密級(jí) 論文編號(hào) 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 博士學(xué)位論文 不同精粗比日糧 泌乳奶牛氮素代謝 及限制性氨基酸的研究 on on 摘 要 本研究在調(diào)查我國奶牛養(yǎng)殖 模式 基礎(chǔ)上， 研究 不同精粗比典型日糧 蛋白質(zhì) 、 氨基酸營養(yǎng)供應(yīng) 和利用 狀況，分析限制性氨基酸種類和程度，為完善我國奶牛蛋白質(zhì)營養(yǎng)需要體系 ， 提高奶業(yè)生產(chǎn)技術(shù)水平 ， 指導(dǎo)和推動(dòng)奶業(yè)健康發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)和數(shù)據(jù)。 本論文首先利用四頭三位點(diǎn)瘺管奶牛研究了簡單 T 型 十二指腸 瘺管食糜流量監(jiān)測 方法 。結(jié)果表明通過簡單 T 型瘺管所采集的十二指腸食糜樣品不具代表性?？梢詫⑹趁臃譃閮傻饺?，三種指示劑 纖維在不同食糜相中的分布差異顯著， 要存在于液相食糜中， 要 與 小顆粒食糜 結(jié)合，而 大顆粒食糜中含量最高。利用單 相 指示劑計(jì)算食糜干物質(zhì)流量變異很大， 其中 測值最低， 測值最高， 測值變異最大 ，利用 兩相和三相指示劑估計(jì)的流量值處于中等。多相指示劑的使用可顯著提高十二指腸酸性洗滌不溶灰分流量估測的準(zhǔn)確度。 本論文第二部分主要研究了四種不同精粗比典型日糧條件下泌乳奶牛瘤胃氮素代謝、小腸蛋白質(zhì) 的消化 吸收及其對(duì)生產(chǎn)性能的影響。試驗(yàn)動(dòng)物為四頭三位點(diǎn)瘺管泌乳奶牛，采用 4 4 拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)。結(jié)果表明 粗料為 70%羊草的日糧，氮源不足限制了瘤胃微生物生長。不同精粗比日糧瘤胃真可消化有 機(jī)物 （ 生成微生物氮的效率差異不顯著，每公斤 生物氮。粗料的改善和精粗比 的提高 顯著增加十二指腸非氨氮流量 ，增加的非氨氮主要是 瘤胃微生物氮 。 四種日糧 條件下， 進(jìn)入 小腸 的微生物氮占 總非氨氮 的 比例為 進(jìn)入小腸的非氨氮 消化率平均為 在各日糧間差異不顯著。泌乳奶牛食入氮中，平均 糞氮 的 形式排出， 尿氮的形式排出 。食入氮轉(zhuǎn)化為乳中真蛋白氮和體組織沉積氮的效率隨精料水平的提高而提高。乳產(chǎn)量、乳蛋白率隨日糧粗料的改善和精料水平的提高而 提高。乳蛋白率和小腸非氨氮流量相關(guān)顯著。 本論文第三部分主要 研究了 四種 不同精粗比 典型 日糧 條件下 泌乳 奶牛氨基酸營養(yǎng)的供給狀況及其對(duì)生產(chǎn)性能的影響。 試驗(yàn)動(dòng)物為四頭三位點(diǎn)瘺管泌乳奶牛，采用 4 4 拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)。結(jié)果表明日糧精粗比對(duì)瘤胃細(xì)菌、牛奶氨基酸組成沒有影響。除精氨酸外， 其他 氨基酸 小腸消化率在各種日糧間 差異 不 顯著（消化率為 。以乳蛋白 質(zhì) 氨基酸組成為理想氨基酸模式 對(duì) 小腸可吸收氨基酸 進(jìn)行評(píng)價(jià)， 結(jié)果表明賴氨酸 、 蛋氨酸為四種日糧的主要限制性氨基酸，支鏈氨基酸重要性僅次于賴氨酸和蛋氨酸。泌乳奶 牛在采食 3070糧后，血液中必需氨基酸出現(xiàn)累積，非必需氨基酸濃度 顯著 低于其他三種日糧， 表明該日糧條件下，泌乳奶牛因能量不足導(dǎo)致必需氨基酸利用率降低。 