密級： 論文編號： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 綠色木霉厚垣孢子與分生孢子生物學(xué)特性及生防效果的比較研究 F I 摘 要 木霉菌是一 類 重要的生防 真 菌 ，在植物病害中具有重要的應(yīng)用價(jià)值 ，其生長周期內(nèi)可產(chǎn)生分生孢子與厚垣孢子 。本實(shí)驗(yàn)以綠色木霉菌液體發(fā)酵產(chǎn)生的厚垣孢子和固體培 養(yǎng)獲得的分生孢子為材料，研究了它們的生物學(xué)特性的差異、土壤對兩者的抑菌作用的差異及對辣椒疫病防治作用的差異，以期探討兩者作為生防制劑形式的各自優(yōu)缺點(diǎn)，以促進(jìn)木霉菌生物農(nóng)藥的發(fā)展。 結(jié)果如下： 1、 不同溫度對兩種孢子萌發(fā)的影響具有顯著差異。厚垣孢子萌發(fā) 溫度范圍為 15 40 ，適宜萌發(fā)溫度為 25 35 ； 分生孢子 萌發(fā) 溫度范圍為 20 35 ，適宜萌發(fā)溫度為 30 35 。 在相同 溫度 條件下，厚垣孢子萌發(fā)較分生孢子快，芽管 的 生長速度也快 。 2、 不同的 碳 氮 源對厚垣孢子 和分生孢子 的萌發(fā) 有 促進(jìn)作用 。五種實(shí)驗(yàn)糖對厚垣孢子 的萌發(fā)有促進(jìn)作用但糖之間的作用沒有顯著差異，對分生孢子的萌發(fā)影響卻有顯著差異。蛋白胨和牛肉膏溶液對厚垣孢子和分生孢子萌發(fā)的促進(jìn)作用最大；尿素對厚垣孢子的抑制作用較分生孢子小， ( 全抑制分生孢子萌發(fā)，對厚垣孢子萌發(fā)有較大影響。 3、 兩種 孢子 對 求相對不嚴(yán)格。兩者在 12 環(huán)境中均能萌發(fā)，厚垣孢子適宜的 10，最 適 6； 分生孢子適宜的 3 9，最適 5。 4、 光線對兩種孢子的影響不同。紫外線（ 15W、 21射 210s）對厚垣孢子的萌發(fā)抑制率為 40%左 右，對分生孢子完全抑制；普通光照對兩者萌發(fā)沒有任何影響。 5、 兩種孢子制劑的貨架期存在明顯差異。兩種 孢子制劑室溫 貯存 180d 后 檢測 ， 厚垣孢子由 108g 下降到 105g，分生孢子由 108g 下降到 103g。 6、 兩種孢子對土壤抑菌作用的反應(yīng)存在差異。 厚垣孢子在土壤 培養(yǎng)基 中培養(yǎng) 24h 而分生孢子僅為 向土壤中添 加營養(yǎng)物質(zhì)后，有利于厚垣孢子和分生孢子的萌發(fā)，但厚垣孢子萌發(fā)情況要優(yōu)于分生孢子。 7、 厚垣孢子和分生孢子對辣椒疫霉病的防治效果沒有顯著差異，但預(yù)防效 果顯著優(yōu)于治療效果 。 總之，厚垣孢子無論在萌發(fā)、抗 性、貨架期等方面皆優(yōu)于分生孢子，其對土壤的抑菌作用較敏感，但低于分生孢子；兩者對辣椒疫病的防治效果相當(dāng)。因此將 厚垣孢子 開發(fā)成生物制劑用于病害的防治更有優(yōu)勢。 關(guān)鍵詞： 木霉菌 厚垣孢子 分生孢子 生物學(xué)特性 生物防效 is an It as We on to as as as 1. on 5 40 , 0 35 , 5 35 0 35 2. of in of no to in (on on of 3 a of at 10, at at 9, at no of on to of to V to V 10s, on no of on 5. in of he of to be 08g.A 80d of in 05g, 03g. So we of to of in in to of in in 7. no of . In to at of V to At it . So to be a to 錄 摘 要 . I . 一章 緒論 . 1 言 . 1 霉菌在生物防治方面的研究現(xiàn)狀及發(fā)展 . 