江蘇技術師范學院化學與環(huán)境工程學院學院（系、部）： 實驗課程名稱 ： 論 文 班 級 名 稱 ： 學 生 姓 名 ： 學 生 學 號 ： 指 導 老 師 ： 作 業(yè) 時 間 ： 江蘇技術師范學院化學與環(huán)境工程學院1目 錄1. 材料與方法 .41.1 材料與儀器 .41.2 提取純化工藝 .41.3 綠原酸的含量 .42. 結果 .42.1 提取條件 .42.1.1 提取溶劑的選擇 .42.1.2 提取溫度的選擇 .52.1.3 提取時間的影響 .52.1.4 浸提液 pH 值的影響 .52.2 絮凝脫色 .52.3 大孔吸附樹脂的選擇 .52.4 NKA-9 樹脂對綠原酸的吸附實驗 .62.4.1 繪制動態(tài)吸附曲線 .62.4.2 進樣液流速對吸附的影響 .72.4.3 進樣液 pH 值對吸附的影響 .82.5 NKA-9 樹脂對綠原酸的脫附實驗 .82.5.1 進樣液 pH 值對吸附的影響 .82.5.2 繪制其洗脫曲線 .92.6 重結晶 .103 結論 .103.1 物理性狀 .103.2 化學結構 .11參考文獻 .122杜仲葉中綠原酸的提取分離作者：袁華，鄧良，楊小俊，閆志國 ，吳元欣【摘要】 目的研究杜仲葉中綠原酸的提取純化方法。方法采用水提、絮凝脫色、樹脂吸附、重結晶工藝提取純化。結果杜仲葉的水浸提液濃縮后用 1%殼聚糖絮凝去雜、活性碳脫色得到進樣液，進樣液用 NKA-9 樹脂吸附，50%乙醇解吸，洗脫液濃縮后的粗品經(jīng)甲醇重結晶得到純度97%的綠原酸，提取率65%。結論 優(yōu)化完善了杜仲葉中綠原酸的提取純化方法，為杜仲資源的充分綜合利用和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供了參考?！娟P鍵字】 綠原酸； 提取； 純化； 杜仲葉Study on the Extraction and Purification of Chlorogenic Acid in Eucommia ulmoides Oliv. LeavesAbstract ：Objective To study the optimum extraction and purification process for chlorogenic acid in Eucommia ulmoides Oliv. Leaves. MethodsThe process was carried out by water extraction, 1% chitosan flocculation, actived char decolorization, NKA9 resin adsorption, 50% ethanol desorption and methanol recrystallization. ResultsThe extracting ratio of chlorogenic acid was 68% with purity of 97%.ConclusionAn optimum and improved technology for the extraction and purification of chlorogenic acid in Eucommia ulmoides Oliv. Leaves was investigated. It is helpful to industrial production of chlorogenic acid.Key words：Chlorogenic acid; Extraction; Purification; Eucommia ulmoides Oliv.杜仲 Eucommia ulmoides Oliv.是我國特有的經(jīng)濟樹種，其藥用價值歷來受到人們關注。杜仲中主要有效成分綠原酸具有抗菌、抗病毒、利膽、保肝、降壓、清除自由基等作用。2000 多年前我國的神農(nóng)本草經(jīng)就將之列為中藥上品。近年來研究表明杜仲葉中的主要化學成分和杜仲皮基本一致，且杜仲葉中綠原酸含量更為豐富，達到干葉重的 1%5%，因此從原材料豐富且價廉的杜仲葉中提取綠原酸成為研究熱點13。其中錢驊4、劉軍海等5提出的大孔吸附樹脂江蘇技術師范學院化學與環(huán)境工程學院3提取純化法展示了一定的工業(yè)化前景，但報道的樹脂分離效果不一致，且均未見有關終產(chǎn)品純度及收率的報道。杜仲葉提取物中除含綠原酸外，還含有鞣質、蛋白質、多糖等物質。為了得到純度較高的綠原酸，必須對提取液進行多步分離純化。本文在文獻工作的基礎上，圍繞產(chǎn)業(yè)化目標，改進完善了提取制備工藝，采用水提、絮凝脫色、樹脂吸附、重結晶工藝提取制備了純度與收率較高的綠原酸。1. 材料與方法1.1 材料與儀器杜仲葉采自湖北五峰（風干、粉碎）；主要試劑乙醇、甲醇、稀鹽酸等均為分析純；殼聚糖為生化試劑；NKA9，AB8，NKA型樹脂(南開大學化工廠)；綠原酸（中國藥品生物制品檢定所）。ZF型紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；Agilent 1100 型高效液相色譜儀。