1、第三章 藥物的雜質(zhì)檢查,基本內(nèi)容,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,第一節(jié) 概述,練習(xí)與思考,基本要求,一、掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、方法和計(jì)算。 二、熟悉特殊雜質(zhì)檢查的方法和原理。,一、藥物純度的概念與要求,第一節(jié) 概述,1.藥物純度的概念：藥物的純度是指藥物的純凈程度。 對藥物純度的認(rèn)識是在防治疾病的實(shí)踐中積累起來的 如：ASA中除了SA外，還存在乙酰水楊酸酐、乙酰水楊酰水楊酸等SA的衍生物，具有致敏作用。 2. 對藥物純度的要求隨著臨床應(yīng)用的實(shí)踐和分析測試技術(shù)的發(fā)展，在不斷改進(jìn)，使之更加完善 如：度冷?。ǎ?948年收入BP，1970年經(jīng)GC分離鑒定出兩種無效異構(gòu)體（

2、）和（），有時(shí)高達(dá)20%30%。,例：純度要求 鹽酸哌替啶(杜冷丁),無效異構(gòu)體I 無效異構(gòu)體 II,3.雜質(zhì)：藥物中存在的無治療作用的、影響藥物穩(wěn)定性 和療效、甚至對人體健康有害的物質(zhì)。 4.藥物純度的評價(jià)： 應(yīng)把藥物的性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測定等 作為一個(gè)有聯(lián)系的整體來評價(jià)藥物的純度。,5.與試劑的純度不同，不能用化學(xué)試劑的規(guī)格代替藥品 標(biāo)準(zhǔn)，更不能將化學(xué)試劑當(dāng)作藥品直接用于臨床 如：試劑規(guī)格的BaSO4,允許存在可溶性鋇鹽 藥品中不允許：可導(dǎo)致醫(yī)療事故,1雜質(zhì)的來源：生產(chǎn)過程中引入 貯藏過程中產(chǎn)生,二、雜質(zhì)的來源與種類,酸度：水解試劑帶入 乙醇中不溶物：水解中間體(糊精) SO3

3、2-：產(chǎn)品用H2SO3漂白 可溶性淀粉：水解不完全,1雜質(zhì)的來源：生產(chǎn)過程中引入 貯藏過程中產(chǎn)生,二、雜質(zhì)的來源與種類,外界條件影響：日光、空氣、溫度、濕度、 微生物等引起藥物產(chǎn)生,例如： 麻醉乙醚 醛及有毒的 過氧化物,2雜質(zhì)的分類 依雜質(zhì)來源分類：一般雜質(zhì)：含義，品種 特殊雜質(zhì)：含義 依雜質(zhì)毒性分類：信號雜質(zhì) 有害雜質(zhì) 依雜質(zhì)理化性質(zhì)分類：有機(jī)雜質(zhì) 無機(jī)雜質(zhì) 殘留溶劑,二、雜質(zhì)的來源與種類,一般雜質(zhì):在自然界分布比較廣泛,在多種藥物的生產(chǎn)或貯存過程中容易引入的雜質(zhì)。 如：pH值、溶液的澄清度、氯化物、硫酸鹽、重金屬等,特殊雜質(zhì)：在有關(guān)藥物的生產(chǎn)和貯存過程中，因其生產(chǎn)工藝或藥物本身的性質(zhì)可能

4、引入的雜質(zhì)。,A + B C D + E,原料,中間產(chǎn)物,副產(chǎn)物,產(chǎn)品,試劑 溶劑 催化劑,金屬容器、管道、裝置,制劑時(shí)的輔料,異構(gòu)體多晶型,三、雜質(zhì)的限量檢查,在不對人體有害、不影響療效的情況下，允許藥物中存在一定量的雜質(zhì) 1.雜質(zhì)限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量 表示方法：或（百萬分率） 2.限量檢查：藥物中雜質(zhì)的檢查，一般不要求測定 其含量，而只是檢查雜質(zhì)的量是否超過 限量。,常用方法：對照法,供試液 供試液 對照液 相同條件 現(xiàn)象 現(xiàn)象 下反應(yīng) 比較 供試液 對照液 對照液 現(xiàn)象 現(xiàn)象,取一定量 (CV) 與被檢雜質(zhì)相同的純品或?qū)φ掌放涑蓪φ掌啡芤?，與一定量(S)藥物供試溶液在相同條件

