任務(wù)群（八）生物技術(shù)與工程【任務(wù)知識(shí)重建構(gòu)】【教材基點(diǎn)再挖掘】一、易漏填空(1)厭氧無氧(2)好氧O2、糖源糖源乙醛乙醛(3)維生素酸性中性或弱堿性無氧(4)防止雜菌污染(5)平板劃線法稀釋涂布平板法(6)連續(xù)劃線逐步稀釋(7)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落(8)微生物菌體(9)一套染色體隱性性狀(10)選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)(11)顯微操作法梯度離心沒有穿透卵母細(xì)胞透明帶(12)兩個(gè)極體雌、雄原核(13)二苯胺(14)T-DNA染色體DNA(15)凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象(16)乳腺中特異表達(dá)的基因二、長(zhǎng)句表達(dá)(1)加熱煮沸是為了殺滅雜菌，冷卻之后使用是為了保證乳酸菌等微生物的生命活動(dòng)不受影響(2)使二氧化碳排出，不打開瓶蓋是防止氧氣和有害雜菌進(jìn)入(3)防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上(污染培養(yǎng)基和破壞菌落)和防止培養(yǎng)基水分過快蒸發(fā)(4)將聚集的菌體逐步稀釋以獲得不連續(xù)的單個(gè)菌落(5)用完全培養(yǎng)基接種后在相同條件下同時(shí)培養(yǎng)(6)纖維素分解菌不止一種(或多種微生物都能分解纖維素)(7)使菌種與發(fā)酵底物充分接觸，提高發(fā)酵效率(8)避免雜菌在培養(yǎng)基上迅速生長(zhǎng)消耗營(yíng)養(yǎng)，且有些雜菌會(huì)危害培養(yǎng)物的生長(zhǎng)(9)血清中含有多種維持細(xì)胞正常代謝和生長(zhǎng)的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、氨基酸、未知的促生長(zhǎng)因子等(10)早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移(11)細(xì)菌在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中形成了一套完善的防御機(jī)制，其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識(shí)別序列，或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到限制酶所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開(12)引物能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)，使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸

任務(wù)1微生物的分離、培養(yǎng)與應(yīng)用1.解析：選A。根據(jù)題意可知，trpX能合成酶Y和酶Z，不能合成酶X；trpY能合成酶X和酶Z，不能合成酶Y；trpZ能合成酶X和酶Y，不能合成酶Z。已知3種酶均不能進(jìn)出細(xì)胞，而色氨酸合成途徑的中間產(chǎn)物積累到一定程度時(shí)可分泌到胞外。分析題圖可知，①trpX在靠近trpY區(qū)域一側(cè)、trpZ區(qū)域一側(cè)均能生長(zhǎng)，說明trpX可以利用trpY、trpZ色氨酸合成途徑中分泌到胞外的中間產(chǎn)物合成色氨酸；②trpY在靠近trpZ區(qū)域一側(cè)可以生長(zhǎng)，說明trpY可以利用trpZ色氨酸合成途徑中分泌到胞外的中間產(chǎn)物合成色氨酸；③trpZ不能生長(zhǎng)。由①②分析可知，trpX、trpY均可合成色氨酸合成途徑所需的最后一種酶，又因?yàn)閠rpX能合成酶Y和酶Z，trpY能合成酶X和酶Z，故trpX、trpY均可合成的酶為酶Z；由①分析可知，trpY、trpZ均能合成色氨酸合成途徑的中間產(chǎn)物，故trpY、trpZ均可合成色氨酸合成途徑所需的第一種酶，又因?yàn)閠rpY能合成酶X和酶Z，trpZ能合成酶X和酶Y，故trpY、trpZ均可合成的酶為酶X。綜上，酶X為色氨酸合成途徑所需的第一種酶，酶Z為色氨酸合成途徑所需的最后一種酶，則酶Y為色氨酸合成途徑所需的第二種酶，即3種酶在該合成途徑中的作用順序?yàn)閄→Y→Z，A正確。2.解析：選A。由題干信息“某些香蕉植株組織中存在的內(nèi)生菌可防治香蕉枯萎病”可知，在大量感染香蕉枯萎病的香蕉種植園內(nèi)，應(yīng)當(dāng)從未感病植株上采集樣品，A錯(cuò)誤；獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，將采集的樣品充分消毒后，用無菌水沖洗，收集沖洗液進(jìn)行無菌檢測(cè)，B正確；由題圖可知，樣品研磨后進(jìn)行了稀釋涂布從而獲得了純培養(yǎng)物，所以將無菌檢測(cè)合格的樣品研磨，經(jīng)稀釋涂布平板法分離能得到內(nèi)生菌的單菌落，C正確；判斷內(nèi)生菌的抗性效果需設(shè)置對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組不接種內(nèi)生菌得到病原菌菌斑，實(shí)驗(yàn)組接種內(nèi)生菌得到病原菌菌斑，然后比較對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的菌斑大小，實(shí)驗(yàn)組病原菌菌斑越小，表示內(nèi)生菌抗性效果越好，D正確。3.解析：(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法把死菌和活菌一起計(jì)數(shù)。菌落計(jì)數(shù)法只統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)，可能存在多個(gè)活菌形成一個(gè)菌落的情況，故前者的數(shù)量多于后者。(2)從100mL細(xì)菌原液中取1mL加入無菌水中得到10mL稀釋菌液，即稀釋了10倍，200μL＝0.2mL，細(xì)菌原液中細(xì)菌濃度＝(菌落數(shù)÷菌液體積)×稀釋倍數(shù)＝(100÷0.2)×10＝5000(個(gè)/mL)。(3)菌落計(jì)數(shù)過程中，涂布器應(yīng)先在酒精燈上灼燒，冷卻后再涂布。灼燒的目的是殺死涂布器上存在的微生物，防止污染，冷卻的目的是防止溫度過高殺死菌種。(4)由圖可得，A消毒液處理后活菌數(shù)減少量最多，且殺菌時(shí)間較短，效率最高，因此A消毒液殺菌效果最好。(5)大腸桿菌在伊紅—亞甲藍(lán)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈深紫色。