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文檔簡介

1、SDS-PAGE,SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,一.實驗目的,了解電泳實驗原理。 掌握垂直板電泳的操作方法。,二.實驗原理,聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）是由單體丙烯酰胺(Acr)和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺(Bis)在催化劑四甲基乙二胺(TEMED)和引發(fā)劑過硫酸銨(AP) 的作用下聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。以此凝膠作為支持介質(zhì)的電泳稱為PAGE。 PAGE具有電泳和分子篩的雙重作用。,PAGE分為連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)兩大類。不連續(xù)系統(tǒng)具有電荷效應、分子篩效應和濃縮效應 蛋白質(zhì)分子結(jié)合SDS陰離子后，所帶負電荷的量遠遠超過了它原有的凈電荷，從而消除了不同種蛋白質(zhì)之間所帶凈電荷的差異。蛋白質(zhì)的電泳

2、遷移率主要決定于亞基的相對分子質(zhì)量。而與其所帶電荷的性質(zhì)無關(guān)。,三.操作步驟,制膠,上樣：取10ul處理后的樣品加入樣品孔中，并加入5ul蛋白標準品作對照。 電泳：在電泳槽中加入1電泳緩沖液，連接電源，負極在上，正極在下，電泳時，濃縮膠電壓100V，分離膠電壓150V，電泳至溴酚蘭(指示停止電泳)行至電泳槽下端停止。 染色：將膠取出，考馬斯亮蘭染色液染色。 脫色,Staking gel,Separating gel,四.實驗結(jié)果,五.注意事項,為達到較好的凝膠聚合效果，緩沖液的pH值要準確，10%AP在一周內(nèi)使用。室溫較低時，TEMED或AP的量可加倍。 未聚合的丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，可通過皮膚和呼吸道吸收，應注意防護。 用瓊脂封底及灌膠時不能有氣泡

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