1、第 七 章 植 物 胚 胎 培 養(yǎng),制作人: 董雯 生物技術(shù)教研室,7.1 胚胎培養(yǎng)的內(nèi)容及意義,7.1.1 胚胎培養(yǎng)意義 離體胚胎培養(yǎng)可以克服種、屬間受精障礙，打破種子休眠，縮短育種周期，克服種子生活力低下和自然不育等，對(duì)于植物界物種的進(jìn)化具有極其重要的意義。,（一）植物受精不育的機(jī)理 （二）打破種子休眠 （三）縮短育種周期 （四）克服種子生活力低下提高萌發(fā)率 （五）克服種子的自然不育性 （六）種子生活力的測(cè)定,內(nèi)容,（一） 植物受精不育的機(jī)理,（1）自然界兩種隔離機(jī)制。植物界由于長期自然選擇的結(jié)果，產(chǎn)生兩種隔離機(jī)制： 拒絕異種受精，雜交不親和現(xiàn)象在種，屬以上的植物雜交中，常?？梢砸姷?，由于

2、雜交不親和性的存在，才能保持物種的遺傳穩(wěn)定性。 拒絕自花受精，由于自交不親和現(xiàn)象的存在，才能確保物種具有強(qiáng)生活力。,（2）植物受精不育障礙的表現(xiàn)形式, 花粉在柱頭上不萌發(fā)，或萌發(fā)后花粉管不能伸入花柱或生長緩慢，使配子喪失受精機(jī)會(huì)。這類不育障礙，可采用試管受精的方法克服。 花粉管生長正常，有配子融合但由于胚敗育而引起的受精不育。胚敗育的原因：可能是胚乳早期敗育或胚胎發(fā)育和珠心組織發(fā)育不同步。 有配子融合，但缺乏同源染色體，染色體配對(duì)上出現(xiàn)障礙。培養(yǎng)時(shí)可以兼用秋水仙素染色體加倍，可等到可育植株。,（二） 打破種子休眠,種子休眠的原因很多，但是能利用幼胚培養(yǎng)打破種子休眠的情況有如下兩種： （1）種胚

3、發(fā)育不全 （2）抑制物質(zhì)抑制種胚發(fā)芽,（三） 縮短育種周期,柑橘（蕓香科）為多胚植物，除正常有性胚外，還可以從珠心組織發(fā)生多個(gè)不定胚。常規(guī)雜交育種中，不定胚干擾了對(duì)有性胚的識(shí)別。再者，不定胚的生長勢(shì)強(qiáng)，具有很強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)力，因而影響柑橘雜交育種的結(jié)果。利用胚離體培養(yǎng)的方法，可以使合子胚正常發(fā)育成植株。,（四） 克服種子生活力低下提高萌發(fā)率,雜交育種中以某些種的早熟種為母本而獲得的雜種，種子生活力低下，甚至經(jīng)過冷藏處理也不能萌發(fā)。 例：“京早3號(hào)”早熟桃（雜交種）熟性比一般早熟桃提前1520d。在25正常冷處理，60d后播種，出苗極不整齊。在25預(yù)冷后取胚接種培養(yǎng)，57d后萌發(fā)，2030d長成46c

4、m高的苗（覃蘭英，1974）。,（五） 克服種子的自然不育性,長期營養(yǎng)繁殖的植物，具有形成種子的能力，但它們的種子常是無生活力的。胚胎培養(yǎng)有可能促進(jìn)這類種子的萌發(fā)和形成幼苗。,（六） 種子生活力的測(cè)定,測(cè)定休眠后的種子生活力，應(yīng)用一般的種子萌發(fā)試驗(yàn)需很長時(shí)間，特別是木本植物需要層積處理打破休眠。 Tukey（1944）發(fā)現(xiàn)未經(jīng)層積處理的和經(jīng)層積處理的種胚，離體培養(yǎng)條件下萌發(fā)速率一致。因此，這一方法用于快速測(cè)定種子生活力已被廣泛采用。,總 結(jié)胚胎培養(yǎng)的意義,1、克服雜種胚的敗育，獲得稀有雜種 2、獲得單倍體和多倍體植株 3、打破種子休眠，促進(jìn)胚萌發(fā) 4、快速繁殖良種，縮短育種周期 5、克服種子生

