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文檔簡介

蛋白質(zhì)的分離純化,（一）材料 1、選材 2、破碎 3、混合物的分離 （二）粗分級 （三）細(xì)分級 （四）結(jié)晶,蛋白質(zhì)的分離方法,根據(jù)蛋白質(zhì)的溶解度差異分離 沉淀技術(shù) 根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小的差異分離 根據(jù)蛋白質(zhì)的荷電差異分離 根據(jù)蛋白質(zhì)與某些物質(zhì)的吸附差異吸附分離 利用生物分子專一性結(jié)合的特性親和層析,蛋白質(zhì)的分離方法,可逆沉淀： 等電點(diǎn)沉淀、鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀 不可逆沉淀： 熱變性沉淀、重金屬鹽沉淀、有機(jī)酸沉淀,透析只用于除鹽類和小分子雜質(zhì),透析只用于除鹽類和小分子雜質(zhì),超過濾除小分子雜質(zhì)，分離、濃縮蛋白質(zhì),加壓,蛋白質(zhì)溶液,半透膜,支持膜的柵板,超濾液,凝膠層析,又叫分子篩層析。 分子篩是具有三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，有天然的，也可人工合成。根據(jù)網(wǎng)孔不同可制成不同規(guī)格。 具備條件：1惰性，2水不溶性，3能高度水化。 常用分子篩： 葡聚糖凝膠（Sephadex） 型號：G200、 G150、 G100、 G75、 G50、 G25、 G15 分離大蛋白質(zhì)、小蛋白質(zhì)，除鹽 瓊脂糖凝膠（瑞典Sepharose、美國Bio-GelA） 孔徑大，用于分離大分子物質(zhì) 聚丙烯酰胺凝膠（ Bio-GelP）,凝膠層析,原理： 1、分子量大的物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部，隨洗脫液從凝膠粒子之間的空隙擠落下來，所以大分子物質(zhì)遷移速度快； 2、小分子物質(zhì)要通過凝膠網(wǎng)孔進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部，所以小分子物質(zhì)遷移速度慢。,密度梯度離心,電泳法,類型：1、區(qū)帶電泳 紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、粉末電泳、細(xì)絲電泳、凝膠電泳。 凝膠電泳包括：瓊脂糖凝膠、淀粉凝膠、硅膠凝膠、聚丙烯酰胺凝膠。 聚丙烯酰胺凝膠包括：垂直板電泳、盤狀電泳、等電聚焦電泳、梯度電泳、免疫

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