1、自身抗體的檢測(cè) 及應(yīng)用,谷俊瑩,一、概述,自身免疫耐受。 自身免疫（autoimmunity） 自身抗體（autoantibody）或自身致敏淋巴細(xì)胞 自身免疫性疾病,二、自身抗體的檢測(cè)（一）抗核抗體 （antinuclear antibody，ANA）,泛指抗各種細(xì)胞核成分（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）的抗體。,1、ANA的類型,（1）抗核蛋白抗體 （2）抗DNA抗體 抗雙鏈DNA抗體（抗dsDNA） 抗單鏈DNA抗體（抗ssDNA）。 （3）抗ENA抗體 可提取性核抗原（extractable nuclear antigens，ENA）,2、ANA的檢測(cè)方法間接免疫熒光法,用小鼠肝切片或印

2、片作為細(xì)胞核基質(zhì)，還可用核質(zhì)豐富的培養(yǎng)細(xì)胞如Hep-2，作為抗原。 用熒光顯微鏡觀察ANA熒光著染強(qiáng)度和免疫熒光圖形。 稀釋待檢血清可檢測(cè)ANA效價(jià)。,3.常見(jiàn)的ANA圖形及臨床意義,均質(zhì)型（homogeneous，H）,斑點(diǎn)型（speckled，S）,核膜型（membranous，M）,核仁型（nucheolar，N）,4.抗dsDNA的檢測(cè),常用間接免疫熒光法檢測(cè)，常用的抗原基質(zhì)是馬疫錐蟲(chóng)或綠蠅短膜蟲(chóng)。,（二）抗ENA抗體譜,不同的自身免疫病可產(chǎn)生不同的抗ENA抗體。通過(guò)檢測(cè)抗ENA抗體的類型及其組合，可綜合診斷自身免疫病的類型。,1、檢測(cè)方法,雙向免疫擴(kuò)散 對(duì)流免疫電泳 斑點(diǎn)酶免疫技術(shù)

3、免疫印跡技術(shù),免疫印跡技術(shù)（最常用）,先將ENA混合抗原作凝膠電泳，分離開(kāi)不同的區(qū)帶，然后把這些區(qū)帶轉(zhuǎn)印到硝酸纖維膜上，加入待檢血清，最后用酶標(biāo)抗體使相應(yīng)的抗原帶顯色,2、抗ENA抗體的主要類型及 臨床意義,（1）抗Sm抗體 抗Sm是SLE的特異性標(biāo)志之一,（2）抗核RNP抗體（抗nRNP抗體）又稱抗U1RNP抗體。 抗U1RNP抗體是診斷混合性結(jié)締組織?。?MCTD）的重要血清學(xué)依據(jù)，是MCTD的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。,（3）抗SSA/Ro和抗SSB/La 這兩種抗體是干燥綜合癥（SS）患者最常見(jiàn)的兩種自身抗體,（4）抗J0 -1抗體 最常見(jiàn)于多發(fā)性肌炎（PM）患者。,（5）抗Scl-70抗體 幾乎

4、僅出現(xiàn)在PSS（進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮?。┗颊唧w內(nèi)，是PSS的特征抗體,（三）類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）,RF是以變性IgG為靶抗原的抗體，它能與人或動(dòng)物的變性IgG結(jié)合，而不與正常IgG結(jié)合，RF主要出現(xiàn)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者。,RF的檢測(cè)最常用IgG致敏的膠乳顆粒凝集試驗(yàn)，或速度散射比濁法，但只能檢測(cè)IgM類的RF。IgG類，IgA類和IgE類RF需ELISA等方法檢測(cè)。,（四）其他自身抗體 1.抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體 （anineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）,以人中性粒細(xì)胞胞質(zhì)為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病有關(guān)。分胞質(zhì)型（

5、cANCA）和核周型（pANCA）?？捎肊LISA或間接免疫熒光法測(cè)定。,2.抗心磷脂抗體（anti-phospholipid antibody，APLA）,靶抗原是血漿中的磷脂結(jié)合蛋白。APLA包括一組自身抗體，如抗心磷脂抗體（ACLA），抗磷脂酸抗體（APAA）和抗磷脂酰絲氨酸抗體等。,3.抗平滑肌抗體（anti-smooth muscle antibody，ASMA）,是自身免疫性肝炎的血清學(xué)標(biāo)志性抗體。常用間接免疫熒光分析檢測(cè)。,4.抗角蛋白抗體（anti-keratin antibody，AKA）,主要見(jiàn)于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者，對(duì)于早期診斷RA有重要意義?？捎瞄g接免疫熒光法檢測(cè)。但敏感性較低。與RF不平行。,5.抗乙酰膽堿受體抗體,是重癥肌無(wú)力的標(biāo)志性自身抗體，對(duì)重癥肌無(wú)力的診斷有特異性。可用ELISA檢測(cè)。,6