1、自身抗體的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及臨床意義,北京友誼醫(yī)院風(fēng)濕科 宋淑菊,1,主要內(nèi)容,自身抗體的概念 自身抗體的分類(lèi) 自身抗體的命名 自身抗體的檢測(cè)方法 常見(jiàn)的自身抗體,2,自身抗體的概念,各種原因造成的機(jī)體B細(xì)胞產(chǎn)生的針對(duì)自身組織成分的抗體，稱(chēng)為自身抗體（autoantibodies）。 自身抗體可以是生理性的，如針對(duì)衰老或死亡的自體細(xì)胞，機(jī)體產(chǎn)生少量的自身抗體，以便被脾、肝及單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞吞噬，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的生理穩(wěn)定； 自身抗體也可以是病理性的，引起自身免疫病。,3,自身抗體的分類(lèi),按照自身抗原在體內(nèi)分布的不同可分為： 器官/組織特異性自身抗體 非器官/組織特異性自身抗體 按照檢測(cè)自身抗

2、體所用的基質(zhì)不同可分為： 細(xì)胞抗體（以游離的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)基質(zhì)） 細(xì)胞非特異性自身抗體，如抗核抗體 細(xì)胞特異性自身抗體，如ANCA、抗血小板抗體、抗紅細(xì)胞抗體 組織抗體（以動(dòng)物組織切片為實(shí)驗(yàn)基質(zhì)）,4,自身抗體的命名,以首先被檢測(cè)到該抗體的患者名字的縮寫(xiě)命名：如抗Sm、抗Ro、抗La抗體 以相關(guān)疾病的名字的縮寫(xiě)命名：如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗體 以抗原的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類(lèi)命名：如抗DNA、抗RNP抗體 以抗原的部位進(jìn)行命名：如抗板層素抗體、抗核膜抗體。,5,自身抗體的檢測(cè)方法,對(duì)流免疫電泳、免疫雙擴(kuò)散 免疫熒光檢測(cè)法 免疫印記法 酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法（ELISA） 放射性核素法 酶免疫

3、斑點(diǎn)技術(shù) 免疫沉淀法,6,間接免疫熒光方法,金標(biāo)法,免疫雙擴(kuò)散法,ANA (anti-nuclear antibodies),7,免疫印記法,ENA (extractable nuclear antigen),8,間接免疫熒光法,自身抗體,9,病人血清(一抗),玻片,二抗,熒光抗體,熒光顯微鏡下閱片,ANAHep-2細(xì)胞 dsDAN抗體短膜蟲(chóng) SMA大鼠胃組織 AMA大鼠腎組織,間接免疫熒光法,底物,10,病人血清,金標(biāo)記的抗體,dsDNA抗原,陰性,陽(yáng)性,金標(biāo)法,11,抗原,1:4,1:16,1:32,1:64,病人血清,標(biāo)準(zhǔn)抗體,免疫雙擴(kuò)散,瓊脂板,12,不同分子量的抗原,病人血清,酶標(biāo)抗

4、體,顯色劑,判斷結(jié)果,免疫印記法,13,14,間接免疫熒光法,細(xì)胞核陽(yáng)性 核仁陽(yáng)性 細(xì)胞漿陽(yáng)性 分裂期細(xì)胞陽(yáng)性,15,細(xì)胞核陽(yáng)性,細(xì)胞核均質(zhì)型（Homogeneous）：抗dsDNA、組蛋白抗體、核小體抗體 細(xì)胞核周邊型（Membranous）：板層素抗體 細(xì)胞核顆粒型（Speckled）： 粗顆粒：抗Sm、RNP抗體 細(xì)顆粒：抗SSA、SSB抗體,16,抗dsDNA抗體,熒光模式： 綠蠅短膜蟲(chóng)：動(dòng)基體均質(zhì)的或邊緣亮度增強(qiáng)的熒光。 Hep-2細(xì)胞：細(xì)胞核的均質(zhì)型熒光。,17,抗dsDNA抗體,自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上。 臨床意義：對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）特異性高?？贵w滴度與疾病

5、活動(dòng)性存在相關(guān)性，因此抗體滴度的檢測(cè)可為監(jiān)控治療提供有用的依據(jù)。,18,抗RNP/Sm抗體,熒光模式： Hep-2片：細(xì)胞核粗顆粒，核仁陰性。 肝組織切片：同上。 熒光法不能區(qū)分抗RNP和抗體Sm。,19,抗RNP/Sm抗體,自身抗原：抗原RNP和Sm屬于一組小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多種蛋白質(zhì)組成，RNA中尿苷（U-RNA）含量較高。 臨床意義：高滴度的抗RNP抗體為 混合結(jié)締組織病（MCTD）的特征，發(fā)生率為95100%。也可出現(xiàn)于SLE，但總是與抗Sm抗體同時(shí)出現(xiàn)。抗Sm抗體對(duì)SLE具有高度特異性，發(fā)生率為2040%。,20,抗SSASSB抗體,熒光模式 Hep-2