5、活力低下和自然不育性，提高種子發(fā)芽率 6、種子活力的快速測(cè)定 7、種質(zhì)資源的搜集和保存 8、研究胚胎發(fā)育的過程和控制機(jī)制,7.1.2 胚胎培養(yǎng)的內(nèi)容和概念,胚胎培養(yǎng)是植物組織培養(yǎng)的一個(gè)主要領(lǐng)域。植物胚胎培養(yǎng)是指對(duì)植物的胚（種胚）及胚器官（如子房、胚珠）進(jìn)行人工離體無菌培養(yǎng)，使其發(fā)育成幼苗的技術(shù)。,主 要 內(nèi) 容,(一) 胚培養(yǎng) (二) 胚珠培養(yǎng) (三) 胚乳培養(yǎng) (四) 試管受精,(一) 胚培養(yǎng) 1）成熟胚培養(yǎng)：指子葉已形成的種胚。僅提供一定溫度、濕度就可以發(fā)芽長成植物體。如種子發(fā)芽。 2）幼胚培養(yǎng)：胚齡處于原胚期、球型期、心型期、早魚雷期的幼胚的培養(yǎng)。這幾個(gè)時(shí)期幼胚從生理至形態(tài)均未成熟，提供

6、一定溫度和濕度均不能發(fā)芽。在遠(yuǎn)緣雜交育種上幼胚培養(yǎng)有極大的利用價(jià)值。,(二) 胚珠培養(yǎng),1）未受精的胚珠的培養(yǎng)，目的是為試管受精提供雌配子體；也可誘發(fā)大孢子發(fā)育成單倍體植株。 2）受精后胚珠的培養(yǎng)，胚珠內(nèi)胚的發(fā)育處于早期階段，從兩個(gè)細(xì)胞的原胚開始至球形胚階段。如蘭科的成熟胚很小，采用胚珠培養(yǎng)較易成功，也同樣能達(dá)到使胚發(fā)育成幼苗的目的。,(三)胚乳培養(yǎng) 指處于細(xì)胞期胚乳的離體培養(yǎng)。 (四)試管受精 指培養(yǎng)未受精的胚珠并在試管內(nèi)撒播花粉，使其受精形成具有生活力的種子。,7. 2 胚 培 養(yǎng),植物在受精后，受精卵形成合子，隨即進(jìn)行第一次分裂，進(jìn)而形成分生組織和幼胚，再發(fā)育成成熟胚。在這個(gè)過程，胚靠消

7、耗胚乳的營養(yǎng)而發(fā)育，同時(shí)胚處在胚囊環(huán)境中，可吸收氨基酸、維生素等營養(yǎng)。離體胚培養(yǎng)包括胚胎發(fā)生過程中不同發(fā)育期的胚，一般可分為成熟胚和幼胚培養(yǎng)。,7.2.1 離體胚培養(yǎng)的方法,（一）成熟胚 將受精（傳粉）后的果實(shí)或種子（帶種皮）用藥劑進(jìn)行表面滅菌，然后在無菌操作臺(tái)上，剝出種胚接種于預(yù)先配制好的培養(yǎng)基上，使裸露的胚，在人工控制的條件下，發(fā)育成一棵完整的植物體。,種子植物離體的成熟胚，在只含大量元素的無機(jī)鹽和糖的培養(yǎng)基上就可萌發(fā)生長。對(duì)成熟胚的培養(yǎng)而言，大多是利用這種技術(shù)來研究胚發(fā)育過程的形態(tài)建成、生長物質(zhì)的作用、各部分的相互關(guān)系，以及營養(yǎng)要求等生理問題。,（二）幼胚 發(fā)育早期的幼胚，由于胚胎發(fā)育要

8、求更為完全的人工合成培養(yǎng)基，而且剝離技術(shù)要求很高，用成熟胚的培養(yǎng)方法很難成功，可以采用胚珠預(yù)培養(yǎng)的方法。 具體做法：將授粉后的子房剝出用藥劑進(jìn)行表面消毒，在無菌條件下切取胚珠進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)。培養(yǎng)一定時(shí)間后，再將胚從胚珠中剝出，接著培養(yǎng)裸露的胚，使其在人工控制的條件下，發(fā)育成一棵完整的植物體。,從離體胚到完整的植株，其發(fā)育途徑有3條： 1、正常胚胎發(fā)育途徑 2、脫分化形成愈傷組織 3、早熟萌發(fā)產(chǎn)生畸形苗,7.2.2 胚齡與胚性發(fā)育的關(guān)系,不同發(fā)育時(shí)期的幼胚，離體培養(yǎng)成功率差異很大。一般胚齡越大成功率越高，相反胚齡越小成功率越低。處于原胚期的幼胚即使采用胚珠預(yù)培養(yǎng)的方法，也僅有少數(shù)植物種能夠成功，如煙

