1、食品分析食品分析2一、維生素的分類二、各種維生素 的測定方法3維生素是是人體生長、發(fā)育、生殖及維持生理機(jī)能所必須的營養(yǎng)素。它主要是調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝，許多種維生素是構(gòu)成輔酶的主要成分，在調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝方面具有十分重要的作用。主要有維生素A、維生素D、維生素E及維生素K。主要有B 族維生素及維生素C。機(jī)體內(nèi)存在的一些具有類似維生素生物活性的物質(zhì)，它們列為復(fù)合維生素B 族這一類中，通常稱它們?yōu)椤邦惥S生素物質(zhì)”。包括：膽堿、生物類黃酮（維生素P）、輔酶Q（泛醌）、肌醇等。4 維生素是維持人體正常生命活動所必需的一類天然有機(jī)化合物。其種類很多，目前已確認(rèn)的有30余種，其中被認(rèn)為對維持人體健康和促進(jìn)發(fā)育至關(guān)重要

2、的有20余種。必須經(jīng)常從食物中攝取維生素；長期缺乏任何一種維生素都會導(dǎo)致相應(yīng)的疾病。近幾年已經(jīng)查明僅有少數(shù)幾種維生素可以在體內(nèi)合成，大多數(shù)維生素都必須由食物供給。（一）概述5 因此，維生素作為強(qiáng)化劑已在食品工業(yè)的某些產(chǎn)品中開始使用，測定食品中的維生素含量，不僅可評價(jià)食品的營養(yǎng)價(jià)值，同時(shí)還起到監(jiān)督維生素強(qiáng)化食品的劑量，以防攝入過多的維生素而引起中毒，所以，測定食品中維生素在營養(yǎng)分析方面具有重要的意義。（一）概述6 維生素化學(xué)結(jié)構(gòu)各異，生理功能也各不相同，化學(xué)結(jié)構(gòu)上沒有共性。胺類（VB1）醛類（VB6）醇類（VA）等（一）概述維生素維生素水溶性維生素水溶性維生素脂溶性維生素脂溶性維生素維生素維生素

3、B、C等等維生素維生素A、D、E、K7 在這二類中與我們最密切，而且了解最多的有：維生素A：是人體必需營養(yǎng)素，能促進(jìn)人體發(fā)育，防止眼膜炎、夜盲癥等疾病。維生素B1：也叫硫胺素，對人體的功能主要是防腳氣病、神經(jīng)炎，幫助消化，促進(jìn)發(fā)育。維生素B2：對人體功能防口角炎、皮膚炎，防止怕光現(xiàn)象。維生素C：防壞血病，促進(jìn)外傷愈合，使機(jī)體增強(qiáng)抵抗力。維生素D：調(diào)節(jié)體內(nèi)礦物鹽的平衡，特別是對人體內(nèi)鈣、磷的代謝，并能防止軟骨病。（一）概述8VA：胡蘿卜、西紅柿、紅薯等；B1（硫胺素）：胚芽、米糠、麩皮等；B2（核黃素）：動物肝臟、雞蛋、牛奶；B12：只有肉類食品還有這種維生素；VC（抗壞血酸）: 各種新鮮蔬菜，

4、新鮮水果等；VE: 麥胚油、玉米油、芝麻油、豆類等。（二）富含維生素的食品9 VA、VD、VE、與類脂物一起存于食物中，攝食時(shí)可吸收，可在體內(nèi)積貯。脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)：溶解性：脂溶性維生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。耐酸堿性：維生素A、D對酸不穩(wěn)定， 對堿穩(wěn)定，維生素E對堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。（二）脂溶性V的測定10 3耐熱性、耐氧化性： 耐熱性 氧化性VA 好，能經(jīng)受煮沸 易被氧化（光、熱促進(jìn)其氧化）VD 好，能經(jīng)受煮沸 不易被氧化VE 好，能經(jīng)受煮沸 在空氣中能慢慢被 （光、熱、堿促進(jìn)其氧化）（二）脂溶性V

