1、 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 1 頁 共 28頁 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 目錄 1 2 驗證3 適用范圍 4 驗證小組成員與5 文件資料及培訓(xùn)6 編制7 驗證8風(fēng)險評估9 驗證內(nèi)容 10驗證結(jié)果的分析與11 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 2 頁 共 28頁 驗證立項申請表 立項部門 申請日期 年 月 日 立項題目 驗證原因 驗證要求及目的： 車間主任： 日期： 年 月 日 生產(chǎn)技術(shù)部意見： 部門負(fù)責(zé)人： 日期： 年 月 日 工程部意見： 部門負(fù)責(zé)人： 日期： 年 月 日 品管部意見： 部門負(fù)責(zé)人： 日期： 年 月 日 驗證小組意見： 驗證小組組長： 日期： 年

2、 月 日 備注 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 3 頁 共 28頁 驗證方案會簽審批表 驗證項目 驗證方案編號 起 草 驗證方案起草部門 簽 名 日 期 會 簽 部 門 簽 名 日 期 小容量注射劑車間 生產(chǎn)技術(shù)部 工程部 品管部 批 準(zhǔn) 部 門 簽 名 日 期 驗證小組組長 備 注 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 4 頁 共 28頁 1、概述 1.1我公司小容量注射劑車間2號生產(chǎn)線，按GMP2010版及其附錄要求進行設(shè)計，是專用于小容量注射劑非最終滅菌產(chǎn)品生產(chǎn)使用。維生素C注射液（5ml:0.5g）因無法進行F08分鐘濕熱滅菌，以達到SAL10-6，但處方可以通過微生物滯留過

3、濾器過濾，故采用除菌過濾和無菌工藝相結(jié)合的滅菌方法。 1.2培養(yǎng)基灌裝驗證是用和實際生產(chǎn)工藝相同的條件與操作方法（包括生產(chǎn)環(huán)境），向安瓿內(nèi)灌裝經(jīng)除菌過濾的培養(yǎng)基，然后將此模擬制品在適當(dāng)條件下培養(yǎng)，以確認(rèn)工藝過程的可靠性。對設(shè)備、環(huán)境以及人員操作的一種系統(tǒng)驗證，是判斷無菌保證水平的關(guān)鍵手段。在正式生產(chǎn)前必須按維生素C注射液（5ml:0.5g）生產(chǎn)工藝進行培養(yǎng)基模擬灌裝驗證。 1.3驗證次數(shù) 按2010版GMP附錄1要求,因該生產(chǎn)線為新建設(shè)施，本次為規(guī)格為5ml培養(yǎng)基模擬灌裝試驗首次驗證，故需進行連續(xù)三個批次的驗證活動。 2、驗證目的 2.1證明無菌生產(chǎn)區(qū)的設(shè)計及其設(shè)備布局，環(huán)境及衛(wèi)生狀態(tài)、人員無

4、菌操作等各方面因素均能保證產(chǎn)品的無菌性。 2.2確定生產(chǎn)最差條件下仍能保證產(chǎn)品的無菌性。 2.3通過培養(yǎng)基模擬灌裝試驗確保生產(chǎn)符合現(xiàn)行GMP法規(guī)要求。 3、驗證范圍 本驗證方案適用于小容量注射劑車間無菌灌裝生產(chǎn)線（二線）正式投入使用前培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的驗證。 4、驗證小組成員與職責(zé) 4.1驗證小組成員 部門與職務(wù) 驗證分工 簽名 日期 生產(chǎn)副總 驗證小組組長 小容量注射劑車間主任 驗證小組副組長 品管部長 組員 工程部長 組員 QC 組員 QA 組員 機修工 組員 配劑操作工 組員 洗瓶操作工 組員 灌封操作工 組員 統(tǒng)計員 組員 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 5 頁 共 28頁

5、4.2職責(zé) 驗證小組：準(zhǔn)備、檢查和實施確認(rèn)方案；設(shè)計、組織和協(xié)調(diào)驗證試驗；收集整理驗證數(shù)據(jù)，偏差處理，編寫確認(rèn)報告；再驗證周期的確定。 驗證小組組長：組織編寫驗證方案,領(lǐng)導(dǎo)協(xié)調(diào)驗證項目的實施,協(xié)調(diào)驗證小組的工作,對驗 證過程的技術(shù)負(fù)責(zé),審核批準(zhǔn)驗證方案、偏差及驗證報告。 驗證小組副組長：負(fù)責(zé)起草驗證方案,編寫驗證報告，負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)確認(rèn)方案的實施，相關(guān)操作規(guī)程的修訂，協(xié)助收集整理驗證數(shù)據(jù)，對偏差提出糾正措施建議。 品管部長：審核驗證過程的檢測數(shù)據(jù)，驗證數(shù)據(jù)的可靠性，負(fù)責(zé)驗證過程檢驗方法的確定及安排相關(guān)檢驗工作，負(fù)責(zé)簽發(fā)檢驗報告。 QA：負(fù)責(zé)驗證過程中取樣、監(jiān)控。 QC：負(fù)責(zé)微生物項目的檢測。序號 文

