1、第二節(jié)基因工程的原理和技術(shù)，生產(chǎn)重組質(zhì)?；蛑亟MDNA，胰島素的傳統(tǒng)方法是從豬和羊的胰腺中提取，獲得1g胰島素，大約100公斤的豬胰腺，糖尿病治療，1978年，科學(xué)家在大腸桿菌中成功表達(dá)了人類胰島素，1982年批準(zhǔn)在美國(guó)上市，通過(guò)基因工程的基本原理，有興趣的基因，基因工程的基本操作程序，1，獲取目的基因，2，形成重組DNA分子，3，將重組DNA分子引入受體細(xì)胞，4，篩選包含目的基因的受體細(xì)胞，5，目的基因的表達(dá)，目前使用的目的基因是芽孢桿菌，基因操作的基本階段，第一，提取目的基因從捐贈(zèng)者生物的細(xì)胞中提取必要的基因。目標(biāo)基因的序列未知1，從基因庫(kù)中獲取目標(biāo)基因的序列2，使用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技

2、術(shù)的擴(kuò)增3，人工合成，獲取目標(biāo)基因的一般方法：1，構(gòu)建基因庫(kù)的直接分離法(或彈弓法)的最大缺點(diǎn)是盲目性大，工作量大，工作量大不能將真核生物的基因轉(zhuǎn)移到原核生物上。2，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，聚合酶鏈反應(yīng)，克隆體外特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。你可以得到很多目的基因。PCR放大裝置，氫鍵破裂，單鏈DNA形成。引物和DNA模板結(jié)合形成局部雙鏈。在酶作用下繼續(xù)擴(kuò)展，合成雙鏈DNA。循環(huán)數(shù)次以獲得大量雙鏈DNA分子。PCR技術(shù)擴(kuò)增，合成方法，逆轉(zhuǎn)錄方法，根據(jù)DNA中已知的氨基酸序列直接合成，2，重組DNA分子，核心，質(zhì)粒，DNA分子，限制性酶處理，兩個(gè)切口獲取目的基因，DNA連接酶，重組DNA分子

3、(探索：轉(zhuǎn)基因過(guò)程中如何選擇受體細(xì)胞？轉(zhuǎn)基因植物，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，轉(zhuǎn)基因微生物，植物細(xì)胞或受精卵，受精卵，大腸桿菌，枯草桿菌，酵母等，研究：為什么一般將微生物用作受體細(xì)胞？目的基因注入受體細(xì)胞，受體細(xì)胞可以在繁殖的同時(shí)克隆，細(xì)菌繁殖得很快，在很短的時(shí)間內(nèi)獲得大量的目的基因。微生物可以通過(guò)發(fā)酵大量繁殖。(2)將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞。受體細(xì)胞：細(xì)菌、氯化鈣、細(xì)胞壁的通透性增加，重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞，復(fù)制目的基因。將目的基因引入植物細(xì)胞，農(nóng)轉(zhuǎn)化，基因槍法，花粉管途徑法，也稱為微彈轟擊法，是以壓縮氣體的生成動(dòng)力，將包裹在金屬粒子表面的表達(dá)載體DNA滲透到受體細(xì)胞，整合和表達(dá)目的基因的方法。將目的基因?qū)?/p>

4、動(dòng)物細(xì)胞，微注技術(shù)，基因表達(dá)載體的純化，1。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，轉(zhuǎn)亞基帕基因，基因槍法，2。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞，微注射技術(shù)(最，最有效)，3 .將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞，Ca2處理，提高細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性。探索：如何篩選引入目標(biāo)基因的受體細(xì)胞？(1)原則：2)方法：3)例如，所有受體細(xì)胞，4，篩選出目標(biāo)基因的受體細(xì)胞，質(zhì)粒上使用抗生素的耐藥基因，利用選擇培養(yǎng)基篩選出包含目標(biāo)基因的受體細(xì)胞，前3個(gè)步驟是處理非常繁雜的鎖，為了確保目標(biāo)基因得到有效利用，通常利用大量受體細(xì)胞容納大量的目標(biāo)基因在這樣處理的受體細(xì)胞中，實(shí)際上很少攝取目標(biāo)基因，應(yīng)該檢測(cè)到這一點(diǎn)。，細(xì)菌的檢測(cè)，分別培養(yǎng)各受體細(xì)胞形成

