干細(xì)胞源性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞清除策略演講人1.干細(xì)胞源性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞清除策略2.引言：膠質(zhì)瘤治療困境與GSCs的核心地位3.干細(xì)胞源性GSCs的生物學(xué)特性與耐藥機(jī)制4.靶向干細(xì)胞源性GSCs的清除策略5.現(xiàn)有策略的挑戰(zhàn)與未來方向6.總結(jié)目錄01干細(xì)胞源性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞清除策略02引言：膠質(zhì)瘤治療困境與GSCs的核心地位引言：膠質(zhì)瘤治療困境與GSCs的核心地位在神經(jīng)外科與腫瘤學(xué)的臨床實(shí)踐中，膠質(zhì)瘤，尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM），始終是最具挑戰(zhàn)性的顱內(nèi)惡性腫瘤之一。其高侵襲性、易復(fù)發(fā)特性及對(duì)傳統(tǒng)治療（手術(shù)、放療、化療）的固有抵抗，使得患者中位生存期仍徘徊在14-15個(gè)月，5年生存率不足5%。作為一名長(zhǎng)期從事神經(jīng)腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究的學(xué)者，我深刻體會(huì)到：盡管影像學(xué)技術(shù)、手術(shù)機(jī)器人及替莫唑胺等化療方案不斷進(jìn)步，但膠質(zhì)瘤治療的“瓶頸”始終未破——腫瘤復(fù)發(fā)如同“野火燒不盡，春風(fēng)吹又生”。近年來，大量研究證實(shí)，膠質(zhì)瘤中存在一小群具有自我更新、多向分化及高致瘤能力的細(xì)胞，即膠質(zhì)瘤干細(xì)胞（GSCs）。它們被認(rèn)為是腫瘤起始、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及耐藥的“根源細(xì)胞”，尤其值得注意的是，約30%-50%的GSCs可能起源于神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）或神經(jīng)前體細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，即“干細(xì)胞源性GSCs”。這類細(xì)胞不僅保留NSCs的干性特征（如Sox2、Nestin表達(dá)），引言：膠質(zhì)瘤治療困境與GSCs的核心地位還通過激活特定信號(hào)通路獲得腫瘤特性，使其對(duì)治療更具抵抗性。因此，清除干細(xì)胞源性GSCs，已成為攻克膠質(zhì)瘤、改善患者預(yù)后的核心策略。本文將從GSCs的生物學(xué)特性入手，系統(tǒng)闡述靶向清除干細(xì)胞源性GSCs的理論基礎(chǔ)、技術(shù)路徑及未來挑戰(zhàn)，以期為臨床轉(zhuǎn)化提供思路。03干細(xì)胞源性GSCs的生物學(xué)特性與耐藥機(jī)制干細(xì)胞源性GSCs的生物學(xué)特性與耐藥機(jī)制深入理解干細(xì)胞源性GSCs的生物學(xué)行為，是其靶向清除的前提。這類細(xì)胞本質(zhì)上是由NSCs或其祖細(xì)胞在遺傳（如EGFRvIII、PTEN突變）、表觀遺傳（如DNA甲基化異常）及微環(huán)境因素（如慢性炎癥、缺氧）共同作用下惡性轉(zhuǎn)化而來，兼具“干細(xì)胞特性”與“腫瘤惡性表型”，其核心特性與耐藥機(jī)制如下：GSCs的起源與鑒定起源假說目前關(guān)于干細(xì)胞源性GSCs的起源主要有兩種假說：其一，“神經(jīng)干細(xì)胞癌變假說”，認(rèn)為位于側(cè)腦室下區(qū)（SVZ）或海馬齒狀回的NSCs，在致癌因素作用下直接發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，形成GSCs；其二，“膠質(zhì)瘤細(xì)胞去分化假說”，認(rèn)為普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞通過表觀遺傳重編程或信號(hào)通路激活，逆分化為具有干性的細(xì)胞。