本論文第四部分以四頭三位點(diǎn)瘺管泌乳奶牛為試驗(yàn)動(dòng)物，利用回撤灌注技術(shù)研究 了精粗比為 50:50 的典型 日糧條件下，賴氨酸、蛋氨酸和支鏈氨基酸對(duì)泌乳奶牛生產(chǎn)性能影響。試驗(yàn)采用4 4 拉丁方設(shè)計(jì)，通過十二指腸灌注不同 組合 氨基酸 ， 結(jié)果表明回撤賴氨酸后產(chǎn)奶量有降低趨勢，乳蛋白率、非脂固形物顯著降低。而回撤 支鏈氨基酸 對(duì)生產(chǎn)性能沒有影響，回撤蛋氨酸后乳蛋白率顯著降低，但乳蛋 白產(chǎn)量等其他指標(biāo)沒有變化。研究發(fā)現(xiàn)支鏈氨基酸和蛋氨酸之間 有頡抗作用。除蘇氨酸、蛋氨酸和胱氨酸外，乳腺對(duì)其他氨基酸的攝取量與動(dòng)脈血漿中氨基酸濃度存在顯著的線性正相關(guān)關(guān)系。乳腺對(duì)動(dòng)脈血液中必需氨基酸的攝取效率 在 13 55%之間。 關(guān)鍵詞 ：泌乳奶牛 ， 蛋白質(zhì) ， 氨基酸 ， 乳腺 to of on of of of or as Co Yb in r at of in in of or of or of of at to of on in s in a 4 4 to of to of in 70% 0% no of of of at to of of to at no in of of in by of of in a in to of on of in of to of in on of in to In in a 4 4 to of on 050in p= 。不同精粗比日糧 十二指腸混合食糜、大顆粒相、固相中 含量 隨精料水平升高而顯著 降低 （ 而且 要 存在于大顆粒相 (在小顆粒相中氮含量顯著高于其他各組份 (平均流量均處于六種組合的中游。 若利用不同指示劑估計(jì)結(jié)果判斷四種日糧十二指腸干物質(zhì)流量差異， 不同指示劑 所得結(jié)果并 不一致 。 b、 b 三種指示劑估計(jì)的流量表明不同精粗比日糧的十二指 腸 量差異極顯著 (經(jīng)統(tǒng)計(jì)，指示劑與日糧之間沒有互作 效應(yīng) （ p 從 圖 2070量估計(jì)變化幅度最大。 r o + o + Y b 7 0 C W 6 5 3 5 C C 5 0 C C A 3 0 7 0 C C g/不同指示劑及其組合對(duì)十二指腸食糜流量的估測效果 of 表列出了三項(xiàng)指示劑的重組因子。重組因子代表在重組一個(gè)單位食糜時(shí)，參與計(jì)算的某一相組份增加或減少的單位數(shù)，正值表示需要增加，負(fù)值則表示需要減少。從 表 20705050 6535糧條件下所采集樣品中液體過多，重組過程中需要減少。3070糜重組過程中雖然 需要增加液相，但小顆粒相增加的更多。 表 2相指示劑重組食糜方法中液相和小顆粒相的重組因子（ 平均值和標(biāo)準(zhǔn)差） he of in 糧 1 相 顆粒相 均數(shù) 均數(shù) D 070307050506535注： 3070粗比為 30:70，粗料僅由羊草（ 成； 3070粗比為 30:70，粗料由羊草、玉米青貯（ 苜蓿干草（ 成； 5050粗比為 50:50，粗料由羊草、玉米青貯及苜蓿干草組成； 6535粗比為 65:35，粗料由羊草、玉米青貯及苜蓿干草組成 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 不同精粗比日糧消化道食糜流量的監(jiān)測 28 消化道內(nèi)不吸收 ( , 1994)，且在食糜各 組分中分布相對(duì)均勻， 沒有晝夜節(jié)律和不同采樣 日期之間的波動(dòng) ( 1977)。