6、件名稱 編號 結(jié)果 01 人員進出C級潔凈區(qū)凈化更衣操作規(guī)程 SOP-SC-WS3-00100 有 無 02 人員進出A/B級潔凈區(qū)凈化更衣操作規(guī)程 SOP-SC-WS3-00200 有 無 03 物料、容器具進出C級潔凈區(qū)凈化操作規(guī)程 SOP-SC-WS3-00300 有 無 04 物料、容器具進出A/B級潔凈區(qū)凈化操作規(guī)程 SOP-SC-WS3-00400 有 無 05 稱量崗位操作規(guī)程 SOP-SC-1-01000 有 無 機修工：負(fù)責(zé)驗證過程中設(shè)備的維修，參與驗證模擬維修活動，確保設(shè)備運行正常。 配劑操作工：負(fù)責(zé)配料操作和除菌過濾操作。 洗瓶操作工：負(fù)責(zé)洗瓶和安瓿滅菌操作。 灌封操作工

7、：負(fù)責(zé)灌封操作。 統(tǒng)計員：負(fù)責(zé)驗證所需物料的領(lǐng)取工作，負(fù)責(zé)驗證資料、數(shù)據(jù)收集、記錄、整理。 5、文件資料及培訓(xùn)確認(rèn) 5.1確認(rèn)相關(guān)文件資料 06 針劑配劑崗位操作規(guī)程 SOP-SC-3-00100 有 無 07 安瓿理瓶崗位操作規(guī)程 SOP-SC-3-00200 有 無 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 6 頁 共 28頁 培訓(xùn)日期 授課人 組織部門 培訓(xùn)地點 培訓(xùn)內(nèi)容 培訓(xùn)人員 崗 位 培訓(xùn)情況 備 注 08 安瓿清洗、干燥滅菌崗位操作規(guī)程 SOP-SC-3-00300 有 無 09 B級區(qū)灌封崗位操作規(guī)程 SOP-SC-3-00400 有 無 10 燈檢崗位操作規(guī)程 SOP-SC-3

8、-00800 有 無 11 脈動真空滅菌柜的操作規(guī)程 SOP-SB-3-00300 有 無 12 配液罐操作規(guī)程 SOP-SB-3-00500 有 無 13 立式超聲波洗瓶機操作規(guī)程 SOP-SB-3-00700 有 無 14 隧道式滅菌烘箱操作規(guī)程 SOP-SB-3-00900 有 無 15 立式灌裝封口機操作規(guī)程 SOP-SB-3-01100 有 無 16 A/B級、C級潔凈區(qū)清潔消毒操作規(guī)程 SOP-SC-WS3-00500 有 無 17 A/B級、C級潔凈區(qū)容器具清潔滅菌操作規(guī)程 SOP-SC-WS3-00600 有 無 18 潔凈區(qū)衛(wèi)生潔具清潔消毒操作規(guī)程 SOP-SC-WS1-00

9、300 有 無 19 A/B級、C級潔凈工作服清潔消毒（滅菌）操作規(guī)程 SOP-SC-WS3-00700 有 無 20 過濾器清潔滅菌操作規(guī)程 SOP-SC-WS3-00800 有 無 21 立式超聲波洗瓶機清潔操作規(guī)程 SOP-SB-WS3-00100 有 無 22 隧道式滅菌烘箱清潔操作規(guī)程 SOP-SB-WS3-00200 有 無 23 立式灌裝封口機清潔操作規(guī)程 SOP-SB-WS3-00300 有 無 24 脈動真空滅菌柜清潔操作規(guī)程 SOP-SB-WS3-00400 有 無 25 配液系統(tǒng)清潔滅菌操作規(guī)程 SOP-SB-WS3-00500 有 無 檢查人 日期 5.2培訓(xùn)確認(rèn) 在進