1 霉孢子的形態(tài)特征 . 1 霉孢子的生產(chǎn) . 2 霉孢子制劑 . 4 霉孢子的萌發(fā) . 5 霉在生物防治中的應(yīng)用技術(shù) . 7 霉對辣椒疫霉的防治研究 . 11 霉菌在生物防治中問題與展望 . 12 究目的與意義 . 12 驗(yàn)內(nèi)容和方法 . 13 第二章 綠色木霉厚 垣孢子與分生孢子生物學(xué)特性的研究 . 14 料和方法 . 14 驗(yàn)材料 . 14 驗(yàn)方法 . 15 計(jì)分析 . 16 果與分析 . 16 垣孢子和分生孢子形態(tài)特征 . 16 垣孢子與分生孢子萌發(fā)特性比較 . 17 垣孢子和分生孢子抗 性比較 . 24 垣孢子和分生孢子貨架期比較 . 24 論與討論 . 25 第三章 土壤對綠色木霉厚垣孢子與分生孢子抑制作用的研究 . 29 料和方法 . 29 驗(yàn)材料 . 29 驗(yàn)方法 . 29 果與分析 . 31 壤抑制木霉厚垣孢子與分生孢子的作用 . 31 菌土壤對厚垣孢子與分生孢子的抑制作用 . 31 壤抑菌機(jī)理研究 . 32 壤抑制厚垣孢子與分生孢子作用的解除 . 33 論與討論 . 34 V 第四章 厚垣孢子與分生孢子 對辣椒疫霉病的生防效果研究 . 37 驗(yàn)材料與方法 . 37 料 . 37 驗(yàn)方法 . 37 果與分析 . 39 色木霉對辣椒疫霉菌生長的影響 . 39 色木霉菌厚垣孢子與分生孢子盆栽防效試驗(yàn) . 41 論與討論 . 42 第五章 全文結(jié)論 . 46 參考文獻(xiàn) . 48 致 謝 . 56 作 者 簡 介 . 57 文縮略表 英文縮寫 英文全稱 中文名稱 T. 木霉 色木霉 茨木霉 氏木霉 氏木霉 擬康氏木霉 孢木霉 絹病菌 枯絲核菌 p. 椒疫霉菌 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒論 言 隨著人們環(huán)保意識日益提高，對綠色農(nóng)產(chǎn)品的需求量增大，人們開始探索植物病害的生物防治，被用于植物病害防治的生防制劑越來越受到人們的青睞（郝林華， 2005）。在很多發(fā)達(dá)和發(fā)展中國家，大量的真菌或細(xì)菌源拮抗微生物被商業(yè)化生產(chǎn)用來防治植物病害。在眾多的真菌生防因子中，木霉菌（ 是最有應(yīng)用潛力的生防微生物之一，可用來防治多種植物病害（ 1982； 1999）。據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界 25 個(gè)國家和美國 43 個(gè)州的生物防治課題中，大約 34%進(jìn)行的是有關(guān)木霉的研究。這是因?yàn)槟久咕谏锓乐紊暇哂歇?dú)特優(yōu)勢和研究的價(jià)值，它具有廣泛適應(yīng)性、抗菌廣譜性、拮抗多樣性等優(yōu)點(diǎn)。 木霉菌屬半知菌亞門，絲孢綱，叢梗孢目，粘孢菌類，是一類普遍存在的腐生真菌，常見于土壤，根圍，葉圍，種子和球莖等生態(tài)環(huán)境中（ 1983）。目前常見木霉屬種類有哈茨木霉（ 哈氏木霉（ 多孢木霉（ 康氏木霉（ 、擬康氏木霉（ T. 綠色木霉（ 長枝木霉（ （ 2000）。在眾多種類中，綠色木霉（ 1996； 紀(jì)明山， 2002；蒲金基， 2002）和哈茨木霉（ 1997； et 2002）應(yīng)用較多，在植病防治方面表現(xiàn)較好的防治效果。木霉菌在其生長周期內(nèi)可以產(chǎn)生三種繁殖體，包括菌絲體、厚垣孢子和分生孢子（ 1985）。有關(guān)木霉分生孢子的生物學(xué)特性、發(fā)酵工藝、制劑開發(fā)、病害防治等方面都有許多研究，生產(chǎn)上常用的木霉菌劑多為它的分生孢子制劑，且已有許多商品化分生孢子制劑問世，如以色列開發(fā)的哈茨木霉 濕性粉劑 國的 哈茨木霉 由于木霉厚垣孢子發(fā)酵條件較難控制，發(fā)酵周期較長，產(chǎn)孢量不及分生孢子大，長期以來沒有受到足夠的重視。