5、下處理后，比較反應(yīng)結(jié)果，以確定雜質(zhì)含量是否超過規(guī)定。,合格,不合格,對照液濁度 供試液濁度,雜質(zhì)限量的計(jì)算：,式中： L 雜質(zhì)的限度（%） C 對照液濃度 （g/ml） V 對照液的加入體積（ml) S 供試品的量(g) 注意: 單位統(tǒng)一,例 1 ： 對乙酰氨基酚中氯化物的檢查： 取試樣 2.0g 溶于100ml水中，取25ml檢查Cl-，與標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液(10g/ml) 5ml對照液相比，不得更深。 C= 10g/ml V=5.0ml S= 25 2.0 100=0.5g,一氯化物檢查法： 1. 原理： 供試液：Ag+ClAgCl（白色混濁） 對照液：標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液 2. 方法：,比濁,第

6、二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,3.討論 黑色背景下，從上至下觀察（納氏比色管“成對”） 氯化物適宜濃度：5080g/50ml（濁度梯度明顯） 硝酸酸性：作用（介質(zhì)條件） 避光（AgCl見光分解） 供試液若不澄清（事先過濾） 供試液若有色（干擾消除） 平行操作原則,供試品有色： 可采用內(nèi)消色法，按中國藥典附錄規(guī)定的方法處理。,供試品,+ AgNO3,放置10min 過濾,澄清溶液,+標(biāo)準(zhǔn)NaCl,+水,對照溶液,供試品,+ AgNO3,+水,供試品溶液,+ AgNO3,+水,二、硫酸鹽檢查法,1.原理： 供試液： SO2 Ba2 BaSO（白色混濁） 對照液：標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液,比濁,2.方法,3. 討

7、論 黑色背景下，從上至下觀察 硫酸鹽適宜比濁濃度：100500g/50ml 鹽酸酸性（介質(zhì)） 供試液如渾濁需濾過 供試液若有色（干擾消除） 平行操作原則,三鐵鹽檢查法 （一）硫氰酸鹽法 1.原理： 供試液：Fe3 6SCNFe(SCN)63（紅色） 對照液：標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液（硫酸鐵銨溶液）,比色,2.方法,3.討論 白色背景下，從側(cè)面觀察 鹽酸酸性（防止三價(jià)鐵水解） 過硫酸銨的作用（氧化二價(jià)鐵為三價(jià)鐵） Fe3的適宜比色范圍：10-50g/50ml 色調(diào)不一致時(shí)或所呈硫氰酸鐵的顏色較淺 不便比較時(shí)：可分別移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。 平行操作原則,(二）巰基醋酸法（BP

8、） 1. 原理 巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，在氨堿性試液中與Fe 2 + 作用生成紅色配位離子。 2Fe3+ + 2HSCH2COOH 2Fe2+ + SCH2COOH + 2H+ SCH2COOH Fe2+ + 2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 + 2H+ Fe(SCH2COOH)2 Fe(SCH2COOH)2 2- + 2H2O,2OH-,四、重金屬檢查法,重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等，由于藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機(jī)會比較多，鉛在體內(nèi)又易積蓄中毒，故檢查時(shí)以鉛作為代表。,ChP(2010年版) 第一法(硫

9、代乙酰胺法) 用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物，最常用 1.原理： 供試液：CH3CSNH2 + H2O CH3CONH2 + H2S H2S + Pb2 PbS+ 2H（黃棕黑） 對照液：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（加硝酸防止Pb2+水解） 2.方法：,比濁,3. 討論 白色背景下，從上至下觀察 pH 3.5醋酸鹽緩沖液 Pb2適宜比色范圍：1020g/27ml 供試液有色時(shí)： 供試品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氫析出S 產(chǎn)生混濁影響比色，可加Vc或鹽酸 羥胺使Fe3+還原成Fe2+再檢查。,第二法（熾灼后的硫代乙酰胺法）：用于在水、稀酸、乙醇中難溶，或含芳環(huán)、雜環(huán)（能與重金屬離子形成配位化合物）的有

10、機(jī)藥物 1.原理：熾灼破壞后 Pb2 第一法檢查 2.方法：500600熾灼 第三法（硫化鈉法）：用于難溶于稀酸但能溶解于堿性水溶液的藥物（磺胺類、巴比妥類） 供試液：Pb2Na2SPbSNa（灰黑色） 對照液：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液 介質(zhì)條件：NaOH堿性條件,比濁,五砷鹽檢查法 古蔡法 二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC） （一）古蔡法： 1.原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，氫與藥物中微量砷鹽反應(yīng)，生成具揮發(fā)性的砷化氫氣體，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在同樣條件下生成的砷斑比較，顏色不得更深。,As3+ + 3Zn + 3H+ 3Zn2+ + AsH3 AsO33- +