10、行培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗驗證之前，方案起草者對所有執(zhí)行本方案人員進行了培訓(xùn)，使每個參與方案的執(zhí)行人員都理解方案內(nèi)容，具備確認(rèn)的前提條件。 培訓(xùn)結(jié)果統(tǒng)計表 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 7 頁 共 28頁 組 長 生產(chǎn)副總 合格 不合格 副組長 小容量注射劑車間主任 合格 不合格 組 員 品管部長 合格 不合格工程部長 合格 不合格QA 合格 不合格QC 合格 不合格統(tǒng)計員 合格 不合格機修工 合格 不合格崗位操作工 合格 不合格 6、編制依據(jù) 6.1藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）、附錄：無菌藥品 6.2中國藥典2010年版二部 6.3藥品GMP實施指南（無菌藥品） 7、驗證時

11、間計劃： 年 月 日至 年 月 日 8、風(fēng)險評估分析 通過風(fēng)險評估，確認(rèn)本次驗證活動需要驗證的項目 風(fēng)險描述 可能性 嚴(yán)重性 可 測 性 風(fēng)險指數(shù) 風(fēng)險控制措施 驗證項目 環(huán)境達不到相關(guān)生產(chǎn)要求 中 高 高 高 建立廠房清潔消毒規(guī)程定期環(huán)境監(jiān)測 培養(yǎng)基灌裝全程對環(huán)境進行動態(tài)監(jiān)測 人員造成污染 中 高 高 高 人員培訓(xùn)并更衣考核上崗，定期對進入無菌區(qū)人 員取樣監(jiān)控 所有相關(guān)人員，模擬生產(chǎn)實際活動后取樣，對最多允許人數(shù)進行挑戰(zhàn) 滅菌后的衣服，器具等發(fā)生二次污染 低 高 高 高 驗證滅菌后儲存方式和有效期，操作人員培訓(xùn)考核上崗，生產(chǎn)過程中進行嚴(yán)格監(jiān)控，生產(chǎn)結(jié)束后與產(chǎn)品接觸表面取樣 相關(guān)驗證操作與正常

12、生產(chǎn)一致，生產(chǎn)結(jié)束后對關(guān)鍵表面取樣，儲存方式和有效期在相關(guān)清潔滅菌驗證中完成 滅菌效果未達到 低 高 中 中 所有滅菌裝載和參數(shù)須經(jīng)過驗證，按經(jīng)驗證的操作方式滅菌 在設(shè)備驗證中完成 配液/灌封超過規(guī)定時限 低 中 低 中 工藝規(guī)程中明確規(guī)定時限 按照工藝規(guī)定工序最大時間挑戰(zhàn)進行驗證 灌封設(shè)備 故障并維修 中 中 低 中 人員培訓(xùn)，使用前通過試機，并定期設(shè)備維護保養(yǎng) 模擬維修操作進行挑戰(zhàn)驗證 過濾系統(tǒng) 有效性和污染 低 高 高 高 過濾后對除菌過濾器進行起泡點測試，使用前進行清潔和滅菌處理 在無菌過濾系統(tǒng)工藝驗證中完成，并取過濾后的藥液進行無菌檢查 取樣工具，記錄等傳入污染 中 低 高 高 所有

13、相關(guān)工具，記錄等進入無菌區(qū)隨廠房消毒，臨時需要的用75%乙醇消毒 在消毒效果驗證中完成 清潔工具和清潔消毒劑使用帶來的污染 低 高 高 高 清潔工具需滅菌，清潔劑消毒劑需除菌過濾后進入無菌區(qū) 在工器具清潔消毒效果驗證方案中完成 灌封所用安瓿造成污染 低 高 高 高 工藝規(guī)程規(guī)定安瓿的 滅菌參數(shù)和暫存時間 在洗烘線驗證中完成滅菌效果和單向流保護，動態(tài)監(jiān)測灌封前區(qū)域，對滅菌后的安瓿進行取樣 生產(chǎn)過程中異常操作造成的風(fēng)險 中 低 中 中 嚴(yán)格異常操作的要求，對于可能污染的藥品報廢處理 模擬中控，倒瓶，倒液，破瓶等情況進行挑戰(zhàn)驗證 產(chǎn)品暴露時間過長帶來的風(fēng)險 中 低 高 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證

14、方案 第 8 頁 共 28頁 序號 驗證項目 確認(rèn)結(jié)果 1 純化水系統(tǒng)確認(rèn) 合格 不合格 2 注射用水系統(tǒng)確認(rèn) 合格 不合格 3 廠房與設(shè)施（HVAC）系統(tǒng)確認(rèn) 合格 不合格 4 壓縮空氣系統(tǒng)確認(rèn) 合格 不合格 5 氮氣系統(tǒng)確認(rèn) 合格 不合格 6 小容量注射劑過濾系統(tǒng)確認(rèn) 合格 不合格 7 配液系統(tǒng)確認(rèn) 合格 不合格 8 ASMR620-48隧道式滅菌烘箱確認(rèn) 合格 不合格 9 QCL120型立式超聲波洗瓶機確認(rèn) 合格 不合格 10 AGF12立式灌裝封口機確認(rèn) 合格 不合格 11 脈動真空滅菌柜確認(rèn) 合格 不合格 12 人員進出潔凈區(qū)更衣程序確認(rèn) 合格 不合格 檢查人 日 期 低 嚴(yán)格控制

