1、病理常規(guī)組織處理，將組織標(biāo)本分離后，經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟和包埋等一系列后續(xù)處理。 組織處理的所有步驟都非常重要。 為了標(biāo)本的采集、部位的選擇等，組織處理的過(guò)程、染色的效果以及最終的診斷是否適合組織結(jié)構(gòu)的保存、有效成分的保留，取決于組織處理所用的試劑和各步驟處理的時(shí)間等因素。 為病理診斷提供優(yōu)秀的切片，需要技術(shù)人員在日常工作中積累熟練的技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)。 1、固定、病理標(biāo)本的制作和組織處理都要先固定。 如果固定不良，電影制作的其他過(guò)程非常困難，必須經(jīng)常固定沒有HE染色，診斷困難，甚至導(dǎo)致誤診，足以證明固定的重要性，概念：組織離開后，采用使其細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)盡可能接近生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過(guò)程。 (

2、用各種方法盡可能保持病理標(biāo)本的離體前狀態(tài)的過(guò)程)目的：防止組織細(xì)胞的自溶和腐敗，使細(xì)胞內(nèi)成分(蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物或酶類)接近原來(lái)的結(jié)構(gòu)和生活狀態(tài)。 方法：1 .物理方法：低溫冷凍，干冰(固體碳酸酐)凍結(jié)真空脫水，殘奧翅滲透法。 2 .化學(xué)方法：用各種藥液作固定液，使組織細(xì)胞處于固定狀態(tài)。 這是國(guó)內(nèi)最常用的方法。 注意：1 .組織離體即時(shí)固定(大標(biāo)本切開固定)2.組織塊大小適當(dāng)(1.51. 50.2適當(dāng))3.合理選擇固定液(免疫組化可選擇殘奧甲醛和中性緩沖甲醛我的病理科大標(biāo)本一般選擇中性緩沖甲醛，它是通常的染色和免疫組織小標(biāo)本選擇AAF液)4.固定液的量為組織的5倍以上(最少也沒有組織)5

3、.固定時(shí)間適當(dāng)：大標(biāo)本(6-12H )小標(biāo)本(3-6H )，時(shí)間過(guò)短，影響組織固定的效果，對(duì)以后的一系列處理組織長(zhǎng)時(shí)間固定，福爾馬林產(chǎn)生酸，影響核染色另外，長(zhǎng)時(shí)間的固定多出現(xiàn)福爾馬林色素，特別是造血器官的標(biāo)本，需要注意。 固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)降低抗原的活性，影響分組。 微破碎組織在包埋操作時(shí)易識(shí)別操作，組織處理前可在1%伊紅液中浸泡510分鐘。 伊紅的粉紅色可以在組織處理時(shí)留下來(lái)，但在之后的切片染色中可以沖洗掉，以免影響正常的染色。 常用固定液的介紹與制備，1.10中性緩沖甲醛：甲醛100ml，磷酸氫二鈉(Na2HPO4)13g磷酸二氫鈉(NaH2PO4H2O)4.0g，蒸餾水900ml的特點(diǎn)：滲透

4、力強(qiáng)、收縮小、抗原保存特點(diǎn)：該液體除了有固定作用外，還兼有脫水作用，固定后可直接裝入95乙醇進(jìn)行脫水。 還有很多其他的固定液，請(qǐng)不要介紹。 有些液體混合使用比單獨(dú)使用效果好，作用互補(bǔ)，真的達(dá)到了固定的目的。 2 .水洗，1 .固定后必須水洗(15-30min )，最適合流水清洗，特別是固定時(shí)間長(zhǎng)的組織。 2 .水洗不徹底結(jié)果：甲醛色素沉積、脫片、染色不鮮、免疫組化標(biāo)記中抗原抗體結(jié)合力減弱等現(xiàn)象；3 .脫水、概念：用脫水劑置換組織內(nèi)水分，促進(jìn)有機(jī)溶劑的滲透。 濃度和時(shí)間：脫水用的乙醇濃度一般從7075開始，之后從8095100，即低濃度向高濃度階段性推進(jìn)。 脫水時(shí)間與組織的大小、厚度有很大關(guān)系，

5、組織厚度大、脫水時(shí)間長(zhǎng)的小薄組織脫水時(shí)間可相對(duì)較短。組織脫水時(shí)間在低濃度乙醇下可較長(zhǎng)(例如7080 )，在高濃度乙醇下可較短。 由于高濃度的乙醇滲透力不強(qiáng)，延長(zhǎng)脫水時(shí)間不起作用，相反高濃度乙醇使組織收縮、易脆，因此難以進(jìn)行后續(xù)切片和觀察。 脫水劑的種類有很多。 例如，乙醇、丙酮、甲醇、異丙醇等。 丙酮是透明無(wú)色可燃性液體，容易與水、乙醇和大多數(shù)有機(jī)溶液混合。 脫水快，但滲透差，脫水時(shí)間長(zhǎng)，容易引起組織扭曲和變形。 丙酮用于脫水可以去除組織中的脂肪。 另外，硬的組織也可以浸漬在甘油乙醇混合液中進(jìn)行處理。 組織脫水不足的糾正、組織脫水不足常影響后續(xù)的透明和蠟浸泡，含蠟組織塊變軟，形成蠟塊后組織塊和