5、殖民地，檢測(cè)在殖民地是否有目的基因的產(chǎn)物。消除無(wú)表達(dá)產(chǎn)物的群體，保持表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一步培養(yǎng)，研究。通過(guò)多細(xì)胞生物的檢測(cè)，個(gè)別培養(yǎng)和誘導(dǎo)各受體細(xì)胞，測(cè)試這些個(gè)體是否攝取目的基因，是否表達(dá)所攝取的基因(是否表現(xiàn)出相應(yīng)的性狀)。消除不變的個(gè)體，保留相應(yīng)變化的個(gè)體，進(jìn)一步培養(yǎng)和研究。例如：如果喂棉花球室蠕蟲，例如蟲蛀后沒(méi)有出現(xiàn)中毒癥狀，說(shuō)明沒(méi)有表達(dá)未攝取目的基因或攝取目的基因。也就是說(shuō)，如果昆蟲吃后因中毒死亡，則在攝取抗昆蟲基因后表現(xiàn)出來(lái)。受體細(xì)胞說(shuō)明攝取DNA分子后能表達(dá)目的基因嗎？包含目標(biāo)基因的受體細(xì)胞不一定會(huì)表達(dá)。(5)如果看到目標(biāo)基因的表達(dá)，目標(biāo)性狀或分離為目標(biāo)基因表達(dá)產(chǎn)物，作為調(diào)節(jié)生物性狀的基

6、本單位，生物界共享基因密碼遺傳信息的傳遞，遵循中心規(guī)律的信息流方向，人類胰島素原電子必須在大腸桿菌中表達(dá)，并經(jīng)過(guò)人類胰島素原的進(jìn)一步加工，才能獲得生物活性胰島素。甲生物，乙生物，新類型，基因敲除技術(shù)，基因改造技術(shù)，生物，新類型，提高能力：人的糖蛋白必須經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基進(jìn)一步加工合成，通過(guò)基因改造技術(shù)可以表達(dá)人的糖蛋白基因的受體細(xì)胞()a大腸桿菌B酵母C T4噬菌體d質(zhì)粒DNA，基因探針(DNA探針)與目標(biāo)基因雜交，雜交帶與否，基因工程的基本操作程序，獲得目標(biāo)基因，形成重組DNA分子；將目的基因引入受體細(xì)胞，篩選包含目的基因的受體細(xì)胞和目的基因表達(dá)，1，從基因庫(kù)中獲取目的基因2，利用PCR技術(shù)

7、進(jìn)行目的基因擴(kuò)增3，化學(xué)合成，農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化，基因槍法，微注射法，Ca2處理，DNA分子雜交技術(shù)，抗原消除無(wú)表達(dá)產(chǎn)物的群體，保持表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一步培養(yǎng)，研究。1，利用基因工程技術(shù)，大腸桿菌可以合成人類蛋白質(zhì)。這種錯(cuò)誤的解釋是，a一般使用相同限制性內(nèi)切酶處理的基因和質(zhì)粒BDNA連接酶和RNA聚合酶，構(gòu)建重組質(zhì)粒所需的工具酶c，利用含有抗生素的培養(yǎng)基將重組質(zhì)粒d引入大腸桿菌，引入大腸桿菌的目的基因不一定能成功表達(dá)。B，綜合練習(xí)，2下一種方法利用mRNA逆轉(zhuǎn)錄形成，從基因組庫(kù)中提取受體細(xì)胞中提取PCR技術(shù)，利用DNA轉(zhuǎn)錄，A B CD，D，3基因工程也被稱為基因剪接技術(shù)。(1)在這項(xiàng)技術(shù)中，通過(guò)合成方法獲

8、得目標(biāo)基因的一種方法是以轉(zhuǎn)錄目標(biāo)基因?yàn)槟０澹圃旎パa(bǔ)的單鏈DNA，然后通過(guò)酶的作用合成。(2)基因工程中常用的受體細(xì)胞包括細(xì)菌、真菌和其他。(。(3)假設(shè)將大腸桿菌質(zhì)粒用作載體，將相同的限制性內(nèi)切載體和目的基因，切割載體與目標(biāo)基因片段混合，添加DNA結(jié)合酶。連接產(chǎn)物中至少有一種環(huán)DNA分子，每個(gè)都有。，信使RNA，逆轉(zhuǎn)錄，雙鏈DNA(目的基因)，動(dòng)植物細(xì)胞，3，載體自身連接，目標(biāo)基因片段連接的環(huán)狀DNA分子，4如何利用目標(biāo)基因通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得耐寒性提高的香蕉植物？在使用轉(zhuǎn)基因香蕉的過(guò)程中，生態(tài)安全會(huì)出現(xiàn)什么問(wèn)題？(列舉兩點(diǎn))將目的基因插入人類土壤農(nóng)桿菌的質(zhì)粒，構(gòu)建表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)香蕉受體細(xì)胞，成功轉(zhuǎn)化的香蕉細(xì)胞通過(guò)組織培養(yǎng)形成了植物。生態(tài)安全問(wèn)題包括外源基因擴(kuò)散到其他物種(外來(lái)基因漂移)。轉(zhuǎn)基因植物的擴(kuò)散影響生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能。轉(zhuǎn)基因植物擴(kuò)散對(duì)生物多樣性的影響；轉(zhuǎn)基因植物殘留或分泌物對(duì)環(huán)境的影響。(4)篩選包含目標(biāo)基因的受體細(xì)胞，(5)目標(biāo)基因的表達(dá)，(4)基因工程的基本操作階段，獲取并人工合成第一階段目標(biāo)基因，利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，已知序列：從基因庫(kù)中獲取，未知序列：(DNA library) 即_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _方式