9、草、矮牽牛、朱頂紅、棉花。離體培養(yǎng)中幼胚培養(yǎng)的成功率主要取決于培養(yǎng)基的組成。,胚齡 胚長度（m） 營養(yǎng)需要（培養(yǎng)基營養(yǎng)） 早球形胚 2060 小于40m長的胚尚不清楚 后球形胚 6180 大量、微量、VB1、VB6、煙酸、糖2、IAAO.1mg/L十KTO001 mgL 心形胚 81450 大量、微量、VB1、VB6、煙酸、糖2 魚雷胚 451700 Ca（NO3）2480、KNO363、KCl42、MgSo463 KH2Po442、VB1、VB6、煙酸、糖2 成熟胚（手杖胚）最大極限（700m） Ca（NO3）2480、KNO363、KCl42、MgSo463、糖 2,例：Raghavan(

10、1966)對(duì)不同發(fā)育時(shí)期的薺菜胚進(jìn)行離體培養(yǎng)，了解薺菜胚發(fā)育的營養(yǎng)需要（表7l）。,結(jié)果表明：,（1）培養(yǎng)已分化的成熟胚，只需提供簡(jiǎn)單的營養(yǎng)元素。即在含有大量元素?zé)o機(jī)鹽和糖的培養(yǎng)基上，成熟胚就能萌發(fā)成一棵正常植物體。 （2）培養(yǎng)未分化的幼胚，要求完全異養(yǎng)的條件。對(duì)培養(yǎng)基要求高。除要求提供大量和微量無機(jī)鹽混合物外，還需提供有機(jī)物（維生素類）和植物激素。 （3）早球胚期（204m）的幼胚更難培養(yǎng)。因?yàn)樗鼈兊臓I養(yǎng)需要尚不清楚。,適宜胚胎培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基和附加物,基本培養(yǎng)基： Tukey（1934） Rangaswamy（1961） RandilphCox（1943） Norstog（1963） Ri

11、jven（1952） White（1963） NitsCh（1953） Rappaport（1954）,附加物： 維生素類：除常用的VB1、VB6、煙酸外，還有生物素、泛酸鈣、VC 氨基酸類：除甘氨酸外，還有谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酸胺、天冬酰胺 核酸及其水解物：腺嘌呤（ADE）、胞嘧啶、尿嘧啶、鳥嘧啶、水解酪蛋 白，酵母提取物、椰乳、麥芽提取物等 植物激素：除生長素、細(xì)胞分裂素外，還有赤霉素,7.2.3 離體胚培養(yǎng)的技術(shù)關(guān)鍵,有關(guān)受精后的幼胚培養(yǎng)，除考慮胚齡之外，還應(yīng)重視在離體條件下幼胚分化和發(fā)育的環(huán)境條件、滲透壓和酸堿度條件等。,（一） 培養(yǎng)基滲透壓對(duì)胚性發(fā)育的作用 培養(yǎng)基滲透壓，對(duì)幼胚發(fā)育

12、的重要性，與其他器官培養(yǎng)一樣。因?yàn)橛着咴谧匀粭l件下賴以生存的是無定形的液體胚乳，具有較高的滲透壓，人工培養(yǎng)基中要?jiǎng)?chuàng)造高滲透壓的條件，滲透壓的調(diào)節(jié)主要依賴于糖，糖在胚培養(yǎng)中具有三個(gè)方面作用：調(diào)節(jié)滲透壓、作為碳源和能源和防止幼胚的早熟萌發(fā)。,（1）幼胚早熟萌發(fā)的概念 在含有無機(jī)鹽、有機(jī)物和蔗糖的培養(yǎng)基上，離體培養(yǎng)的幼胚越過正常胚胎發(fā)育階段，在未達(dá)到生理和形態(tài)成熟的情況下，萌發(fā)長成幼苗，稱早熟萌發(fā)。早熟萌發(fā)成的幼苗往往畸形、細(xì)弱，甚至不能存活。所以幼胚培養(yǎng)中，防止早熟萌發(fā)是非常重要的。,（2）防止幼胚早熟萌發(fā)的方法 提高培養(yǎng)基滲透壓。胚齡越小要求的滲透壓（糖濃度）越高，高糖濃度控制幼胚早熟萌發(fā)的效果