15、允許的灌封速度 挑戰(zhàn)工藝規(guī)程中允許 的最慢速度進行灌封 9、驗證內(nèi)容 9.1廠房設(shè)施、公用系統(tǒng)、關(guān)鍵設(shè)備的確認(rèn)已經(jīng)完成，并且合格。 廠房實施、公用系統(tǒng)、關(guān)鍵設(shè)備確認(rèn)一覽表 9.2進入A/B潔凈區(qū)人員資格確認(rèn) 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 9 頁 共 28頁 進入A/B潔凈區(qū)人員已按更衣程序進行確認(rèn)，并且嚴(yán)格按人員進出A/B級潔凈區(qū)凈化更衣操作規(guī)程更衣，不會對潔凈區(qū)及藥品質(zhì)量帶來不良影響， 消除了生產(chǎn)產(chǎn)品受更衣過程中人員所帶來污染的風(fēng)險，符合GMP規(guī)范要求。 進入A/B潔凈區(qū)人員資格確認(rèn) 姓名 職位 確認(rèn)情況 QA 合格 不合格 機修工 合格 不合格 灌封操作工 合格 不合格 灌封操作

16、工 合格 不合格 灌封操作工 合格 不合格 確認(rèn)人 日期 9.3驗證可接受標(biāo)準(zhǔn) 9.3.1按照藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010版附錄無菌藥品第47條相關(guān)規(guī)定：培養(yǎng)基灌 裝容器的數(shù)量應(yīng)當(dāng)足以保證評價的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應(yīng) 當(dāng)至少等于產(chǎn)品的批量。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的目標(biāo)是零污染，應(yīng)當(dāng)遵循以下要求： （一）灌裝數(shù)量少于5000支時，不得檢出污染品。 （二）灌裝數(shù)量在5000至10000支時：有1支污染，需調(diào)查，可考慮重復(fù)試驗；有2支污染，需調(diào)查后，進行再驗證。 （三）灌裝數(shù)量超過10000支時： 有1支污染，需調(diào)查；有2支污染，需調(diào)查后，進行再驗證。 （四）發(fā)生任何微生物污染時，均

17、應(yīng)當(dāng)進行調(diào)查。 9.3.2綜合上述標(biāo)準(zhǔn)，本次驗證數(shù)量定在8000-12000支之間，灌裝量為5ml，且其污染數(shù) 不得超過1支。 9.4驗證活動準(zhǔn)備工作 9.4.1培養(yǎng)基準(zhǔn)備 經(jīng)確認(rèn)合格的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)250g×20瓶，經(jīng)濕熱滅菌并用橡膠塞封口的無菌取樣試管9支，接觸碟60個，沉降菌培養(yǎng)皿15個，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌等各類菌種，經(jīng)滅菌的具塞三角瓶6個。 9.4.2工器具滅菌和準(zhǔn)備 將模擬灌裝活動中需要用到的生產(chǎn)工器具、潔凈服和設(shè)備提前一天進行滅菌，按相關(guān)SOP要求儲存，將需要使用的消毒劑提前一天進行無菌過濾準(zhǔn)備，將無菌操作區(qū)提前一天按清潔SOP要求

18、進行清潔消毒。 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 10 頁 共 28頁 9.5配料：按針劑配劑崗位操作規(guī)程操作，取適量（約20kg）注射用水，加入已清潔滅菌的稀配罐中，注射用水溫度冷卻至20-25，另取注射用水約3kg，加入已清潔滅菌的不銹鋼容器中，再緩緩加入胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)1650g攪拌使其溶解加入稀配罐內(nèi)，再補加注射用水至55kg，攪拌20分鐘使溶成均勻溶液。QA人員在稀配室取樣口用2個滅菌的具塞三角瓶分別取樣50ml，蓋塞，包好在瓶身標(biāo)明取樣位置、取樣數(shù)量、取樣時間和樣品名稱后送化驗室檢測微生物。 9.6除菌過濾 用經(jīng)滅菌的0.22m聚醚砜除菌過濾器，過濾上述培養(yǎng)基