本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過多年發(fā)酵工藝研究，改善了木霉菌液體深層發(fā)酵產(chǎn)厚垣孢子的發(fā)酵工藝，發(fā)酵周期縮短至 5d 左右，產(chǎn)孢量達(dá) 107厚垣孢子的 研究及其制劑的開發(fā)提供了良好的研究基礎(chǔ)。本文對綠色木霉分生孢子和厚垣孢子的萌發(fā)特性、抗逆特性、對土壤抑菌作用的敏感性、孢子的存活特性等生物學(xué)特性以及對植物病害的防治作用進(jìn)行研究，以期了解木霉菌分生孢子與厚垣孢子的生物學(xué)特性差異，探討它們作為生防制劑的優(yōu)勢和不足，為木霉菌生物農(nóng)藥的研究和應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 霉菌在生物防治方面的研究現(xiàn)狀及發(fā)展 霉孢子的形態(tài)特征 木霉菌在 養(yǎng)基上培養(yǎng)菌落初為棉絮狀或致密從束，顏色為白色至灰白色，無固定形狀（鄢永琦等， 2000）當(dāng)分生孢子成熟后，菌 自中央到邊緣，漸漸變?yōu)椴煌潭鹊木G色菌落，極中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 2 少數(shù)為白色粉狀。 的分生孢子梗為重復(fù)多次分枝，排列成規(guī)則的樹狀結(jié)構(gòu)，最早形成的分枝較長，后續(xù)形成分枝隨著離基部距離的增加而逐步變短。瓶梗為安瓶形至壇形，基部常常縊縮，在中間部位稍微膨大，在近頂端突然變細(xì)而形成近柱形的頸部。瓶梗的排列為輪狀，位于分生孢子梗分枝的終端，有時(shí)單生，或者為渦狀排列位于靠近分生孢子梗與其分枝分隔的下方。分生孢子形成于瓶形小梗上，分生孢子近球形，橢圓形，或短倒卵形，壁光滑或細(xì)胞壁上明顯而 微小粗糙突起，淺 綠 色或無色， 大小 2 5 4m（楊合同等， 2002）。 木霉菌常常形成厚垣孢子，在基內(nèi)菌絲上產(chǎn)量大，間生，或者在營養(yǎng)菌絲側(cè)枝的尖端端生，圓形或橢圓形，無色至淺黃色，大小 面光滑，細(xì)胞壁有加厚現(xiàn)象，無性生殖產(chǎn)生，通常有耐不良環(huán)境條件的能力。厚垣孢子是木霉菌重要的繁殖體形式，能夠確保其在土壤中繁衍（楊合同等， 2002； et 983）。盡管早在 1865 年 就描述過木霉菌的厚垣孢子（ 1939），在以后的木霉菌分類 綜述中也經(jīng)常提到厚垣孢子（ 939； et 1980； 1969），但有關(guān)木霉菌厚垣孢子結(jié)構(gòu)的形成、生態(tài)學(xué)重要性及其與木霉菌在土壤中存活之間的關(guān)系僅有少數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道。 1954）觀察到綠色木霉的分生孢子接種到土壤浸出液中，厚垣孢子能夠很快形成。木霉屬厚垣孢子在土壤中存活能力要優(yōu)于分生孢子，至少能存活 20 個(gè)月（ 958）。 霉孢子的生產(chǎn) 自從木霉菌的生防效果得到廣泛認(rèn)同以來，許多研究者就對其產(chǎn)孢條件進(jìn)行了大量的摸索，但有關(guān)孢子產(chǎn)生時(shí)所涉及的基因表達(dá)與生物化學(xué)過程則少有報(bào)道，僅胡東維等（胡東維 ， 2004）研究過哈茨木霉菌分生孢子發(fā)育時(shí)的超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞化學(xué)，發(fā)現(xiàn)孢子發(fā)育時(shí)孢子壁由薄而光滑到厚而產(chǎn)疣，期間脂肪體在分生孢子和產(chǎn)孢細(xì)胞中不斷累積，最后脂肪體沿內(nèi)壁排列成一層。 