答案：(1)前者將活菌和死菌一起計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般是活菌和死菌數(shù)量的總和；后者只計(jì)數(shù)活菌且存在多個(gè)活菌形成一個(gè)菌落的情況(2)5000(3)殺死涂布器上存在的微生物，防止污染防止溫度過高殺死菌種(4)AA消毒液處理后活菌數(shù)減少量最多，且殺菌時(shí)間較短，效率最高(5)深紫1.解析：選C。微生物菌種純化未必都需要使用選擇培養(yǎng)基，采用平板劃線法或稀釋涂布平板法也能獲得純培養(yǎng)物，A錯(cuò)誤；一般都是采用濕熱滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，如高壓蒸汽滅菌法，B錯(cuò)誤；接種前、接種后培養(yǎng)皿都要倒置，倒置既可防止培養(yǎng)基水分散失過快，又能防止冷凝形成的水珠倒流污染培養(yǎng)基，C正確；培養(yǎng)基滅菌之前就要調(diào)好pH，滅菌后就要嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，D錯(cuò)誤。2.解析：選D。培養(yǎng)黑曲霉時(shí)一般需將培養(yǎng)基調(diào)至酸性，但單細(xì)胞蛋白指微生物菌體，果膠酶不屬于單細(xì)胞蛋白，A錯(cuò)誤；伊紅—亞甲藍(lán)培養(yǎng)基是鑒定大腸桿菌的培養(yǎng)基，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)該用剛果紅培養(yǎng)基篩選高產(chǎn)纖維素酶菌株，B錯(cuò)誤；酒精發(fā)酵的菌種為酵母菌，當(dāng)接種量為12%左右時(shí)，發(fā)酵后的酒精含量與殘?zhí)呛壳€有交點(diǎn)，但兩者的縱坐標(biāo)數(shù)值及單位均不同，故發(fā)酵后二者含量不同，C錯(cuò)誤；由圖可知，菌種接種量為15%時(shí)對(duì)應(yīng)的酒精含量達(dá)到最大值，接種量超過15%，菌種數(shù)量大，自身的生長(zhǎng)會(huì)大量消耗反應(yīng)物，導(dǎo)致酒精產(chǎn)量降低，D正確。3.解析：選A。圖中a為液體培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；b、c、d使用的接種方法為稀釋涂布平板法，所用的接種工具為涂布器，B正確；微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，該培養(yǎng)基中胰蛋白胨和酵母浸粉可以給農(nóng)桿菌提供碳源和氮源，C正確；圖中細(xì)菌稀釋了103倍，若b、c、d中菌落數(shù)分別為48、57、60，則在a中農(nóng)桿菌的密度約為(48＋57＋60)÷3÷0.1×103＝5.5×105(個(gè)/mL)，D正確。

任務(wù)2傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)與發(fā)酵工程的應(yīng)用1.解析：選D。黑曲霉利用糖類發(fā)酵產(chǎn)生檸檬酸時(shí)需要充足的氧，相同菌體密度下，菌球體越大越不利于菌體與氧氣接觸，檸檬酸產(chǎn)生速率越慢，A正確；菌體內(nèi)銨離子濃度升高時(shí)，可解除檸檬酸對(duì)其合成途徑的反饋抑制，因此發(fā)酵中期添加一定量的硫酸銨，提高銨離子濃度，能提高檸檬酸產(chǎn)量，B正確；發(fā)酵過程中pH下降導(dǎo)致細(xì)菌生命活動(dòng)所必需的酶失活，可抑制大部分細(xì)菌的生長(zhǎng)，C正確；發(fā)酵結(jié)束后，將過濾所得的固體物質(zhì)進(jìn)行分離、純化、濃縮、干燥等一系列操作后才能獲得檸檬酸產(chǎn)品，D錯(cuò)誤。2.解析：選D。醋酸菌是好氧細(xì)菌，當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)能通過復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)將糖分解成乙酸，反應(yīng)式為：C6H12O6＋2O2eq\o(→,\s\up7(酶))2CH3COOH(乙酸)＋2H2O＋2CO2＋能量。當(dāng)缺少糖源時(shí)則直接將乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛變?yōu)橐宜幔磻?yīng)式為：C2H5OH＋O2eq\o(→,\s\up7(酶))CH3COOH(乙酸)＋H2O＋能量。A、B、C正確。醋酸菌屬于原核生物，沒有線粒體，D錯(cuò)誤。3.解析：選C。白酒的釀造主要依靠釀酒酵母，由于窖泥中含有大量與釀酒相關(guān)的微生物，故傳統(tǒng)白酒的釀造是在以釀酒酵母為主的多種微生物共同作用下完成的，A正確；窖池內(nèi)各種微生物形成了相對(duì)穩(wěn)定的體系，且釀造過程產(chǎn)生的酒精也會(huì)抑制雜菌的生長(zhǎng)與繁殖，使釀造過程不易污染雜菌，B正確；酵母菌是兼性厭氧菌，與無氧呼吸相比，細(xì)胞有氧呼吸產(chǎn)生的能量更多，更能滿足酵母菌大量繁殖時(shí)的需求，故對(duì)分離的釀酒酵母擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)需要在有氧的條件下進(jìn)行，C錯(cuò)誤；谷物原料如高粱、玉米、大米等富含淀粉，因此從谷物原料發(fā)酵形成的酒糟中可分離出產(chǎn)淀粉酶的微生物，D正確。1.解析：選C。在泡菜發(fā)酵中期、后期，乳酸含量高，亞硝酸鹽含量低，泡菜品質(zhì)良好，A錯(cuò)誤；腐乳味道鮮美是因?yàn)槎垢械牡鞍踪|(zhì)被分解成多肽和氨基酸，該過程中起主要作用的是毛霉，B錯(cuò)誤；淀粉分解能形成麥芽糖和葡萄糖，甜面醬的甜味主要來源于微生物水解淀粉形成的麥芽糖和葡萄糖，C正確；在制作泡菜時(shí)壇口要密封，主要是為了創(chuàng)造無氧環(huán)境，便于乳酸菌發(fā)酵，D錯(cuò)誤。2.解析：選C。在微生物的作用下，泡菜發(fā)酵過程中原有有機(jī)物分解，導(dǎo)致其種類增加，A正確；不同菌種的發(fā)酵溫度有一定差異，接種紅茶菌后的發(fā)酵階段需要根據(jù)溫度來調(diào)控發(fā)酵時(shí)間，B正確；溫度過高、食鹽用量不足10%、腌制時(shí)間過短，都易使細(xì)菌大量繁殖導(dǎo)致亞硝酸鹽含量增加，C錯(cuò)誤；紅茶菌的品質(zhì)與茶基、產(chǎn)地以及保存條件均有關(guān)，D正確。3.解析：選A。制備圖示培養(yǎng)基需要在滅菌前調(diào)節(jié)pH，否則會(huì)引起雜菌污染，A正確；該抑菌實(shí)驗(yàn)為檢測(cè)暹羅芽孢桿菌代謝物對(duì)沙門氏菌和大腸桿菌的抑制能力，互為對(duì)照，因此進(jìn)行圖示實(shí)驗(yàn)不需要設(shè)計(jì)對(duì)照，B錯(cuò)誤；圖示X為離心后得到的下層沉淀，含有暹羅芽孢桿菌，上清液中含有代謝物，C錯(cuò)誤；在抑菌圈邊緣生長(zhǎng)的細(xì)菌可能是耐藥菌，從抑菌圈邊緣挑取菌落涂布平板重復(fù)實(shí)驗(yàn)，抑菌圈平均直徑變小，D錯(cuò)誤。4.解析：選B。酒精發(fā)酵的適宜溫度為18～30℃，醋酸發(fā)酵的適宜溫度為30～35℃，因此酒精發(fā)酵時(shí)的溫度應(yīng)低于醋酸發(fā)酵時(shí)的溫度，A正確；酒精發(fā)酵時(shí)微生物主要來自酵母活化液及其后代，B錯(cuò)誤；酶的作用原理是降低反應(yīng)的活化能，因此α-淀粉酶通過降低反應(yīng)的活化能達(dá)到液化的目的，C正確；釀醋時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生乙醛等有害物質(zhì)，因此需要對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)后才能銷售，D正確。