5、的測定11根據(jù)上述性質(zhì)，測定脂溶性維生素時(shí)，通常： 皂化樣品 水洗去除類脂物 有機(jī)溶劑提取脂溶性維生素(不皂化物) 濃縮 溶于適當(dāng)?shù)娜軇?測定。 在皂化和濃縮時(shí)，為防止維生素的氧化分解，常加入抗氧化劑(如焦性沒食子酸、維生素C等)。 對于A、D、E共存的樣品，或雜質(zhì)含量高的樣品，在皂化提取后，還需進(jìn)行層析分離。（二）脂溶性V的測定12結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定CH3CH3CH3CH2ORCH3CH3RH 維生素維生素A醇醇RCOCH3 維生素維生素A醋酸酯醋酸酯 維生素ACH2ORCH3CH3CH3CH3CH3環(huán)己烯環(huán)己烯共軛多共軛多烯側(cè)鏈烯側(cè)鏈多異構(gòu)體

6、多異構(gòu)體UV易被氧化易被氧化結(jié)構(gòu)分析結(jié)構(gòu)分析共軛多烯結(jié)構(gòu)：具有紫外吸收，可采用紫外吸收光譜法進(jìn)行鑒別，采用紫外分光光度法進(jìn)行含量測定。天然維生素A是全反式維生素A。結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系 維生素A含量測定方法有三氯化銻比色法、紫外分光光度法、熒光分析法、液相色譜法。紫外分光光度法是法定方法。三氯化銻比色法多用于食品或飼料中的維生素A的測定。 （二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定維生素A（1）三氯化銻比色法（GB/T 5009.82-2003）原理 （二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定氯仿溶液中氯仿溶液中維生素A+三氯化銻蘭色可溶性配合物620nm波長比色（1）三氯化銻比色法（GB/T

7、 5009.82-2003）適用范圍及特點(diǎn) 本法適用于維生素A含量較高的各種樣品（含量高于510g/g）。 該法的主要缺點(diǎn)是生成的藍(lán)色配合物的穩(wěn)定性差，比色測定必須在6S內(nèi)完成，否則藍(lán)色會迅速消退，將造成極大誤差。（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定（1）三氯化銻比色法（GB/T 5009.82-2003）試劑無水硫酸鈉、乙酸酐無水乙醚（不含過氧化物）無水乙醇（不含醛類物質(zhì)）三氯甲烷（不含分解物和水）250g/L三氯化銻三氯甲烷溶液1:1氫氧化鈉溶液、0.5mol/L氫氧化鉀（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定（1）三氯化銻比色法（GB/T 5009.82-2003）測定步驟：樣品預(yù)處理含

8、有維生素A的樣品大多需首先除去脂肪，把維生素A從脂肪中分離出來。常規(guī)的去脂方法是采用皂化法和研磨法。（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理樣品測定樣品測定A、皂化法（皂化反應(yīng)是堿催化下的酯水解反應(yīng)，尤指油脂的水解 ）:脂肪與VA分離原理：脂肪和植物油的主要成分是甘油三酯，它們在堿性條件下水解的方程式為： （二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定適用于維生素適用于維生素A含量不高的樣品，但全部試驗(yàn)過程費(fèi)時(shí)，且易導(dǎo)致維生素含量不高的樣品，但全部試驗(yàn)過程費(fèi)時(shí)，且易導(dǎo)致維生素A的損失。的損失。u皂化 稱取0.55g經(jīng)組織搗碎機(jī)搗碎或充分混勻的樣品于三角瓶中，加入l0ml 1：1氫氧化