11、3Zn + 9H+ 3Zn2+ + 3H2O + AsH3 AsO43- + 4Zn + 11H+ 4Zn2+ + 4H2O + AsH3 AsH3 + 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3 (黃色) 2As(HgBr)3 + AsH3 3 AsH(HgBr)2 (棕色) As(HgBr)3 + AsH3 3HBr + As2Hg3 (棕黑色) 2.儀器裝置 3.方法： 醋酸鉛棉花的作用 KI和酸性SnCl2的作用 標(biāo)準(zhǔn)砷斑用2ml的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液制成,供試品、HCl、Zn、KI、SnCl2,Pb(Ac)2棉,HgBr2試紙,返 回,KI和酸性SnCl2的作用：,AsO43- + 2I-

12、 +2H+ AsO33- + I2 + H2O AsO43- + Sn2+ + 2H+ AsO33- + Sn4+ H2O I2 + Sn2+ 2I- + Sn4+ 4I- + Zn2+ ZnI42-,AsO43-,AsO33-,AsH3,慢,快,KI SnCl2,將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，加快反應(yīng)速度,5,3,抑制銻化氫的生成,促進(jìn)AsH3的生成,形成Zn-Sn齊，去極化,返 回,Pb(AC)2棉的作用： 消除鋅粒和供試品中可能含有的少量的硫化物的影響。 S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgS （汞斑） H2S + Pb(Ac)2 PbS + 2HAc,返 回,

13、4.供試品處理,（1）供試品為S2-,SO32-, S2O32-等: 因在酸中生成H2S, SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。 用硝酸氧化成硫酸鹽可消除。 （2）供試品為Fe3+ ，能消耗KI，SnCl2 ，可先加足量 SnCl2。 （3）環(huán)狀結(jié)構(gòu)有機(jī)藥物，先有機(jī)破壞 （4）含銻藥物，改用白田道夫（Betterdorff ）法 2As3+ + 3SnCl2 + 6HCl 2As+ 3SnCl4 + 6H+,膠態(tài)、棕褐色,（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法 （silver diethyl dithio carbamate) （Ag-DDC法） 1.原理： 供試液：AsH3+ 6A

14、g（DDC）Ag （紅色膠態(tài)） 對照液：標(biāo)準(zhǔn)砷溶液 2.儀器裝置：,比色或 測定A,Ag(DDC)的 吡啶溶液(USP) 三乙胺-氯仿溶液(ChP),3.方法：白色背景下，從上至下觀察； 或在510nm處，測定吸收度,小結(jié),其他要求：原理 試液的作用 對照的方法 砷鹽檢查法的儀器裝置,六、溶液顏色檢查法,控制藥物中有色雜質(zhì)的含量 1. 目視比色法,5種色調(diào) 10種色號,標(biāo)準(zhǔn)比色液,標(biāo)準(zhǔn)貯備液,比色原液,K2Cr2O7 CoCl2 CuSO4,2. 分光光度法 有色雜質(zhì)對光有吸收，通過測定吸收度可控制其限量 3. 色差計(jì)法 通過比較供試品、標(biāo)準(zhǔn)比色液與水之間的色差值,黃綠、黃 橙黃,橙紅 棕紅,

15、七、易炭化物檢查法,檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)。 這類雜質(zhì)多數(shù)結(jié)構(gòu)未知，常采用加硫酸呈色后與對照液比較的方法進(jìn)行檢查。 對照液為：標(biāo)準(zhǔn)比色液 由CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4 配制 KMnO4液,八、溶液澄清度檢查法,八、溶液澄清度檢查法,澄清：系指供試品溶液的澄清度相當(dāng)于所用溶劑或 未超過0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液,九、熾灼殘?jiān)鼨z查法,熾灼殘?jiān)河袡C(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機(jī)藥物加熱分解后，高溫?zé)胱?，所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)的硫酸鹽 加硫酸熾灼法：700800; 如熾灼殘?jiān)枇糇髦亟饘贆z查，則熾灼溫度應(yīng)控制在500600 恒重：供試品連續(xù)兩次熾灼或干燥后的重量差異在0.3