13、早已被證實(shí)。下述實(shí)例闡明不同胚齡對(duì)糖濃度的要求。 提高無機(jī)鹽濃度。提高無機(jī)鹽濃度也是為了提高培養(yǎng)基滲透壓?？杉尤脒m量的NaCl以提高滲透壓，濃度一般為0204，超過08對(duì)胚有毒害作用。 加人甘露醇提高滲透壓。甘露醇的濃度為1l55，以部分地代替蔗糖，使幼胚在等滲條件下繼續(xù)胚性發(fā)育。,（二） 培養(yǎng)基酸堿度對(duì)胚性發(fā)育的影響,培養(yǎng)基酸堿度對(duì)胚性發(fā)育也是非常重要的。通常胚培養(yǎng)所用pH值的范圍為5.2-6.3。因植物種類不同而有所差異。 如： 薺菜： 5.47.5 桃：5.8 曼陀羅：5.0一8.1 水稻：5.0 番茄： 6.50 大麥：4.9,(三) 環(huán)境條件對(duì)胚性發(fā)育的影響,1）光照條件： 由于胚在

14、胚珠內(nèi)發(fā)育是不見光的。一般認(rèn)為在黑暗或弱光下培養(yǎng)幼胚比較適宜。光照對(duì)胚胎發(fā)育有輕微抑制作用，離體培養(yǎng)條件下，幼胚正常胚性發(fā)育對(duì)光的要求，還應(yīng)根據(jù)植物種類來決定。 光照可以促進(jìn)某些植物的胚轉(zhuǎn)綠，利于胚芽生長，而黑暗利于胚根生長。因此以光暗交替培養(yǎng)較為有利。,棉花：胚先在黑暗中培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)人光照下培養(yǎng)，子葉的葉綠素生成很慢；而轉(zhuǎn)人弱光下培養(yǎng)的幼胚，子葉很容易產(chǎn)生葉綠素。 芥菜：胚培養(yǎng)每天以 12 h光照比全暗條件好。,2）溫度條件： 因植物種類而異，幼胚培養(yǎng)與其他器官培養(yǎng)無多大區(qū)別。對(duì)于大多數(shù)植物的胚來說，在2530為宜，但是，早熟果樹如桃的種胚，必須經(jīng)過一定的低溫春化階段才能正常萌發(fā)生長，而馬鈴

15、薯胚以20為好。,7.3 胚乳培養(yǎng),7.3.1 胚乳離體培養(yǎng)的意義 被子植物的胚乳是雙受精的產(chǎn)物，是由精細(xì)胞和二個(gè)極核融合而成，故胚乳細(xì)胞為三套染色體。但是由于胚囊類型不同，參加融合的極核數(shù)目不同，胚乳的倍性亦不同。如待宵草型膠囊只有一個(gè)極核與精細(xì)胞融合，胚乳核為2n；貝母型胚囊兩個(gè)極核，其中一個(gè)是n，另一個(gè)是3n，與精細(xì)胞融合后胚乳核為5n；椒草型胚囊中有8個(gè)極核，與精細(xì)胞融合后胚乳核為9n。,胚 囊,至今，尚未見到胚乳細(xì)胞在自然狀態(tài)下器官發(fā)生的報(bào)道。最早報(bào)道由玉米胚乳離體培養(yǎng)得到可連續(xù)生長的愈傷組織（Lampe等，1933）。后來在巴婆(番荔枝科)、黃瓜（葫蘆科）、黑麥草（禾本科）、蓖麻（

16、大戟科）、桑寄生科、檀香科等植物相繼報(bào)道由胚乳培養(yǎng)得到愈傷組織。最先報(bào)道由胚乳組織培養(yǎng)而器官發(fā)生的是柏形外果（檀香科）的芽分化（ Johri等，1965）；通過離體胚乳培養(yǎng)第一個(gè)得到三倍體的植物是羅氏核實(shí)木（大戟科）（Johri，1978）（表72，表73）。,當(dāng)前胚乳離體培養(yǎng)的研究進(jìn)展： 1)僅能形成愈傷組織的有：巴婆、黑麥草、黃瓜、檀香、小麥、沙針、美洲懈寄生、澳洲根寄生。 2）達(dá)到器官分化水平的有：玉米、蓖麻、巴豆、麻瘋樹、變?nèi)~木、黑種草、葡萄荷葉芹、桃、柏形外果、印度五蕊寄生、白花寄生、酸細(xì)檀、怒江鈍果寄生、楔葉鈍果寄生。 3）能形成完整植株的有：羅氏核實(shí)木、大麥、水稻、蘋果、抽、橙、

