熱原,一、熱原的概念、組成與性質(zhì)二、污染熱原的途徑三、除去熱原的方法四、檢查熱原的方法,一、熱原的概念、組成與性質(zhì),熱原：是由微生物代謝產(chǎn)生的微量即能引起恒溫動物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。大多數(shù)細(xì)菌都能產(chǎn)生熱原，霉菌、酵母菌、真菌，甚至病毒也能產(chǎn)生熱原。在產(chǎn)生熱原的微生物中，致熱能力最強(qiáng)的是革蘭氏陰性桿菌的產(chǎn)物，其次是革蘭氏陽性桿菌類，革蘭陽性球菌則較弱。,（一）熱原的概念,熱原反應(yīng)：含有熱原的注射劑注入人體可引起發(fā)熱反應(yīng)，使人體產(chǎn)生發(fā)冷、寒戰(zhàn)、體溫升高、出汗、惡心、嘔吐等癥狀，有時體溫可升至40，嚴(yán)重者甚至昏迷、虛脫，如不及時搶救，可危及生命。,（二）熱原的組成,熱原是微生物的一種內(nèi)毒素（內(nèi)毒素：革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的組成成分，細(xì)菌在生活時不能釋放出來，當(dāng)細(xì)胞死亡而溶解或用人工方法破壞菌體時才釋放出來）。內(nèi)毒素是由磷脂、脂多糖和蛋白質(zhì)所組成的復(fù)合物，其中脂多糖是內(nèi)毒素的主要成分，具有特別強(qiáng)的熱原活性，因而可以近似的認(rèn)為：熱原=內(nèi)毒素=脂多糖脂多糖的化學(xué)組成因菌種不同而異（主要含有多種糖類，類脂化合物，有機(jī)磷和其它一些成分）；熱原的分子量一般為1106左右。,（三）熱原的性質(zhì),一般在60加熱1小時不受影響，100會有少量不耐熱的熱原被破壞，只有在180、2小時，250、30分鐘或650、1分鐘可使熱原徹底破壞。必須引起注意：在通常注射劑的滅菌條件下，往往不足以使熱原破壞。,1.耐熱性,熱原體積小，約在15nm之間，故一般濾器、微孔濾膜均不能截留，一些超濾設(shè)備可以濾除部分熱原。,2.可濾過性,由于磷脂結(jié)構(gòu)上連接有多糖，所以熱原能溶于水，在水或水溶液中呈分子狀態(tài)。,3.水溶性,熱原本身不揮發(fā)，但必須注意在蒸餾時，防止隨水蒸氣霧滴帶入藥液或注射用水中，因此在配制罐和蒸餾水室的蒸發(fā)器上部設(shè)隔沫裝置，以分離蒸汽和霧滴。,4.不揮發(fā)性,熱原能被活性炭吸附，也能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化劑破壞，超聲波亦能破壞熱原。,5.其他性質(zhì),二、污染熱原的途徑,（一）生產(chǎn)過程中的污染,是熱原污染的主要途徑，主要指配制注射液用的注射用水，盡管水本身并非使微生物良好的培養(yǎng)基，但易被空氣或含塵空氣中的微生物污染。雖經(jīng)蒸餾可將熱原除去，但若操作不當(dāng)或蒸餾設(shè)備結(jié)構(gòu)不合理，水蒸氣中帶有細(xì)小的水滴則可將熱原帶入。另外，注射用水儲存不當(dāng)或儲存時間過長被微生物污染也可產(chǎn)生熱原。故注射用水應(yīng)新鮮使用，多效蒸餾水機(jī)質(zhì)量要好，環(huán)境應(yīng)潔凈。,1.從溶劑中帶入,一些原輔料因包裝損壞、受潮而污染微生物可產(chǎn)生熱原。另外，用生物方法制備的藥品如水解蛋白及中藥提取物易帶入致熱物質(zhì)。,2.從原輔料中帶入,3.從容器、用具、管道和裝置中帶入,如未按GMP要求認(rèn)真清洗處理，常易導(dǎo)致熱原污染。,如室內(nèi)空氣、環(huán)境、人員衛(wèi)生條件達(dá)不到要求，操作時間過長、產(chǎn)品滅菌不及時或滅菌不合格等均會增加微生物的污染而產(chǎn)生熱原。,4.制備過程中的污染,5.產(chǎn)品密閉不合格，在儲存中被污染,臨床使用的器具如輸液器、注射針筒針頭、配藥器具等的污染會帶入熱原，中心配藥室或臨床科室配藥過程，由于環(huán)境、操作、用品、混入的其他藥品等因素的污染也可能帶入熱原。