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文檔簡介

1、實驗五 DMEM培養(yǎng)液的配制,【能力目標(biāo)】 熟練掌握DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液的配制。,500mL大燒杯 玻璃棒 250mL/500mL鹽水 瓶 酸度計 50mL小燒杯3個 孔徑0.22m 微孔濾膜 一次性濾器 一次性濾紙 去離 子水 滅活的小牛血清 DMEM干粉 青霉 素 鏈霉素 NaHCO3 超凈工作臺 磁力攪 拌器 電子天平 藥匙,【實驗材料】,DMEM干粉 1瓶(1,000mL量) NaHCO3 3.7g L-谷氨酰胺 0.2g 超純水 1,000mL,【配方】,取清洗干凈的500mL大燒杯一個，加入 新鮮制備的三蒸水約300mL，加熱至15 30； 將DMEM干粉袋豎立輕彈，使袋中粉下 沉，

2、剪開袋口，將干粉倒入500mL的大燒 杯中，用超純水沖洗袋23次； 放入清洗干凈的磁子，在磁力攪拌器充 分?jǐn)嚢?，以確保培養(yǎng)基干粉充分溶解；,【配制方法】,根據(jù)配方要求，加入準(zhǔn)確稱取的NaHCO3 1.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分搖勻至完全 溶解； 加入已經(jīng)制備好的雙抗溶液，使青霉素 和鏈霉素的最終使用濃度達(dá)到100g/mL； 加入培養(yǎng)基總體積約10的已滅活的小 牛血清；,【配制方法】,用濃度為7.4的NaHCO3溶液調(diào)整溶液 的pH值為7.27.4，加超純水定容，并將 培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入鹽水瓶； 用一次性濾器過濾上述培養(yǎng)液到滅菌的 鹽水瓶，封口，4保存?zhèn)溆谩?【配制方法】,實驗五 1M HCl的

3、配制 1M NaOH的配制,250mL燒杯 玻璃棒 250mL鹽水瓶 一次 性濾紙 去離子水 電子天平 藥匙 5mL 移液器 5mL吸頭 NaOH 濃HCl,【實驗材料】,用5mL的移液器準(zhǔn)確移取鹽酸21mL， 加入到279mL超純水中。,【HCl的配制過程】,【NaOH的配制過程】,NaOH 10g 超純水 250mL 邊加邊攪拌，溶解過程會產(chǎn)熱。,【課程安排】,1、每組確定本組的D-Hanks液是否有？ 是否已過濾除菌； 2、每組的EDTA需要高壓滅菌； 3、需要配制新鮮的1M HCl和1M NaOH 溶液，以及7.4的NaHCO3溶液； 4、需要重新滅菌5mL槍頭； 5、每組準(zhǔn)備一鋁飯盒，內(nèi)放小剪刀一把， 小鑷子一把，手術(shù)鉗一把，大剪刀一

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