任務(wù)3植物細(xì)胞工程1.解析：選B。植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，若要將愈傷組織分散成單個(gè)細(xì)胞來制備懸浮細(xì)胞，常采用纖維素酶和果膠酶處理，A合理；細(xì)胞培養(yǎng)裝置中細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)，為使細(xì)胞獲得充足的氧氣并及時(shí)排出多余氣體，裝置中的充氣管要置于溶液中，排氣管要置于液面上方，B不合理；培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)要營(yíng)造無菌環(huán)境，可在充氣口增設(shè)無菌濾器，以防止雜菌污染，C合理；細(xì)胞培養(yǎng)必須有適宜的溫度，所以該裝置需增設(shè)溫度監(jiān)測(cè)和控制設(shè)備，D合理。2.解析：選D。題圖①為脫分化過程，脫分化過程中形成的愈傷組織是排列不規(guī)則的薄壁組織團(tuán)塊，A錯(cuò)誤；愈傷組織細(xì)胞分化時(shí)可能會(huì)發(fā)生基因突變，但不會(huì)發(fā)生基因重組，B錯(cuò)誤；生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值高時(shí)，有利于根的分化、抑制芽的形成，若3號(hào)培養(yǎng)基用于誘導(dǎo)生根，其細(xì)胞分裂素濃度與生長(zhǎng)素濃度的比值應(yīng)小于1，C錯(cuò)誤；百合分生區(qū)附近的病毒極少，甚至無病毒，可以作為該研究中的外植體，D正確。3.解析：選D。植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，故用纖維素酶和果膠酶去除愈傷組織的細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體，A錯(cuò)誤；融合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁標(biāo)志著原生質(zhì)體融合完成，之后才能形成愈傷組織，B錯(cuò)誤；體細(xì)胞雜交獲得的雜種植株細(xì)胞中具有來自親本的2個(gè)細(xì)胞核，但最后會(huì)融合成1個(gè)細(xì)胞核，C錯(cuò)誤；通過愈傷組織再生出多個(gè)完整植株的過程屬于植物組織培養(yǎng)，屬于無性繁殖，D正確。1.解析：選B。植物莖尖、根尖分生區(qū)附近的病毒極少，甚至沒有病毒，因此可用植物莖尖、根尖來培育脫毒苗，A正確；DNA甲基化不改變DNA堿基排列順序，但會(huì)使基因表達(dá)和表型發(fā)生可遺傳變化，因?yàn)榧谆揎椏赡?，所以不能穩(wěn)定遺傳，B錯(cuò)誤；由題干信息可知，共同侵染時(shí)TB通過降低TV基因組甲基化水平從而增強(qiáng)TV的致病性，C正確；TV單獨(dú)侵染不會(huì)引起植物發(fā)病的原因可能是植物通過對(duì)病毒基因組進(jìn)行DNA甲基化修飾從而抵御病毒的侵染，D正確。2.解析：選D。紫杉醇是紅豆杉屬植物體內(nèi)的一種次生代謝物，所以為培育產(chǎn)紫杉醇的柴胡，需要用紫外線照射紅豆杉細(xì)胞，使其染色體片段化，A錯(cuò)誤；誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合，應(yīng)先用酶解法去除細(xì)胞壁，獲取原生質(zhì)體，然后加入聚乙二醇誘導(dǎo)，B錯(cuò)誤；得到產(chǎn)紫杉醇的柴胡的雜種細(xì)胞的染色體數(shù)目應(yīng)介于柴胡的染色體數(shù)目(12)和兩種生物染色體數(shù)目之和(36)之間，C錯(cuò)誤；雜種細(xì)胞中兩種植物細(xì)胞的染色體間排斥較為明顯，所以對(duì)稱性細(xì)胞雜交技術(shù)中不同物種間基因表達(dá)的干擾程度高于非對(duì)稱性細(xì)胞雜交技術(shù)，D正確。3.解析：選A。實(shí)驗(yàn)所用葉片、嫩芽和花芽經(jīng)過滅菌后會(huì)死亡，經(jīng)過消毒處理后可用于培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；HBG葉片經(jīng)誘導(dǎo)后形成愈傷組織時(shí)需要用固體培養(yǎng)基，B正確；分析表格可知東云系多肉植物品種HBG和阿姆斯特壯以葉片為外植體時(shí)成活率最低，結(jié)合污染率各組數(shù)值可猜測(cè)東云系多肉植物可能因?yàn)槿~片污染率高導(dǎo)致葉插成活率低，C正確；由表可知東云系多肉植物進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)花芽的污染率最低，成活率最高，因此優(yōu)選部位為花芽，D正確。

任務(wù)4動(dòng)物細(xì)胞工程1.解析：選B。單克隆抗體的制備涉及細(xì)胞融合技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，mAb屬于單克隆抗體，其制備可能涉及細(xì)胞融合技術(shù)，A正確；注射mAb可以促進(jìn)胰島A細(xì)胞增殖，而胰島A細(xì)胞可分泌胰高血糖素，可見注射mAb可提高胰腺分泌胰高血糖素的量，B錯(cuò)誤；mAb是胰高血糖素受體單克隆抗體，故mAb和胰高血糖素均能與胰高血糖素受體特異性結(jié)合，C正確；胰高血糖素主要作用于肝，促進(jìn)肝糖原分解成葡萄糖進(jìn)入血液，促進(jìn)非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)變成糖，使血糖濃度回升到正常水平，D正確。2.解析：選D。在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞需要氧氣進(jìn)行有氧呼吸，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，而非密封，A錯(cuò)誤。細(xì)胞80%～90%或剛剛?cè)繀R合成片時(shí)是傳代的理想時(shí)期，由題圖可知：①→②屬于指數(shù)增長(zhǎng)期，在此期間，幾乎無接觸抑制；②以后，增長(zhǎng)速率變慢，說明開始出現(xiàn)接觸抑制，即將全部匯合成片。