19、溶液，在A級層流保護下，取經(jīng)除菌過濾的培養(yǎng)基200ml分裝于9支10ml的無菌試管和4個無菌三角瓶中，蓋塞，包好送化驗室進行培養(yǎng)基的微生物生長實驗和培養(yǎng)基無菌性檢查。 9.7洗烘瓶灌封 按安瓿清洗、干燥滅菌崗位操作規(guī)程進行洗瓶。將經(jīng)隧道烘箱滅菌合格的安瓿送入灌裝線，按灌封崗位操作規(guī)程、立式灌裝封口機操作規(guī)程開啟灌裝機，在與實際生產(chǎn)環(huán)境相同的條件下，將過濾后的培養(yǎng)基溶液灌入安瓿內(nèi)，并封口，調(diào)節(jié)裝量為5ml支，用潔凈區(qū)無菌空氣代替惰性氣體。無菌灌裝最長時間9小時（根據(jù)生產(chǎn)工藝規(guī)程制定）。全過程設(shè)備慢速運行（灌裝速度80-100支/分鐘）增加灌裝時間，增大受污染的幾率。灌裝設(shè)置前中后三個階段，每個階

20、段約灌裝3500支，其余時間設(shè)備正常運行(不走瓶)，灌封完的樣品通過傳送帶及時傳出無菌區(qū)，每灌封一盤及時記錄好灌封時間和盤號放在裝中間產(chǎn)品的盤內(nèi)。 9.7.1最差灌裝條件的模擬 9.7.1.1設(shè)備模擬維修 在灌封正常運行過程中，停灌30分鐘，進行設(shè)備模擬維修，保持現(xiàn)有人員在操作間內(nèi)，維修結(jié)束按立式灌裝封口機清潔操作規(guī)程的清潔SOP清潔消毒，標(biāo)記設(shè)備再次運行灌裝的樣品（約800支），并在記錄上做好備注。 9.7.1.2模擬現(xiàn)場人員最大控制數(shù) 根據(jù)無菌灌封室正常生產(chǎn)最多人數(shù)控制，在灌裝正常運行過程中，模擬現(xiàn)場允許進入5人，標(biāo)記該過程中生產(chǎn)出的樣品（約800支），并在記錄上做好備注。 9.7.1.3

21、模擬灌裝針/管調(diào)整、更換 在灌裝正常運行過程中，進行緊急停機，模擬調(diào)整、更換灌裝針/管2支或以上，標(biāo)記更換針/管后灌裝的樣品（約800支），并在記錄上做好備注。 9.7.1.4模擬空瓶倒瓶、破瓶 在灌裝正常運行過程中，模擬倒瓶，破瓶情況，停灌處理，處理結(jié)束后繼續(xù)灌裝，標(biāo)記此后灌裝的樣品（約800支），并在記錄上做好備注。 9.7.1.5模擬抽樣處理的過程 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 11 頁 共 28頁 在灌裝正常運行過程中，模擬三次抽樣測定可見異物和裝量的過程，標(biāo)記抽樣過程中進行灌封的樣品（約800支），并在記錄中做好備注。 9.7.2灌裝過程的動態(tài)監(jiān)測 潔凈區(qū)對動態(tài)的空氣懸浮粒

22、子的標(biāo)準(zhǔn) 潔凈度級別 動態(tài)懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米 0.5um 5.0um A級 3520 20 B級 352000 2900 潔凈級別 浮游菌 cfu/m3 沉降菌（?90mm） cfu /4小時 表面微生物 接觸（?55mm） cfu /碟 5指手套 cfu /手套 A級 ?1 1 1 1 B級 10 5 5 5 潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)如下 9.7.2.1人員表面微生物取樣：對進入灌裝區(qū)域的所有人員離開無菌區(qū)前進行不少于5 個位置的用接觸碟進行表面微生物取樣，取樣部位：口罩、帽兜額頭處、袖口、胸口（拉鏈中心位置）、前臂、手套。 9.7.2.2沉降菌的動態(tài)監(jiān)測：灌裝全過程中應(yīng)對灌裝A級