根據(jù)本試驗(yàn)的測定結(jié)果， 十二指腸 食糜 小顆粒相、大顆粒相、固相和混合食糜中的平均含量分別為 由于沒有更好的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) ，本試驗(yàn)以對(duì) 量估計(jì)的量和 入量之間的接近程度作為評(píng)價(jià)各種指示劑應(yīng)用效果的指標(biāo) （ 表 2圖 2從 表 2 2項(xiàng)指示劑對(duì) 二指腸流量的估計(jì)明顯偏高，而雙相指示劑和三相指示劑的估測效果則更為準(zhǔn)確。 表 2同指示劑組合對(duì)十二指腸食糜中 量估計(jì) of IA in of 粗比1 to 3070070050535際食入量 表 2he of in 粗比 1 to 3070070050535o r b ： 1: 3070粗比為 30:70，粗料僅由羊草（ 成； 3070粗比為 30:70，粗料由羊草、玉米青貯（ 苜蓿干草（ 成； 5050粗比為 50:50，粗料由羊草、玉米青貯及苜蓿干草組成；6535粗比為 65:35，粗料由羊草、玉米青貯及苜蓿干草組成 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 不同精粗比日糧消化道食糜流量的監(jiān)測 29 100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300350400A I A 實(shí)際攝入量 ( g / d )A I A 實(shí)際攝入量 ( g / d )A I A 實(shí)際攝入量 ( g / d )A I A 實(shí)際攝入量 ( g / d )A I A 實(shí)際攝入量 ( g / d )A I A 實(shí)際攝入量 ( g / d )100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300350400g/d)g/d)100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300g/d)g/d)g/d)100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300g/d)100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300圖 2心 標(biāo)識(shí) ） 和殘差值（預(yù)測值 心 標(biāo)識(shí) ）的散點(diǎn)圖 he of IA IA 國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 不同精粗比日糧消化道食糜流量的監(jiān)測 30 3 討論 在真胃和十二指腸部位，通過 T 形瘺管無法獲得代表性的食糜樣，為了能夠很好的監(jiān)測食糜流量， 975)建議將食糜分成兩相，即液相和固相，通過兩種指示劑分別標(biāo)記并計(jì)算食糜流量。 986)進(jìn)一步根據(jù)采集的食糜樣品的代表性和指示劑的理想與否，綜述了多種算法，并推導(dǎo)了采集的食糜樣品沒有代表性時(shí)的食糜重組和計(jì)算方案，該方法并不需要多相標(biāo)記物體系中指示劑全部存在于某一相中，只要其在某一相存在絕對(duì)優(yōu)勢，就可應(yīng)用于食糜流量的計(jì)算，這使得該種方法對(duì)指示劑的理想性依賴程度減小，提高了試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性。