單細(xì)胞測(cè)序研究顯示，GBM患者腫瘤組織中存在與NSCs高度相似的細(xì)胞亞群，高表達(dá)干性基因（如SOX2、OLIG2、PAX6），且這群細(xì)胞與患者不良預(yù)后顯著相關(guān)，支持“NSCs癌變”假說。GSCs的起源與鑒定鑒定標(biāo)準(zhǔn)干細(xì)胞源性GSCs的鑒定需結(jié)合“功能特性”與“分子標(biāo)志物”。功能上，需通過體外sphere-formingassay（球形成實(shí)驗(yàn)）、體內(nèi)致瘤性實(shí)驗(yàn)（如NOD/SCID鼠移植模型，證實(shí)其能重建原發(fā)腫瘤的異質(zhì)性）；分子上，除通用干性標(biāo)志物（CD133、CD15、CD44）外，還需檢測(cè)NSCs相關(guān)標(biāo)志物（Nestin、SOX2、Musashi-1），以及干細(xì)胞源性GSCs的特異性標(biāo)志物（如ALDH1A1、CD133+CD15+雙陽性亞群）。GSCs的核心生物學(xué)特性自我更新能力GSCs通過不對(duì)稱分裂維持自身數(shù)量與腫瘤異質(zhì)性：一個(gè)子細(xì)胞保持干性，另一個(gè)分化為腫瘤細(xì)胞。這一過程高度依賴保守的信號(hào)通路，如Notch通路（促進(jìn)細(xì)胞存活與自我更新）、Wnt/β-catenin通路（維持干性基因表達(dá)）、Hedgehog（Hh）通路（調(diào)控細(xì)胞增殖）。例如，Notch1受體在GSCs中高表達(dá)，其下游靶基因Hes1、Hey1可抑制分化，促進(jìn)自我更新；抑制Notch1可顯著降低GSCs的sphere形成能力。GSCs的核心生物學(xué)特性多向分化潛能GSCs可向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞分化，形成腫瘤的異質(zhì)性結(jié)構(gòu)。這種分化能力使其能“偽裝”為正常細(xì)胞，逃避免疫識(shí)別；同時(shí)，分化后的腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物（如替莫唑胺）更敏感，而未分化的GSCs則因高表達(dá)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（如ABCG2）將藥物泵出細(xì)胞外，導(dǎo)致耐藥。GSCs的核心生物學(xué)特性高致瘤性與普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞相比，GSCs的致瘤能力顯著增強(qiáng)：僅100-1000個(gè)GSCs即可在NOD/SCID鼠顱內(nèi)形成與原發(fā)腫瘤病理特征一致的腫瘤，而普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞需10^5-10^6個(gè)細(xì)胞。這種高致瘤性使其成為腫瘤復(fù)發(fā)的“種子細(xì)胞”。GSCs的核心生物學(xué)特性免疫逃逸能力GSCs通過多種機(jī)制逃避免疫系統(tǒng)識(shí)別：低表達(dá)MHC-I類分子，減少CD8+T細(xì)胞殺傷；高表達(dá)免疫檢查點(diǎn)分子（如PD-L1、CTLA-4），與T細(xì)胞上的PD-1、CTLA-4結(jié)合，抑制T細(xì)胞活性；分泌免疫抑制因子（如TGF-β、IL-10），誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）浸潤(rùn)，形成免疫抑制微環(huán)境。GSCs的耐藥機(jī)制ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的藥物外排GSCs高表達(dá)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族（如ABCG2、ABCB1），能將化療藥物（如替莫唑胺、長(zhǎng)春新堿）主動(dòng)泵出細(xì)胞，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度。例如，ABCG2陽性GSCs對(duì)替莫唑胺的IC50較ABCG2陰性細(xì)胞高5-10倍。GSCs的耐藥機(jī)制DNA損傷修復(fù)增強(qiáng)GSCs通過激活DNA修復(fù)通路（如ATM/ATR-Chk1/2通路）修復(fù)化療或放療引起的DNA損傷。