23、區(qū)和灌封室進行全程動態(tài)沉降菌監(jiān)測，每過4h更換取樣碟，取樣位置設(shè)為灌裝針頭處、出瓶口處、灌封室。 9.7.2.3對A級灌裝區(qū)和灌封室懸浮粒子的全程動態(tài)監(jiān)測。 9.7.2.4對A級灌裝區(qū)域的動態(tài)浮游菌取樣：灌封過程中選定灌裝針頭處每4小時進行浮游 菌取樣檢測一次，B級區(qū)每班檢測一次。 9.7.2.5操作完成后對關(guān)鍵設(shè)備表面取樣：相關(guān)操作程序結(jié)束后，對關(guān)鍵設(shè)備表面用滅菌的0.9%氯化鈉溶液潤濕棉球（棉簽），然后用棉球（棉簽）擦拭以下各點，取樣面積為5 cm×5cm /個，再棉球放入20ml滅菌的0.9%氯化鈉溶液中，充分振搖，再按薄膜過濾法進行微生物檢查。以排除設(shè)備污染，取樣部位包括：A

24、 級安瓿轉(zhuǎn)盤、 A 級操作臺面、B級傳送帶表面，B級灌裝間墻面。 9.7.2.6對安瓿的取樣：在驗證過程的前、中、后期用滅菌的鑷子在隧道烘箱出瓶口處隨機抽取安瓿2支×2，分別裝入足量已滅菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基與改良馬丁培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)，用硅膠塞蓋住，立即送化驗室按無菌檢測操作規(guī)程進行無菌檢測，分別在23-28與30-35培養(yǎng)14天，要求無菌生長。 9.8燈檢檢查 將已灌封完畢的產(chǎn)品傳入燈檢區(qū)域，翻轉(zhuǎn)三次確保培養(yǎng)基與包材內(nèi)壁充分接觸，剔除破 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 12 頁 共 28頁 瓶，將其余產(chǎn)品按原灌裝盤號分別裝盤送培養(yǎng)區(qū)域，每盤內(nèi)放入原灌封物料標(biāo)簽和燈檢合格數(shù)量

25、。 9.9培養(yǎng)基無菌性檢查 9.9.1方法：將除菌過濾后的培養(yǎng)基裝于4個無菌三角瓶中，其中2個三角瓶在2328 培養(yǎng)14天；另2個三角瓶在3035培養(yǎng)14天。 9.9.1.2可接受標(biāo)準(zhǔn)：4個三角瓶中的培養(yǎng)基在14天內(nèi)應(yīng)無任何微生物生長。 9.9.2培養(yǎng)基的微生物生長試驗： 9.9.2.1方法：質(zhì)檢中心QC人員將QA所取的9支樣品，在2支10ml試管中接種枯草芽 孢桿菌，接種量100cfu/管，另取一支作為空白對照；在2支10ml試管中接種白色念珠菌，接種量100cfu/管，另取一支作為空白對照。在2支10ml試管中接種金黃色葡萄球菌，接種量100cfu/管，另取一支作為空白對照。接種后蓋塞、封

26、口并分別在3035（金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌）和2328（白色念珠菌）培養(yǎng) 72小時。 9.9.2.2可接受標(biāo)準(zhǔn)：72小時內(nèi)接種各試管的TSB培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯渾濁現(xiàn)象，且空白 對照管應(yīng)澄清則判定該培養(yǎng)基微生物性能生長試驗符合要求。 9.10微生物培養(yǎng) 9.10.1將燈檢完的產(chǎn)品先放置在23-28環(huán)境內(nèi)培養(yǎng)7天，其后轉(zhuǎn)入30-35環(huán)境中內(nèi)培養(yǎng)7天，期間每天觀察并統(tǒng)計污染數(shù)。 9.10.2培養(yǎng)基陽性對照試驗 因培養(yǎng)基灌裝過程中，所有樣品無菌過濾后進行了時限儲存操作，為確保這些操作不影響培養(yǎng)基的促生長性，故從燈檢完產(chǎn)品抽取30支進行樣品陽性對照試驗，分為3組，每組10支，其中一組接種大腸埃希菌（

27、30-35培養(yǎng)），一組接種金黃色葡萄球菌（30-35培養(yǎng)），一組接種白色念珠菌（23-28培養(yǎng)），接種濃度均小于100cfu/支，分別在相應(yīng)溫度下培養(yǎng)72小時。接種安瓿培養(yǎng)基中應(yīng)有明顯的接種微生物生長。 9.11潔凈工作服及工器具轉(zhuǎn)運方法驗證 已滅菌的工衣，在層流保護下裝入滅菌過的潔凈袋內(nèi)標(biāo)識后，送至三更；器具、維修工具通過脈動真空滅菌柜滅菌后轉(zhuǎn)入到B級區(qū)，取樣方法潔凈服內(nèi)袋、灌注針頭、活塞用接觸法取樣，維修工具、緩沖瓶外壁用測試法取樣。 9.12 生產(chǎn)結(jié)束配液系統(tǒng)按配液系統(tǒng)清潔滅菌操作規(guī)程清潔，取終洗水檢測PH、電導(dǎo)率、TOC，微生物限度。 可接受標(biāo)準(zhǔn)：PH：5.0-7.0電導(dǎo)率：1.0s/

