醉藥量不夠、藥效降低或動物個體耐受性較強會導(dǎo)致麻醉過淺，手術(shù)時動物疼痛而掙扎。此時可考慮使用局部麻醉藥浸潤麻醉；也可臨時補充麻醉藥，但一次射劑量不宜超過總量的1/5,而且注射時要密切觀察動物的狀況。第八節(jié)急性動物實驗的基本操作技術(shù)一、切口和止血在切開皮膚之前，先預(yù)定切口部位并將手術(shù)野及周圍的長毛剪去。然后選好確切的切口部位和范圍，必要時做出標志。切口的大小要適中，既能暴露充分而便于操作，又不可損傷過大。術(shù)者左手拇指外展，另外四指并攏將預(yù)定切口兩側(cè)的皮膚固定。右手握持手術(shù)刀，以適當(dāng)?shù)牧α?，一刀全線切開皮膚和皮下組織。切開皮膚時必須注意解剖結(jié)構(gòu)特點，以避免切斷神經(jīng)、血管為原則；盡可能使切口與各層組織的纖維方向一致。若肌纖維走向與切口縱軸一致時，可剪開肌膜，用手術(shù)刀柄、止血鉗或手指將肌纖維鈍性分離至所需長度，需要時將肌肉橫行切斷或剪斷。切口自外至內(nèi)應(yīng)外大內(nèi)小，以便于操作，觀察和止血。手術(shù)過程中必須及時止血，以免動物出血過多而致使手術(shù)野模糊，組織混淆不清。處理出血，要視破裂血管的大小而定。微血管滲血可用溫?zé)猁}水紗布輕壓止血；較大血管出血，先用止血鉗夾注出血點及其周圍的小部分組織，再用縫線結(jié)扎；更大血管出血，或血管雖不很大，但出血點較多且比較集中（如肌肉的橫斷面），最好用縫線穿過局部組織，進行貫穿結(jié)扎，以防縫線松脫。使用止血鉗時，鉗夾的組織不能過多。否則，損傷會加重，且不易用線扎緊。有些組織，如腦、肝臟等，不適宜用結(jié)扎止血的，可使用止血膠或止血海綿。紗布只用于吸血，切不可用作揩擦組織，以免組織損傷及血疑塊脫落加重出血現(xiàn)象。在實驗間歇期間，應(yīng)將切口暫時閉合，用溫鹽水紗布蓋好，以防組織干燥和體內(nèi)熱量散失。二、神經(jīng)血管的剝離術(shù)神經(jīng)和血管是比較脆弱的組織，在分離的過程中應(yīng)細心、認真和耐心，動作要輕柔；要特別注意保持自然的解剖位置，切勿把結(jié)構(gòu)關(guān)系弄亂。分離較小的神經(jīng)、血管，可用蚊式止血鉗或玻璃分針在神經(jīng)、血管旁沿其走向鈍性分離，必要時可用眼科剪分離周圍的軟組織。若分離較大的神經(jīng)、血管時，先用蚊式止血鉗將神經(jīng)、血管旁的結(jié)締組織稍加分離成一個小缺口，然后用大小適宜的止血鉗插入該小缺口內(nèi)，沿神經(jīng)、血管走向逐漸擴大，使神經(jīng)、血管從周圍的結(jié)締組織中游離出來。若遇到較堅韌的組織或神經(jīng)小分支，可用眼科剪將其剪斷；切勿強行牽拉，以免造成損傷。遇到小血管，用兩根線結(jié)扎之后，在中間剪斷。游離神經(jīng)、血管段的長度，視實驗的需要而定。分離完畢，在神經(jīng)或血管下方穿過1?2根浸透生理鹽水的縫線備用。然后用浸透生理鹽水的紗布覆蓋，以免組織干燥；或在創(chuàng)口內(nèi)滴加適量溫?zé)幔?7℃左右）石蠟油，使神經(jīng)浸泡其中。