本試驗(yàn)比較了單相、雙相和三相指示劑對(duì)食糜流量的監(jiān)測效果，為反芻動(dòng)物營養(yǎng)消化代謝研究中指示劑的合理選擇和應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 化道食糜樣本的非代表性和食糜重組 利用過濾和離心將采集到的十二指腸食糜分成兩相 或三相，各相的營養(yǎng)成份和指示劑含量顯著不同（ 表 2表 2這進(jìn)一步證實(shí)了十二指腸食糜確實(shí)存在多相；通過簡單 T 型瘺管采集到的食糜樣本代表性很差；各相食糜之間可以通過簡單方法分離。 食糜中各相物理流動(dòng)性和化學(xué)組成各不相同，使用能夠與各相緊密相連的指示劑，監(jiān)測各相食糜流動(dòng)量，從而分析重組出真正代表性食糜 ( , 2003; 1975)。根據(jù) 986)的理論，各相指示劑并不需要完全和所標(biāo)記相結(jié)合，只需要在所標(biāo)記相中占有絕對(duì)優(yōu)勢即可。 表 2o 主要存在于液相，而通過液體形式注入瘤胃的 要吸附到食糜中的小顆粒相上，而與羊草纖維緊密結(jié)合的 主要存在于大顆粒相中。 (2003)比較了利用離心和過濾兩種方法分離十二指腸食糜，利用過濾獲得的液體食糜相中 濃度占絕對(duì)優(yōu)勢，但 該相中 含量 也 很高，這也符合 要結(jié)合食糜中細(xì)小食糜顆粒的規(guī)律，因?yàn)?相對(duì)于高速離心來說，過濾后的濾液中含有較多的小顆粒相， 這使得 濾渣（顆粒相）中難以保持優(yōu)勢，從而無法很好的應(yīng)用 975)重組食糜的方法。本試驗(yàn)在兩相分離時(shí)采用了食糜直接離心的方法，三相分離采用了先雙層紗布過濾獲得大顆粒相，然后用離心方法獲得小顆粒相和液相，保證了各種指示 劑在所代表的相中處于絕對(duì)優(yōu)勢。 在 (2003)試驗(yàn)中求出的重組因子都小于或等于零，表 明與食糜代表樣品相比，通過他們的 方法從真胃獲得的食糜樣品中，含有較多的液相和小顆粒相。本試驗(yàn)中基于三相指示劑法所計(jì)算的重組因子變異 較大 （ 表 2且 和日糧精粗比無關(guān)，這可能與本試驗(yàn)瘺管以及采樣方法有關(guān) 。三種日糧的液相重組因子為負(fù)值，表明采集到的食糜樣品中液體較多；但對(duì)于小顆粒相來說， 3070糧的重組因子為 明該日糧條件下獲得的食糜樣本中小顆粒相不足，重組 1 個(gè)單位食 糜需要額外添加 單位的小顆粒相；其他三種日糧的小顆粒相重組因子分別為 都表明本試驗(yàn)中應(yīng)用的簡單 T 型瘺管采集的樣品中小顆粒相不足，液體過多。針對(duì)簡單 T 型瘺管所采集的十二指腸食糜樣品變化很大的問題，除增加采樣次數(shù)、提高樣品代表性外，多相標(biāo)記分析 、通過 重組 獲得 代表性食糜是較好的辦法。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 不同精粗比日糧消化道食糜流量的監(jiān)測 31 示劑的選擇 1955）首度提出 以作為液相指示劑使用。當(dāng) 子量達(dá)到 4000 以上，其比重變大，無法代表液相，研究中一般選用分子量較小的 但 分析技術(shù)不夠準(zhǔn)確，而且根據(jù)在綿羊和兔子上做的試驗(yàn)， 回收率也僅為 95%，表明這種指示劑可以被吸收。早期應(yīng)用于液相監(jiān)測的還有 合物 ( 1964)，但 以被動(dòng)物機(jī)體吸收， 1976)發(fā)現(xiàn) 瘤胃吸收受到瘤胃內(nèi)滲透壓的影響，最終可能引起 10%的誤差。 (1980)研制了液相指示劑 論從制作方法和使用效果方面，均優(yōu)于 經(jīng)逐漸取代了 為最常用的液相指示劑。 食糜中實(shí)際是獨(dú)立存在的，幾乎和任何不可溶養(yǎng)分之間都沒有結(jié)合，可以很好的監(jiān)測食糜液體和可溶性養(yǎng)分的流量，但單純使用 為食糜 流量監(jiān)測顯然不合適，應(yīng)該結(jié)合其他固相食糜使用。