28、 cm（溫度25）TOC：0.50mg/L 微生物限度：5cfu/100ml 9.13檢驗記錄 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 13 頁 共 28頁 潔凈區(qū)潔凈服檢測記錄（一） 培養(yǎng)基灌封驗證批號 規(guī)格 生產(chǎn)日期 人員姓名 取樣部位 左手指 右手指 帽兜額頭處 口 罩 胸口（拉鏈中心位置） 左前臂 右前臂 左袖口 右袖口 取樣人 日 期 檢驗人 日 期 復(fù)核人 日 期 潔凈區(qū)潔凈服檢測記錄（二）培養(yǎng)基灌封驗證批號 規(guī)格 生產(chǎn)日期 人員姓名 取樣部位 左手指 右手指 帽兜額頭處 口 罩 胸口（拉鏈中心位置） 左前臂 右前臂 左袖口 右袖口 取樣人 日 期 檢驗人 日 期 復(fù)核人 日 期

29、培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 14 頁 共 28頁 潔凈區(qū)潔凈服檢測記錄（三） 培養(yǎng)基灌封驗證批號 規(guī)格 生產(chǎn)日期 人員姓名 取樣部位 左手指 右手指 帽兜額頭處 口 罩 胸口（拉鏈中心位置） 左前臂 右前臂 左袖口 右袖口 取樣人 日 期 培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 開始時間 結(jié)束時間 位置 沉降菌標(biāo)準(zhǔn) (CFU/4小時) 實測結(jié)果 結(jié) 論 出瓶口 1 灌封段 1 出瓶口 1 灌封段 1 灌封室1 5 灌封室2 5 灌封室1 5 灌封室2 5 取樣人 日 期 檢測人 日 期 檢驗人 日 期 復(fù)核人 日 期 沉降菌動態(tài)監(jiān)測記錄（一） 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 15 頁

30、 共 28頁 沉降菌動態(tài)監(jiān)測記錄（二） 培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 開始時間 結(jié)束時間 位置 沉降菌標(biāo)準(zhǔn) (CFU/4小時) 實測結(jié)果 結(jié) 論 出瓶口 1 灌封段 1 出瓶口 1 灌封段 1 灌封室1 5 灌封室2 5 灌封室1 5 灌封室2 5 取樣人 日 期 檢測人 日 期 沉降菌動態(tài)監(jiān)測記錄（三）培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 開始時間 結(jié)束時間 位置 沉降菌標(biāo)準(zhǔn) (CFU/4小時) 實測結(jié)果 結(jié) 論 出瓶口 1 灌封段 1 出瓶口 1 灌封段 1 灌封室1 5 灌封室2 5 灌封室1 5 灌封室2 5 取樣人 日 期 檢測人 日 期 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 16 頁 共

31、 28頁 浮游菌動態(tài)檢測記錄（一） 培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 級別 開始時間 結(jié)束時間 標(biāo)準(zhǔn)浮游菌（cfu/m3） 實測結(jié)果 結(jié) 論 A級 1 1 B級 10 取樣人 日 期 檢測人 日 期 浮游菌動態(tài)檢測記錄（二）培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 級別 開始時間 結(jié)束時間 標(biāo)準(zhǔn)浮游菌（cfu/m3） 實測結(jié)果 結(jié) 論 A級 1 1 B級 10 取樣人 日 期 檢測人 日 期 浮游菌動態(tài)檢測記錄（三）培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 級別 開始時間 結(jié)束時間 標(biāo)準(zhǔn)浮游菌（cfu/m3） 實測結(jié)果 結(jié) 論 A級 1 1 B級 10 取樣人 日 期 檢測人 日 期 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案

32、第 17 頁 共 28頁 設(shè)備表面微生物檢測記錄（一） 培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 取樣部位 合格標(biāo)準(zhǔn)（CFU/25cm2） 實測結(jié)果 結(jié) 論 A 級安瓿轉(zhuǎn)盤 1 A 級操作臺面 1 B級傳送帶表面 5 B級灌裝間墻面 5 取樣人 日 期 檢測人 日 期 設(shè)備表面微生物檢測記錄（二）培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 取樣部位 合格標(biāo)準(zhǔn)（CFU/25cm2） 實測結(jié)果 結(jié) 論 A 級安瓿轉(zhuǎn)盤 1 A 級操作臺面 1 B級傳送帶表面 5 B級灌裝間墻面 5 取樣人 日 期 檢測人 日 期 設(shè)備表面微生物檢測記錄（三）培養(yǎng)基批號 規(guī) 格 生產(chǎn)日期 取樣部位 合格標(biāo)準(zhǔn)（CFU/25cm2） 實測結(jié)果 結(jié)