分離神經(jīng)、血管切不可有齒的鑷子，也不能用止血鉗或鑷子夾持，以免損傷組織結(jié)構(gòu)、機能。三、氣管插管術(shù)為了保證呼吸道通暢，在家兔、狗等哺乳類動物急性實驗中，一般均進行氣管切開，插入氣管插管。過程如下：將麻醉的動物仰臥于手術(shù)臺上，剪去頸部的毛；在頸前正中線緊靠喉頭下緣切開皮膚（家兔切口為4?6cm,狗可稍長）；用止血鉗分開頸前正中的肌肉，暴露出氣管；再分離開氣管兩側(cè)及食管之間的結(jié)締組織，

圖3-17氣管插管法圖3-18IW4材帝要淺動停席使氣管游離；在已暴露的氣管下用鑷子穿一條較粗的縛線；在甲狀軟骨下2?3厘米處的軟骨環(huán)上橫向切開氣管前壁（不在軟骨環(huán)之間切開，因為軟骨環(huán)之間有較豐富的血管），長度不超過氣管口徑的1/2；再用尖剪刀朝鼻腔方向在氣管作長約0.5cm的縱切口，使整個切口呈“倒T”字形；用小綿球拭凈氣管內(nèi)分泌物或血液；提起剛才穿于氣管下的縛線，再將口徑適當(dāng)?shù)臍夤懿骞埽ㄔ谀懿迦肭疤嵯?，氣管插管的?nèi)徑越粗越好），由切口向肺端插入氣管腔內(nèi)，用事先穿過的縛線結(jié)扎固定（圖3-17氣管插管法圖3-18IW4材帝要淺動停席狗股靜脈插管四、靜脈插管法急性動物實驗常要進行靜脈插管，以便輸液和隨時向靜脈注射各種藥物。常用的靜脈插管為一種軟硬適中，無毒的塑料導(dǎo)管。導(dǎo)管的一端套入大小匹配的注射針頭，針頭與含有少量肝素等抗凝劑的注射器連接；另一端插入靜脈腔。插管前應(yīng)先將注射器內(nèi)的空氣驅(qū)盡，塑料導(dǎo)管充滿生理鹽水。靜脈插管的插入部位，應(yīng)按實驗?zāi)康暮蛣游锓N類而定。狗常用股靜脈。操作如下：剪去腹股溝三角區(qū)的被毛，沿血管行走方向切開皮膚，長約4?5cm；用小止血鉗鈍性分離肌肉和深筋膜，暴露出股神經(jīng)和股血管（由外至內(nèi)的排列大致是股神經(jīng)、股動脈、股靜脈）；用蚊式止血鉗將股靜脈分離出一段，在其下方穿兩條縛線，用其中一條線結(jié)扎靜脈遠心端；左手提起結(jié)扎線，右手持銳利眼科剪在較近結(jié)扎線的頭側(cè)以45°將靜脈剪一斜口（呈“V”字型）;將充滿生理鹽水的塑料導(dǎo)管插入靜脈內(nèi)，用另一條縛線結(jié)扎固定（圖3-18）。在急性動物實驗中，可根據(jù)實驗要求，將不同形狀的金屬、玻璃、塑料等材料造成的插管分別插入輸尿管、胰腺管、膽總管等管腔內(nèi)，以收集尿液、胰液或膽汁。上述各種插管方法與靜脈插管基本相同。五、動脈插管法要行動脈插管應(yīng)先將動脈盡可能分離得長些：狗4?5cm,兔3?4cm,豚鼠和大白鼠2?3cm。步驟如下：鈍性分離了一段動脈后，在其下方穿絲線2條；用其中一條結(jié)扎動脈的遠心端；再動脈夾夾閉動脈的近心端，以阻斷動脈血流；提起結(jié)扎線端，用銳利的眼科剪在緊靠結(jié)扎處稍下方的動脈上做一V形切口（切口大小約為管徑的1/2,斜口的前端朝向近心端）；將充滿肝素、驅(qū)盡空氣的動脈插管由切口向心臟方向插入動脈；用另一絲線結(jié)扎固定，再將余線結(jié)扎于插管上的側(cè)支以防滑出；然后將插管放置穩(wěn)妥，適當(dāng)固定，以免扭轉(zhuǎn)；最后打開動脈夾，動脈即與插管連通。