1、.1，612518，造祖國(guó)，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)，2，基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體參與的反應(yīng)熒光免疫反應(yīng)放射免疫酶免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)金免疫技術(shù)。3，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)，第一節(jié)發(fā)光和化學(xué)發(fā)光第二節(jié)發(fā)光酶免疫測(cè)定(cleia)(chemiluminescence enzyme immunoassay)第三節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定(ECLI)(chemiluminessay)，4，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)：靈敏的化學(xué)發(fā)光分析和特異抗原抗體免疫測(cè)定為一體的檢測(cè)技術(shù)。特征：特異性高，敏感性高，易于分離，快速，無(wú)試劑毒，安全可靠，自動(dòng)化。概念，5，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的類型，根據(jù)發(fā)光劑1。發(fā)光酶免

2、疫測(cè)定(cleia)化學(xué)發(fā)光酶免免疫測(cè)定(chemiluminescence enzymeimmunoassay 2)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(ECLI)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法immuno assay 3。電化學(xué)發(fā)光Electrochemiluminescence Immuno Assay根據(jù)分離方法分為1。微粒子化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定2。磁性粒子化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定。6，第一節(jié)發(fā)光和化學(xué)發(fā)光劑，1，發(fā)光的物質(zhì)從電子激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)釋放的能量表現(xiàn)為光的釋放，1。照明發(fā)光：發(fā)光劑被短波長(zhǎng)入射光照射后進(jìn)入刺激狀態(tài)，在恢復(fù)基態(tài)時(shí)發(fā)射長(zhǎng)波長(zhǎng)的可見光。2 .生物發(fā)光：反應(yīng)器質(zhì)量在熒光素酶的催化下利用ATP能力生成激發(fā)態(tài)氧

3、化熒光素，這是在回復(fù)基態(tài)時(shí)以光子形式釋放多余能量。3 .化學(xué)發(fā)光：室溫下化學(xué)反應(yīng)生成光的發(fā)射。化學(xué)發(fā)光是一個(gè)多階段的過(guò)程。7，lucifer Razer ATP；O2；Mg2，氧化螢火蟲熒光素，螢火蟲熒光素，生物發(fā)光，返回，以牙齒產(chǎn)物分子或中間態(tài)分子衰變到基本狀態(tài)時(shí)發(fā)射光子的形式發(fā)射能量(即發(fā)光)。2 .化學(xué)發(fā)光劑、化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光基質(zhì)：參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的能量傳遞，最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物。發(fā)光劑分為熒光素、生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光劑。9，可以參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)?？乖蚩贵w偶聯(lián)后形成穩(wěn)定的合子試劑；耦合后，保持了較高的楊紫效應(yīng)和反應(yīng)動(dòng)力。標(biāo)記物的理化特性，特別是免疫活性必須保持不變或幾乎不

4、變?；瘜W(xué)發(fā)光劑必須符合以下幾個(gè)茄子條件。返回，10，1。酶促反應(yīng)發(fā)光基質(zhì)是指通過(guò)酶的分解作用發(fā)光的發(fā)光基質(zhì)。在CLEIA中常用的酶是HRP和ALP HRP的發(fā)光體魯米諾，羥基苯乙酸ALP的發(fā)光體是AMPPD，4-MUP(熒光基質(zhì))特征：標(biāo)志物，過(guò)氧化物酶的基質(zhì)，1.1魯米諾及其衍生物，H2O2/HPA是H2O2，1.2 HPA，H2O2 HRP，熒光，氧化二聚體，12，AMPPD，AMPPD在堿性條件下由ALP生成相當(dāng)穩(wěn)定的AMP。、光、ALP/oh-、1.3 360nm PPD、hpo 42-、13，4- MUP，4-MUP，熒光，ALP，1.4 4-MUP，4-mu，360奈米此處光源，1

5、4、2.反應(yīng)快，背景低，神秘高，發(fā)光體量與AE濃度呈線性關(guān)系。一般試劑：吖啶酯(acridinium，AE)，CO2光，15，3。電化學(xué)發(fā)光劑是指在電極表面通過(guò)電化學(xué)反應(yīng)發(fā)光的物質(zhì)。特征：電極上的反應(yīng)；電子載體是三聚氰胺(TPA)化學(xué)發(fā)光劑：三聚氰胺釕、回收物、三聚氰胺釕分子結(jié)構(gòu)、Ru(bpy3)2-、16，電化學(xué)發(fā)光結(jié)構(gòu)圖。牙齒過(guò)程在電極表面反復(fù)制造很多光子，產(chǎn)生光。利用發(fā)光體和蛋白質(zhì)之間的氨基、羧基、硫氫羥基等基團(tuán)形成不可逆轉(zhuǎn)的連接。例如：三聯(lián)的羥基南瓜酰胺基團(tuán)可以與蛋白質(zhì)、抗原激素和核酸結(jié)合。18，2節(jié)發(fā)光酶免疫測(cè)定(CLEIA)，1原理是酶免疫測(cè)定的一種。但是，最后酶反應(yīng)中使用的基質(zhì)是