33、 論 A 級安瓿轉(zhuǎn)盤 1 A 級操作臺面 1 B級傳送帶表面 5 B級灌裝間墻面 5 取樣人 日 期 檢測人 日 期 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 18 頁 共 28頁 TSB培養(yǎng)基過濾前微生物限度檢查（一） 培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日期 試驗方法 將 ml的TSB分別在2328培養(yǎng)120h，在3035培養(yǎng)72h，觀察培養(yǎng)基是否渾濁。 培養(yǎng)時間 24h 48h 72h 96h 120h 23-28培養(yǎng) 30-35培養(yǎng) 備注 (打“-”表示不長菌，打“+”表示長菌) 結(jié)論 合格 不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 TSB培養(yǎng)基過濾前微生物限度檢查（二）培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日

34、期 試驗方法 將 ml的TSB分別在2328培養(yǎng)120h，在3035培養(yǎng)72h，觀察培養(yǎng)基是否渾濁。 培養(yǎng)時間 24h 48h 72h 96h 120h 23-28培養(yǎng) 30-35培養(yǎng) 備注 (打“-”表示不長菌，打“+”表示長菌) 結(jié)論 合格 不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 TSB培養(yǎng)基過濾前微生物限度檢查（三）培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日期 試驗方法 將 ml的TSB分別在2328培養(yǎng)120h，在3035培養(yǎng)72h，觀察培養(yǎng)基是否渾濁。 培養(yǎng)時間 24h 48h 72h 96h 120h 23-28培養(yǎng) 30-35培養(yǎng) 備注 (打“-”表示不長菌，打“+”表示長菌) 結(jié)論 合格

35、不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 19 頁 共 28頁 TSB培養(yǎng)基無菌性檢查記錄（一） 培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日期 培養(yǎng)天數(shù) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 23-28培養(yǎng) 30-35培養(yǎng) 備注 (打“-”表示不長菌，打“+”表示長菌) 結(jié)論 合格（培養(yǎng)14天后均無任何微生物生長） 不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 TSB培養(yǎng)基無菌性檢查記錄（二）培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日期 培養(yǎng)天數(shù) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 23-28培養(yǎng) 30-35培養(yǎng) 備注 (打“-

36、”表示不長菌，打“+”表示長菌) 結(jié)論 合格（培養(yǎng)14天后均無任何微生物生長） 不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 TSB培養(yǎng)基無菌性檢查記錄（三）培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日期 培養(yǎng)天數(shù) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 23-28培養(yǎng) 30-35培養(yǎng) 備注 (打“-”表示不長菌，打“+”表示長菌) 結(jié)論 合格（培養(yǎng)14天后均無任何微生物生長） 不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 20 頁 共 28頁 培養(yǎng)基微生物生長試驗（一） 培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日期 菌種名稱 菌種信息 培養(yǎng)條件 試管1 試管2 空

37、白 結(jié)論 大腸埃希菌 白色念珠菌 金黃色葡萄球菌 備注 “+”表示陽性，“-”表示陰性 結(jié)論 合格（所有接種管出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長，空白管顯陰性） 不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 培養(yǎng)基微生物生長試驗（二）培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日期 菌種名稱 菌種信息 培養(yǎng)條件 試管1 試管2 空白 結(jié)論 大腸埃希菌 白色念珠菌 金黃色葡萄球菌 備注 “+”表示陽性，“-”表示陰性 結(jié)論 合格（所有接種管出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長，空白管顯陰性） 不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 培養(yǎng)基微生物生長試驗（三）培養(yǎng)基灌封驗證批號 生產(chǎn)日期 菌種名稱 菌種信息 培養(yǎng)條件 試管1 試管2 空白 結(jié)論 大腸埃希菌 白色念珠菌 金黃色葡萄球菌 備注 “+”表示陽性，“-”表示陰性 結(jié)論 合格（所有接種管出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長，空白管顯陰性） 不合格 檢驗人 檢驗日期 復(fù)核人 復(fù)核日期 培養(yǎng)基模擬灌裝無菌生產(chǎn)工藝驗證方案 第 21 頁 共 28頁 安瓿無菌檢查記錄（一） 培養(yǎng)條件：將三角瓶分別在至23-28與30-35培養(yǎng)14天。 培養(yǎng)觀察（天） 硫乙醇酸鹽流體培