木霉菌分生孢子的產(chǎn)生條件 要求相 對較低，條件適宜時(shí)在多種固體或液體培養(yǎng)基 中 都能夠產(chǎn)生。城市垃圾、腐敗的咖啡果皮、禽類的糞便以及混以牛糞的咖啡果皮、香蕉葉、甘蔗渣和麥麩等廉價(jià)物質(zhì)都可作為木霉菌的固體培養(yǎng)基來生產(chǎn)分生孢子，且孢子產(chǎn)量都可達(dá) 1091996；朱輝， 1999； 2003； 2004)。這些材料廉價(jià)易得，方法也簡單易行，可被農(nóng)民采用。目前生產(chǎn)上常用的木霉制劑多為分生孢子制劑，因?yàn)槟久咕稍谠S多廉價(jià)液體培養(yǎng)基中產(chǎn)生大量的分生孢子（ et 1991； et 1991）。趙培潔、王惠中（ 1995，分 生 孢 子 形成 模 式 圖 分 生 孢 子 形 成 顯 微 圖 厚垣 孢子 形 成 顯 微 圖 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 3 1998）等人做過淺層液體培養(yǎng)方面的研究，他們應(yīng)用蟲草頭孢廢液，添加幾種中草藥（青蒿、黃芩、貫眾和板藍(lán)根）作為培養(yǎng)基，接種哈茨木霉（ 分生孢子 進(jìn)行培養(yǎng)，可獲得 108個(gè)孢子 /皿。應(yīng)用蟲草頭孢廢液組合培養(yǎng)液培養(yǎng)哈茨木霉，其產(chǎn)孢量比 氏培養(yǎng)基都高。但液體深層發(fā)酵雖能得到大量的孢子，所得到的孢子類型為芽生孢子壽命短且生活力弱，而固體培養(yǎng)方法雖可得到貨架期相對較長的分生孢子，但其生產(chǎn)周期長、菌劑含孢量低而導(dǎo)致成本高的弊端同樣阻礙了木霉菌的實(shí)用化進(jìn)程 。改善發(fā)酵工藝，采用 液固兩相 進(jìn)行 發(fā)酵，將含孢量為 108個(gè) /養(yǎng) 24可 得到含孢 量平均為 600億 / 趙蕾 ， 1999）。此種方法僅利用兩種廉價(jià)、易得的農(nóng)副產(chǎn)品為原料，整個(gè)工藝過程簡便易行，成本低廉，且培養(yǎng)時(shí)間大為縮短，可為較大規(guī)模生產(chǎn)木霉菌劑提供參考依據(jù)。 礦質(zhì)元素和維生素有助于木霉菌的生長和產(chǎn)孢，向培養(yǎng)基中添加錳、銅、鐵等金屬元素可明顯提高木霉菌的產(chǎn)孢量，但高濃度的鐵離子則會(huì)影響木霉的生長，產(chǎn)孢下降（紀(jì)明山 ， 2004；陳建愛， 2004； 1991）。對礦質(zhì)元素的需求因種而異， 乏 P、K 或 S 時(shí)產(chǎn)孢量明顯下降，而 有在缺乏 P 時(shí)產(chǎn)孢量才會(huì)下降（ 1991）。維生素 組合可大幅度提高木霉菌的產(chǎn)孢量（紀(jì)明山， 2004；陳建愛， 2004）。 真菌生防制劑的生產(chǎn)必須迅速且成本較低，在收獲、干燥、制劑加工、貯存及運(yùn)輸過程中能夠保持活力（ et 1992）。孢子保持較高的活性是生物防治成功的重要環(huán)節(jié)， 在改進(jìn)的s 培養(yǎng)基中加入 汁（ 養(yǎng)哈茨木霉菌株 “ 1295，能夠得到較多而耐干燥的孢子。環(huán)境條 件也是影響木霉菌產(chǎn)孢的重要因素。木霉菌的多數(shù)種類對光較為敏感，黑暗和光照交替培養(yǎng)木霉菌菌落可出現(xiàn)同心輪紋，分生孢子產(chǎn)生于光照階段（ 1968），日光照射3近紫外線（ 366射 10 30s，可以誘導(dǎo)分生孢子的形成（ 1976）。 