文獻(xiàn)綜述題目：雞傳染性支氣管炎的研究進(jìn)展雞傳染性支氣管炎的研究進(jìn)展摘要雞傳染性支氣管炎（AvianInfedtiousBronchitis，簡(jiǎn)稱IB）是由雞傳染性支氣管炎病毒（AvianInfectiousBronchitisVirus，IBV）引發(fā)的雞的一種急性高度接觸性傳染病，重要侵害雞的呼吸、泌尿生殖和消化系統(tǒng)。IBV往往引發(fā)混合感染，也可引發(fā)產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋量和雞蛋品質(zhì)的下降，甚至造成成年雞的死亡，從而加重了對(duì)雞群的危害，也給養(yǎng)雞業(yè)造成很大的損失，是現(xiàn)在危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的重要疫病之一。我國(guó)在80年代初發(fā)現(xiàn)有IB的存在，隨即IB在國(guó)內(nèi)相繼暴發(fā)，且流行十分廣泛。IBV的血清型最少有29種之多，并不停出現(xiàn)新型。在生產(chǎn)過程中，免疫失敗的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，傳染性支氣管炎成為禽病防治工作中的一大難題。因此，研究不同地區(qū)IBV的發(fā)生，血清型的鑒定和分子病原學(xué)研究，揭示IBV分子變異機(jī)理，對(duì)于從根本上控制傳支，含有重要意義。核心詞雞、冠狀病毒、傳染性支氣管炎、IBV1.IB的歷史IB于1931年由shalk首先報(bào)道于美國(guó)，1936年Beach和Schalm擬定了該病原[1]。在我國(guó)，20世紀(jì)40年代，傳支重要以呼吸道癥狀、產(chǎn)蛋量下降為主。1962年，Winterfield和Hitchner在美國(guó)報(bào)道了腎病變型IB，證明IBV的某些毒株可重要引發(fā)腎臟病變。1972年在廣東初次發(fā)現(xiàn)本病。1985年EI-Houadtih和Jone在摩洛哥分離了一種以致腸道病變?yōu)橹鞯腎BV腸型變種，該毒株除引發(fā)氣管、腎臟和生殖道的的病變外，還能夠造成腸道損害[2]。1994-1995年，江蘇、山東等省暴發(fā)了腺胃型傳支，但該病的病因尚有爭(zhēng)論[3]。1997年王玉東報(bào)道的腺胃病變型雞傳染性支氣管炎，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是由冠狀病毒引發(fā)的雞傳染性支氣管炎就是禽流感的代名詞。也有人從腺胃病變中分離到新城疫病毒和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒等。2.病原學(xué)2.1形態(tài)IBV屬于冠狀病毒科，冠狀病毒屬，單股正鏈RNA，呈螺旋對(duì)稱，形態(tài)多樣，大都數(shù)為球形，直徑為80-120nm，囊膜表面呈松散狀，上有均勻排列的花冠狀的纖突樣蛋白，纖突長(zhǎng)約20nm，其末端呈球狀，易從病毒粒子上脫落，纖突不如副粘病毒的棒狀纖突排列緊密，有間隙，使病毒外形酷似皇冠。IBV內(nèi)部有RNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成的螺旋狀核衣殼構(gòu)成，寬約9-16nm，呈長(zhǎng)頸瓶樣或圈樣[4]。2.2理化特性IBV對(duì)外界環(huán)境的抵抗力不強(qiáng)，多數(shù)毒株56℃15min及45℃90min即被滅活。耐酸不耐堿。0.1%的福爾馬林可使其完全滅活。IBV對(duì)乙醚、氯仿及普通消毒劑敏感，但20%的脂溶劑只能減少病毒的滴度而不能使其完全滅活。0.2%的去氧膽堿鈉溶液在常溫作用下10min能完全滅活雞胚尿囊液中的病毒?？