1.2 提取純化工藝準確稱取 10.0 g 杜仲葉，用去離子水 2120 ml 在 80下動態(tài)提取 150 min，過濾,提取液減壓濃縮至 100 ml，濃縮液中加入 1%殼聚糖溶液 4 ml 絮凝，過濾，濾液用活性碳脫色，得進樣清液，用 NKA9 樹脂吸附進樣清液，用 50%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，得綠原酸粗品，經(jīng)甲醇重結晶得綠原酸純品。提取率65%（以杜仲葉中綠原酸含量計），純度97%。1.3 綠原酸的含量檢測綠原酸的含量測定參照文獻6，7進行。42. 結果2.1 提取條件2.1.1 提取溶劑的選擇杜仲葉中綠原酸的提取一般選用 40%乙醇水溶液，使用乙醇水溶液提取除增加溶劑成本以外，提取液中的脂溶性成分增加，造成后續(xù)處理困難，綠原酸在熱水中溶解度較大，本文選用水為提取溶劑。2.1.2 提取溫度的選擇隨著提取溫度的升高，綠原酸得率不斷增加，當溫度高于 80時，綠原酸得率開始下降。隨著溫度的升高，杜仲葉中其它成分的溶出也不斷增加，同時考慮到綠原酸的熱不穩(wěn)定性，提取溫度控制在 80以下。2.1.3 提取時間的影響提取的時間隨著時間的延長，綠原酸得率逐漸升高，尤其是在 50150 min 內，二者幾乎呈現(xiàn)良好的線性關系，隨后逐漸達到提取平衡狀態(tài)。2.1.4 浸提液 pH 值的影響在溫度、料液比、提取時間一致的條件下，用稀鹽酸調節(jié)提取溶劑的 pH 值，當 pH 值為 4 時，綠原酸得率較高。因此，綠原酸的最佳提取工藝條件為：每10.0 g 杜仲葉，用 2120 ml 去離子水在 pH=4 及溫度 80下動態(tài)提取 150 min。2.2 絮凝脫色傳統(tǒng)中藥提取工藝中常常采用水提醇沉法，目的是除去提取液中的淀粉、樹膠、蛋白質、粘液質、果膠、多糖、無機鹽等無效成分。實驗發(fā)現(xiàn)，水提醇沉法中醇的濃度越高越有利于除去雜質，但有效成分由于醇沉包夾損失也隨之增大。另外水提醇沉工藝還存在乙醇消耗量大、生產(chǎn)成本高、生產(chǎn)安全系數(shù)低等缺點，因此需要改進工藝。絮凝澄清法是在中藥提取液或提取濃縮液中加入一種絮凝劑以吸附架橋及電中和方式除去溶液中的某些物質，以達到分離純化的目的8。實驗通過絮凝劑種類、濃度及絮凝溫度、酸度的選擇比較，確定江蘇技術師范學院化學與環(huán)境工程學院5優(yōu)化的絮凝脫色工藝為：每 100 ml 濃縮液中加入 1%殼聚糖溶液 4 ml，攪拌，在 60靜置 60 min，過濾，濾液用 1g 活性碳脫色，得進樣清液。2.3 大孔吸附樹脂的選擇結合杜仲葉浸提物的特性，本文對 NKA-9，AB-8，NKA-3 種極性的大孔吸附樹脂進行選擇比較。樹脂根據(jù)文獻4，5經(jīng)預處理、再生后，進行靜態(tài)吸附與解吸實驗，3 種不同型號的大孔吸附樹脂對綠原酸溶液（4.8 mg ml-1，10 ml）得到的吸附量、吸附率和解吸率如表 1 所示。表 1 3 種樹脂對綠原酸的吸附和解吸情況由表 1 知，3 種大孔吸附樹脂對綠原酸均具有較高的吸附量和吸附率，但是 AB-8 型樹脂吸附的綠原酸很難被解吸下來，不宜用作分離綠原酸的樹脂，只有 NKA-9，NKA-型樹脂較為適合。比較可知，NKA-9 型樹脂在靜態(tài)吸附時具有較高的吸附量和吸附率，而且易解吸，2.4 NKA-9 樹脂對綠原酸的吸附實驗2.4.1 繪制動態(tài)吸附曲線將濃度為 3.0 mg ml-1 的綠原酸溶液加入裝有 200gNKA-9 型大孔樹脂的玻璃層析柱中，在流速為 2.0 ml min-1 時（可用 BV/h 表示，即每小時流過床層的流動相的體積為樹脂床體積 Bed Volume 的倍數(shù)), 測定流出液中綠原酸的濃6度，繪制吸附曲線（見圖 1）。結果表明，該樹脂可處理 78 倍樹脂床體積的進樣液。圖表 1NKA-9 樹脂對綠原酸的吸附曲線2.4.2 進樣液流速對吸附的影響為了進行有效的吸附，在樹脂吸附過程中有必要使固液兩相有充分的接觸時間。進樣流速過大，樹脂對綠原酸來不及吸附，導致吸附率下降；進樣流速過小，雖然吸附較充分，但是吸附時間長，效率較低。將濃度為 3.0 mg ml-1的綠原酸溶液過柱，考察單位時間內樹脂的吸附量與不同進樣流速的關系，結果表明，在流速為 2.0 ml min-1 時，吸附效果最好。見圖 2。圖表 2 進樣液流速對吸附的影響江蘇技術師范學院化學與環(huán)境工程學院72.4.3 進樣液 pH 值對吸附的影響在不同 pH 值下進行吸附實驗, 結果表明，綠原酸作為多羥基酚酸，在酸性條件下易被吸附。因為在酸性條件下，綠原酸以分子形式存在，樹脂對其吸附作用增強；在強酸條件下，以內酯形式存在的綠原酸容易水解；在堿性條件下，以離子形式存在的綠原酸則不易被吸附。由圖 3 可知，pH 值為 3 時，吸附效果最好。圖表 3 進樣液 pH 值對吸附的影響82.5 NKA-9 樹脂對綠原酸的脫附實驗2.5.1 進樣液 pH 值對吸附的影響洗脫液的選擇化合物經(jīng)樹脂吸附后，根據(jù)吸附力的強弱不同而選用不同的洗脫劑。一般來說，吸附劑與吸附質以分子間色散力作用時，吸附力較弱，易于洗脫；而當吸附劑與吸附質以偶極間作用力或氫鍵作用時，吸附力強，不易于洗脫。NKA-9 大孔樹脂極性較強，同時綠原酸是含有酚羥基化合物，容易與樹脂形成氫鍵，對綠原