木霉菌厚垣孢子產(chǎn)生條件相對較為嚴(yán)格，雖然在 麥麩等固體培養(yǎng)基、滅菌土壤、土壤浸出液及植物碎片等基質(zhì)中 都 產(chǎn)生厚垣孢子（ , 1984； 983） ，但沒有形成大規(guī)模的發(fā)酵生產(chǎn) 。 應(yīng)用 糖蜜玉米漿等液體培養(yǎng)基 接種 T. 木霉菌株 ，發(fā)酵兩周， 每克干燥菌絲體可 獲得 108 個(gè)厚垣孢子（ ., 1983,1984；1983） ；但發(fā)酵周期過長，限制了其發(fā)展。近年來，國內(nèi)也有一些探索厚垣孢子發(fā)酵條件的報(bào)道，如 秦蕓 （ 秦蕓 ， 2002）就影響木霉菌厚垣孢子產(chǎn)生的因素進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)萄糖 蛋白胨 1%， 瓊脂 2%）是 生厚垣孢子的最佳培養(yǎng)基， 溫度 30 、 產(chǎn)孢量較大。光照不利于厚垣孢子的產(chǎn)生，卻有利于木霉菌分生孢子的產(chǎn)生（ 1968），說明環(huán)境條件影響木霉菌產(chǎn)孢類型。液體發(fā)酵可以通過控制培養(yǎng)條件來生產(chǎn)不同類型的孢子，馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)液等雖然都可作為生產(chǎn)厚垣孢子的培養(yǎng)基 。 但是孢子類型和產(chǎn)孢速度卻受溫度、 影響，在適于木霉生長范圍內(nèi)，低 、24 以下可產(chǎn)生厚垣孢子，最大產(chǎn)孢量能達(dá)到 108 個(gè) /敬華， 2005）。但是有關(guān)厚垣孢子發(fā)酵生產(chǎn)的研究大都處于摸索階段，本實(shí)驗(yàn)室成功開發(fā)出一種厚垣孢 子發(fā)酵培養(yǎng)基，接種綠色木霉菌（ T. 180r/28 培養(yǎng) 5d，厚垣孢子的產(chǎn)量可達(dá) 107產(chǎn)已處于中試階段。與 厚垣孢子發(fā)酵培養(yǎng)基相比（ 1984； 1983），發(fā)酵周期顯著縮短，孢子含量提高。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 4 霉孢子制劑 把拮抗真菌加工成適宜形式的制劑是成功實(shí)施生物防治的又一重要環(huán)節(jié)。制劑必須易于使用，貯存和運(yùn)輸而且要有一定的貨 架 期。在半固體培養(yǎng)基上生產(chǎn)的生物量可被用于土壤中或種子包衣處理，而液體發(fā)酵 的產(chǎn)物則要被加工成粉劑，可濕性粉劑或片劑等形式的制劑（ 2000）。但木霉菌的制劑與加工技術(shù)研究較少，木霉菌的大量培養(yǎng)技術(shù)尚處于模仿階段，一般采用液體或半固體生產(chǎn)的方法，以得到大量的菌絲、厚垣孢子或分生孢子（ 1991； 1989；1996； 1984； 1990,1991； 984,1987,1989）。 人（ 1984）研究以褐煤酒糟廢液作為載體和底物，接種哈茨木霉，培養(yǎng) 7d 后風(fēng)干制成顆粒制劑， 20 貯存 4個(gè)月后發(fā)現(xiàn)木霉菌的成活率仍保持 90以上。 1985）將木霉菌絲加工成制劑能夠有效的降低溫室里棉花、甜菜和蘿卜等猝倒病的發(fā)生，并且將這種木霉菌絲制劑應(yīng)用于田間，防治 染的甜菜，防治效果達(dá)到 50。 （ 1991）發(fā) 明 了一種新型的生防制劑加工體系，這種體系的特點(diǎn)是在制劑加工過程中不必保持無菌條件，為木霉制劑的生產(chǎn)開辟 了 廣闊的空間。應(yīng)用 兩種制劑（玉米芯萌發(fā)接種和菌絲粉劑），可以有效的降低西紅柿 的發(fā)生。 