九江市人民醫(yī)院蛋白提取技術(shù)考核一、單選題（每題2分，共20題）1.在九江市人民醫(yī)院進行蛋白提取時，常用的裂解緩沖液pH值通?？刂圃诙嗌俜秶鷥?nèi)以保持蛋白質(zhì)活性？A.4.0-6.0B.7.0-8.0C.9.0-10.0D.11.0-12.02.提取九江市某地流行病患者的血清蛋白時，應(yīng)優(yōu)先選擇哪種方法以避免蛋白降解？A.高鹽裂解法B.酶法裂解法C.熱變性裂解法D.有機溶劑沉淀法3.對于九江市人民醫(yī)院病理科需提取的石蠟包埋組織樣本，哪種預(yù)處理步驟最為關(guān)鍵？A.直接研磨B.磷酸緩沖液洗滌C.脫蠟處理D.高溫滅菌4.在九江市人民醫(yī)院實驗室提取腦組織蛋白時，若需去除脂質(zhì)，常用哪種試劑輔助？A.SDSB.Tris-HClC.乙腈D.脫脂棉5.提取九江市水產(chǎn)研究所提供的魚類組織蛋白時，以下哪種方法對鹽濃度要求最高？A.超聲波裂解B.離心沉淀C.有機溶劑提取D.酶解法6.九江市人民醫(yī)院檢驗科在檢測肝功能時，提取血清蛋白常用的離心速度和時間是？A.3000rpm，10分鐘B.5000rpm，20分鐘C.8000rpm，30分鐘D.12000rpm，5分鐘7.提取九江市人民醫(yī)院腫瘤科患者腫瘤組織蛋白時，若需分離可溶性蛋白，應(yīng)選擇哪種緩沖液？A.20%TCAB.0.1MTris-HCl（pH7.4）C.50%丙酮D.1MNaCl8.在九江市人民醫(yī)院提取病毒樣蛋白時，哪種方法最能有效避免核酸污染？A.離心過濾B.乙醇沉淀C.煮沸變性D.甲醇洗滌9.提取九江市某農(nóng)業(yè)科研所植物種子蛋白時，若需去除多糖，常用哪種試劑？A.SDS電泳B.Sevag試劑C.離子交換柱D.超濾膜10.九江市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科提取細胞膜蛋白時，哪種試劑能最有效地裂解細胞膜？A.尿素B.SDSC.CHAPSD.蛋白酶K二、多選題（每題3分，共10題）1.在九江市人民醫(yī)院提取蛋白時，以下哪些因素會影響蛋白提取效率？A.樣本類型B.裂解緩沖液pH值C.溫度控制D.提取時間2.提取九江市某地流行病患者的病原體蛋白時，以下哪些步驟是必要的？A.高溫滅菌B.超聲波輔助裂解C.乙醇沉淀D.離心去除雜質(zhì)3.對于九江市人民醫(yī)院病理科的石蠟組織樣本，以下哪些預(yù)處理方法能有效提高蛋白提取率？A.脫蠟B.磷酸緩沖液洗滌C.蛋白酶K消化D.超聲波研磨4.提取九江市水產(chǎn)研究所魚類組織蛋白時，以下哪些試劑可用于去除脂質(zhì)？A.乙腈B.SDSC.脫脂棉D(zhuǎn).超濾膜5.在九江市人民醫(yī)院檢驗科進行血清蛋白提取時，以下哪些離心條件是合理的？A.3000rpm，10分鐘B.5000rpm，20分鐘C.8000rpm，30分鐘D.10000rpm，5分鐘6.提取九江市腫瘤科患者腫瘤組織蛋白時，以下哪些緩沖液可用于蛋白沉淀？A.20%TCAB.0.1MTris-HCl（pH7.4）C.50%丙酮D.1MNaCl7.在九江市人民醫(yī)院提取病毒樣蛋白時，以下哪些方法能有效避免核酸污染？A.離心過濾B.乙醇沉淀C.煮沸變性D.甲醇洗滌8.提取九江市某農(nóng)業(yè)科研所植物種子蛋白時，以下哪些試劑可用于去除多糖？A.SDS電泳B.Sevag試劑C.離子交換柱D.超濾膜9.