杀?.1%的甲醛、0.1%去氧膽酸鹽、0.05-0.1%β丙內(nèi)酯滅活。10%葡萄糖對(duì)IBV有穩(wěn)定作用。該病毒對(duì)低溫保存穩(wěn)定，雞胚尿囊液中的病毒科在-30--60度條件下存活幾個(gè)月，病毒在PH=7.82.3基因組特點(diǎn)及構(gòu)造蛋白含有冠狀病毒基因組的普通構(gòu)造特點(diǎn)，Boursnell等測(cè)定了其全部序列，共有27608nt，比現(xiàn)在所知的任何RNA病毒都大得多，5＇末端和3＇末端有明顯的同源性，5＇末端20kb為1個(gè)單個(gè)基因，它很可能轉(zhuǎn)錄翻譯成依賴于RNA的RNA聚合酶。分析此20kb基因序列，發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)開放的閱讀框架（ORF），分別為OFR1和ORF2＇，負(fù)鏈RNA轉(zhuǎn)錄成的6種mRNA含有相似的3＇末端，5＇末端的先導(dǎo)序列約為60nt，mRNAE、C、A分別編碼病毒的3種重要構(gòu)造蛋白[5]。IBV含有三種構(gòu)造蛋白，即纖突蛋白S、膜蛋白M和核衣蛋白N。S蛋白往往分解為S1和S22個(gè)亞單位糖蛋白，S1蛋白能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生IBV特異性中和抗體和血凝克制蛋白。M糖蛋白和核衣殼N蛋白相對(duì)保守，他們和S1、S2一起，在免疫過程中起作用。3流行病學(xué)IB自然感染僅發(fā)生于雞，多個(gè)年紀(jì)的雞均易感，但感染重要侵害1-4周齡的幼雞和雛雞，并引發(fā)死亡，隨雞年紀(jì)的增加，抵抗力逐步加強(qiáng)。IBV自然感染普通在48h內(nèi)出現(xiàn)癥狀；人工接種后24h到第7d始終可從雞氣管、腎、法氏囊中分離出病毒。雛雞感染后死亡率為20%-30%，有報(bào)道腺胃型IB雛雞死亡率可達(dá)95%[6]。本病重要通過呼吸道感染，也可因污染的飼料、飲水、用品等經(jīng)消化道感染，病雞康復(fù)后帶毒時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)數(shù)周。本病一年四季均可發(fā)生，但以冬季最為嚴(yán)重。炎熱、嚴(yán)寒、擁擠、通風(fēng)不良及維生素、礦物質(zhì)、微量元素的缺少都能夠促使本病的發(fā)生。4臨床癥狀和病理剖檢變化IBV自然感染潛伏期較長(zhǎng)，有母源抗體的雛雞可長(zhǎng)達(dá)6d以上，人工感染的普通為18-36h，IBV感染的癥狀與感染的毒株、雞的日齡、雞場(chǎng)的管理水平、免疫水平和應(yīng)激狀況及與否并發(fā)癥有關(guān)。IB在臨床上分為呼吸型，腎型，腺胃型等3種類型。呼吸系統(tǒng)的雞的病理變化重要是鼻炎，支氣管炎，偶有氣囊渾濁增厚；由侵害腎的毒株致病時(shí)，腎臟腫大蒼白，泄殖腔內(nèi)稀薄糞便中夾雜白色尿酸鹽泡狀物；有侵害消化道毒株引發(fā)的病變，可見腺胃腫大，肌胃癟縮，肌肉弛軟，胸腺雞法氏囊嚴(yán)重萎縮，肌肉蒼白，肝臟腫大充血。4.1呼吸型傳支[7]呼吸型IB，多發(fā)生于5周齡以內(nèi)的雛雞，雛雞往往忽然出現(xiàn)呼吸道癥狀，并很快涉及全群，病雞重要臨床癥狀為：精神不振，呼吸困難，氣管啰音，咳嗽，打噴嚏，夜間沉寂時(shí)較明顯。病雞眼濕潤(rùn)，流鼻液；但不不大于6周齡的雞常無鼻液。幼雞死亡率約25%，雛雞可達(dá)75%-90%。成年雞感染重要體現(xiàn)為產(chǎn)蛋下降，產(chǎn)亂殼蛋、畸形蛋和粗殼蛋，蛋白稀薄如水，蛋黃與蛋白分離。剖檢時(shí)見呼吸道內(nèi)有漿液性、卡他性和干酪樣滲出，氣囊渾濁，含有黃色干酪滲出物。在大的氣管周邊可見小面積的肺炎。產(chǎn)蛋母雞可見卵黃性腹膜炎，腹腔內(nèi)可發(fā)現(xiàn)液體狀的卵黃物質(zhì)，卵巢正?