菌絲粉制劑置于聚乙烯袋中，避光保存 3 年，菌絲仍保持活性（ 993）。 人（ 2000）比較了以滑石粉、高嶺土和皂土三種惰性物質(zhì)作為載體對哈茨木霉制劑貨 架 期及生物防效的影響，結(jié)果表明在貯存 120d 后，以高嶺土為載體的木霉制劑活性仍高達(dá) 106g，生防效果高于 50，明顯優(yōu)于其它兩種物質(zhì)作為載體的制劑。以滑石粉、葉臘石及藻酸鹽作為稀釋劑，且包含營養(yǎng)基質(zhì)如麥麩的粉狀木霉制劑，當(dāng)其施入土壤中不僅繁殖迅速，而且比純的分生孢子 或厚垣孢子的防病效果好，并且其制劑在土壤中可以減少許多病原菌的存活和生長（ et 1984； 985）。國內(nèi)也有許多利用木霉制劑防治植物病害的例子，且取得了較理想的效果。薛寶娣等人（ 1995）用 霉的分生孢子制劑在溫室條件下對黃瓜猝倒病和黃瓜疫病進(jìn)行防治試驗(yàn)，效果分別達(dá)到 而且具有持續(xù)防效和刺激作物生長的作用。郝林華（ 2005）利用擬康氏木霉液體發(fā)酵的菌絲制劑防治大田試驗(yàn)，生防效果顯著， 深受廣大農(nóng)民 歡迎，有待進(jìn)一步開發(fā)成商品化的農(nóng)用生物制劑。木霉菌絲型制劑含有 低分子量的抗生素類物質(zhì)和病原菌細(xì)胞壁的降解酶如幾丁質(zhì)酶、 葡聚糖酶等（王惠中等 ， 1995），可以更有效的防治病原菌。 木霉制劑的開發(fā)大都以分生孢子為主要對象，厚垣孢子制劑的開發(fā)卻未見報(bào)道，但有一些學(xué)者對木霉分生孢子與厚垣孢子干燥后貯存期的生物活性及其生物防治的效果做過研究，但不同研究得出的結(jié)論也不盡相同。 2000）等學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在初始活孢量為 108 個(gè) /g 以上 的厚垣孢子制劑 ，經(jīng)過 270d 的貯存期后，制劑中 活孢子數(shù)仍可達(dá)到 106 個(gè) /g。 然而 2002）等研究者卻發(fā)現(xiàn)分生孢子與厚垣孢子制劑在初始孢子量都為 108 個(gè) /g 以上時(shí)，在貯存 150d 后，厚垣孢子制劑中的活孢量不足 106 個(gè) /克，而分生孢子制劑 的活 孢子在 180d 后仍可保持在 106 個(gè) /者在防治 起的鷹嘴豆根腐病時(shí)效果沒有顯著性差異。不同的研究者得出的結(jié)論不一樣，可能是由于所用的出發(fā)菌株不同，貯存時(shí)的條件（如濕度、溫度等）具有一定的差異所造成的。 當(dāng)今，以木霉為基礎(chǔ)的生物殺菌劑已經(jīng)問世，利用原生質(zhì) 體融合技術(shù)將一株哈茨木霉菌株成中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 5 功開發(fā)成一種商品 化 制劑 種產(chǎn)品主要用于種子處理來預(yù)防 起的早期猝倒病（ 992）。在以色列從木霉菌（ 篩選獲得的分離菌株 加工制成商品化制劑，此種制劑有四種不同的形式： 子處理劑 劑 濕性粉劑 粒劑，可以用來防治由 和 病 原菌引起的蔬菜和其它植物的猝倒病及根腐?。?, 2000）。木霉商品化制劑種類繁多，名字不一，主要分為四種類型（ 1998）（ 1）可濕性粉劑 如 2）顆粒劑 如 000 ( 3）片劑 （ 4）水劑（分生孢子懸液） 。 霉孢子的萌發(fā) 養(yǎng)條件對孢子萌發(fā)的影響 盡管不少研究者對木霉孢子 的 萌發(fā)做過大量的研究（ 1973； 1983；2004； 莊敬華， 2005；），但有關(guān)木霉菌孢子萌發(fā)時(shí)所涉及的分子機(jī)制和生物化學(xué)過程卻多被忽略。這可能是由于木霉菌的分生孢子在多種營養(yǎng)基質(zhì)中都能萌發(fā)。