即便是在雙標(biāo)記體系中， 使用也受到疑問， (2003)指出在雙指示體系 中 不能很好代表液相，應(yīng)該將固液兩相改變?yōu)樾☆w粒相和大顆粒兩相，從而采用 雙相標(biāo)記物體系，由于他的試驗(yàn)中液相食糜中 含量和固相食糜中含量幾乎相等，其計(jì)算結(jié)果有待進(jìn)一步驗(yàn)證。本試驗(yàn)中由于試驗(yàn)樣品采用高速離心分離， 在固相食糜中占有絕對(duì)優(yōu)勢，這種情況下無法采用 雙標(biāo)記物計(jì)算食糜流量，也就無法進(jìn)一步證實(shí) (2003)的結(jié)果，但本試驗(yàn)采用的以 液相標(biāo)記物的雙標(biāo)記物法仍然獲得了比較好的結(jié)果。 相標(biāo)記物 稀土元素 有很強(qiáng)的吸附性，可以緊密地與飼料顆粒結(jié)合 ( , 1984)，每克飼料可以結(jié)合 75 1984)。早期的研究認(rèn)為 染飼料在酸性條件下可能發(fā)生 解離 ( , 1982)，但后來的研究證明這種解離很少，任何稀土元素媒染飼料均可以在 4 的乙酸溶液中保持穩(wěn)定，而瘤胃中的 難低到如此程度 ( , 2002; 2002)。而且可以通過用乙酸等溶液洗滌去除結(jié)合不緊的 ，再投放到消化道，以便排除酸性條件下解離的影響 ( , 2000)。 (1985)研究結(jié)果表明 所結(jié)合飼料的瘤胃降解沒有影響， 其 回收率為 通過瘤 胃投放液體乙酸鐿后， 十二指腸食糜的大顆粒、中等顆粒和小顆粒中的含量分別為 夠滿足雙標(biāo)記法要求( , 2003; , 1985)。因此， 為指示劑應(yīng)用越來越 廣泛，尤其適用于雙標(biāo)記法中的固相指示劑 ( , 2003; , 1994; , 1990; , 2003)。本試驗(yàn)中 用瘤胃直接 液體 投放，分析十二指腸各相食糜 量表明 要存在于小顆粒相食糜中，其含量分別是大顆粒相和液相的 ，而食糜中的蛋白質(zhì)主 要也存在于小顆粒相中（四種日糧條件下大顆粒、小顆粒和液相中氮平均含量分別為 ，這表明 很好應(yīng)用于反芻動(dòng)物蛋白質(zhì)消化代謝研究中，這一研究結(jié)果與 (2003)的研究結(jié)果一致。 糞中的回收率為 本試驗(yàn)結(jié)果說明 較好的反芻動(dòng)物固相食糜標(biāo)記物。 鉻標(biāo)記纖維： 早開發(fā)了這種將 日糧纖維結(jié)合起來使用的指示劑方法，并被中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 不同精粗比日糧消化道食糜流量的監(jiān)測 32 （ 1974）使用 ( , 1980)。 (1989)研究表明 吸附性良好， 標(biāo)記纖維在瘤胃培養(yǎng)后仍然能保持 98%的結(jié)合率， 記纖維在消化道內(nèi)的流動(dòng)主要和物理特性相近的大顆粒纖維類飼料相近。本試驗(yàn)通過紗布過濾后所獲得大顆粒相中， 量是小顆粒相食糜的 （ 表 2食糜大顆粒相中 濃度是小顆粒相的 ，這也表明食糜中 內(nèi)源固相標(biāo)記物： 994)研究了以瘤胃不可消化中性洗滌纖維 （ 纖維素酶不可消化的酸性洗滌纖維為指示劑（ 外源指示劑的效果，結(jié)果表明 合于做指示劑，但 質(zhì)素等不宜用做指示劑。994)用 288h 瘤胃培養(yǎng)后，認(rèn)為沒有消化的 以用做指示劑，但利用288h 的時(shí)間制作指示劑似乎過于費(fèi)時(shí)費(fèi)力。 ( 1977)的研究也表明 很好的內(nèi)源指示劑，在糞中的回收率為 本試驗(yàn)在十二指腸部位以參照評(píng)價(jià)其他指示劑的使用效果，沒有參與計(jì)算，但通過糞中回收率（ 分析，進(jìn)一步證明 為內(nèi)源指示劑比較合適。但是，本試驗(yàn)在全舍飼條件下進(jìn)行，土壤、塵土和沙土墊料等外源性污染都不存在，這些污染都可能導(dǎo)致 使用出現(xiàn)偏差 (1975)，使用中需要注意。 相標(biāo)記法應(yīng)用效果評(píng)價(jià) 根據(jù)使用效果，現(xiàn)有的各種指示劑都不能完全滿足 975)提出的理想指示劑的五點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康膿駜?yōu)而用。本試驗(yàn)的主要目的之一是為了測定十二指腸食糜流量，而試驗(yàn)動(dòng)物安裝的是簡單 T 型瘺管，無法象橋式瘺管一樣全量收集食糜，所以只 能借助于指示劑來測定食糜流量。試驗(yàn)中比較了單相指示劑（ 雙相標(biāo)記法（ 三相標(biāo)記法（ 指示效果。單相指示劑中 測的十二指腸食糜量最低，而 測的量較高，雙向標(biāo)記法和三相標(biāo)記法估測的食糜流量居于中等。根據(jù)測定的重組因子分析，本試驗(yàn)采集的食糜中液相較多，在重組過程中需要減去一些，這也說明主要存在于液相的所采集的非代表性食糜樣品干物質(zhì)中比代表性樣品中的要高，利用 計(jì)算的食糜量則較低 ， 這和 1994)研究結(jié)果相同。相應(yīng)地，利用主要存在于固相食糜中的 994)用 測十二指腸食糜流量也高于用雙標(biāo)記法和 監(jiān)測結(jié)果。從十二指腸 量的估測來看（ 圖 2雙標(biāo)記法和三相標(biāo)記法獲得了更準(zhǔn)確和更一致的結(jié)果， 此 間接說明多相指示劑能夠很好提高食糜流量監(jiān)測的準(zhǔn)確性。 結(jié)合 十二指腸食糜樣品的非代表性，在利用指示劑監(jiān)測十二指腸食糜流量的試驗(yàn)中，單標(biāo)記法顯然是不合適的，宜選用多標(biāo)記法。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明雙標(biāo)記法和三相標(biāo)記法對(duì)食糜流量的監(jiān)測沒有差異，雖然后者的精確度確實(shí)有所提高，但雙標(biāo)記法能夠滿足大多數(shù)試驗(yàn)要求。在理論上，指示劑相數(shù)越多，監(jiān)測越準(zhǔn)確，但指示劑的準(zhǔn)備、樣品的處理和分析工作大量增加， 例如在氨基酸、脂肪酸等研究中，指標(biāo)分析成本很高，這必然增加了大量人力、物力的支出。 和 975)研究結(jié)果一樣，本試驗(yàn)證明 日糧精粗比和標(biāo)記物之間沒有互作效應(yīng)。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 不同精粗比日糧消化道食糜流量的監(jiān)測 33 4 小結(jié) 試驗(yàn)研究表明， 不同精粗比日糧十二指腸食糜組成變化很大， 通過簡單 T 型瘺管所采集的十二指腸食糜樣品不具代表性 。 過過濾、離心等辦法可以將食糜分為兩到三相。其中含氮物主要存在于小顆粒食糜中，而纖維類物質(zhì)在大顆粒相中含量較高。 過單項(xiàng)指示劑計(jì)算食糜流量變異很大， 測值最低， 測值最高， 測值變異最大，兩相和三相指示劑的流量估計(jì)值處于中等。 用各種指示劑組合估測 十二指腸 量發(fā)現(xiàn)，單項(xiàng)指示劑估測值變異最大，兩相指示劑和三相指示劑的使用顯著提高了估測的準(zhǔn)確度。 纖維 在不同食糜相中的分布差異顯著， 要存在于液相食糜中， 要和小顆粒食糜結(jié)合，而 在大顆粒食糜中含量最高， 可以很好的應(yīng)用到1975)的食糜重組方法中 。 