提取九江市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科細胞膜蛋白時，以下哪些試劑能最有效地裂解細胞膜？A.尿素B.SDSC.CHAPSD.蛋白酶K10.在九江市人民醫(yī)院進行蛋白提取時，以下哪些操作會導致蛋白降解？A.高溫處理B.酶法裂解C.pH值不適宜D.反復(fù)凍融三、判斷題（每題1分，共10題）1.在九江市人民醫(yī)院提取蛋白時，所有樣本均需進行高溫滅菌以避免微生物污染。（×）2.提取九江市某地流行病患者的病原體蛋白時，有機溶劑沉淀法比乙醇沉淀法更有效。（√）3.對于九江市人民醫(yī)院病理科的石蠟組織樣本，脫蠟是提取蛋白的關(guān)鍵步驟。（√）4.提取九江市水產(chǎn)研究所魚類組織蛋白時，超聲裂解比研磨法更高效。（√）5.在九江市人民醫(yī)院檢驗科進行血清蛋白提取時，離心速度越高越好。（×）6.提取九江市腫瘤科患者腫瘤組織蛋白時，高鹽緩沖液能更好地沉淀蛋白。（√）7.在九江市人民醫(yī)院提取病毒樣蛋白時，甲醇洗滌能有效去除核酸污染。（√）8.提取九江市某農(nóng)業(yè)科研所植物種子蛋白時，離子交換柱可用于分離純化蛋白。（√）9.提取九江市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科細胞膜蛋白時，SDS能最有效地裂解細胞膜。（×）10.在九江市人民醫(yī)院進行蛋白提取時，所有蛋白提取方法均需避免反復(fù)凍融。（√）四、簡答題（每題5分，共5題）1.簡述九江市人民醫(yī)院在提取石蠟包埋組織蛋白時，脫蠟的具體步驟及目的。2.說明九江市水產(chǎn)研究所魚類組織蛋白提取過程中，如何去除脂質(zhì)并提高提取效率。3.闡述九江市人民醫(yī)院檢驗科在提取血清蛋白時，選擇離心條件的主要依據(jù)。4.描述九江市腫瘤科在提取腫瘤組織蛋白時，如何避免蛋白降解的方法。5.分析九江市某農(nóng)業(yè)科研所植物種子蛋白提取過程中，Sevag試劑的作用及原理。五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合九江市人民醫(yī)院的實際情況，論述如何優(yōu)化病毒樣蛋白的提取流程以提高純度。2.分析九江市檢驗科在提取血清蛋白時，可能遇到的挑戰(zhàn)及解決方案。答案與解析一、單選題答案與解析1.B解析：九江市人民醫(yī)院在提取蛋白時，常用7.0-8.0的pH值緩沖液（如Tris-HCl）以保持蛋白質(zhì)活性，過高或過低的pH值會導致蛋白變性。2.B解析：酶法裂解法（如使用蛋白酶K）能有效避免蛋白降解，適用于九江市某地流行病患者的病原體蛋白提取。3.C解析：石蠟包埋組織樣本需先脫蠟，否則蠟質(zhì)會阻礙蛋白溶解，這是九江市人民醫(yī)院病理科的關(guān)鍵預(yù)處理步驟。4.C解析：乙腈能有效去除脂質(zhì)，適用于九江市水產(chǎn)研究所魚類組織蛋白提取。5.D解析：有機溶劑提取對鹽濃度要求高，適用于九江市水產(chǎn)研究所魚類組織蛋白提取。6.B解析：九江市人民醫(yī)院檢驗科提取血清蛋白常用5000rpm，20分鐘的離心條件以分離蛋白。7.B解析：0.1MTris-HCl（pH7.4）是可溶性蛋白的常用緩沖液，適用于九江市腫瘤科患者腫瘤組織蛋白提取。8.B解析：乙醇沉淀能有效避免核酸污染，適用于九江市人民醫(yī)院提取病毒樣蛋白。9.B解析：Sevag試劑能去除多糖，適用于九江市某農(nóng)業(yè)科研所植物種子蛋白提取。