6、片：細(xì)胞核呈細(xì)顆粒熒光，核仁不發(fā)光。 肝組織片：細(xì)顆粒熒光。,21,抗SSASSB抗體,自身抗原：SSA抗原是一個(gè)小核糖核蛋白，由一個(gè)RNA分子和兩種不同的蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)的分子量為52KD和60KD。抗體直接針對(duì)蛋白質(zhì)的抗原決定簇。SSB抗原是分子量為48kD的磷酸化蛋白。 臨床意義；最常見(jiàn)于干燥綜合征（SS）,也見(jiàn)于SLE、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC），偶見(jiàn)于慢活肝?？筍SA抗體在新生兒紅斑狼瘡的發(fā)生率幾乎為100%。,22,核仁陽(yáng)性(Nucleolar),核仁熒光增強(qiáng)，核漿均質(zhì)型-Scl-70抗體。 核仁均質(zhì)型-PM-Scl及其他抗原抗體。 核仁細(xì)顆粒型-原纖維蛋白抗體。 核仁粗顆粒型

7、-RNA多聚酶-1抗體。,23,抗Scl-70抗體,熒光模式： Hep-2片：細(xì)胞核幾乎均質(zhì)的熒光，核仁熒光加強(qiáng)而且也為均質(zhì)型，胞漿無(wú)熒光。 肝組織片；細(xì)胞核顆?；蚓|(zhì)型熒光，常見(jiàn)到細(xì)胞核熒光。,24,抗Scl-70抗體,自身抗原：為DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶1，分子量為100KD。在DNA雙鏈的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中起作用。 臨床意義：2570%的系統(tǒng)性硬化癥（PSS）彌漫型患者陽(yáng)性，局限型硬皮病患者陰性。,25,細(xì)胞漿陽(yáng)性,胞漿均質(zhì)型-抗核糖體抗體 細(xì)顆粒-抗Jo-1抗體 胞漿顆粒型 粗顆粒-AMA抗體 滴狀點(diǎn)狀-溶酶體抗體 核周顆粒-高爾基體抗體 胞漿纖維型 細(xì)纖維-波形蛋白抗體 環(huán)狀纖維-原肌球蛋白抗體

8、針狀纖維-肌動(dòng)蛋白抗體,26,抗核糖體抗體,熒光模式： Hep-2：胞漿細(xì)顆粒到均質(zhì)狀、非常致密的熒光 。 肝組織片：島狀熒光。 臨床意義：SLE的特異性抗體，與精神癥狀有關(guān)。,27,抗Jo-1抗體,熒光模式： Hep-2：胞漿顆粒到細(xì)塊狀熒光。 肝組織片：胞漿中弱熒光。 自身抗原：組氨酰tRNA合成酶。 臨床意義：見(jiàn)于PM，發(fā)生率2535%。,28,抗線粒體抗體,熒光模式： Hep-2：胞漿內(nèi)粗的顆粒型熒光。 大鼠腎組織切片：腎小管明顯熒光，腎小球熒光較弱。,29,抗線粒體抗體,自身抗原：位于真核細(xì)胞線粒體膜的內(nèi)面。線粒體自身抗原為2-氧酸脫氫酶復(fù)合體的亞單位，為一組自身抗原，其中與PBC有

9、關(guān)的包括： （1）丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDC） （2）支鏈2-氧酸脫氫酶復(fù)合體（BCOADC） （3）a-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDC）,30,抗線粒體抗體,臨床意義：AMA-M2對(duì)PBC具有診斷意義。 AMA亞型與疾病的相關(guān)性： AMA-1：梅毒、干燥綜合征 AMA-2：PBC AMA-3：藥物性紅斑狼瘡 AMA-4：PBC與AIH重疊 AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性貧血 AMA-6：異煙肼引起的藥物性肝炎 AMA-7：AIH AMA-8：AIH、閉塞性血栓性血管炎 AMA -9：藥物性肝炎 AMA-10：SLE,31,分裂期細(xì)胞陽(yáng)性,染色體陽(yáng)性-染色體相關(guān)抗體，相關(guān)疾??？ 紡錘體纖

10、維陽(yáng)性-紡錘體纖維抗體，如燕麥細(xì)胞型支氣管肺癌 中間體陽(yáng)性-中間體抗體，相關(guān)疾??？ 細(xì)胞兩極陽(yáng)性-中心?？贵w，相關(guān)疾??？ 著絲點(diǎn)陽(yáng)性-抗著絲點(diǎn)抗體,32,抗著絲點(diǎn)抗體(ACA),熒光模式： Hep-2：細(xì)胞核細(xì)的、相同大小的顆粒熒光，分裂期顆粒熒光帶狀位于細(xì)胞中間。 肝組織片：分布于細(xì)胞核的1020個(gè)顆粒，熒光弱，易被忽略。,33,抗著絲點(diǎn)抗體,自身抗原：著絲粒中的三種不同的蛋白質(zhì)：著絲點(diǎn)蛋白A、B、C，主要抗原為著絲點(diǎn)蛋白B。 臨床意義：對(duì)進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥亞型（CREST綜合征）有診斷意義。陽(yáng)性率8095%。還可見(jiàn)于PBC、SS等。,34,器官/組織特異性自身抗體,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（A