6、周邊蠟容易脫離，該蠟塊不易切取組織薄片，或即使強(qiáng)行切取組織塊也會(huì)破壞組織，影響病理診斷。 在圖1組織脫水不足制造的蠟塊、切片鏡下觀察，組織被壓碎、核染色不明顯的圖2修復(fù)處理后，將組織平坦、無(wú)破碎、核染色清晰的蠟塊放入60度的殘奧翅溶液中，使組織周圍的殘奧翅成分完全溶解(1) 在使組織塊內(nèi)的殘奧翅成分保持熔融的同時(shí)，在75度水浴槽內(nèi)加入丙酮30 ml的a、b2組燒杯(容積50 ml )，時(shí)間差約為5 min，預(yù)熱丙酮。 (2)甲丙酮完全沸騰后，加入組織塊，此時(shí)丙酮內(nèi)逐漸出現(xiàn)白色糊狀殘奧片沉淀，組織塊上出現(xiàn)氣泡。 (3)b丙酮完全沸騰時(shí)，迅速將組織塊從a丙酮中取代，在其中處理10分鐘，此時(shí)丙酮內(nèi)的

7、殘奧翅沉淀明顯減少，組織塊少量或無(wú)氣泡出現(xiàn)。 (4)取出組織塊，立即投入75度的殘奧翅片溶液中，約15分鐘，直至組織塊不再出現(xiàn)氣泡。 (5)通常包埋、切片、HE染色。 原理：本法以沸騰丙酮為介質(zhì)。 其原理是： (1)丙酮和殘奧散熱片蠟不相溶，該特性相互單向置換，即，將保證在丙酮為溶液時(shí)釋放出殘奧散熱片蠟的殘奧散熱片蠟作為溶液時(shí)，丙酮被放置。 (2)使75度為脫蠟和蠟浸漬的適當(dāng)溫度，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于丙酮沸點(diǎn)(56-57 )和殘奧翅片熔點(diǎn)(58-60 )，能夠有效且迅速地單向置換丙酮和殘奧翅片蠟。 (3)丙酮作為快速脫水劑，現(xiàn)主要用于快速殘奧翅片切片的制備，適宜溫度也為75度。 四.透明、概念：所謂透明，

8、是指組織脫水后，脫水劑和殘奧石蠟?zāi)軌蚧旌系脑噭?，置換脫水劑，使殘奧石蠟均勻滲透，有些透明劑能夠使組織形成透明的狀態(tài)。 我們發(fā)現(xiàn)，常用的透明劑是二甲苯，但由于容易使組織收縮、變脆，透明時(shí)間不增長(zhǎng)二甲苯就能溶解脂肪，因此切片中脂肪細(xì)胞的細(xì)胞漿為空泡狀，是由二甲苯脫脂產(chǎn)生的。 五、浸蠟概念：浸蠟是指組織透明后，浸入熔化的殘奧翅蠟中，一般為24小時(shí)。 浸蠟時(shí)間過(guò)短，蠟未完全滲透組織，組織過(guò)于柔軟，難以切片浸蠟時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，組織又硬又脆，切片也困難)目的：使殘奧蠟均勻地浸漬組織，使組織硬度與殘奧蠟的硬度相似，切片蠟浸漬后的組織用包埋框包埋。 包埋用蠟的熔點(diǎn)與最后浸漬的殘奧翅蠟的熔點(diǎn)一致，有利于切片。 蠟浸漬

9、溫度要對(duì)應(yīng)于殘奧散熱片蠟的熔點(diǎn)，如果有條件(第一殘奧散熱片蠟可以使用48-50度的熔點(diǎn)的殘奧散熱片蠟)，第二、三殘奧散熱片蠟使用56-58度的熔點(diǎn)的殘奧散熱片蠟，溫箱溫度不能超過(guò)62度請(qǐng)不要把二甲苯帶入蠟中。 低熔點(diǎn)殘奧翅蠟通常柔軟，高熔點(diǎn)殘奧翅蠟通常堅(jiān)硬，耐切片。 六、包埋、包埋機(jī)一般由自動(dòng)流釬器、冷臺(tái)及儲(chǔ)藏底座和組織包埋箱熱槽三部分組成。 殘奧散熱蠟通過(guò)噴嘴自動(dòng)流入適當(dāng)大小的包埋底座。 組織在包埋底座上排列方向和位置，按壓塑料包埋箱，形成具有組織的平行蠟塊。 注意：組織包埋時(shí)，組織方向是證明或顯示組織形態(tài)的重要問(wèn)題。 組織的方向性或定位不應(yīng)影響組織切片。錯(cuò)誤的方向性可能會(huì)導(dǎo)致必要的組織成分