因此，②更適合傳代培養(yǎng)，B錯(cuò)誤。對(duì)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，需要先用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理，使之分散為單個(gè)細(xì)胞，然后再用離心法收集，C錯(cuò)誤。細(xì)胞增長(zhǎng)進(jìn)入平臺(tái)期可能與細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累、培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏、接觸抑制有關(guān)，D正確。3.解析：選C。膠原蛋白酶可以催化分解細(xì)胞外的膠原蛋白，因此利用膠原蛋白酶處理，可分散貼壁生長(zhǎng)的骨髓瘤細(xì)胞，A正確；由于蛋白S含有多個(gè)不同的抗原決定基，每一個(gè)抗原決定基能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體，單克隆抗體A和單克隆抗體B來自不同的雜交瘤細(xì)胞，因此制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B不是相同的單克隆抗體，B正確；用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可傳代培養(yǎng)，也可以冷凍保存，C錯(cuò)誤；單克隆抗體A和單克隆抗體B都來自篩選出的雜交瘤細(xì)胞，因此都能夠特異性識(shí)別S蛋白上的抗原決定簇，D正確。1.解析：選D。經(jīng)劃痕處理后的細(xì)胞需放在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，以維持培養(yǎng)液的pH，A正確；為更好地達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，可適當(dāng)降低培養(yǎng)基中血清的濃度，以減少細(xì)胞遷移，B正確；并非所有的動(dòng)物細(xì)胞都適合做劃痕實(shí)驗(yàn)，如神經(jīng)細(xì)胞已高度分化不能再分裂，故不適合做劃痕實(shí)驗(yàn)，C正確；劃痕縮小直至愈合，不完全是由細(xì)胞遷移所導(dǎo)致的，也有細(xì)胞增殖的原因，D錯(cuò)誤。2.解析：選D。在進(jìn)行核移植時(shí)，可以通過顯微操作技術(shù)，將供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞，A錯(cuò)誤；若從野生動(dòng)物體內(nèi)采集到的體細(xì)胞數(shù)目較少，可先用添加動(dòng)物血清的液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，以增加體細(xì)胞的數(shù)目，B錯(cuò)誤；種間體細(xì)胞核移植(iSCNT)技術(shù)的原理是動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性，操作過程中可用Ca2＋載體激活重構(gòu)胚，C錯(cuò)誤；在種間體細(xì)胞核移植(iSCNT)過程中，去核的卵母細(xì)胞來自不同種、科、目或綱的家畜(馴養(yǎng)動(dòng)物)，獲得的重構(gòu)胚的細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)可能不同，因此同一野生動(dòng)物經(jīng)iSCNT技術(shù)獲得的多個(gè)重構(gòu)胚中，遺傳物質(zhì)可能不完全相同，D正確。3.解析：選C。根據(jù)題意可知，DTMUVE蛋白單克隆抗體4A1可與E蛋白發(fā)生免疫反應(yīng)，將E蛋白注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中分離出已免疫的B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞分化后產(chǎn)生的漿細(xì)胞能夠分泌特定的抗體，A正確；用滅活的病毒或PEG處理，可促進(jìn)已免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，B正確；雜交瘤細(xì)胞株克隆培養(yǎng)時(shí)不會(huì)出現(xiàn)接觸抑制，C錯(cuò)誤；單克隆抗體4A1能準(zhǔn)確識(shí)別抗原的細(xì)微差異，D正確。

任務(wù)5胚胎工程1.解析：選B。超數(shù)排卵處理的做法是給供體注射促性腺激素，用促性腺激素處理后其卵巢卵泡發(fā)育和超數(shù)排卵，從而使一頭母畜一次排出比自然情況下多幾倍到十幾倍的卵子，用于配種或者人工授精和早期胚胎培養(yǎng)，A正確；從卵巢中剛采集的卵母細(xì)胞需培養(yǎng)至減數(shù)分裂Ⅱ中期時(shí)才可與獲能的精子進(jìn)行體外受精，B錯(cuò)誤；在胚胎移植前要對(duì)供體和接受胚胎的受體進(jìn)行同期發(fā)情處理，使供體與受體的生理狀況相同，因此受體藏羊丙需和藏羊甲進(jìn)行同期發(fā)情處理，C正確；后代丁是由藏羊甲的卵細(xì)胞和藏羊乙的精子結(jié)合形成的受精卵發(fā)育而來的，因此后代丁的遺傳物質(zhì)來源于藏羊甲和藏羊乙，D正確。2.解析：選D?？焖俜敝巢柹窖颍x擇遺傳性狀優(yōu)良的健康波爾母山羊進(jìn)行超數(shù)排卵，A正確；滋養(yǎng)層細(xì)胞和胚胎細(xì)胞都是由受精卵發(fā)育來的，基因相同，所以取滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行遺傳學(xué)檢測(cè)就可以知道胚胎遺傳物質(zhì)組成，且不會(huì)影響胚胎發(fā)育，B正確；山羊和綿羊是不同的物種，具有生殖隔離，不能將山羊的胚胎移植到綿羊子宮發(fā)育，即普通品質(zhì)的健康杜泊母綿羊不適合作為受體，C正確；生產(chǎn)中需選擇品質(zhì)優(yōu)良的波爾公山羊提供精子，D錯(cuò)誤。3.解析：選A。由表可知，與對(duì)照組相比，甲低濃度時(shí)促進(jìn)卵裂，高濃度時(shí)抑制卵裂，A錯(cuò)誤；對(duì)照組第一極體排出個(gè)數(shù)為70個(gè)，甲濃度＞10μg/mL時(shí)，第一極體排出個(gè)數(shù)＜70，故甲濃度過高抑制第一極體的排出，B正確；添加1μg/mL的甲，卵裂數(shù)增大，即該條件可提高受精后胚胎發(fā)育能力，C正確；卵子排出后，需要在輸卵管內(nèi)進(jìn)一步成熟，到MⅡ期，才具備與精子受精的能力，在本實(shí)驗(yàn)中，卵母細(xì)胞成熟的判斷標(biāo)準(zhǔn)是第一極體的排出，D正確。1.解析：選B?？