1、閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，1。生物學(xué)特性、細(xì)菌形態(tài)和培養(yǎng)特性。革蘭氏陽性球菌，直徑0.5-1.0微米，是單個、成對、四重或不規(guī)則的簇，如葡萄球菌，所以它們被稱為葡萄球菌。在閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡蘿卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)暗橙色至淡黃色。色素的產(chǎn)生取決于生長條件，所以它被稱為金黃色葡萄球菌。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，大多數(shù)菌株的最適生長溫度為30-37，最適酸堿度為7.0-7.5；兼性厭氧菌在有氧條件下生長最好；它能在15%氯化鈉和40%膽汁中生長。通常，含有10%氯化鈉的胰蛋白胨大豆肉湯用于富集，或者7.5%氯化鈉肉湯用于富集。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物

2、工程系，所有菌株都產(chǎn)生血漿凝固酶，來自人和動物的菌株通常能凝固兔、人、馬和豬的血漿。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等。大多數(shù)菌株能夠水解天然動物蛋白并釋放脂肪酸。磷脂環(huán)在英國石油公司的平板上生產(chǎn)。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，生物學(xué)特性為致病性，金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株的毒力主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a .溶血素：外毒素，可破壞血小板，破壞溶酶體，引起機(jī)體缺血壞死；溶血環(huán)出現(xiàn)在血平板培養(yǎng)中。b .殺死白細(xì)胞：它能殺死人類白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時，這種酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積在細(xì)菌表面或凝固，從而阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。

3、d .脫氧核糖核酸酶(dnase) e .腸毒素：引起急性胃腸炎。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，金黃色葡萄球菌是人類化膿性感染中最常見的病原體，臨床表現(xiàn)多樣，可引起局部化膿性感染、肺炎、心包炎，甚至全身性感染如敗血癥和膿毒血癥。葡萄球菌食物中毒是一種由葡萄球菌腸毒素引起的疾病，可引起不同程度的急性胃腸炎癥狀。惡心和嘔吐最為突出和常見，其次是腹痛和腹瀉。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染含有淀粉和水的食物時，如牛奶和奶制品、肉、蛋等。在合適的溫度條件下，在8-10小時內(nèi)可以獲得大量的腸毒素。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系。檢驗程序和操作方法，根據(jù)中華人民共和國和中國國家標(biāo)準(zhǔn)食品衛(wèi)生微生物檢驗GB 478

4、9.10-94，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系金黃色葡萄球菌檢驗，25g(ml) 225ml無菌生理鹽水，國家標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌檢驗程序，直接計數(shù)法，富集培養(yǎng)法，貝爾德-帕克0.3ml，0.3ml，0.4ml，75%氯化鈉肉湯或胰蛋白胨大豆肉湯，血盤，血盤，貝爾德-法361 24小時，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，富集培養(yǎng)的試驗程序，利用金黃色葡萄球菌的耐鹽特性(可耐受15%氯化鈉)，用含有10%氯化鈉的胰蛋白胨大豆肉湯或7.5%氯化鈉肉湯進(jìn)行富集。 把它放在37的培養(yǎng)箱里24小時。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，檢驗程序分離與培養(yǎng)，血片：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生溶血素，因此在血片上產(chǎn)生明

5、顯的溶血環(huán)。典型菌落：金黃色，有時白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，大型，突起，圓形，不透明，帶溶血環(huán)，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，血平板制作，配料：大豆粉瓊脂(或營養(yǎng)瓊脂)100毫升，脫纖維羊血(或兔血)5-10毫升。制備方法：將瓊脂加熱融化，冷卻至50，在無菌操作中加入脫纖維的羊血或兔血，搖勻，倒入盤中。或者將滅菌的試管包裝起來，放在一個斜面上。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，英國石油公司(貝爾德-帕克)板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和礦物質(zhì)元素。丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑，對除金黃色葡萄球菌外的其他能分解蛋黃

6、的菌株有毒性，使菌落產(chǎn)生黑色蛋黃提供營養(yǎng)，并有助于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對除金黃色葡萄球菌外的其他菌株的抑制作用。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系BP平板上的典型菌落為灰色至暗玉色，圓形，光滑突起，濕潤，直徑2-3毫米，邊緣常為淡(米色或灰色)，周圍有一個渾濁帶，外緣常有一個透明圈。用接種針接觸菌落似乎有一種黃油口香糖的粘性。從長期儲存的冷凍或干燥食品中分離出的菌落通常比典型的菌落顏色淺，并且可能具有粗糙的外觀和干燥的質(zhì)地。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，食品與生物工程系，B-P板，革蘭氏陽性，球形，葡萄狀，革蘭氏染色鏡檢，檢驗程序鑒定，食品與生物工程系，檢驗程序鑒定，凝固酶試驗，金黃色

7、葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，所以對其鑒定的主要試驗是確定其凝固酶。方法一：取1:4新鮮兔血漿0.5毫升，放入試管，然后加入0.5毫升培養(yǎng)24小時的金球葡萄肉湯培養(yǎng)物，搖勻，放入361培養(yǎng)箱或水浴中，每隔半小時觀察6小時。如果凝結(jié)，如果試管傾斜或倒置，將被視為陽性結(jié)果。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，試管法，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，陽性反應(yīng)，陰性反應(yīng)，不凝，少而散凝，明顯塊凝，巨大塊凝，完全凝，倒置不流動，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，帶凝塊，血漿，均勻混濁，生理鹽水，方法2:玻片用接種環(huán)取待測培養(yǎng)物并混合(與陽性和陰性對照)制成細(xì)菌懸液。如果在1020秒內(nèi)沒有發(fā)生自凝，加入一圈新

8、鮮的人或兔血漿(不稀釋)，將其與細(xì)菌懸液混合，并觀察結(jié)果。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，兔血漿制備組分：檸檬酸鈉0.106 mol/L (31.3g Na3C6H5O72H2O溶于1L蒸餾水中)制備方法：一份加入9份兔血，然后以2000rpm離心，10分鐘后吸取上清液，得到兔血漿。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，葡萄糖肉膏肉湯制備，配料：牛肉糜500克，氯化鈉5克，蛋白胨10克，磷酸氫二鉀2克，葡萄糖10克，蒸餾水1000毫升，pH7.47.6加入蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉和磷酸鹽，溶解，調(diào)節(jié)酸堿度，煮沸，過濾，分裝，高壓滅菌12130分鐘。，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，25克樣品，2

9、25毫升生理鹽水，5毫升樣品勻漿(1:10)，50毫升胰蛋白胨大豆肉湯，血平板，361 24小時，顯微鏡檢查和肉提取物肉湯培養(yǎng)，血漿凝固酶試驗，報告結(jié)果，定性檢測，361 24小時，361 24小時，361 64小時，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系BP平板，25g樣品，225ml生理鹽水，選擇三個連續(xù)梯度，每個梯度接種表面干燥的1mL BP平板(如0.4mL、0.3mL、0.3mL)，平板計數(shù)(分別記錄每種類型的菌落數(shù))為36148小時。血漿凝固酶試驗，報告金黃色葡萄球菌數(shù)/克(毫升)結(jié)果，定量檢測(平板法)，每種類型選擇一個菌落，361 24hr，361 6hr，適用于食品檢測金黃色葡萄球菌數(shù)不低于10個/克(毫升)的計算方法：(在三個平板中加入疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數(shù))血漿凝固酶陽性數(shù)5倍稀釋，梯度科食品與生物工程，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院，第一天設(shè)備準(zhǔn)備，樣品處理， 富集培養(yǎng)和BP平板分離接種，閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系，第二天接種，