1、實(shí)驗(yàn)4 氯化三苯基四氮唑(TTC)法測(cè)定根系活力,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?根系活力是衡量根系活動(dòng)能力強(qiáng)弱的重要指標(biāo)，可以衡量根系吸收水分或礦質(zhì)元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的營(yíng)養(yǎng)狀況以及產(chǎn)量水平。學(xué)會(huì)利用TTC法測(cè)定根系活力。,一、原理,氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成為無(wú)色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯基甲替（TTF），如下式：,生成的TTF比較穩(wěn)定，不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化，所以TTC被廣泛地用作酶試驗(yàn)的氫受體，植物根所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋(píng)果酸得到增強(qiáng)，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性，并作為根系活力的指標(biāo)。,二、材料、設(shè)備儀器及試

2、劑,（一）材料： 玉米等植物根系。 （二）儀器設(shè)備： 分光光度計(jì)； 天平； 恒溫箱1臺(tái)； 研缽1套； 漏斗； 量筒； 移液管；試管； 刻度試管10ml； 試管架； 藥勺； 石英砂適量； 燒杯； 小培養(yǎng)皿；洗瓶。,二、材料、設(shè)備儀器及試劑,（三）試劑： 1. 乙酸乙酯 2. 次硫酸鈉（Na2S2O4，強(qiáng)還原劑，俗稱保險(xiǎn)粉） 3. 1mg/ml的TTC溶液： 4. 磷酸緩沖液（66mmol/L，pH7）。 5. 1mol/L硫酸： 6. 0.4mol/L琥珀酸：,三、實(shí)驗(yàn)步驟,1定性測(cè)定(教師做演示實(shí)驗(yàn)） （1）配置反應(yīng)液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸鈉和磷酸緩沖液按154比例混合。

3、（2）把根仔細(xì)洗凈，把地上部分從莖基切除，將根放入三角瓶中，倒入反應(yīng)液，以浸沒(méi)根為度，置37左右暗處放1h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細(xì)側(cè)根都明顯地變成紅色，表明該處有脫氫酶存在。,三、實(shí)驗(yàn)步驟,2定量測(cè)定 （1）TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取1mg/mL的T T C 2mL于100mL容量瓶中，加入2勺（黃豆大?。┍ｋU(xiǎn)粉搖勻，加入乙酸乙酯40mL左右劇烈震蕩至保險(xiǎn)粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度，即成TTF標(biāo)準(zhǔn)液(20 g /mL )。 按下表制作 T T F標(biāo)準(zhǔn)曲線。以空白作參比，在485nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。,10 10,三、實(shí)驗(yàn)步驟,（2）.樣品的提取及測(cè)定 樣品提取：

4、稱取根樣品0.5g，放入小培養(yǎng)皿，加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把根充分浸沒(méi)在溶液內(nèi)，在37下暗處保溫1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反應(yīng)。（與此同時(shí)做一空白實(shí)驗(yàn)，先加硫酸，再加根樣品，其他操作同上）。,根系活力測(cè)定：把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯34ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把紅色提出液過(guò)濾后移入10ml刻度試管，用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈於寥?，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量?0ml，用分光光度計(jì)在485nm下比色，以空白作參比讀出光密度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出四氮唑還原量。,四、結(jié)果計(jì)算,四氮唑還原強(qiáng)度： mg/g(根鮮重)/h= 四氮唑還原量（mg）/ 根重（g）時(shí)間(h),五 注意事項(xiàng),分光光度計(jì)的使用：看視頻 保險(xiǎn)粉的量要過(guò)量。