六、家兔肝大部分結(jié)扎，十二指腸插管.將家兔固定于兔臺，剪去腹部正中被毛，用1%普魯卡因皮下浸潤麻醉。.從劍突下沿腹部正中切開皮膚，切口約5?6cm；分離皮下結(jié)締組織，再沿腹白線切開腹壁肌肉和腹膜，在右上腹可見肝臟；于肝臟和膈肌之間用左手食指和中指插入并輕壓肝臟，可見在肝臟和膈肌之間有鐮狀韌帶，特點是三角形、透明、很?。挥沂殖盅劭萍粜⌒募魯噻牋铐g帶，切莫損傷膈肌。.將肝葉向上翻，用粗棉線沿肝左外葉、左中葉和右中葉之根部圍繞一周結(jié)扎以阻斷血流。由于供應(yīng)右外葉及尾狀葉之門靜脈血管為獨立分枝，不會同時被結(jié)扎。（兔肝臟解剖見圖3-19）.順著胃幽門部下找到十二指腸，用穿好縫線的小圓針在十二指腸壁上穿4?5針，使之圍成一小圓圈。再用眼科剪在小圓圈中央作一小切口直達腸腔，插入胃管（或?qū)蚬埽∧c方向插入4?5cm,結(jié)扎并固定。然后，用三角針穿上縫線關(guān)閉腹腔，用膠布把胃管固定于一側(cè)耳背上。右中央葉-肝門的肱圖3-19兔的肝臟與胃左中央葉左做右中央葉-肝門的肱圖3-19兔的肝臟與胃左中央葉左做I葉輸膽總營?右割葉一總蛆管開口-十二指胸七、輸尿管插管.將家兔麻醉并以仰臥位固定于兔臺上，剪去下腹部被毛。.在恥骨聯(lián)合上緣約0.5cm處正中切開皮膚，長約3?4cm,再沿腹白線切開腹壁，注意不能傷及內(nèi)臟及腸管。.尋找膀胱并將其翻出至腹外，辨認輸尿管進入膀胱背側(cè)的部位----膀胱三角區(qū)后，用小止血鉗分離出雙側(cè)輸尿管。.在輸尿管靠近膀胱處用縫線結(jié)一松結(jié)備用，再在距此2cm處的輸尿管下穿一縫線，用小指或刀柄托起輸尿管，持眼科剪以45剪開輸尿管，口徑約輸尿管管徑的1/2。.用眼科鑷夾住切口的一角，向腎臟方向插入預(yù)先充滿生理鹽水的輸尿管插管，用縫線在切口結(jié)扎固定，防止滑脫，平放輸尿管直至尿液慢慢流出。.同樣方法完成另一側(cè)輸尿管插管（見圖3-20）。八、膀胱插管.將家兔麻醉，仰臥固定于兔臺上，剪去下腹部被毛。.在恥骨聯(lián)合上方正中切開皮膚，長3?4cm；再沿腹白線切開腹壁，暴露膀胱并將其翻出腹腔；在雙側(cè)輸尿管進入膀胱處下方穿一縫線，結(jié)扎尿道。.在膀胱頂部血管較少處剪一小口，穿破膀胱壁全層并插入預(yù)先充滿生理鹽水的膀胱插管，結(jié)扎固定。若方法正確，可見尿液順利流出。圖3-20兔輸尿管導(dǎo)尿法1.腹部切口；2.導(dǎo)尿管插入處；3.導(dǎo)尿管；4.膀胱；5.輸尿管九、暴露家兔心臟的方法.將家兔麻醉、仰臥固定于兔臺上，剪去其胸部被毛。.胸前中央切開皮膚約5?6cm,鈍性分離胸骨兩側(cè)的肌肉，暴露2?5胸骨體及兩側(cè)與之相連的3?5肋骨的胸骨端。.沿胸骨左緣，用直剪在劍突根部上方約1cm處（相當(dāng)于5?6肋之間）垂直橫斷1根胸骨，造成穿孔。.