例如，替莫唑胺通過誘導(dǎo)O6-甲基鳥嘌啶DNA損傷，但GSCs高表達(dá)MGMT（O6-甲基鳥嘌啶-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶），直接逆轉(zhuǎn)DNA損傷，導(dǎo)致耐藥。GSCs的耐藥機(jī)制抗凋亡信號(hào)通路激活GSCs高表達(dá)抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xL、Survivin），抑制Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)；同時(shí)，PI3K/Akt通路持續(xù)激活，通過磷酸化Bad、FOXO等蛋白促進(jìn)細(xì)胞存活，抵抗化療誘導(dǎo)的凋亡。GSCs的耐藥機(jī)制腫瘤微環(huán)境的保護(hù)作用GSCs常位于缺氧區(qū)域（hypoxicniche），通過HIF-1α通路上調(diào)VEGF、GLUT1等基因，促進(jìn)血管生成與糖酵解，同時(shí)缺氧誘導(dǎo)自噬，增強(qiáng)細(xì)胞存活能力；此外，GSCs與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）、星形膠質(zhì)細(xì)胞相互作用，通過分泌IGF-1、EGF等因子支持其存活，形成“保護(hù)傘”。04靶向干細(xì)胞源性GSCs的清除策略靶向干細(xì)胞源性GSCs的清除策略基于對(duì)GSCs生物學(xué)特性與耐藥機(jī)制的深入理解，近年來針對(duì)干細(xì)胞源性GSCs的清除策略已從“單一靶向”發(fā)展為“多維度、多層次的系統(tǒng)性干預(yù)”。以下從分子靶點(diǎn)、信號(hào)通路、微環(huán)境、免疫調(diào)控及聯(lián)合治療五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述當(dāng)前的研究進(jìn)展。靶向GSCs特異性表面標(biāo)志物表面標(biāo)志物是區(qū)分GSCs與正常細(xì)胞的重要靶點(diǎn)，靶向這些標(biāo)志物的抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）、CAR-T細(xì)胞等策略在臨床前研究中展現(xiàn)出良好前景。靶向GSCs特異性表面標(biāo)志物靶向CD133的ADC與CAR-T細(xì)胞CD133（Prominin-1）是最經(jīng)典的GSCs標(biāo)志物，在約60%的GBM中高表達(dá)。研究表明，CD133+細(xì)胞具有更強(qiáng)的致瘤性與耐藥性。目前，抗CD133抗體-藥物偶聯(lián)物（如CD133-DM1）可通過抗體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將細(xì)胞毒性藥物（美登素）特異性遞送至GSCs，在體外實(shí)驗(yàn)中可抑制80%的GSCs存活，動(dòng)物模型中延長(zhǎng)生存期40%。CAR-T細(xì)胞方面，靶向CD133的CAR-T（CD133-CAR-T）在體外可高效殺傷CD133+GSCs，且在顱內(nèi)移植模型中顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)；但需注意，CD133也在部分正常組織（如腸道上皮、造血干細(xì)胞）中表達(dá)，可能導(dǎo)致脫靶毒性，通過“邏輯門”CAR-T（如同時(shí)靶向CD133和EGFRvIII）可降低風(fēng)險(xiǎn)。靶向GSCs特異性表面標(biāo)志物靶向CD15（SSEA-1）的雙特異性抗體CD15是另一類GSCs標(biāo)志物，尤其在干細(xì)胞源性GSCs中高表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，CD15+GSCs具有更強(qiáng)的自我更新能力，且與患者預(yù)后不良顯著相關(guān)?？笴D15單抗可誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC），但效果有限；而CD15-CD3雙特異性抗體可同時(shí)結(jié)合CD15+GSCs與T細(xì)胞，激活T細(xì)胞殺傷，在體外實(shí)驗(yàn)中殺傷效率達(dá)90%，且對(duì)CD15-細(xì)胞無影響，特異性更高。