；虺溲?、出血、變形。輸卵管萎縮，其長(zhǎng)度和重量明顯減少或發(fā)生囊腫。雛雞早期感染IBV，有時(shí)可造成生殖系統(tǒng)的損傷，如某些產(chǎn)蛋雞，外觀食欲均正常，但不產(chǎn)蛋，因素是卵子發(fā)育不良，輸卵管管壁較薄，短縮，甚至積水。4.2腎型傳支腎型IB，現(xiàn)在發(fā)生較多，流行廣。是在90年代早期、中期廣泛發(fā)生和流行的疾病。重要發(fā)生于20-50日齡的雛雞，早期有的可見呼吸道癥狀。排白色糞便，有時(shí)肛門周邊粘滿糞便。病雞食欲下降，飲欲增強(qiáng)，呼吸癥狀以啰音為主，快速涉及全群，出現(xiàn)精神沉郁，羽毛松亂，水樣排泄物及飲水量增加。40日齡后來的雞發(fā)病較少，成年雞極少發(fā)生。特性性病變時(shí)腎臟腫大，較正常的大1-2倍，整個(gè)腎臟呈斑駁狀花腎，腎小管和輸尿管擴(kuò)張，內(nèi)充滿白色尿酸鹽，直腸后段雞泄殖腔均可見到灰白色稀薄含尿酸鹽的糞便。部分病雞的心包、肝、脾和腸道表面散布許多石灰樣物，與痛風(fēng)病變相似。4.3腺胃型傳支腺胃型IB多發(fā)生于已免疫過的雞群，重要發(fā)生于20~90日齡的雞群，患病早期體現(xiàn)咳嗽，甩鼻子，少數(shù)病雞有呼吸啰音，飲食無明顯變化；有的機(jī)眼瞼腫脹，眼角有泡沫狀液體流出，約兩周左右呼吸癥狀消失或減輕，病雞日益消瘦，雞冠蒼白，羽毛蓬松，閉目嗜睡，飲食減少，廢絕，排白色綠色水樣便，最后衰竭死亡[8]。開產(chǎn)雞除呼吸道癥狀外，還可看到產(chǎn)蛋量和質(zhì)量的下降，產(chǎn)畸形蛋、軟皮蛋。下降程度與產(chǎn)蛋階段和致病毒株有親密關(guān)系，并且產(chǎn)蛋水平多不能恢復(fù)到感染前水平；另外種雞蛋孵化率下降，但死亡率普通很低。重要剖檢病變時(shí)雞體消瘦，腺胃腫大，呈球狀，腺胃壁增厚，腺胃粘膜出血和潰瘍，個(gè)別腺胃乳頭周邊出血，膜充血、出血。使用傳統(tǒng)的疫苗和腎傳支疫苗，不能減少發(fā)病率和死亡率。5診療5.1病原的分離與鑒定在感染雞出現(xiàn)臨床癥狀時(shí)采用氣管拭子法采集病料，或病雞死后取病料組織如肺、氣管、支氣管、腎、輸卵管盲腸等。將氣管拭子、組織病料置于2~3ml無菌的磷酸胰蛋白胨肉湯中，低速離心，取上清用微孔濾膜過濾，濾液備用。將肺、腎等組織病料置于加雙抗的TPB中，用玻璃勻漿器勻漿，過濾，取上清備用。初代次分離病毒普通采用雞胚[9]。由于ND疫苗的廣泛使用，病料常被NDV污染，因此，分離IBV應(yīng)首先排除NDV[10]。1990年李康然建議按以下程序分離IBV效果較好：病料→勻漿過濾加雙抗于4℃4-6h后→接種9-10日齡雞胚48h后→雞胚盲傳3-5代→HA檢查陰性，NDV干擾實(shí)驗(yàn)陽性、侏儒胚陽性者→進(jìn)一步做IBV鑒定。通過此辦法某些變異株被不停發(fā)現(xiàn)，張安國(guó)等分離出腺胃型IBV[11]，杜元釗分離到IBV變異株YVVF7[12]，朱站波等鑒定分離出腎型IBV毒株MK、M2[13]。5.2血清學(xué)診療技術(shù)IB的血清學(xué)診療辦法有瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)（AGP），血凝實(shí)驗(yàn)(HI),免疫熒光實(shí)驗(yàn)(IF)，免疫擴(kuò)散（D），酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），斑點(diǎn)-酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Dot-ELISA）及中和實(shí)驗(yàn)（VN）等?，F(xiàn)在應(yīng)用最廣泛的是IFA和ELISA。