寺匮R的獲得體現(xiàn)出動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性，不能說明動(dòng)物細(xì)胞具有全能性，A錯(cuò)誤；動(dòng)物體細(xì)胞核移植時(shí)需先將卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)至MⅡ期，B正確；利用電融合法可以促進(jìn)重構(gòu)胚的形成，Ca2＋載體處理可以激活重構(gòu)胚，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程，C錯(cuò)誤；胚胎移植前無需對(duì)供、受體進(jìn)行免疫檢查，受體不會(huì)對(duì)重構(gòu)胚產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，D錯(cuò)誤。2.解析：選C。采集到的精液可在液氮環(huán)境中長(zhǎng)期保存，A正確；在傳統(tǒng)的胚胎工程技術(shù)的基礎(chǔ)上，我國(guó)利用高密度基因芯片和肉牛全基因組選擇育種技術(shù)育成新品種“華西?！保纱丝芍?，利用高密度基因芯片可快速篩選具有優(yōu)良性狀的華西牛胚胎，B正確；為了提高繁殖效率，華西牛胚胎應(yīng)移植到有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的母牛的子宮中，C錯(cuò)誤；若要獲得遺傳物質(zhì)完全相同的兩個(gè)新個(gè)體，可對(duì)發(fā)育到桑葚胚期或囊胚期的早期胚胎進(jìn)行胚胎分割，同時(shí)，可以通過取樣滋養(yǎng)層進(jìn)行DNA分析、鑒定性別，因此利用胚胎分割技術(shù)，可對(duì)華西牛進(jìn)行性別鑒定和遺傳檢測(cè)，D正確。3.解析：選B。融合體胚胎的產(chǎn)生未進(jìn)行受精作用，細(xì)胞融合的目的是使第一極體與次級(jí)卵母細(xì)胞融合產(chǎn)生二倍體胚胎，激活的目的是使二倍體胚胎發(fā)育，A錯(cuò)誤；體外受精時(shí)先將精子置于獲能液中培養(yǎng)使其獲能，然后可直接在獲能液中進(jìn)行體外受精，B正確；嵌合體小豬同一個(gè)器官中可能含有不同來源的細(xì)胞，所以其細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)可能不同，C錯(cuò)誤；人—猴嵌合體胚胎難以長(zhǎng)期存活可能是由于細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)，早期胚胎無免疫系統(tǒng)分化，D錯(cuò)誤。

任務(wù)6基因工程1.解析：選D。分析反應(yīng)管①～④中分別加入的適量單鏈DNA可知，①中兩條單鏈DNA分子之間具有互補(bǔ)的序列(10個(gè)連續(xù)堿基對(duì))，但雙鏈DNA區(qū)之外的3′端無模板，因此無法進(jìn)行DNA合成，不能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針；②中單鏈DNA分子內(nèi)具有互補(bǔ)的序列，由于在本實(shí)驗(yàn)的溫度條件下不能產(chǎn)生小于9個(gè)連續(xù)堿基對(duì)的雙鏈DNA區(qū)，故該條單鏈DNA分子不發(fā)生自身環(huán)化，但兩條鏈可以形成雙鏈DNA區(qū)，由于DNA合成的序列(5′－TCT－3′)中不含堿基A，不能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針；③中兩條單鏈DNA分子之間具有互補(bǔ)的序列(10個(gè)連續(xù)堿基對(duì))，且雙鏈DNA區(qū)之外的5′端有凸出的堿基(含堿基T)，因此進(jìn)行DNA合成能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針；④中單鏈DNA分子內(nèi)具有自身互補(bǔ)的序列，結(jié)合題中信息知該條單鏈DNA分子不發(fā)生自身環(huán)化，兩條鏈可以形成雙鏈DNA區(qū)，且雙鏈DNA區(qū)之外的5′端有凸出的堿基(含堿基T)，因此進(jìn)行DNA合成能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針。綜上，能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針的反應(yīng)管有③④，故答案選D。2.解析：選D。若用HindⅢ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同，A正確；若用PvuⅠ酶切，重組質(zhì)粒和質(zhì)粒中都有四環(huán)素抗性基因(TetR)，因此在含Tet(四環(huán)素)培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因，B正確；DNA凝膠電泳技術(shù)可以分離不同大小的DNA片段，重組質(zhì)粒的大小與質(zhì)粒的大小不同，能夠鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否，C正確；SphⅠ的酶切位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，重組質(zhì)粒中只含氨芐青霉素抗性基因(AmpR)，因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp(氨芐青霉素)的培養(yǎng)基中能形成菌落，在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落，D錯(cuò)誤。3.解析：選C。酶3切割后得到的是平末端，應(yīng)該用T4DNA連接酶連接，A不符合題意；質(zhì)粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到的是黏性末端，二者不能連接，B不符合題意；質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4DNA連接酶連接后，還能保證目的基因在質(zhì)粒上的連接方向，此重組表達(dá)載體的構(gòu)建方案最合理且高效，C符合題意；若用酶2和酶4切割質(zhì)粒和目的基因，會(huì)破壞質(zhì)粒上的抗生素抗性基因，連接形成的重組表達(dá)載體缺少標(biāo)記基因，無法進(jìn)行后續(xù)的篩選，D不符合題意。1.解析：選B。由于質(zhì)粒的啟動(dòng)子內(nèi)有BamHⅠ的切割位點(diǎn)，所以目的基因兩端不能添加BamHⅠ的識(shí)別序列；若要使插入的目的基因能抑制原有Ers1基因的表達(dá)，該目的基因應(yīng)反向插入T-DNA中，使其轉(zhuǎn)錄的mRNA與細(xì)胞中原有Ers1基因轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)而抑制其翻譯，再結(jié)合目的基因的轉(zhuǎn)錄方向，可確定目的基因A端添加XhoⅠ的識(shí)別序列，B端添加HpaⅠ的識(shí)別序列。