,（二）使用過程中的污染,三、除去熱原的方法,耐高溫的注射器、針頭或器皿，在洗滌干燥后，于250加熱30分鐘以上，可以破壞熱原。,1.高溫法,熱原能溶于水但不揮發(fā)，因此制備注射用水時，需經(jīng)蒸餾，純化水中的熱原可被除去。,2.蒸餾法,活性炭對熱原有較強(qiáng)的吸附作用，同時有助濾、脫色作用，所以在注射劑中使用較廣。常用量為0.1%0.5%，但應(yīng)注意吸附可能造成主藥的損失。此外，還可用活性炭與白陶土合用除去熱原。,3.活性炭吸附法,玻璃、搪瓷等耐酸容器及用具，可用重鉻酸鉀硫酸清潔液或稀氫氧化鈉液處理破壞熱原。,4.酸堿法,臨床使用的一次性注射器、輸液器都普遍使用該方法，效果可靠、產(chǎn)品具有較長的有效期。,5.環(huán)氧乙烷氣體殺滅法,熱原分子量為1106左右，采用二乙氨基乙基葡聚糖凝膠(分子篩)可去除部分熱原。,6.凝膠過濾法,一般用3.015nm孔徑的超濾膜除去部分熱原。,7.超濾法,如采用離子交換法、反滲透法等，也可通過吸附或濾過作用除去部分熱原。,8.其他,四、檢查熱原的方法,中國藥典現(xiàn)行版本規(guī)定熱原檢查采用：（一）家兔法（二）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法,（一）家兔法,中國藥典現(xiàn)行版規(guī)定熱原檢查法系將一定量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。家兔法作為熱原檢查法，仍是目前各國藥典法定的方法。因家兔對熱原的反應(yīng)與人基本相似，試驗成本相對比較低。對供試家兔的要求、試驗前的準(zhǔn)備、檢查法、結(jié)果判斷藥典均有具體規(guī)定。,檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性取決于試驗動物的狀況、實驗室條件和操作的規(guī)范性。供試驗用家兔應(yīng)按藥典要求進(jìn)行選擇，以免影響結(jié)果。家兔法監(jiān)測內(nèi)毒素的靈敏度約為0.001mg/mL，試驗結(jié)果接近人體真實情況。但該法操作繁瑣費時，不能用于注射劑生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制，且不適用于放射性藥物、腫瘤抑制劑等細(xì)胞毒性藥物制劑。,（二）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法,細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法系利用鱟試劑來檢測或量化革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示。鱟是節(jié)肢動物門、螯肢亞門肢口綱劍尾目的一種海生動物，又稱鱟珠。鱟的血細(xì)胞溶解物與內(nèi)毒素之間產(chǎn)生凝聚反應(yīng)。鱟試劑即鱟的血細(xì)胞溶解物。,細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法包括凝膠法和光度測定法兩種方法：凝膠法系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來檢測或半定量內(nèi)毒素；光度測定法包括濁度法和顯色基質(zhì)法，系分別利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化及產(chǎn)生的凝固酶使特定底物釋放出呈色團(tuán)的多少來測定內(nèi)毒素。供試品檢測時可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗，當(dāng)測定結(jié)果有爭議時，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。,鱟試劑法檢查內(nèi)毒素的靈敏度約為0.0001mg/mL，比家兔法靈敏10倍，操作簡單易行，實驗費用低，結(jié)果迅