將直止血鉗一只腳插入穿孔（注意不要插入過深），并沿著胸骨左緣向上插入，在胸骨旁外側(cè)0.3cm處夾住2?3根肋骨，在止血鉗內(nèi)緣將肋骨剪斷。.以同樣方法在胸骨另一側(cè)剪斷2?3三根肋骨，再將胸骨掀起并剪斷。.用止血鉗夾持心包膜并用眼科剪剪開，即可暴露出心臟。十、腸系膜、大網(wǎng)膜微循環(huán)觀察法大鼠、豚鼠和家兔等動物的腸系膜和大網(wǎng)膜可用作微循環(huán)的觀察。用麻藥把動物麻醉，剪除腹部被毛并消毒皮膚。在腹部一側(cè)剪開切口，長約2?3cm,深至腹腔。讓動物側(cè)臥或仰臥于恒溫灌流盒旁，輕輕取出腸系膜或大網(wǎng)膜，伸展地平鋪于灌流盒上（圖3-21）。啟動恒溫灌流裝置，保持組織濕潤，灌流液pH維持在7.2?7.35。調(diào)節(jié)顯微鏡及附屬裝置或其它觀察儀器，觀察微循環(huán)。期間，應(yīng)維持動物的體溫恒定。圖3-21腸系膜微循環(huán)恒溫灌流盒 圖3-22小鼠眼眶取血法十一、離體蛙心標本的制作.取青蛙或蟾蜍一只，將探針從枕骨大孔刺入，朝上、下?lián)v毀腦和脊髓；然后取仰位固定于蛙板上，依次剪開胸前區(qū)皮膚及剪去胸骨，暴露心臟。用鑷子提起心包膜并用眼科剪小心剪破，完全暴露心臟；仔細辨認心房、心室、動脈圓錐、靜脈竇和前后腔靜脈等。.用絲線結(jié)扎右主動脈；在左右主動脈下穿一絲線備用。把心尖翻至背面，用備用線把左右肺靜脈和前后腔靜脈一起結(jié)扎，但不能結(jié)扎靜脈竇。.在左主動脈下穿2條絲線，其中的一條結(jié)扎其遠心端，另一條備用。用鑷子輕提左主動脈遠端絲線，用眼科剪在其靠近動脈圓錐處剪一『形切口；將灌有任氏液的蛙心插管從剪口處插入主動脈直至動脈圓錐，略向后退在心室收縮時往心室后壁方向下插，經(jīng)主動脈瓣插入心室內(nèi)。切忌用力過大和插管過深。插管正確時，當(dāng)心臟收縮可見血液在插管內(nèi)上下移動。用滴管吸去插管內(nèi)的血液，用任氏液沖洗1?2次，然后用備用絲線結(jié)扎固定。.在結(jié)扎絲線的遠心端剪斷左、右主動脈；輕輕提起蛙心插管，在結(jié)扎靜脈遠端并剪斷血管，使心臟與蛙體分離；用滴管吸取任氏液換去蛙心插管內(nèi)的血液數(shù)次，直至灌流液無色為止；然后將蛙心插管固定在鐵支架上，用一端帶有長線的蛙心夾夾住心尖，長線的末端垂直綁在張力換能器上，連接記錄系統(tǒng)。十二、采集血液的方法.小白鼠和大白鼠(1)尾尖取血這種方法適用于采取小量血樣，如紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)、白細胞分類計數(shù)等。取血前宜先使鼠尾血充血，室溫低時可用燈照射片刻即可，然后剪去尾尖，血即自尾尖流出。(2)眶動脈或眶靜脈取血將動物倒持壓迫眼球，使其突出充血后，用止血鉗迅速摘除眼球，血液很快從眼眶流出。將血滴入加有抗凝劑的玻璃器皿內(nèi)，直至流血停止為止。一般可取得相當(dāng)于動物體重4?5%的血液量。用畢動物即死亡，只適用于一次性取血。