據(jù)有關(guān)報(bào)道，木霉菌分生孢子的萌發(fā)需要提供外源營養(yǎng)物質(zhì)（ 973），營養(yǎng)物質(zhì)不同對孢子萌發(fā)的影響 具有差異（ 1973； 文成敬， 1995；王芊， 2002； 李雪玲， 2003；）。分生孢子經(jīng)無菌水沖洗數(shù)遍后不能在無營養(yǎng)的蒸餾水中萌發(fā)，未洗過的分生孢子或瓊脂能夠?yàn)殒咦拥拿劝l(fā)提供充足的營養(yǎng)。分生孢子雖然能夠適應(yīng)較寬的 圍但卻表現(xiàn)較強(qiáng)的嗜酸性特點(diǎn)，在酸性條件下比在中性或堿性環(huán)境中萌發(fā)要好（ 高克祥， 1995； 王芊， 2002）。溫度也是影響孢子萌發(fā)的重要因素，但不同的菌株所需要的最適溫度范圍也不一樣，如喜涼的多孢木霉（ 較好地在較低的溫度下萌發(fā)。 有關(guān)木霉菌厚垣孢子萌發(fā) 的特性知之甚少，新鮮的厚垣孢子在營養(yǎng)瓊脂上萌發(fā)較好，其萌發(fā)率可達(dá) 75%以上（ et 1983），自然干燥后的孢子萌發(fā)率卻下降到 13% 31%?？赡苁怯捎诟稍锏暮裨咦涌梢员３中菝郀顟B(tài)，一旦條件合適便會(huì)萌發(fā)。本實(shí)驗(yàn)室研究則發(fā)現(xiàn)，綠色木霉厚垣孢子即使在無營養(yǎng)的水中也能夠快速萌發(fā)， 3h 開始萌發(fā)， 8h 萌發(fā)率可達(dá) 90%左右，此時(shí)分生孢子則剛剛開始萌發(fā)。這種現(xiàn)象可能是由于厚垣孢子較大，能夠貯存較多的營養(yǎng)物質(zhì)供孢子萌發(fā)時(shí)利用。 壤抑 菌 作用對木霉孢子萌發(fā)的 影響 土壤抑菌作用（ of 是指土壤中或與土壤相接觸的微生物繁殖體（包括真菌、細(xì)菌、放線菌等）的萌發(fā)受到抑制的現(xiàn)象。對土壤抑菌作用機(jī)理的解釋有營養(yǎng)剝奪和抑制因子兩種假說，認(rèn)為土壤中營養(yǎng)物質(zhì)的缺乏或抑制因子的存在都能夠影響孢子的萌發(fā)（ 1953；1977）。 2003）等就證實(shí)了土壤微生物種群中的假單胞菌是導(dǎo)致土壤抑菌作用的主要原因，它能夠強(qiáng)烈抑制哈茨木霉（ 真菌孢子的萌發(fā)。 土壤的抑菌作用及其人為的解除或增強(qiáng)對土壤中 的土著木霉菌或引入木霉菌的生存與種群活力具有非常大的影響。土壤對木霉菌具有較強(qiáng)的抑制作用，而分生孢子對這種抑菌作用表現(xiàn)較中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 6 為敏感（ 1977； 許傳坤， 2004）。由于土壤抑制孢子萌發(fā)作用的存在，延長了孢子在土壤中的存活期，卻不利于生物防治活性的發(fā)揮。據(jù)相關(guān)報(bào)道，在不提供任何外源營養(yǎng)物質(zhì)的情況下，哈茨木霉分生孢子施入土壤后可存活 110d 130d，孢子存活期的長短因菌株的不同而異。大多數(shù)的分生孢子在未開始萌發(fā)時(shí)細(xì)胞就已經(jīng)溶解，或者是有的孢子利用土壤中有機(jī)質(zhì)分解物所提供的有限營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行萌發(fā)，但 這種萌發(fā)卻由于后續(xù)營養(yǎng)物質(zhì)的不足而停止生長隨后發(fā)生細(xì)胞溶解（ 1981）。但向土壤中添加額外營養(yǎng)物質(zhì)能夠部分或全部解除土壤對木霉分生孢子的抑制作用，這種現(xiàn)象在中性或堿性土壤環(huán)境中表現(xiàn)更加明顯（許傳坤， 2004； , 1968）。即使同一菌株，孢子類型不同，大小不一，對土壤抑真菌作用敏感程度也不同，個(gè)體較