1、微觀技術(shù),馬玉堃 生命科學(xué)學(xué)院 2007年3月,第五節(jié) 顯微鏡的附屬部件 測微尺（計） 也叫顯微測量尺，是用來測量在顯微鏡下所觀察到的物體長度、厚度、數(shù)目和位置的工具。 測微尺的種類：鏡臺測微計、目鏡測微計、鏡臺標(biāo)本推動器標(biāo)尺和微調(diào)焦輪標(biāo)尺4種類型。 鏡臺測微計 stage micrometer 系一特制的載玻片，在它的中央具有刻度的標(biāo)尺，全長為1mm，共劃分為10個大格，每大格再分成10個小格，這樣共100個小格。每小格長0.01mm=10um。圖1-4. 目鏡測微計 ocular micrometer 是放在目鏡內(nèi)的一種標(biāo)尺，有2種類型，即固定式與移動式。固定式的為一個橢圓形玻璃，直徑20

2、-21mm，上面刻有直線或網(wǎng)格線，圖1-5AB。,普通直線型直線長5mm，分為5大格50或100小格。網(wǎng)格的有25、36、49不等，可以計算數(shù)目和面積。上面這些目鏡測微計在使用時，將目鏡拿出，旋去接目鏡，然后把目鏡測微計放在目鏡光欄上，有刻度的一面向下，再把接目鏡放上即可。 移動式目鏡測微計的標(biāo)尺基本和直線式相似，所不同的是除了這種固定的標(biāo)尺外，還有可以移動的指示線。它裝在一個特制的目鏡中，右邊有一個能旋轉(zhuǎn)的小輪控制，上有100個格，每轉(zhuǎn)動一圈目鏡中的指示線就移動一個。圖1-5CD。,鏡臺標(biāo)本推動器上的縱橫游標(biāo)尺 高級顯微鏡裝有移動式鏡臺或標(biāo)本推動器。這上面裝有推動標(biāo)尺，可以測量長度。 微調(diào)焦

3、輪上的標(biāo)尺 好的顯微鏡在微調(diào)焦輪上都刻有標(biāo)尺，共刻50個分度，每個為1或2個um垂直移動?？梢杂脕頊y量物體的厚度。 測量方法 測量時一般注意事項: (1)在測量時，由于各種原因都會產(chǎn)生誤差，因此要測量5次以上后取平均值。(2)被測量物體一定要放在視野中央，因為此處鏡象最清楚，象差最小。(3)一定要使測定計的分度或標(biāo)準(zhǔn)線與物體在同一個焦點上造像，使2者都清楚。(4)視野中的亮度要均一，以免影響測量的結(jié)果。,長度等測量方法 測量長度時，通常以目鏡測微計與鏡臺測微計配合使用，先用鏡臺測微尺標(biāo)定目鏡測微尺每小格代表的長度，然后才能用目鏡測微尺來測量細(xì)胞的長度。具體方法是先將鏡臺測微計安置在載物臺上，調(diào)

4、好焦點，看清楚后即可移動標(biāo)本推動器使鏡臺測微計的標(biāo)尺與目鏡測微計的標(biāo)尺重疊在一起，圖1-6。 如果目鏡測微計標(biāo)尺上的50格等于鏡臺測微計標(biāo)尺的68格，即0.68mm，則目鏡測微計標(biāo)尺每格0.0136mm或13.6um。這時，移去鏡臺測微計，換成標(biāo)本。如果測量的到葉肉的厚度為目鏡測微計的10格，則它的厚度為13.610=136um。,根據(jù)長度測量結(jié)果可計算各種細(xì)胞、細(xì)胞核的體積及核質(zhì)的比例。公式如下：,2. 描繪器 基本原理 應(yīng)用顯微鏡的成像原理，借助描繪器(drawing attachment)，可將顯微鏡下觀察到的物像直接描繪下來。這與顯微攝影不同，繪制的圖具有比照片更能突出重要細(xì)節(jié)以及表現(xiàn)

5、物體全層的優(yōu)點。因此，它是顯微鏡使用技術(shù)中必須掌握的技能之一。描繪器的種類很多，現(xiàn)介紹一種新型的描器一-0lympusBH2DA型描繪器。這是一種結(jié)構(gòu)精密，操作方便的新型描繪器。但它必須與01ympus系列顯微鏡配合使用。其結(jié)構(gòu)如圖17。,OlympusBH2DA型描繪器與Olympus BHS系列顯微鏡配合使用的安裝和操作方法 1取下顯微鏡的雙筒目鏡座。 2，將描繪器安裝在顯微鏡上。 3重新裝上雙筒目鏡座。 4按圖17B將NFK目鏡裝入描繪器鏡筒內(nèi)。 5在顯微鏡右邊臺面鋪上繪圖紙。 6，將放大倍數(shù)調(diào)節(jié)桿定在A的位置。 7，轉(zhuǎn)動描繪器上的聚焦環(huán)，通過顯微鏡目鏡觀察，直到圖紙表面出現(xiàn)在焦點上。

6、8打開顯微鏡光源。逐漸增加亮度，直到與紙面的亮度平衡。 9，把標(biāo)本放人鏡臺，利用顯微鏡的調(diào)焦輪調(diào)準(zhǔn)焦，使標(biāo)本的物像與圖紙平面同時出現(xiàn)在焦點上。 10用鉛筆繪圖，并不時調(diào)整顯微鏡光源的亮度與圖紙面的亮度，保持平衡。,3. 血細(xì)胞計數(shù)板 基本原理 要計算單位體積的細(xì)胞或微小生物體的數(shù)量，需應(yīng)用顯微鏡的成像原理并借助血細(xì)胞計數(shù)板(haemocytometer)進(jìn)行計數(shù)。血細(xì)胞計數(shù)板為一塊特制的長方形厚玻璃板，中部有兩個凹平臺為計數(shù)室，蓋上蓋玻片后，深度為0.1mm。每個計數(shù)室長、寬各3mm，精確劃分為9個大方格。每個大方格面積為lmm2，體積為0.1mm3。每個角的大方格，各劃分為16個中方格。中央

7、的大方格則由雙線劃分為25個中方格，每個中方格面積為0.04mm2，體積為0.004mm3；每個中方格又各分成16個小方格。每個小方格面積是1400mm2，體積為14 000mm3(圖1-8)。,此法適用于血細(xì)胞、單細(xì)胞生物、浮游生物等計數(shù)，并可測出培養(yǎng)細(xì)胞密度和新接種的培養(yǎng)基在不同時間內(nèi)細(xì)胞數(shù)量增長的情況。,取血細(xì)胞計數(shù)板，加蓋玻片，蓋住計數(shù)室兩邊的小槽。將要計數(shù)的細(xì)胞懸浮液搖勻，用干凈吸管吸取懸液12mL，加1-2滴于蓋玻片邊緣，則懸浮液自動吸人計數(shù)室。放置1-2min。低倍鏡鏡檢。依照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則(凡物體落在方格四邊細(xì)線上的，每格只計算上邊和左側(cè)，其余方向則屬于它格)，以小方格為單位記下每小方格細(xì)胞數(shù)量。小格空白記為0，依次計算小方格內(nèi)含有0、1、2、3、4、個細(xì)胞的小方格各有多少個并記為do、