靶向GSCs特異性表面標(biāo)志物靶向ALDH1A1的抑制劑ALDH1A1是醛脫氫酶家族成員，參與視黃酸代謝，在GSCs中高表達(dá)，與其干性維持相關(guān)。ALDH1A1抑制劑（如DEAB）可抑制GSCs的sphere形成與體內(nèi)致瘤能力，且可增強(qiáng)替莫唑胺的敏感性；機(jī)制上，DEAB通過降低ALDH1A1活性，增加活性氧（ROS）積累，誘導(dǎo)GSCs凋亡。干擾關(guān)鍵信號(hào)通路GSCs的自我更新與存活高度依賴保守的信號(hào)通路，抑制這些通路可破壞其干性，誘導(dǎo)分化或凋亡。干擾關(guān)鍵信號(hào)通路Notch通路抑制劑Notch通路在GSCs中持續(xù)激活，促進(jìn)自我更新與耐藥。γ-分泌酶抑制劑（GSIs，如DAPT）可阻斷Notch受體裂解，抑制下游靶基因Hes1表達(dá)；在GSCs中，DAPT可顯著降低sphere形成能力，誘導(dǎo)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞，并增強(qiáng)替莫唑胺敏感性。然而，GSIs在臨床中可因抑制Notch1在腸道細(xì)胞中的作用導(dǎo)致腹瀉、腸黏膜炎等副作用；開發(fā)“腫瘤選擇性”GSIs（如與納米載體結(jié)合，靶向腫瘤微環(huán)境）是未來方向。干擾關(guān)鍵信號(hào)通路Wnt/β-catenin通路抑制劑Wnt/β-catenin通路通過激活干性基因（如c-Myc、CyclinD1）維持GSCs干性。小分子抑制劑（如IWP-2）可抑制Wnt蛋白分泌，阻斷β-catenin核轉(zhuǎn)位；在GSCs中，IWP-2可誘導(dǎo)凋亡，并抑制體內(nèi)致瘤能力。此外，靶向Wnt通路的上游調(diào)控因子（如DKK1、sFRP）也可抑制GSCs生長(zhǎng)，DKK1抗體在動(dòng)物模型中可延長(zhǎng)生存期30%。干擾關(guān)鍵信號(hào)通路Hedgehog（Hh）通路抑制劑Hh通路通過Gli1/2/3轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控GSCs增殖與分化。Hh抑制劑（如GDC-0449，維莫德吉）可抑制Gli1表達(dá)，在GSCs中降低sphere形成能力，并誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯；與放療聯(lián)用時(shí)，GDC-0449可增強(qiáng)GSCs對(duì)放射線的敏感性，機(jī)制與抑制DNA修復(fù)通路相關(guān)。干擾關(guān)鍵信號(hào)通路PI3K/Akt/mTOR通路抑制劑PI3K/Akt/m通路是GSCs存活與耐藥的核心通路。mTOR抑制劑（如雷帕霉素）可抑制mTORC1活性，降低蛋白合成，誘導(dǎo)GSCs自噬性死亡；PI3K抑制劑（如BKM120）可阻斷Akt磷酸化，增強(qiáng)化療敏感性。然而，單一通路抑制劑易因反饋激活（如mTOR抑制后激活A(yù)kt）導(dǎo)致耐藥，因此開發(fā)“PI3K/Akt/mTOR”多靶點(diǎn)抑制劑（如BEZ235）是當(dāng)前熱點(diǎn)，BEZ235在GSCs中可顯著抑制增殖，誘導(dǎo)凋亡。調(diào)控腫瘤微環(huán)境GSCs與其所在的微環(huán)境（如缺氧、血管、免疫細(xì)胞）相互作用，形成“共生關(guān)系”，破壞微環(huán)境可間接清除GSCs。調(diào)控腫瘤微環(huán)境靶向缺氧微環(huán)境GSCs常位于缺氧區(qū)域，通過HIF-1α通路激活VEGF、GLUT1等基因，促進(jìn)血管生成與糖酵解。HIF-1α抑制劑（如PX-478）可降低HIF-1α蛋白水平，抑制GSCs的缺氧適應(yīng)能力，在動(dòng)物模型中可減少腫瘤體積50%；此外，通過高壓氧艙提高腫瘤氧分壓，可增強(qiáng)放療與化療效果，臨床研究顯示，高壓氧聯(lián)合替莫唑胺可延長(zhǎng)GBM患者無進(jìn)展生存期2-3個(gè)月。調(diào)控腫瘤微環(huán)境抑制血管生成GSCs通過分泌VEGF促進(jìn)腫瘤血管生成，形成異常血管，導(dǎo)致藥物遞送障礙?？筕EGF抗體（如貝伐珠單抗）可抑制血管生成，降低顱內(nèi)壓，改善臨床癥狀；但需注意，貝伐珠單抗雖可短期縮小腫瘤，但無法清除GSCs，且可能通過“血管正常化”窗口期增強(qiáng)藥物遞送，因此需與化療、靶向治療聯(lián)合使用。