11、NCA） 抗平滑肌抗體 抗角蛋白抗體 抗肝腎微粒體抗體 抗肝細(xì)胞膜抗原抗體 抗可溶性肝抗原抗體 抗肝特異性蛋白抗體,35,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（胞漿型）cANCA,熒光模式： 猴肝：肝血竇區(qū)粒細(xì)胞強(qiáng)熒光，而肝細(xì)胞陰性。甲醛固定的中性粒細(xì)胞：胞漿內(nèi)粗大到細(xì)的熒光顆粒。,36,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（胞漿型）,自身抗原：為絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。該靶抗原為可溶性蛋白，存在于正常中性粒細(xì)胞的嗜苯胺藍(lán)顆粒中。 臨床意義：cANCA可見(jiàn)于多種系統(tǒng)性血管炎。主要見(jiàn)于Wengeners肉芽腫，約占ANCA陽(yáng)性率的8095%。cANCA被認(rèn)為是活動(dòng)性Wengeners肉芽腫和微多動(dòng)脈炎的特異和敏感的標(biāo)

12、志性抗體。還見(jiàn)于Churg-Strauss綜合征。,37,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型）pANCA,熒光模式： 乙醇固定的中性粒細(xì)胞：細(xì)胞核周?chē)交膸顭晒?，?xì)胞核陰性。 猴肝：肝血竇區(qū)粒細(xì)胞強(qiáng)熒光，而肝細(xì)胞陰性。,38,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型）,自身抗原：主要抗原為髓過(guò)氧化物酶（MPO），其他抗原還有白細(xì)胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、溶菌酶及乳鐵蛋白等。 臨床意義：見(jiàn)于多種系統(tǒng)性血管炎?？梢?jiàn)于Wengeners肉芽腫、微多動(dòng)脈炎、Churg-Strauss綜合征、炎性腸病、自免肝、系統(tǒng)性風(fēng)濕?。≧A、SLE、SS、PM/DM）。,39,抗平滑肌抗體（SMA）,熒光模式： 大鼠胃組織，呈

13、現(xiàn)肌膜、黏膜肌層和肌膜腺體間收縮纖維的明顯細(xì)胞漿熒光 。 大鼠腎組織，腎小管細(xì)胞內(nèi)原纖維、腎小球膜細(xì)胞及血管肌層的熒光。,40,抗平滑肌抗體（SMA）,自身抗原：主要的靶抗原為肌動(dòng)蛋白，肌動(dòng)蛋白可以單體（G-肌動(dòng)蛋白）或聚合體（F-肌動(dòng)蛋白）形式存在于微絲中， F-肌動(dòng)蛋白自身抗原與自免肝關(guān)系密切，而G-肌動(dòng)蛋白自身抗原則與酒精性肝硬化有關(guān)。 臨床意義：見(jiàn)于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化。,41,抗角蛋白抗體（AKA）,熒光模式： 大鼠食管，僅限于上皮角質(zhì)層的較強(qiáng)的線性分層的均質(zhì)熒光。,42,抗角蛋白抗體（AKA）,自身抗原：絲聚蛋白（filaggrin）為AKA的靶抗原。 臨床意義：見(jiàn)

14、于RA，陽(yáng)性率3659%，特異性9599%。還是一個(gè)潛在的預(yù)后標(biāo)志，高抗體滴度可能預(yù)示著較嚴(yán)重的RA類(lèi)型。,43,抗肝腎微粒體抗體（LKM）,有三種熒光模式： LKM-1：肝細(xì)胞胞漿明顯熒光，呈細(xì)顆粒到均質(zhì)狀，腎臟近近端腎小管有熒光。 LKM-2：門(mén)靜脈周?chē)母谓M織熒光比其他部位強(qiáng)，腎臟近近端腎小管有熒光。 LKM-3：肝和腎均為陰性，靈長(zhǎng)類(lèi)睪丸間質(zhì)細(xì)胞熒光明顯。,44,抗肝腎微粒體抗體（LKM）,自身抗原： LKM-1：細(xì)胞色素P450 D6，為50KD蛋白。 LKM-2：細(xì)胞色素P450同工酶，藥物替尼酸的結(jié)合部位 LKM-3：UDP葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶，為55KD蛋白。 臨床意義：自免肝按血清學(xué)分型可分為三型 型：出現(xiàn)ANA、SMA、肝細(xì)胞膜抗體（LMA抗體）為特征。 型：以出現(xiàn)LKM抗體為特征。 型：以出現(xiàn)可溶性肝抗原抗體（SLA抗體）為特征。 LKM-1為型自免肝的血清學(xué)標(biāo)志。LKM-3抗體見(jiàn)于1015的慢性丁型肝炎患者。,45,抗肝細(xì)胞膜抗原抗體（LMA）,熒光模式： 肝細(xì)胞膜的線性熒光。,46,抗肝細(xì)胞膜抗原抗體（LMA）,自身抗原：肝細(xì)胞膜抗原，可能為26KD蛋白。 臨床意義：為非疾病特異性，最常發(fā)生于病毒性及原發(fā)性自身免疫性肝炎型，在非肝病患者，其發(fā)生率較低。,47,