(3)眼眶后靜脈叢取血用玻璃毛細管，內(nèi)徑為1.0?1.5mm,臨用前折斷，成1?1.5cm長的毛細管段，浸入1%肝素溶液中，取出干燥。取血時左手抓住鼠兩耳之間的頸背部皮膚，使頭部固定，并輕輕向下壓迫頸部兩側(cè)，引起頭部靜脈血液回流困難，使眼眶靜脈叢充血，右手持毛細管，將其新折斷端插入眼瞼與眼球之間后，輕輕向眼底部方向移動，并旋轉(zhuǎn)毛細管以切開靜脈叢，保持毛細管水平位，血液即流出，以事先準備的容器接收(圖3-22)。取血后，立即拔出血管，放松左手即可止血。小鼠、大鼠、豚鼠及家兔均采取此法取血。其特點是可根據(jù)實驗需要，在數(shù)分鐘內(nèi)在同一部位反復(fù)取血。(4)心臟取血左手抓住大鼠背及頸部皮膚，右手持注射器，在心尖搏動最明顯處刺入心室，抽出血液。也可從上腹部刺入穿過橫膈膜刺入心室取血。動作宜輕巧，否則取血后動物可能死亡。(5)斷頭取血如在實驗結(jié)束時取血，可剪去鼠頭或剪斷一側(cè)頸總動脈，收集自頸總動脈流出的血液。.兔和豚鼠(1)兔耳緣靜脈取血局部去毛，用電燈照射加熱或用酒精或二甲苯棉球涂擦，使靜脈擴張，再以石蠟油涂擦耳緣，防止流出血液凝固。用粗針頭將靜脈刺破或刀切小口后讓血自然滴入已放抗凝劑的試管中。(2)兔頸總動脈取血先行手術(shù)暴露頸總動脈并分離出長約2?3cm的一段成游離狀態(tài)，并在其下穿2條線；用一條線結(jié)扎遠心端，使血管充盈，用血管夾夾閉近心端；輕提結(jié)扎線端，在靠近線端處用眼科剪朝近心端剪一小“V型小切口，插入制備好的硬塑料動脈插管，結(jié)扎絲線并固定。動物體內(nèi)可注射肝素抗凝。術(shù)畢，取血時把血管夾打開放出所需之血量，爾后夾閉血管夾。這樣可以按照所需時間反復(fù)取血，方便而準確。但該動物只能利用一次。(3)心臟取血將動物仰臥固定；在第三肋間胸骨左緣3mm處，或以左手拇指在胸骨一側(cè)，食指及中指于胸骨另側(cè)固定心臟，在心尖搏動最明顯處將采血針與胸壁垂直刺入胸腔；當(dāng)持針手感到心臟搏動時，再稍刺入便進入心臟，然后可抽出血液。操作時，針頭應(yīng)直入直出，切勿在胸腔內(nèi)左右探索。.狗1)前肢皮下頭靜脈取血剪毛后助手壓迫血管上端或橡皮帶扎其上端，以左手二指固定靜脈后即可用注射器針頭刺入取血。2)后肢小隱靜脈取血取血方法同前肢皮下頭靜脈。十三、采集尿液的方法.用代謝籠采集尿液代謝籠是一種特別設(shè)計的為采集實驗動物各種排泄物的密封式飼養(yǎng)籠。簡單的代謝籠主要用于收集尿液；設(shè)計精致的代謝籠除可收集尿液外，又可收集糞便和動物呼出的CO2。.導(dǎo)尿法收集尿液需施行導(dǎo)尿術(shù)，適宜于犬、猴等大動物。導(dǎo)尿時一般不需要麻醉，先將實驗動物仰臥固定，再用甘油潤滑導(dǎo)尿管。對于雄性動物，可用手握住陰莖并將包皮向下拉，暴露龜頭，使尿道口張開，然后將導(dǎo)尿管緩慢插入，當(dāng)導(dǎo)尿管推進到尿道膜部時有抵抗感，此時注意動作輕柔，繼續(xù)向膀胱推進導(dǎo)尿管，即有尿液流出。雌性動物尿道外口在陰道前庭，導(dǎo)尿時于陰道前庭腹側(cè)將導(dǎo)尿管插入陰道外口，其后操作同雄性動物導(dǎo)尿術(shù)。