ELISA在IB的近期感染、持續(xù)感染中均可應(yīng)用，Wif采用抗體捕獲ELISA檢測(cè)IBV特異性IgM獲得成功，某些研究表明[15]（Hong等；Stein等）日糧采食量水平、蛋白質(zhì)含量和喂養(yǎng)水平會(huì)變化單一飼料原料的消化率，不同原料之間也存在互作關(guān)系，急性期感染敏感性為83%~100%，Ignjafovie[15]建立的ELISA也含有較高的敏感性。Wang[16]運(yùn)用IFA與分子生物學(xué)技術(shù)在IBV鑒定應(yīng)用上比較發(fā)現(xiàn)IFA在兩種毒或更多毒株同時(shí)感染時(shí)，敏感性較低，但含有快速和成本低的特點(diǎn)。VN作為常規(guī)診療的辦法費(fèi)力費(fèi)時(shí)，對(duì)野毒需育結(jié)3-4代雞胚才會(huì)發(fā)生典型病變[17]。AGP就診療效果與ELISA得一致性較好，但由于沉淀抗體在感染后幾周內(nèi)消失，因此AGP只合用于近期感染的診療[18]；HI對(duì)近期感染、持續(xù)感染都可合用，總之，血清學(xué)檢查含有良好的特異性和不同毒株抗原交叉關(guān)系復(fù)雜，因此原則很難統(tǒng)一，單抗和原則化診療抗原可解決這一問題，有關(guān)研究正在進(jìn)行中。5.3分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用PCR技術(shù)制備放射性標(biāo)記或生物素標(biāo)記的核酸探針，用于IBV的檢測(cè)，含有敏感、特異、快速等優(yōu)點(diǎn)。采用聚合酶聯(lián)氏反映（RT-PCR）結(jié)合限制性片段長(zhǎng)度多胎性分析，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性的內(nèi)切酶消化，不同血清型IBV的PCR產(chǎn)物可產(chǎn)生不同數(shù)目、不同長(zhǎng)度的DNA片段，參考原則毒株便可鑒定血清型。其成果和中和實(shí)驗(yàn)成果完全一致，現(xiàn)在這種辦法諸多?？傊?，IB的診療與其它并相比有不少的困難，一是由于IB血清型和突變株較多，不同的毒株之間的抗原交叉關(guān)系非常復(fù)雜；二是診療抗原制備復(fù)雜，并且不同的毒株，實(shí)驗(yàn)的成果也有差別。隨著科學(xué)及生物技術(shù)的發(fā)展，相信會(huì)有更合用的診療技術(shù)出現(xiàn)。6防治由于IB是病毒引發(fā)的疾病，一旦發(fā)生后無特效藥品治療，重要采用綜合防治方法。故應(yīng)注意防止，平時(shí)加強(qiáng)喂養(yǎng)管理，嚴(yán)格檢疫、隔離、消毒、免疫等一系列綜合性防治方法。如不要從疫區(qū)引種雞，加強(qiáng)喂養(yǎng)管理，供應(yīng)適宜的飼料及微量元素等，保護(hù)好環(huán)境衛(wèi)生，定時(shí)消毒，適度通風(fēng)，舍溫、適度要適宜，喂養(yǎng)密度合理，減少應(yīng)激。作好常規(guī)的免疫接種，國(guó)內(nèi)運(yùn)用中草藥制劑已獲得良好的治療成果，同時(shí)給集群應(yīng)用抗菌藥品，對(duì)避免繼發(fā)感染有良好的作用。疫苗接種已成為防止IB的重要手段，并相繼研制出常規(guī)的IB活苗和滅活苗，在生產(chǎn)中獲得了較好的效果。IBV弱毒苗可用于氣霧、滴鼻、點(diǎn)眼、飲水的雞胚免疫。點(diǎn)眼、滴鼻和同居感染比飲水效果好。雞傳染性支氣管炎的國(guó)產(chǎn)弱毒苗有H120和H52等。H120毒力弱，對(duì)14日齡的雛雞安全，重要用于雛雞的初次免疫。H52毒力強(qiáng)，可引發(fā)14日齡的雞較嚴(yán)重的反映，多用于8-10周齡的雞重復(fù)免疫。肉仔雞用H120于7日齡、30日齡免疫較合理。