試驗(yàn) 沒有監(jiān)測到日糧和不同標(biāo)記物之間的互作效應(yīng)，但該試驗(yàn)結(jié)果還需要更多的試驗(yàn)研究來證明。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第三章 不同精粗比日糧對(duì)泌乳奶牛瘤胃發(fā)酵、氮素消化吸收和生產(chǎn)性能的影響 34 第 三 章 不同精粗比日糧 對(duì)泌乳 奶牛瘤胃發(fā)酵、氮素 消化吸收 和生產(chǎn)性能 的影響 我國奶牛業(yè)發(fā)展很快，但是養(yǎng)殖水平參差不齊。對(duì)北京大興區(qū)的調(diào)研發(fā)現(xiàn)，該區(qū)奶牛存欄量 26000 多頭，其中集約化養(yǎng)殖約占 60%，小區(qū)養(yǎng)殖約占 10%，農(nóng)村散戶飼養(yǎng)約占 30%。不同模式不僅在養(yǎng)殖數(shù)量上有明顯差別，而且在飼料來源、飼料加工配制、飼養(yǎng)工藝、管理水平等方面也存在巨大差異，而這種差異是影響奶牛健康、牛奶產(chǎn)量、質(zhì)量和生產(chǎn)效率的根本原因 (王加啟和李樹聰 , 2004)。在這些不同養(yǎng)殖模式中， 可以歸納出 高粗料低營養(yǎng)水平型、粗飼料結(jié)構(gòu)改善的低成本型、精粗比大致 相等的配合合理型和為盲目追求產(chǎn)量的高精料型等幾種典型的日糧，其實(shí)質(zhì)在于日糧中精粗比例的不同。低水平飼養(yǎng)常導(dǎo)致奶牛生產(chǎn)性能無法充分發(fā)揮，奶牛養(yǎng)殖效益降低。增加日糧中精料水平，可以提高奶牛產(chǎn)奶量和乳蛋白率 ( , 1991)，但精料過量又會(huì)引起奶牛 瘤胃發(fā)酵、小腸可吸收養(yǎng)分供給 紊亂，導(dǎo)致乳脂率降低、代謝性酸中毒等現(xiàn)象的發(fā)生 ( , 1983)，不僅造成資源的浪費(fèi)，而且影響奶牛的健康和生產(chǎn)性能的發(fā)揮。 本試驗(yàn)通過研究不同精粗比例的四種典型日糧對(duì)奶牛瘤胃發(fā)酵、小腸可消化蛋白組成和數(shù)量以及奶牛生產(chǎn)性能的影響，目的是： 給不同飼養(yǎng)模式典型日糧的優(yōu)化提供科學(xué)依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)； 獲得瘤胃發(fā)酵、微生物合成效率、小腸可吸收蛋白消化吸收等營養(yǎng)需要參數(shù)，為建立具有中國特色的奶牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)； 為進(jìn)一步研究奶牛氨基酸營養(yǎng)的提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 1 材料與方法 驗(yàn)動(dòng)物、日糧及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)動(dòng)物及其飼養(yǎng)管理同 第二章 。 四種日糧中精料組成相同，第一種日糧以全羊草為粗飼料，其余三種日糧粗料 組成 相同，由羊草、苜蓿和全株青貯玉米構(gòu)成。四種日糧精粗比為 30:70,30:70,50:50,65:35，分別用307030705050 6535示 (表 3 驗(yàn)設(shè)計(jì) 同第二章 示劑的制備和 使用 同第二章，計(jì)算采用三相指示劑法。 本 章中涉及部分試驗(yàn)內(nèi)容是 與 2004 年本研究室畢業(yè)的 王吉峰 博士共同完成，所以 瘤胃 氮數(shù)據(jù) 與該同志博士論 文相同，為保證本論文內(nèi)容的完整性，在此引用和分析，特此申明 ！ 