調(diào)控腫瘤微環(huán)境重編程免疫微環(huán)境GSCs通過分泌TGF-β、IL-10等因子誘導(dǎo)Tregs浸潤(rùn)，形成免疫抑制微環(huán)境。TGF-β抑制劑（如galunisertib）可阻斷TGF-β信號(hào)，減少Tregs浸潤(rùn)，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞殺傷；此外，CSF-1R抑制劑（如PLX3397）可抑制TAMs的M2型極化，將免疫抑制微環(huán)境轉(zhuǎn)化為免疫激活狀態(tài)，與PD-1抑制劑聯(lián)用時(shí)，可顯著增強(qiáng)抗腫瘤效果，動(dòng)物模型中生存期延長(zhǎng)60%。免疫治療策略利用患者自身免疫系統(tǒng)清除GSCs，是近年來最具前景的策略之一，包括GSCs疫苗、CAR-T細(xì)胞、檢查點(diǎn)抑制劑等。免疫治療策略GSCs疫苗GSCs疫苗是通過將GSCs裂解物或抗原肽（如Survivin、MAGE-A3）與佐劑結(jié)合，激活特異性T細(xì)胞反應(yīng)。樹突狀細(xì)胞（DC）疫苗是當(dāng)前研究熱點(diǎn)：將GSCs抗原肽負(fù)載至DC，回輸患者體內(nèi)，可誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞聯(lián)合抗腫瘤反應(yīng)；臨床研究顯示，DC疫苗聯(lián)合替莫唑胺可延長(zhǎng)GBM患者中位生存期至23個(gè)月，且安全性良好。免疫治療策略CAR-T細(xì)胞治療除前述靶向CD133、CD15的CAR-T外，針對(duì)GSCs特異性抗原（如EGFRvIII、IL-13Rα2）的CAR-T也展現(xiàn)出良好效果。EGFRvIII是GBM特異性突變，在約30%的GBM中表達(dá)，靶向EGFRvIII的CAR-T在臨床I期中可顯著延長(zhǎng)患者生存期，部分患者實(shí)現(xiàn)完全緩解；然而，GBM的免疫抑制微環(huán)境（如TGF-β、PD-L1）可抑制CAR-T活性，因此“armoredCAR-T”（分泌IL-12、抗PD-1抗體）是當(dāng)前改進(jìn)方向，可增強(qiáng)CAR-T在腫瘤微環(huán)境中的浸潤(rùn)與殺傷能力。免疫治療策略免疫檢查點(diǎn)抑制劑GSCs高表達(dá)PD-L1，通過與T細(xì)胞PD-1結(jié)合抑制T細(xì)胞活性?？筆D-1抗體（如帕博利珠單抗）可阻斷這一相互作用，恢復(fù)T細(xì)胞殺傷功能；但單藥使用效果有限，僅約10%的GBM患者有效，與CTLA-4抑制劑（如伊匹木單抗）聯(lián)用可提高有效率至25%；此外，靶向LAG-3、TIM-3等新型檢查點(diǎn)抑制劑也在臨床前研究中展現(xiàn)出潛力。表觀遺傳調(diào)控與分化誘導(dǎo)療法GSCs的干性與耐藥性與其異常表觀遺傳調(diào)控（如DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA）密切相關(guān)，通過表觀遺傳藥物或分化誘導(dǎo)劑可逆轉(zhuǎn)其惡性表型。表觀遺傳調(diào)控與分化誘導(dǎo)療法DNA甲基化抑制劑GSCs中MGMT基因啟動(dòng)子高甲基化是其對(duì)替莫唑胺耐藥的關(guān)鍵，而抑癌基因（如p16、RASSF1A）啟動(dòng)子高甲基化則促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。DNA甲基化抑制劑（如5-aza-2'-deoxycytidine，地西他濱）可逆轉(zhuǎn)MGMT甲基化，增強(qiáng)替莫唑胺敏感性；同時(shí)，地西他濱可激活p16等抑癌基因，抑制GSCs增殖。表觀遺傳調(diào)控與分化誘導(dǎo)療法組蛋白去乙?；敢种苿℉DACi）HDACi（如伏立諾他、帕比司他）可增加組蛋白乙?；?，開放染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，促進(jìn)分化相關(guān)基因表達(dá)。在GSCs中，HDACi可誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，降低自我更新能力，并增強(qiáng)化療敏感性；與替莫唑胺聯(lián)用時(shí)，可顯著降低sphere形成數(shù)量，動(dòng)物模型中生存期延長(zhǎng)50%。