16、mg以下 限量標(biāo)準(zhǔn)：0.1%-0.2%,十、干燥失重測定法,干燥失重：藥品在規(guī)定條件下，經(jīng)干燥后所減失的量，以百分率表示 檢查：藥物中的水分和揮發(fā)性物質(zhì) 1.常壓恒溫干燥法 適用于受熱較穩(wěn)定的藥物 溫度：105 2.減壓干燥法 適用于熔點(diǎn)低、受熱分解的藥物 3.干燥劑干燥法 適用于受熱易分解或升華的藥物 干燥劑：硅膠、硫酸、五氧化二磷,十一、有機(jī)溶劑殘留量測定法,主要檢查藥物在生產(chǎn)過程中引入的有害的有機(jī)溶劑 常采用氣相色譜法進(jìn)行檢查 直接進(jìn)樣法 頂空進(jìn)樣法（適用于揮發(fā)性大的樣品測定）,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,特殊雜質(zhì)：在該藥物的生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)藥物的性質(zhì)、生產(chǎn)方法和工藝條件，有可能引入的雜

17、質(zhì) 方法： 利用藥物和雜質(zhì)在物理和化學(xué)性質(zhì)上的差異進(jìn)行,物理：外觀性狀、分配或吸附、對光的吸收的差異 化學(xué)：對某一化學(xué)反應(yīng)的差別,雜質(zhì)與試劑反應(yīng) 藥物無反應(yīng),一、色譜分析法,（一）TLC 1.雜質(zhì)對照品法 判斷結(jié)果：供試品溶液如顯與對照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對照品溶液主斑點(diǎn)比較，不得更深,特點(diǎn)：分離效能高，分離的同時(shí)進(jìn)行測定，應(yīng)用廣泛,需要對照品,供試品A,對照品B,A,？,B,前沿,原點(diǎn),l0,l,2.高低濃度對比法 當(dāng)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)不能確定、或無雜質(zhì)對照品時(shí)，采用此法 要求：雜質(zhì)斑點(diǎn)的顏色與主成分斑點(diǎn)顏色相同或相近,供試液,稀釋,對照液,點(diǎn)樣、展開、干燥、顯色,結(jié)果判斷：供試液所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)與

18、對照液主斑點(diǎn)比較，不得更深,（高）,（低）,（二）高效液相色譜法(HPLC),1.內(nèi)標(biāo)法（加校正因子測定法）,1.內(nèi)標(biāo)法（例）,2. 外標(biāo)法測定 需要雜質(zhì)對照品，進(jìn)樣量能夠精確控制,3.加校正因子的主成分自身對照法 建立方法時(shí)，需要雜質(zhì)對照品 雜質(zhì)檢查時(shí)，不需雜質(zhì)對照品,4.不加校正因子主成分對照法 用于沒有雜質(zhì)對照品時(shí)雜質(zhì)的檢查 對照液：供試品的稀釋液，進(jìn)樣測得A主 供試液：進(jìn)樣測得雜質(zhì)Ai，雜質(zhì)Ai A主即為合格.,4.不加校正因子主成分對照法（例）,5.峰面積歸一化法 適用于粗略測量雜質(zhì)含量 L% = Ai /(Ai + A主）100% 例如：利巴韋林中有關(guān)雜質(zhì)的檢查：,5.峰面積歸一化

19、法（例）,（三）氣相色譜法(GC) 主要用于藥物中揮發(fā)性的雜質(zhì)檢查，其檢查方 法與HPLC法相同。,利用藥物和雜質(zhì)對光選擇性吸收性質(zhì)的差異 （一）紫外分光光度法 在藥物無吸收而雜質(zhì)有吸收的波長測定吸收度，規(guī)定測得的吸收度不得超過某一限值,二、光譜分析法,220 260 300 nm,腎上腺酮及腎上腺素的紫外吸收曲線,max310nm,二、光譜分析法,（二）紅外分光光度法 用于藥物中無效或低效晶型的測定 晶型結(jié)構(gòu)不同，化學(xué)鍵的鍵長、鍵角等發(fā)生不同 程度的變化，導(dǎo)致紅外吸收光譜中某些特征峰的 頻率、峰形、強(qiáng)度等出現(xiàn)顯著差異。,（三）原子吸收分光光度法 用于金屬元素的測定,試樣預(yù)處理原子化器待檢元素的原子蒸氣 求出待檢元素含量檢測器吸收特定的光,利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性質(zhì)上的差異,選擇合適的試劑，使之與雜質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)生顏色、 沉淀或氣體，而藥物不發(fā)生反應(yīng),三、化學(xué)分析法,利用藥物和雜質(zhì)在物理