2.解析：選D。由圖可知，可變區(qū)能夠與抗原特異性結(jié)合，可變區(qū)決定了抗體的特異性，A錯(cuò)誤；鼠源抗體對(duì)人體具有免疫原性，人體的不良反應(yīng)與鼠源抗體有關(guān)，主要與可變區(qū)有關(guān)，B錯(cuò)誤；EGF是體內(nèi)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的因子，因此EGF受體在除癌細(xì)胞以外其他細(xì)胞中也能表達(dá)，C錯(cuò)誤；西妥昔單抗的制備通過對(duì)原有抗體的基因改造完成，屬于蛋白質(zhì)工程，D正確。3.解析：選C。卡那霉素抗性基因位于T-DNA之外的區(qū)域，只能與重組質(zhì)粒一起導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞，用于篩選導(dǎo)入目的基因的農(nóng)桿菌細(xì)胞，只有T-DNA上的潮霉素抗性基因才能用于篩選導(dǎo)入目的基因的植物細(xì)胞，A錯(cuò)誤；質(zhì)粒應(yīng)用酶A和酶B切割，避免破壞T-DNA，B錯(cuò)誤；相比于導(dǎo)入一種抗性基因，同時(shí)導(dǎo)入兩種抗性基因可以減緩害蟲對(duì)抗性基因的選擇，從而延緩抗性基因頻率增加，C正確；酶A與酶C的識(shí)別序列相比，酶C的識(shí)別序列特異性更低，酶A與酶C切割后產(chǎn)生的黏性末端互補(bǔ)后形成的連接位點(diǎn)只能被酶C識(shí)別，而不能被酶A識(shí)別，D錯(cuò)誤。

任務(wù)7生物技術(shù)的安全性與倫理問題1.解析：選D。我國(guó)政府主張?jiān)谌魏吻闆r下不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲(chǔ)存生物武器，并反對(duì)生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴(kuò)散，主張全面禁止和徹底銷毀生物武器等各類大規(guī)模殺傷性武器，D符合題意。2.解析：選D。試管嬰兒屬于有性生殖，合理范圍內(nèi)，試管嬰兒技術(shù)是可以使用的，A錯(cuò)誤。我國(guó)政府同樣重視治療性克隆所涉及的倫理問題，主張對(duì)治療性克隆進(jìn)行有效監(jiān)控和嚴(yán)格審查，B錯(cuò)誤。生殖性克隆人沖擊了現(xiàn)有的一些有關(guān)婚姻、家庭和兩性關(guān)系的倫理道德觀念，C錯(cuò)誤。我國(guó)政府一再重申四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)。D正確。1.解析：選D。依題意，利用患者血液PBMC重編程為自體iPS細(xì)胞，該方法誘導(dǎo)獲得iPS細(xì)胞的過程無需利用人類胚胎，不存在早期生命的破壞或拋棄，可避免倫理問題，A正確；進(jìn)食后血糖升高，再生胰島B細(xì)胞合成和分泌胰島素降低血糖，使血糖維持在正常范圍，B正確；胰島素具有促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖并促進(jìn)細(xì)胞利用、儲(chǔ)存及轉(zhuǎn)化葡萄糖的功能，胰島素與骨骼肌上受體結(jié)合后促進(jìn)骨骼肌細(xì)胞吸收葡萄糖并促進(jìn)葡萄糖合成肌糖原，C正確；下丘腦通過自主神經(jīng)支配胰島細(xì)胞，D錯(cuò)誤。2.解析：選D。干細(xì)胞培養(yǎng)在臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域前景廣泛，但可能存在安全性問題，A正確；蛋白質(zhì)工程通過設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)而對(duì)基因進(jìn)行操作來改造或創(chuàng)造新的蛋白質(zhì)，B正確；治療性克隆的研究與應(yīng)用必須受到相應(yīng)法律法規(guī)的規(guī)范限制，我國(guó)明令禁止生殖性克隆，C正確；生物武器對(duì)人畜、植物等均可能造成重大傷害，D錯(cuò)誤。3.解析：選C。由轉(zhuǎn)基因技術(shù)研發(fā)出來的產(chǎn)品需要經(jīng)過一系列的安全性評(píng)價(jià)，符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)后才能上市，A正確；轉(zhuǎn)基因大豆中的一些物質(zhì)可能誘發(fā)人體過敏反應(yīng)，B正確；轉(zhuǎn)基因作物的生存競(jìng)爭(zhēng)和繁殖能力一般高于野生種，C錯(cuò)誤；種植花粉失活的轉(zhuǎn)基因玉米，可以防止轉(zhuǎn)基因花粉的傳播，不易發(fā)生基因污染，D正確。

任務(wù)8基因組編輯技術(shù)1.解析：(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，引物越短則與目的基因匹配的特異性越低，可能會(huì)擴(kuò)增出許多非目的基因的區(qū)域。分析BsaⅠ酶識(shí)別序列的特點(diǎn)，黏性末端可能出現(xiàn)四個(gè)位置的堿基任一排列，每個(gè)位置都可能是A、T、C、G四種堿基中的一種，因此黏性末端最多有44種，即256種。分析BsaⅠ識(shí)別序列的特點(diǎn)，結(jié)合題圖甲中的堿基序列，限制酶切割的位置如圖所示：限制酶會(huì)將解析圖中虛線框內(nèi)的區(qū)域去掉，則載體上保留的黏性末端的序列為5′-GTTT-3′和5′-CAAT-3′。(2)將重組載體導(dǎo)入大豆細(xì)胞時(shí)會(huì)將卡那霉素抗性基因一起導(dǎo)入，因此應(yīng)使用抗生素卡那霉素篩選植株①～④。通過比較題圖乙中目標(biāo)序列和突變序列上的堿基差異發(fā)現(xiàn)，若用BamHⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶切割，無法區(qū)分出目標(biāo)序列和突變序列，因?yàn)閮尚蛄猩隙即嬖谶@兩種限制酶的切割位點(diǎn)，只有用SacⅠ限制酶進(jìn)行切割才能區(qū)分出目標(biāo)序列和突變序列，因此應(yīng)選用SacⅠ限制酶。純合的突變植株只含有突變序列，因此可以把PCR產(chǎn)物切成大小不同的兩段，其電泳結(jié)果為兩個(gè)條帶，如植株④結(jié)果所示。純合的非突變體的PCR產(chǎn)物不能被SacⅠ限制酶切開，只有一個(gè)條帶，如植株②，雜合的植株既存在目標(biāo)序列也存在突變序列，會(huì)有三個(gè)條帶，如植株①和③。(3)實(shí)驗(yàn)中獲得的1株基因L成功突變的純合植株只有1條染色體上有T-DNA插入，則只有一個(gè)抗生素抗性基因，假設(shè)該基因?yàn)镠，則該植株的抗性基因組成為HO，該植株自交的子代的基因型及比例為HH∶HO∶OO＝1∶2∶1，其中OO型對(duì)抗生素敏感，抗生素敏感植株的比例為1/4。