用導(dǎo)尿法導(dǎo)尿可采集到?jīng)]有污染的尿液。如果嚴格執(zhí)行無菌操作，可收集到無菌尿液。.輸尿管插管采集尿液適用于要求精確計算單位時間內(nèi)實驗動物排尿量的實驗。參照膀胱插管方法剖腹后，將膀胱牽拉至腹腔外，暴露膀胱底兩側(cè)的輸尿管。在兩側(cè)輸尿管近膀胱處用線分別結(jié)扎，于輸尿管結(jié)扎處上方剪一小口，向腎臟方向分別插入充滿生理鹽水的插管，用絲線結(jié)扎固定，即可見尿液從插管滴出收集。采尿過程中要用38℃熱生理鹽水紗布遮蓋切口及膀胱。.壓迫膀胱采集尿液實驗人員在實驗動物下腹部用手加壓，手法要輕柔有力。當(dāng)壓力增加使實驗動物膀胱括約肌松弛時，尿液會自動流出，即可收集。.穿刺膀胱采集尿液實驗動物麻醉固定后，剪去下腹部的被毛，消毒后用連接注射器的針頭穿刺。先鈍角進針，穿過皮膚后稍微改變角度，然后刺向膀胱方向，以避免穿刺后漏尿?？蛇吘徛M針邊回抽，直到抽到尿液為止。.剖腹采集尿液按上述穿刺膀胱采集尿液法做術(shù)前準備，其備皮范圍應(yīng)更大。剖腹暴露膀胱，直視下穿刺膀胱抽取尿液。也可于穿刺前用無齒鑷夾住部分膀胱壁，從鑷子下方的膀胱壁進針抽尿。.提鼠尾采集尿液抓住鼠類尾巴并將其提起即出現(xiàn)排尿反射，因而能收集尿液，以小鼠最明顯。當(dāng)鼠類被提起尾巴排尿，尿滴常掛在尿道外口附近的被毛上，不會馬上流走，操作人員應(yīng)迅速用吸管或玻璃管接住尿滴。十四、實驗動物的急救措施麻醉意外的處理方法前已述及。在實驗過程中，常由于大出血、創(chuàng)傷、窒息等原因而導(dǎo)致血壓急驟下降、呼吸慢而不規(guī)則甚至停止、角膜反射等臨床死亡癥狀時應(yīng)進行急救。對于兔、狗等較大型動物的急救，可采取以下的措施。.檢查動物癥狀出現(xiàn)的原因麻醉可引起氣管分泌物增多，氣管插管引起的出血凝塊堵塞氣道都能引致窒息，動物出現(xiàn)呼吸困難、缺氧、紫紺等癥狀。應(yīng)拔除氣管插管，用棉簽把分泌物或血凝塊清除干凈，重新插管。手術(shù)操作失誤、肝素應(yīng)用過量等原因會引起滲血甚至大出血，導(dǎo)致血壓下降、休克。應(yīng)進行對因治療，如緊急止血、停用肝素等，必要時補充血容量。.刺激在緊急情況下，針刺人中穴效果較好。對于狗，每分鐘數(shù)百次頻率的脈沖電刺激膈神經(jīng)可取得較顯著效果。.呼吸中樞興奮劑(1)1%山梗菜堿0.5ml/次，靜脈注射。山梗菜堿可興奮外周化學(xué)感受器，反射性興奮呼吸中樞；對呼吸中樞也有直接的較弱的興奮作用。興奮呼吸的作用迅速、顯著，在改善呼吸的同時也能升高血壓。(2)25%尼可剎米1ml/次，靜脈注射。尼可剎米直接興奮呼吸中樞，使呼吸加深加快；對血管運動中樞的興奮作用較弱。.強心劑在乙酰膽堿、氯化鉀使用過量等情況下，常導(dǎo)致血壓下降。此時可用0.1%腎上腺素1ml，靜脈注射，必要時可心內(nèi)注射。離體實驗可進行心臟灌注，必要時可反復(fù)應(yīng)用。腎上腺素是a、0受體的激動劑，可使外周血管收縮，增