10、的破壞和錯(cuò)誤的診斷。 大部分組織被平埋，組織周邊的包埋媒介起著固定保護(hù)組織的作用。 以下組織需要特殊的定向包埋：動(dòng)脈、靜脈、脈管等腔性結(jié)構(gòu)需要橫切的皮膚、腸管、膽囊、膀胱和其他上皮類活檢組織，從下方開始切片，保證組織的上皮面最后被切斷，可減少對(duì)上皮的壓迫，損傷切片的肌肉活檢：橫向和長(zhǎng)縱向切片一晚標(biāo)本處理的實(shí)施，對(duì)于許多科室，一晚處理是比較常用的處理模型。 組織固定浸泡在10%甲醛或AF液中，用梯度乙醇、二甲苯或二甲苯的替代物、殘奧石蠟浸透。 使用自動(dòng)組織處理機(jī)編寫程序時(shí)，需要考慮影響處理程序的許多因素，即實(shí)驗(yàn)室所需的結(jié)束時(shí)間。使用的液體是否需要加熱？ 加壓、真空功能是否有效組織標(biāo)本數(shù)的多少和體

11、積的大小等， 1 .固定4-6H 2.水洗20-30min 3.75%乙醇2h 4.85%乙醇2h 5.95%乙醇6.100%乙醇7.100%乙醇1.5h 8.二甲苯30min 9組織干燥處理：組織處理的機(jī)械或設(shè)備發(fā)生故障時(shí)，組織在浸蠟前進(jìn)行干燥(干燥)， 組織可能喪失正常形態(tài)，以下糾正處理方法有助于組織得到滿足診斷需要的切片。 組織干燥的修復(fù)方法： 70%乙醇70ml，甘油30ml，二硫代水楊酸鈉1g，組織在該溶液中停留數(shù)小時(shí)或一夜。 組織處理從脫水液恢復(fù)到結(jié)束。 組織組織切片可能很難，但可以使用涂層載玻片防止組織脫片。常見問(wèn)題和處理方法的討論：1 .跳刀有波紋或洗滌板樣的變化：跳刀出現(xiàn)波紋

12、或洗滌板樣變化的現(xiàn)象一般是由于組織過(guò)硬或切片刀不銳利造成的切片機(jī)零件松動(dòng)。 因此，切片之前必須緊固切片機(jī)的螺桿，如果沒有緊固或者沒有包埋的蠟塊過(guò)硬，就會(huì)出現(xiàn)彈刃，波紋和洗滌板樣式發(fā)生變化的現(xiàn)象。 同時(shí)，還可以調(diào)整刀片和蠟塊的適當(dāng)角度，防止刀片跳動(dòng)現(xiàn)象。 2 .切片不完整或有傷痕。 修理座椅時(shí)深度不足，組織全部不露出切斷面。 切片的傷痕是由于切片刀有缺口，或者包埋的組織有異物(線結(jié))、鈣化組織、骨組織及包埋殘奧翅片有砂粒造成的。 因此，在片修理時(shí)保證組織塊全部露出切斷面切片刀鋒利無(wú)切口的同時(shí)，組織采訪時(shí)去除手術(shù)異物和鈣化組織的骨組織必須完全脫鈣。 由此，可以保證切片的完整且平坦的美觀，3 .有組

13、織龜裂或異物：組織龜裂是由于燒切片時(shí)的溫度過(guò)高、切片快速受熱而使切片過(guò)長(zhǎng)所致的展片用的水中有異物而污染切片。 因此，攤池的水需要更換，防止異物污染，另外，切片在空氣中稍微干燥后的燒片，烘箱溫度優(yōu)選為65度，燒片時(shí)間優(yōu)選為1530分鐘。 對(duì)于腦組織切片，切片完全干燥后再烤。(我科蠟片數(shù)多，時(shí)間緊，有不規(guī)范的地方)，4 .脫蠟不干凈，可見片狀或點(diǎn)狀白斑，殘奧翅片切片不經(jīng)脫蠟不能染色，脫蠟的好壞由切片的溫度和二甲苯的溫度決定，然后洗滌梯度的泡沫否則，由于切片中殘奧片和二甲苯的殘留，染色劑不能與細(xì)胞有效接觸，不著色，使得切片呈片狀或點(diǎn)狀變白，5 .切片太厚，細(xì)胞核模糊，切片刀不夠銳利或組織脫水不理想，組織塊凍結(jié)不足， 切片精度不高會(huì)導(dǎo)致組織切片過(guò)厚，切片染色細(xì)胞重疊，細(xì)胞核模糊