1、病毒感染的實驗室診斷與防治原則,第18章,教學(xué)大綱,熟悉病毒的診斷，抗病毒治療，病毒感染的預(yù)防。,第一節(jié) 病毒感染的實驗室診斷,病毒感染的檢查,檢測內(nèi)容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶,電鏡直接觀察 光鏡檢查包涵體 分離培養(yǎng),一、標(biāo)本的采集與送檢,原則基本與細菌相似，但應(yīng)注意： 1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢 3.血清學(xué)診斷采雙份血清,二、病毒形態(tài)學(xué)鑒定,電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限 光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒）， 包涵體（如內(nèi)基小體） 對一般病毒檢測意義不大,三、病毒的分離與鑒定,（一）病毒的分離培養(yǎng) 細胞培

2、養(yǎng)（cell culture） 雞胚接種（egg inoculation） 動物接種（animal inoculation）,1.雞胚培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜 痘苗病毒、人類皰疹病毒 尿囊腔 接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分離 卵黃囊 嗜神經(jīng)病毒,1、雞胚培養(yǎng),優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低 缺點：操作程序復(fù)雜,2.動物接種 應(yīng)用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng) 動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型 缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物 體內(nèi)常帶有潛伏病毒,病毒的分離培養(yǎng) 3.細胞培養(yǎng) 單層細胞培養(yǎng)（monolayer cell cul

3、ture） 分類 懸浮細胞培養(yǎng)（suspended cell culture） 原代細胞（primary cell） 細胞種類 二倍體細胞（diploid cell） 傳代細胞系（continuous cell line）,病毒的細胞培養(yǎng),細胞培養(yǎng)瓶,單層細胞,1病毒增殖鑒定 (1)細胞的變化 細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒的鑒定,細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落,麻疹病毒感染細胞,呼吸道合胞病毒感染細胞,形成多核巨細胞或稱融合細胞,(1)細

4、胞病變 (cytopathy),形成包涵體(inclusion body),(1)細胞病變(cytopathy ),腮腺炎病毒感染細胞,(2)紅細胞吸附（hemadsorption）,病毒包膜表面血凝素(HA) 紅細胞表面HA受體,(3)干擾現(xiàn)象（interference）,風(fēng)疹病毒 細胞 病毒增殖，CPE(),?？刹《?細胞 病毒增殖，CPE(), 細胞,風(fēng)疹病毒？ ?？刹《?CPE(-)風(fēng)疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)風(fēng)疹病毒(-) ?？刹《?+),(4)細胞代謝改變 細胞代謝變慢 pH變化減慢,2.病毒數(shù)量與感染性測定,(1).空斑形成試驗 （plaque formation

5、 test） (2).50組織細胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50） (3). 感染復(fù)數(shù)測定（MOI）,感染性病毒量,四.病毒抗原的測定,用已知的抗體，檢測病毒的抗原 免疫熒光法 放射免疫測定法 ELISA,五.病毒核酸檢測,抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴增 核酸雜交 基因芯片 基因測序,六、血清學(xué)診斷,用已知抗原檢測患者血清中抗體水平及動態(tài)變化。 應(yīng)用： 采取標(biāo)本分離病毒為時已晚 目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒 為證實所分離的病毒的臨床意義 進行血清流行病學(xué)調(diào)查等,補體結(jié)合試驗 （complement fixation t

6、est）,用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補體抗體 特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快 應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。,病毒的快速診斷,光鏡-包涵體,電鏡,免疫熒光,ELISA,分子生物學(xué)技術(shù),雜交,Southern blot,PCR,Northern blot,病毒的血清學(xué)診斷,中和試驗,補體結(jié)合試驗,血凝抑制試驗,免疫擴散等,第二節(jié) 病毒感染的防治原則,微生物及其代謝產(chǎn)物 生物制品 動物免疫血清 （biological products） 免疫細胞 細胞因子 防治和診斷感染性疾病,滅活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重組載體疫苗（recombinant carrier vaccine） 亞單位疫苗（subunit vaccine） 化學(xué)提取或人工合成疫苗 重組疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主動免疫常用生物制品,二、人工被動免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙種球蛋白 細胞免疫制劑 IFN-、 細胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的殺傷細胞 LAK細胞,三、病毒感染的藥物治療,核苷類藥物 非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 蛋白酶抑制劑 2.干擾素和干擾素誘生劑 3.中草藥 4.基因治療劑,1.抗病毒化學(xué)制劑,