10.C解析：CHAPS能有效裂解細胞膜，適用于九江市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科細胞膜蛋白提取。二、多選題答案與解析1.A、B、C、D解析：樣本類型、裂解緩沖液pH值、溫度控制和提取時間均會影響蛋白提取效率。2.A、B、D解析：高溫滅菌、超聲波輔助裂解和離心去除雜質(zhì)是提取病原體蛋白的必要步驟。3.A、B、D解析：脫蠟、磷酸緩沖液洗滌和超聲波研磨能有效提高石蠟組織樣本的蛋白提取率。4.A、B、C解析：乙腈、SDS和脫脂棉可用于去除魚類組織蛋白中的脂質(zhì)。5.A、B、C解析：3000rpm，10分鐘；5000rpm，20分鐘；8000rpm，30分鐘是合理的離心條件。6.A、C、D解析：20%TCA、50%丙酮和1MNaCl均可用于蛋白沉淀。7.A、B、D解析：離心過濾、乙醇沉淀和甲醇洗滌能有效避免核酸污染。8.B、C解析：Sevag試劑和離子交換柱可用于去除植物種子蛋白中的多糖。9.B、C解析：SDS和CHAPS能有效裂解細胞膜。10.A、C、D解析：高溫處理、pH值不適宜和反復(fù)凍融會導致蛋白降解。三、判斷題答案與解析1.×解析：并非所有樣本需高溫滅菌，應(yīng)根據(jù)實驗需求選擇。2.√解析：有機溶劑沉淀法比乙醇沉淀法更有效。3.√解析：脫蠟是石蠟組織樣本提取蛋白的關(guān)鍵步驟。4.√解析：超聲裂解比研磨法更高效。5.×解析：離心速度需根據(jù)樣本類型選擇，并非越高越好。6.√解析：高鹽緩沖液能更好地沉淀蛋白。7.√解析：甲醇洗滌能有效去除核酸污染。8.√解析：離子交換柱可用于分離純化蛋白。9.×解析：SDS會破壞蛋白結(jié)構(gòu)，不適合裂解細胞膜。10.√解析：反復(fù)凍融會導致蛋白降解。四、簡答題答案與解析1.脫蠟步驟及目的答：九江市人民醫(yī)院提取石蠟組織蛋白的脫蠟步驟包括：-用有機溶劑（如二甲苯或氯仿）反復(fù)洗滌石蠟樣本，去除蠟質(zhì)；-用磷酸緩沖液洗滌樣本，去除有機溶劑殘留；-超聲波研磨樣本，提高蛋白溶解度。目的：去除石蠟，避免蠟質(zhì)阻礙蛋白溶解，提高提取效率。2.去除脂質(zhì)的方法答：九江市水產(chǎn)研究所魚類組織蛋白提取中去除脂質(zhì)的方法包括：-使用乙腈沉淀脂質(zhì)；-加入SDS裂解細胞，同時去除脂質(zhì)；-超聲波研磨樣本，提高脂質(zhì)去除率。3.離心條件選擇依據(jù)答：九江市人民醫(yī)院檢驗科選擇離心條件的主要依據(jù)包括：-血清蛋白密度較大，3000-5000rpm即可有效分離；-離心時間需根據(jù)樣本量選擇，一般10-20分鐘；-避免高速離心以免破壞蛋白結(jié)構(gòu)。4.避免蛋白降解的方法答：九江市腫瘤科提取腫瘤組織蛋白時避免降解的方法包括：-使用蛋白酶K降解核酸；-加入蛋白酶抑制劑（如PMSF）；-避免高溫處理，低溫操作；-減少反復(fù)凍融。5.Sevag試劑的作用及原理答：Sevag試劑（氯仿-異戊醇混合液）的作用是去除多糖，原理是：-氯仿與蛋白質(zhì)不互溶，可沉淀蛋白；-異戊醇能與多糖形成復(fù)合物，隨氯仿沉淀去除。五、論述題答案與解析1.優(yōu)化病毒樣蛋白提取流程答：九江市人民醫(yī)院優(yōu)化病毒樣蛋白提取流程的方法包括：-使用低毒性裂解緩沖液（如RIPA）；-加入蛋白酶抑制劑（如PMSF）；-離心過濾去除核酸污染；-使用親