表觀遺傳調(diào)控與分化誘導(dǎo)療法非編碼RNA靶向治療microRNAs（miRNAs）與長(zhǎng)鏈非編碼RNAs（lncRNAs）在GSCs中發(fā)揮重要調(diào)控作用。例如，miR-128可靶向BMI1（Polycomb蛋白，調(diào)控自我更新），抑制GSCs增殖；lncRNAHOTAIR可通過抑制PRC2復(fù)合物，激活Wnt通路，促進(jìn)GSCs干性。miRNA模擬物（如miR-128mimic）或lncRNA抑制劑（如HOTAIRASO）可特異性靶向這些非編碼RNA，在體外實(shí)驗(yàn)中可抑制GSCs生長(zhǎng)，動(dòng)物模型中可延長(zhǎng)生存期。表觀遺傳調(diào)控與分化誘導(dǎo)療法分化誘導(dǎo)療法通過小分子誘導(dǎo)GSCs分化為終末分化細(xì)胞，可降低其致瘤性與耐藥性。維甲酸（RA）是經(jīng)典分化誘導(dǎo)劑，可誘導(dǎo)GSCs分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞，降低CD133表達(dá)，增強(qiáng)化療敏感性；此外，骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）家族成員（如BMP4）也可誘導(dǎo)GSCs分化，BMP4與RA聯(lián)用時(shí)，分化效率可達(dá)80%，顯著抑制體內(nèi)致瘤能力。聯(lián)合治療策略鑒于GSCs的高度異質(zhì)性與耐藥性，單一治療策略難以徹底清除，聯(lián)合治療已成為必然趨勢(shì)。聯(lián)合治療策略化療+靶向治療替莫唑胺聯(lián)合MGMT抑制劑（如O6-芐基鳥嘌呤）可逆轉(zhuǎn)MGMT介導(dǎo)的耐藥；聯(lián)合PI3K抑制劑（如BKM120）可增強(qiáng)替莫唑胺對(duì)GSCs的殺傷，臨床前研究顯示，聯(lián)合組動(dòng)物生存期延長(zhǎng)70%。聯(lián)合治療策略放療+靶向治療放療可誘導(dǎo)DNA損傷，而DNA損傷抑制劑（如ATR抑制劑）可增強(qiáng)放療效果；此外，放療可促進(jìn)GSCs表達(dá)PD-L1，與PD-1抑制劑聯(lián)用可產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用，動(dòng)物模型中生存期延長(zhǎng)80%。聯(lián)合治療策略免疫治療+靶向治療CAR-T細(xì)胞聯(lián)合HIF-1α抑制劑可改善腫瘤缺氧微環(huán)境，增強(qiáng)CAR-T浸潤(rùn)；聯(lián)合PD-1抑制劑可抑制免疫逃逸，臨床前研究顯示，聯(lián)合組CAR-T殺傷效率提高60%。聯(lián)合治療策略多靶點(diǎn)聯(lián)合治療針對(duì)GSCs的多個(gè)關(guān)鍵通路（如Notch+Wnt+PI3K）開發(fā)多靶點(diǎn)抑制劑，可避免單一靶點(diǎn)抑制后的反饋激活；例如，“Notch抑制劑+PI3K抑制劑”聯(lián)合使用可顯著抑制GSCs的自我更新與存活，動(dòng)物模型中腫瘤體積減少70%。05現(xiàn)有策略的挑戰(zhàn)與未來方向現(xiàn)有策略的挑戰(zhàn)與未來方向盡管靶向干細(xì)胞源性GSCs的策略已取得顯著進(jìn)展，但臨床轉(zhuǎn)化仍面臨諸多挑戰(zhàn)：挑戰(zhàn)GSCs的異質(zhì)性單細(xì)胞測(cè)序顯示，GSCs存在高度異質(zhì)性，不同亞群表達(dá)不同標(biāo)志物、依賴不同信號(hào)通路，導(dǎo)致單一靶向治療難以清除所有GSCs。例如，靶向CD133的CAR-T可能清除CD133+亞群，但CD133-亞群仍可殘留并復(fù)發(fā)。挑戰(zhàn)血腦屏障（BBB）限制BBB是藥物遞送的主要障礙，多數(shù)化療藥物、抗體難以通過BBB到達(dá)腫瘤部位。例如，貝伐珠單抗的BBB穿透率不足5%，限制了其在GSCs中的療效。挑戰(zhàn)耐藥性的產(chǎn)生GSCs可通過表觀遺傳重編程、信號(hào)通路旁路激活等機(jī)制產(chǎn)生耐藥。例如，Notch抑制劑治療可激活Wnt通路，導(dǎo)致耐藥；CAR-T治療可誘導(dǎo)GSCs表達(dá)PD-L1，逃避免疫識(shí)別。挑戰(zhàn)免疫抑制微環(huán)境GBM的免疫抑制微環(huán)境（如Tregs浸潤(rùn)、TAM