答案：(1)低256GTTTCAAT(2)卡那霉素SacⅠ④(3)1/42.解析：(1)根據(jù)蛋白質(zhì)的功能改變基因的結(jié)構(gòu)，最終獲得耐高溫的β-淀粉酶，這屬于蛋白質(zhì)工程。(2)PCR的原理是DNA的半保留復(fù)制，利用的酶是耐高溫的DNA聚合酶，合成子鏈時(shí)是以DNA為模板。(3)根據(jù)β-淀粉酶的編碼序列，替換的堿基在編碼序列中，則利用的引物應(yīng)該把編碼序列全部擴(kuò)增出來，則所用的引物是②③，再結(jié)合題意可知，β-淀粉酶由484個(gè)氨基酸構(gòu)成，而替換位點(diǎn)位于476位，則含已替換堿基的引物是②。(4)作為基因工程載體的質(zhì)粒應(yīng)該包含：復(fù)制原點(diǎn)、限制酶的切割位點(diǎn)、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子和終止子，根據(jù)圖示的表達(dá)載體可知還要包括目的基因和標(biāo)記基因。(5)用EcoRⅠ酶切來自不同大腸桿菌菌落的質(zhì)粒DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳確定DNA片段長(zhǎng)度，可以篩選出導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌。正確連接的基因表達(dá)載體中只有一個(gè)EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，則切割后的長(zhǎng)度為4.2＋1.5＝5.7(kb)。(6)轉(zhuǎn)錄是以DNA為模板合成RNA的過程，通過PCR在分子水平上確定目的基因是否轉(zhuǎn)錄，則需要以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄出DNA作為PCR的模板。答案：(1)蛋白質(zhì)(2)③(3)②(4)標(biāo)記基因(5)篩選導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌5.7(6)逆轉(zhuǎn)錄1.解析：選B。細(xì)胞內(nèi)的Cas9酶在配對(duì)區(qū)域定點(diǎn)剪切，引起果蠅發(fā)生基因突變，A錯(cuò)誤；該過程中，sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA，sgRNA和Cas9酶類似于限制酶的作用，B正確；敲除后需要DNA連接酶對(duì)DNA上的切口進(jìn)行修復(fù)，C錯(cuò)誤；sgRNA與紅眼基因B的部分序列配對(duì)，堿基互補(bǔ)配對(duì)方式中A—T可能會(huì)出現(xiàn)，D錯(cuò)誤。2.解析：選B。在PCR反應(yīng)體系中還需要加入4種游離脫氧核苷酸、TaqDNA聚合酶等，但不需要加入ATP，A錯(cuò)誤；在第3輪PCR結(jié)束后，含突變堿基對(duì)且兩條鏈等長(zhǎng)的DNA有2個(gè)，DNA分子總共8個(gè)，所以比例為1/4，B正確；引物中設(shè)計(jì)兩種限制酶識(shí)別位點(diǎn)，可以配合載體的限制酶識(shí)別位點(diǎn)，幫助目的基因定向定點(diǎn)插入載體，避免發(fā)生自身環(huán)化，C錯(cuò)誤；第2輪PCR，引物1能與圖中②結(jié)合并且形成兩條鏈不等長(zhǎng)的突變基因，其中②較長(zhǎng)，D錯(cuò)誤。3.解析：選A。Cas9內(nèi)切酶的作用部位是DNA分子中特定的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵，與細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的限制酶的作用相似，A錯(cuò)誤，B正確；向?qū)NA通過堿基互補(bǔ)與目標(biāo)DNA的單鏈結(jié)合，從而使Cas9內(nèi)切酶可以定點(diǎn)切割，因此Cas9內(nèi)切酶定點(diǎn)切割與向?qū)NA和目標(biāo)DNA結(jié)合有關(guān)，C正確；雙鏈DNA的斷裂修復(fù)過程需要DNA連接酶催化形成磷酸二酯鍵，D正確。4.解析：選B。據(jù)圖分析，通過刪除編碼PD-1蛋白基因的2、3、4片段造成蛋白質(zhì)的功能性缺失，指的是將野生型基因內(nèi)部的部分堿基對(duì)剪切，改變的是基因內(nèi)部的堿基序列，屬于可遺傳變異中的基因突變，A正確；分析圖1可知，將基因的2、3、4共3個(gè)片段切除，需要設(shè)計(jì)片段2和片段4的2個(gè)sgRNA，B錯(cuò)誤；基因敲除后，其核苷酸數(shù)量減少，電泳時(shí)移動(dòng)速度快，距離點(diǎn)樣孔遠(yuǎn)，4、7和12個(gè)體均為敲除純合子，則4和12個(gè)體雜交的子代也均為敲除純合子，C正確；3個(gè)體的基因未敲除，5個(gè)體和9個(gè)體為基因敲除雜合子，體內(nèi)均能檢測(cè)到PD-1，D正確。5.解析：(1)將真菌細(xì)胞置于一定濃度的PEG溶液中，一段時(shí)間后再與重組DNA混合可以提高轉(zhuǎn)化效率，其中PEG的作用是增加細(xì)胞膜的通透性。在轉(zhuǎn)基因真菌的培育中，一般以原生質(zhì)體為主，極少嘗試菌絲體和孢子，說明遺傳轉(zhuǎn)化體系中受體細(xì)胞的選擇是制約轉(zhuǎn)化效率的另一重要因素。(2)基因編輯系統(tǒng)中的向?qū)NA能識(shí)別并通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合特定的DNA序列，野生型核基因組中含有pyrg、ura3基因，這兩類基因表達(dá)可產(chǎn)生乳清核苷-5′-磷酸脫羧酶，參與催化尿嘧啶的合成，通過CRISPR/Cas9編輯系統(tǒng)中的向?qū)NA與pyrg、ura3基因中的序列進(jìn)行互補(bǔ)(或特異性識(shí)別并結(jié)合)，將Cas9蛋白帶到靶基因附近并對(duì)基因進(jìn)行剪切。當(dāng)目標(biāo)基因序列被破壞后，菌體表現(xiàn)為尿嘧啶營(yíng)養(yǎng)缺陷，所以只能在含有尿嘧啶和5-氟乳清酸的培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)，利用這種選擇作用可以初步區(qū)分出野生型真菌及完成了轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)基因品系。研究發(fā)現(xiàn)CRISPR/Cas9編輯系統(tǒng)中的向?qū)NA序列長(zhǎng)度應(yīng)當(dāng)適中否則極易脫靶即難以精準(zhǔn)找到目標(biāo)DNA序列，脫靶最可能的原因是其他基因序列中也有與向?qū)NA互補(bǔ)配對(duì)的序列，造成向?qū)NA錯(cuò)誤結(jié)合到有關(guān)基因區(qū)域。