17、馬鈴薯、桃、荷葉芹。,目前為止，約有30種被子植物的胚乳培養(yǎng)，達(dá)到不同程度的細(xì)胞分裂和器官分化。說明胚乳組織也具有發(fā)育成植株的潛在能力。在應(yīng)用上胚乳培養(yǎng)為植物界創(chuàng)造新種提供了一條可行途徑。,7.3.2 胚乳培養(yǎng)的方法,取有胚乳的果實(shí)或種子，進(jìn)行表面滅菌，然后在無菌條件下剝離胚乳接種培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)有帶胚培養(yǎng)和不帶胚培養(yǎng)兩種方式。 帶胚培養(yǎng)胚乳組織容易成功，不帶胚培養(yǎng)胚乳組織成功率低。,取授粉48天后的幼果，常規(guī)消毒后，在無菌條件下切開果實(shí)，取出種子，小心分離出胚乳。接種在培養(yǎng)基上，可用MS、White等，加入2，4-D或NAA0.52.0mg/l，BA0.11.0 mg/l。在2527和黑暗條件或

18、散射光下培養(yǎng),約610天胚乳開始膨大,再培養(yǎng)形成愈傷組織。這時(shí)應(yīng)轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng),分化培養(yǎng)基可加入0.53.0 mg/l的BA及少量的NAA。待愈傷組織長出芽后,切下不定芽,插入生根培養(yǎng)基中，光下培養(yǎng)1015天,切口處可長出白色的不定根。,7.3.3 胚乳培養(yǎng)的技術(shù)關(guān)鍵,(一) 胚乳發(fā)育時(shí)期的影響 雙受精后的胚乳核，先分裂形成游離核。把這一時(shí)期的胚乳稱為“游離核期”。繼續(xù)發(fā)育后形成細(xì)胞壁，即形成許多小的細(xì)胞。這一時(shí)期稱為“胚乳細(xì)胞期”，見圖71。,游離胚乳核,受精卵,一受精后12小時(shí)的狀態(tài)二受精后36小時(shí)的狀態(tài),球狀胚體,以“游離核期”的胚乳為材料離體培養(yǎng)很難成功；而“細(xì)胞期”的胚乳為材料

19、離體培養(yǎng)成功率較高。這一特點(diǎn)已被許多植物胚乳培養(yǎng)實(shí)例所證實(shí)，如玉米、柑橘、蘋果、梨等。 植物種類不同，傳粉后胚乳進(jìn)入細(xì)胞期的時(shí)間不同，胚乳細(xì)胞終止有絲分裂的時(shí)間不同。玉米胚乳在授粉后3-5D進(jìn)入細(xì)胞期，8-12D胚乳細(xì)胞處于旺盛細(xì)胞處于旺盛分裂期，22D胚乳核有絲分裂。,幾種植物胚乳雙受精后進(jìn)入細(xì)胞期的時(shí)間 梨（錦豐、早酥） 20d 黑麥草 810d 小麥 5d 大麥 5d 黃瓜 716d,(二) 胚性因子的作用 胚乳組織培養(yǎng)中，一個(gè)值得注意的問題，即在誘導(dǎo)胚乳組織增殖，形成愈傷組織時(shí)，必須要有胚的存在。當(dāng)愈傷組織形成后，除去胚并不影響胚乳組織的增殖。胚對(duì)胚乳的增殖作用，有人認(rèn)為是某種“胚性因

20、子”在起作用。 “胚性因子”究竟是什么？,用巴豆（Bhojwani，1968）、核實(shí)木和蓖麻（SriVastava，1971）為實(shí)驗(yàn)材料，將成熟胚乳組織片，在培養(yǎng)之前先用不同濃度的GA3，或IAA進(jìn)行浸泡預(yù)處理12 h、24 h、36 h、48 h，然后轉(zhuǎn)移至如下兩種培養(yǎng)基上：IAAKTCH（水解酪蛋白）；2，4-D+酵母提取物進(jìn)行培養(yǎng)。發(fā)現(xiàn)用12mgL GA3（赤霉素）浸泡36 h的核實(shí)木的胚乳組織，在無胚的情況下，可形成愈傷組織并分化出綠色芽體。蘋果（母錫金，1977）的胚乳培養(yǎng)中亦有類似的情況。說明植物激素對(duì)胚乳的增殖和分化的作用。柚子胚乳培養(yǎng)中，無論帶胚或不帶胚均可獲得愈傷組織并分化成