蛋雞用H120于7日齡雞30日齡點(diǎn)眼、滴鼻或飲水免疫；8周齡是用H52免疫；產(chǎn)蛋前用IB滅活油乳劑疫苗免疫。由于IBV血清型復(fù)雜且互相間交叉保護(hù)力弱，且新的血清型和變異株不停出現(xiàn)，傳統(tǒng)疫苗常出現(xiàn)免疫失敗，人們開始轉(zhuǎn)向研制廣譜、安全、高效的基因工程苗。Binns等運(yùn)用禽痘病毒作載體研制出基因工程苗。該苗可體現(xiàn)S1蛋白質(zhì)，通過檢測(cè)其在雞體內(nèi)復(fù)制的無毒性，以及它所激發(fā)抗IBV保護(hù)性免疫應(yīng)答的能力均獲得滿意的成果。Tomley用Beaudette株纖突蛋白基因和疫苗病毒W(wǎng)R株重組，得到了能感染細(xì)胞產(chǎn)生含有S1和S2亞基的糖基化的180kD的多肽前體的重組病毒。由于IBV基因有很高的突變率，因此，該種基因工程苗的變化范疇尚有待進(jìn)一步的研究與完善。參考文獻(xiàn)[1]BeachJCoronavirusIBVstructuralcharacter:Isolationofthespikeprotein[J].J.Cen.Virol.,1936,64：2577-2583.[2]王紅寧.禽傳染性支氣管炎綜合防治[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,:228-245.[3]余姍.腺胃病變中分離到的冠狀病毒的鑒定及其致病研究[D].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文,1999,6.[4]殷震.動(dòng)物病毒學(xué)[M].科學(xué)出版社,1997:675-683.[5]BoursnellME,etal.Completionofthesequenceofthegenomeofthecoronavirusavianinfectiousbronchitisvirus[J].J.Gen.virol,1987,68:57-77.[6]許金俊,朱國(guó)強(qiáng),許益民,等.雞傳染性腺胃炎腺胃的初步調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,1997,23（11）:11-12.[7]張中直.雞群發(fā)病診療防治[M].北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1993,28-32.[8]張安國(guó),劉彥,左穎,等.雞腺胃型傳支氣管炎的診療及病毒分離鑒定[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,1999,29（11）:24-25.[9]吳延功.雞傳染性支氣管炎的診療[C].中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第八次論文集（續(xù)集）.1996，(10),69-71.[10]程金科.雞傳染性支氣管炎的病毒分離與鑒定[J].中國(guó)畜牧傳染病,1992,(2):60-62.[11]杜元釗,范根成.產(chǎn)蛋雞傳染性支氣管炎病毒變異的分離鑒定.中國(guó)畜牧傳染病[J],1995（60）：1-3.[12]張安國(guó),劉彥,左穎,等.雞腺胃型傳支氣管炎的診療及病毒分離鑒定[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,1999,2（11）:24-25.[13]朱戰(zhàn)波,侯喜林,余麗芝,等.雞腎型傳染性支氣管炎病毒的分離鑒定[J].中國(guó)畜牧科技,,30（5）:18-19.[14]HongD,RaglandD,AdeolaO.Additivilityandassociativeeffectsofmetabolizableenergyandaminoaciddigestibilityofcorn,soybeanmeal,