(3)Cas9蛋白和向?qū)NA基因在真菌細(xì)胞中表達(dá)水平低，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，起始轉(zhuǎn)錄，所以可通過在基因一端添加合適的啟動(dòng)子來構(gòu)建高表達(dá)基因編輯系統(tǒng)，還可以通過基因優(yōu)化，使其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中含有真菌細(xì)胞高頻使用密碼子，以此來提高翻譯效率。(4)該食用菌是某種逆轉(zhuǎn)錄病毒的特定宿主，侵染時(shí)，病毒將病毒RNA、逆轉(zhuǎn)錄酶注入食用菌細(xì)胞合成雙鏈DNA片段，說明注入的酶可能具有的作用是：以病毒核酸為模板，催化磷酸二酯鍵的形成，解開DNA與RNA雜交片段中的氫鍵。這些功能的實(shí)現(xiàn)由酶分子相應(yīng)的結(jié)構(gòu)區(qū)域完成，體現(xiàn)了酶的專一性以及酶功能的復(fù)雜性。食用菌細(xì)胞中合成的這些DNA片段通過核孔進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，并隨機(jī)整合到食用菌的核基因組中，使其發(fā)生基因重組，進(jìn)而引發(fā)食用菌減產(chǎn)。(5)某些食用菌具有天然抗擊該種逆轉(zhuǎn)錄病毒的能力，有同學(xué)指出，可能是因?yàn)檫@些食用菌中含有限制性內(nèi)切核酸酶切割了病毒核酸，這種推測(cè)不合理，因?yàn)槟孓D(zhuǎn)錄病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，而限制酶只能識(shí)別DNA中的特定堿基序列。答案：(1)增加細(xì)胞膜的通透性受體細(xì)胞(2)pyrg、ura3互補(bǔ)(或特異性識(shí)別并結(jié)合)尿嘧啶其他基因序列中也有與向?qū)NA互補(bǔ)配對(duì)的序列，造成向?qū)NA錯(cuò)誤結(jié)合到有關(guān)基因區(qū)域(3)啟動(dòng)子密碼子(4)病毒RNA、逆轉(zhuǎn)錄酶磷酸二酯DNA與RNA雜交片段中的氫鍵專一性核孔隨機(jī)基因重組(5)不合理逆轉(zhuǎn)錄病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，而限制酶只能識(shí)別DNA中的特定堿基序列

任務(wù)9PCR技術(shù)1.解析：(1)由題意可知，鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在某種植物根部細(xì)胞特異性表達(dá)并定位于細(xì)胞膜，所以應(yīng)以該植物的根為材料提取并純化mRNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。熱變性處理的目的是使DNA解螺旋，相當(dāng)于生物體內(nèi)解旋酶的效果。DNA分子因?yàn)楹辛姿峄鶊F(tuán)而帶負(fù)電荷，所以其點(diǎn)樣孔端應(yīng)靠近電泳槽負(fù)極接口。隨著時(shí)間的推移，不同相對(duì)分子質(zhì)量的DNA分子在凝膠中的距離逐漸變長(zhǎng)。(2)DNA連接酶可將限制酶處理后的質(zhì)粒和目的基因連接。由于PCR過程中熱變性使大腸桿菌內(nèi)的DNA外溢，所以可用大腸桿菌懸液當(dāng)模板，利用PCR快速驗(yàn)證重組轉(zhuǎn)化是否成功。(3)取凍存的鋅吸收缺陷型酵母菌，直接在固體培養(yǎng)基上劃線接種后進(jìn)行培養(yǎng)，活化后轉(zhuǎn)至液體培養(yǎng)基增殖，培養(yǎng)過程中進(jìn)行振蕩，有利于增加培養(yǎng)液的溶氧量，還可以使酵母菌和培養(yǎng)液充分接觸，從而快速增殖。(4)由題意可知，菌液稀釋后OD600為0.06、0.006和0.0006，說明對(duì)菌液進(jìn)行了梯度稀釋。由圖可知，鋅吸收缺陷型酵母＋空載體組不會(huì)吸收鋅，為陰性對(duì)照。由圖中光譜吸收值可知，轉(zhuǎn)入N基因的這組酵母菌數(shù)量較多，說明轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白N轉(zhuǎn)運(yùn)Zn2＋能力更強(qiáng)。答案：(1)根解旋酶磷酸基團(tuán)變長(zhǎng)(2)DNA連接酶熱變性使大腸桿菌細(xì)胞破裂，DNA流出(3)劃線分離振蕩培養(yǎng)(4)梯度稀釋鋅吸收缺陷型酵母＋空載體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白N轉(zhuǎn)入N基因的這組酵母菌數(shù)量較多2.解析：(1)限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。在構(gòu)建片段甲時(shí)，將M1與M2片段分別插入質(zhì)粒的Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ酶切位點(diǎn)之間，可保證片段甲中的啟動(dòng)子位于N基因上游，終止子位于N基因下游，從而使N基因能在菌株B2中表達(dá)。(2)向?qū)NA為核糖核苷酸序列，含有堿基A、U、C、G；B1基因組DNA為脫氧核苷酸序列，含有堿基A、T、C、G。故向?qū)NA與B1基因組DNA互補(bǔ)配對(duì)可形成的堿基對(duì)有G－C、C－G、U－A、A－T。(3)由題中信息“利用CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)將片段甲插入B1的基因組，得到菌株B2”可知，用引物P1和P2進(jìn)行PCR驗(yàn)證片段甲插入了細(xì)菌B1基因組所用的模板為菌株B2的基因組DNA。結(jié)合題圖分析可知P4是以細(xì)菌B1基因組DNA為模板設(shè)計(jì)的引物，故以菌株B2的基因組DNA為模板，以P3和P4為引物進(jìn)行PCR，不能擴(kuò)增出目的條帶。(4)焚燒秸稈會(huì)污染環(huán)境，利用高效降解纖維素的細(xì)菌處理秸稈可實(shí)現(xiàn)廢物利用，減少環(huán)境污染、高效利用秸稈資源等。答案：(1)磷酸二酯鍵保證N基因啟動(dòng)子、N基因、N基因終止子的完整性，確保N基因能夠順利表達(dá)(2)C－G、U－A、A－T(3)菌株B2的基因組DNA無擴(kuò)增產(chǎn)物(4)實(shí)現(xiàn)廢物利用，減少環(huán)境污染1.解析：選B。PCR引物一般是單鏈DNA，A錯(cuò)誤；PCR過程中用到了緩沖液，緩沖液中一般要添加Mg2＋用于激活DNA聚合酶，B正確；復(fù)性溫度過低會(huì)導(dǎo)致引物與模板鏈的結(jié)合不牢固，會(huì)增加PCR中非特異性條帶的產(chǎn)生，C錯(cuò)誤；用酶B作用后進(jìn)行電泳得到2條條帶，說明DNA分子上有1個(gè)酶B的酶切位點(diǎn)，且酶切后得到2個(gè)片段，無法判斷是否為雜合子，D錯(cuò)誤。2.解析：選D。由于ddNTP的五碳糖為雙脫氧核糖，其3′碳位為－H且不能與磷酸形成化學(xué)鍵，因此ddATP＋中