21、植株。不過所用的培養(yǎng)基中均具有赤霉素，故認(rèn)為這種“胚性因子”就是赤霉素。當(dāng)然GA的作用仍需繼續(xù)探討（王大元，1977）。,有人在培養(yǎng)葡萄和蘋果未成熟胚乳組織（細(xì)胞期軟組織）時(shí)，證明胚乳細(xì)胞的增殖和器官分化并不需要胚的存在。后來發(fā)現(xiàn)在柚子、水稻、大麥未成熟胚乳培養(yǎng)中亦有類似情況。“胚性因子”究竟是什么？植物激素是肯定的，至于哪些激素在胚乳培養(yǎng)中，可起到“胚性因子”的作用，還要看植物體內(nèi)內(nèi)源激素的種類和含量才能判斷。,(三)培養(yǎng)基酸堿度對(duì)胚乳組織培養(yǎng)的影響 根據(jù)不同植物種類進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)，不同植物種有其最適應(yīng)的pH值。 玉米6.l7.0 核實(shí)木5.6 蓖麻5.0 蘋果6.06.2 麻瘋樹5.2 巴

22、婆40,7.4 植物的離體受精,7.4.1 離體受精的概念和意義 從花粉萌發(fā)到受精形成種子，從種子萌發(fā)到幼苗形成的整個(gè)過程，均在試管內(nèi)完成，稱離體受精，或試管受精。,離體受精技術(shù)在克服植物受精不育障礙，特別是克服花粉在柱頭上不萌發(fā)或萌發(fā)后花粉管不能伸入花柱，或在花柱中生長緩慢，使配子不能如期融合的障礙有著極其重要的意義。 重要作用有如下三點(diǎn)：可以克服自交不孕；使親緣關(guān)系更遠(yuǎn)的植物進(jìn)行種間或?qū)匍g雜交；誘導(dǎo)孤雌生殖。1990年管啟良等進(jìn)行大麥和硬粒小麥屬間試管受精，得到了試管種子和幼苗。,7.4.2 離體受精的方法,將未授粉的子房，經(jīng)表面滅菌后，切開取出胚珠，接種在培養(yǎng)基上。然后，在試管內(nèi)撒播花粉

23、?；ǚ郯l(fā)芽后，花粉管長人胚珠內(nèi)受精。受精后的胚珠進(jìn)一步發(fā)育形成種子。種子能在培養(yǎng)基上發(fā)芽長成植株。,具體作法有5種,（1）從胎座上切下單個(gè)胚珠（裸露胚珠），接種在培養(yǎng)基上，然后撒播花粉的方法。 （2）帶著完整胎座或部分胎座接種并撒播花粉的方法。 （3）帶著完整子房或部分子房壁接種并撒播花粉的方法。由于帶著完整子房，對(duì)于解決花粉和柱頭，花粉管和花柱兩種形式的受精障礙不起作用。故發(fā)展到切去柱頭和花柱直接在子房上散布花粉的作法。如煙草試管受精。,（4）柱頭接近法。將花粉撒在本種植物的柱頭上，切下柱頭接種在培養(yǎng)基上。然后在柱頭周圍，接種異種裸露胚珠，花粉在本種植物的柱頭哺育下發(fā)芽，花粉管伸長并進(jìn)人胚珠受精。 這一方法是解決花粉發(fā)芽和胚珠培養(yǎng)，在培養(yǎng)基組成上發(fā)生矛盾時(shí)，所采用的一種方法。 （5）哺育法。將胚珠表面先蘸滿有助于花粉發(fā)芽的培養(yǎng)基接種培養(yǎng)，然后在胚珠上撒播花粉使之受精。這一方法是解決胚珠存活率和花粉發(fā)芽、花粉管伸長培養(yǎng)基發(fā)生矛盾時(shí)的作法。,7.4.3 離體受精成功的技術(shù)關(guān)鍵,(一) 離體胚珠的成活率和受精力 試管受精的成功率與胚珠的成活率有著密切關(guān)系。提高離體胚珠成活率的關(guān)鍵是培養(yǎng)基。因此要對(duì)培養(yǎng)基的各種成分進(jìn)行詳細(xì)的篩選。 諸如基本