6、發(fā)光體，發(fā)光反應(yīng)發(fā)出的光是在特定的儀器中測(cè)量的。2 .技術(shù)類型取決于酶促反應(yīng)氣質(zhì)1 .熒光酶免疫測(cè)定法2?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定法。19，1)反應(yīng)模式：1。雙抗體三明治法：經(jīng)常用于大分子檢測(cè)2。雙抗原三明治法：經(jīng)常用于抗原檢查3 1。磁粒子分離法：用抗原或抗體修飾磁性粒子將標(biāo)記本的相應(yīng)抗原或抗體及酶的抗體或抗原結(jié)合起來(lái)，最終通過(guò)磁場(chǎng)將酶標(biāo)記物IC和玻璃酶標(biāo)記物結(jié)合起來(lái)的技術(shù)。b，f分離技術(shù)，磁鐵，3。包皮周分離法：聚苯乙烯稀物質(zhì)制成的珠子作為抗原或抗體載體，抗原抗體反應(yīng)后狀態(tài)和自由狀態(tài)的酶標(biāo)志物結(jié)合分離，24，化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定反應(yīng)電路圖，取消清洗，25，3。酶發(fā)光反應(yīng)添加4-MUP，酶抗體ALP

7、將4-MUP分解為4-MU，在360nm刺激光的照射下釋放448nm的熒光，經(jīng)過(guò)電腦處理，記錄光的強(qiáng)度。3，方法評(píng)價(jià)1，靈敏度高酶發(fā)光增強(qiáng)劑發(fā)光穩(wěn)定劑2，非特異性吸附可導(dǎo)致高本底。如果洗滌不徹底，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性。26，第三節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(CLIA)，1，原理化學(xué)發(fā)光劑，抗原或抗體直接標(biāo)記，通過(guò)與試驗(yàn)標(biāo)本對(duì)應(yīng)的Ab或Ag，磁性顆粒性的Ag或Ab反應(yīng)和磁場(chǎng)分離結(jié)合狀態(tài)(沉淀部分)和自由狀態(tài)的化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物。2，技術(shù)類型1。分離方法通常采用磁粒子分離技術(shù)。2 .免疫學(xué)反應(yīng)模式酶發(fā)光免疫測(cè)定技術(shù)3。區(qū)別在于其標(biāo)記是吖啶酯，而不是酶。技術(shù)要點(diǎn)，2 .分離技術(shù)在磁場(chǎng)中洗兩三次后，快速?zèng)_洗沒(méi)有組合的不

8、必要的Ag和標(biāo)簽Ab。3 .充分洗滌化學(xué)發(fā)光反應(yīng)后，加入H2O2和pH糾正液NaOH，AE在沒(méi)有催化劑的情況下分解發(fā)光，進(jìn)行儀器檢測(cè)和分析。28，1.AE背景噪音低，化學(xué)反應(yīng)簡(jiǎn)單，沒(méi)有快速催告劑。方法評(píng)估，2 .AE和大分子的結(jié)合不會(huì)減少生成的光量，因此提高靈敏度和靈敏度可能達(dá)到10-15g/ml。3 .AE段宜恩試劑有效期，最多1年。，4 .固相分離劑是一種非常精細(xì)的磁粉，除了增加包面積，加快反應(yīng)外，清洗和分離更容易，更快。29，第4節(jié)電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(ECLI)，1，原理是在電極表面電化學(xué)發(fā)生的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，實(shí)際上包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)茄子過(guò)程。ECL是傳記啟動(dòng)發(fā)光反應(yīng)，CL通

9、過(guò)化合物混合啟動(dòng)發(fā)光反應(yīng)。Ab用化學(xué)發(fā)光劑三連吡啶Ru(bpy)32表示，通過(guò)Ag-Ab反應(yīng)和磁主分離技術(shù)，根據(jù)三連吡啶釕在電極上發(fā)射的光的強(qiáng)度測(cè)量的Ag或Ab進(jìn)行定量/定性處理。2，技術(shù)類型1。分離方法通常采用磁粒子分離技術(shù)。2 .免疫學(xué)反應(yīng)模式同工酶發(fā)光免疫測(cè)定技術(shù)3。該標(biāo)記物不是酶，而是三吡啶釕，30，1。三吡啶釕標(biāo)記抗體生物素標(biāo)記抗體測(cè)試標(biāo)本，技術(shù)要點(diǎn)，2。添加鏈霉親和素(SA)，3 .蠕動(dòng)泵將RU (BPY) 32-A B-AG-A B-B-A-A-磁珠復(fù)合物吸入流動(dòng)測(cè)量室，磁珠被工作電極下的磁鐵吸附在電極表面。同時(shí)，免費(fèi)Ab也從測(cè)量室中脫落。4 .驅(qū)動(dòng)泵插入TPA，電極電壓，開始ECL反應(yīng)過(guò)程。牙齒過(guò)程在電極表面反復(fù)進(jìn)行，產(chǎn)生大量光子，光電倍增管檢測(cè)光的強(qiáng)度，與Ru(bpy)32的濃度呈線性關(guān)系，可以測(cè)量要測(cè)試的Ag的含量。31，原理圖，返回，32，方法評(píng)估，標(biāo)記回收，所以發(fā)光時(shí)間，強(qiáng)度，很容易測(cè)量。靈敏