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第三章 不同精粗比日糧對(duì)泌乳奶牛瘤胃發(fā)酵、氮素消化吸收和生產(chǎn)性能的影響 35 表 3of 目 粗比1 to 070070050535糧組成 苜蓿草粉 草 米青貯 米 麥麩 豆粕 粉 酸氫鈣 鹽 混料 養(yǎng)成分 2 P， %E， %a, % , % % % % 自粗料的 % 粉 % ： 1： 3070粗比為 30:70，粗料僅由羊草（ 成； 3070粗比為 30:70，粗料由羊草、玉米青貯（ 苜蓿干草（ 成； 5050粗比為 50:50，粗料由羊草、玉米青貯及苜蓿干草組成； 6535粗比為 65:35，粗料由羊草、玉米青貯及苜蓿干草組成 2： 主要養(yǎng)分含量以 基礎(chǔ) , P、 實(shí)測值 , 3： 每公斤含有 70 萬 12 萬 210075060000005002I 842 4： 100品采集 瘤胃液 樣品采集 每期試驗(yàn)第 15 天 和 第 16 天的 07:30、 9:30、 11:30、 13:30、 15:30、 17:30 及 19:30 分別采集瘤胃液 100層紗布過濾后立即測定 ；同時(shí)取過濾后的瘤胃液 8入 2配制的 25%偏磷酸，封蓋，倒置，搖勻，在 11,000g 離心 20 清液 用于 測定 度；另取 20液 ，低溫 ()保存 待 測 量 。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第三章 不同精粗比日糧對(duì)泌乳奶牛瘤胃發(fā)酵、氮素消化吸收和生產(chǎn)性能的影響 36 每期試驗(yàn)第 16 18 天依照下述各時(shí)間點(diǎn)從瘤胃背囊、背盲囊、腹囊、腹盲囊四個(gè)位點(diǎn)采集瘤胃固體食糜 (用手?jǐn)D出液體后剩余的食糜 )50g，液相食糜 100即冰箱冷凍保存 ()；三天采樣結(jié)束后，采集的 600g 瘤胃固相食糜 解凍后 加入 600理鹽水，攪動(dòng) 5，經(jīng) 4 層紗布過濾，收集濾液，將液相食糜解凍后經(jīng) 四 層紗布過濾，混合兩相食糜濾液，經(jīng) 1000 g 離心 10除去原蟲顆粒和飼料殘?jiān)?，上清液再?jīng) 20,000 g 4下離心 20心棄去上清液，用 鹽水洗滌沉淀，重復(fù)離心一次，小心棄去上清液，收集沉淀至潔凈培養(yǎng)皿中，經(jīng)冷凍干燥，作為瘤胃混合細(xì)菌樣品， 4保存?zhèn)溆谩?采樣時(shí)間點(diǎn)如下： 第 16 天： 07:30， 13:30， 19:30， 01:30 第 17 天： 09:30， 15:30： 21:00， 03:30 第 18 天： 11:30， 17:30， 23:30， 05:30 料 、 剩 余 料 、 十二指腸食糜 、 糞樣 、 尿樣的采集及預(yù)處理 同 第二章 腸食糜的采集和預(yù)處理 在采集十二指腸食糜同時(shí)，采集 50腸食糜，采樣結(jié)束后將每頭牛不同時(shí)間點(diǎn)的樣品混合 均勻，凍干， 粉碎并過 40 目篩， 4保存?zhèn)?用。 奶樣品采集 試驗(yàn)期 每 日擠奶兩次，擠奶完畢立即稱重，記錄產(chǎn)奶量，將牛奶攪拌均勻后進(jìn)行取樣。取樣時(shí)將乳樣采樣器垂直緩慢插入奶桶，封閉采樣器一端，提起采樣器取樣，每頭牛每次采集乳樣約為乳產(chǎn)量總量 2%，立即用乳品分析儀測定 乳脂率、乳蛋白率 、乳糖率、 非乳脂固形物 率和冰點(diǎn) 。 然后分裝為 50積的四份樣品，立即低溫 ()保存 備用 。 漿樣品采集 試驗(yàn)期第 20 天，分別 于飼喂前