9、鉀及2040ml乙醇，在電熱板上回流30min。加入10m1水，稍稍振搖,若無渾濁現(xiàn)象，表示皂化完全。u提取 將皂化液移入分液漏斗，先用30ml水分兩次沖洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗。再用 50ml乙醚分兩次沖洗皂化瓶，所有洗液并入分液漏斗，振搖2min，提取不皂化部分。（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定 靜止分層后，水層放入第二分液漏斗。皂化瓶再用 30ml乙醚分兩次沖洗，洗液傾入第二分液漏斗，振搖后靜止分層，將水層放入三角瓶，醚層并入第一分液漏斗。如此重復(fù)操作，直至醚層不再使三氯化銻一三氯甲烷溶液呈藍(lán)色為止。u洗滌 在第一分液漏斗中加30ml水，輕輕振搖，靜止片刻后，放出水層。再加入15

10、20ml 0.5mol/L的氫氧化鉀溶液，輕輕振搖后，棄去下層堿液（除去醚溶性酸皂），繼續(xù)用水洗滌，至水洗液不再使酚酞變紅為止。醚液靜置10 20min后，小心放掉析出的水。（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定u濃縮 將醚層液經(jīng)過無水硫酸鈉濾入三角瓶中，再用約25ml乙醚沖洗分液漏斗和硫酸鈉兩次，洗液并入三角瓶內(nèi)。用水浴蒸餾，回收乙醚。待瓶中剩約5ml乙醚時(shí)取下。減壓抽干，立即準(zhǔn)確加入一定量三氯甲烷（約5ml左右），使溶液中維生素A含量在適宜濃度范圍內(nèi)(35g）。（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定B、研磨法 適用于每克樣品維生素A的含量大于510g樣品的測定，如豬肝的分析。步驟簡單、省時(shí)

11、，結(jié)果準(zhǔn)確。u研磨 精確稱取25g樣品，放入盛有35 倍樣品質(zhì)量的無水硫酸鈉研缽中，研磨至樣品中水分完全被吸收，并均質(zhì)化。u提取 小心地將全部均質(zhì)化的樣品移入帶蓋的三角瓶內(nèi)，準(zhǔn)確加入50100ml乙醚。緊壓蓋子，用力振搖2min；靜置澄清（大約需12 h），或離心澄清（保持低溫）。（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定u濃縮 取澄清提取乙醚液25m1，放入比色管中，在7080水浴上抽氣蒸干；然后立即加入lml三氯甲烷溶解殘?jiān)?。（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定6個3cm比色管編號 1 2 3 4 5 6加各種濃度VA標(biāo)液1ml 10 20

12、 30 40 50 60 ug/ml乙酸酐d 1 1 1 1 1 1 于620nm波長處，以 10ml三氯甲烷加 1滴乙酸酐調(diào)節(jié)吸光度至零點(diǎn)；然后將標(biāo)準(zhǔn)比色系列按順序移入光路前，迅速加入9ml三氯化銻一三氯甲烷溶液，于6s內(nèi)測定吸光度（每支比色管都在臨測前加入顯色劑）。以維生素A含量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制曲線。 計(jì)算（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定式中 -維生素A含量； c-由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品溶液中維生素A的含量，g/ml； c0-由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品空白液中維生素A的含量，g/ml； m-樣品質(zhì)量，g； V-樣品提取后加入三氯甲烷定容之體積，ml； 100-以每100g樣品計(jì)

13、。100-=0Vmccx 說明及討論（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定維生素A極易被光破壞，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在微弱光線下進(jìn)行，或使用棕色玻璃儀器。 乙醚為溶劑的萃取體系，易發(fā)生乳化現(xiàn)象。在提取、洗滌操作中，不要用力過猛，若發(fā)生乳化，可加幾滴乙醇破乳。所用氯仿中不應(yīng)含有水分,因三氯化銻遇水會出現(xiàn)沉淀，干擾比色測定。故在每毫升氯仿中應(yīng)加入乙酸酐1滴，以保證脫水。另外，由于三氯化銻遇水生成白色沉淀，因此用過的儀器要用稀鹽酸浸泡后再清洗。 說明及討論（二）脂溶性V的測定1.維生素A的測定由于三氯化銻與維生素A所產(chǎn)生的藍(lán)色物質(zhì)很不穩(wěn)定，通常生成6S后便開始比色，產(chǎn)生藍(lán)色后立即讀取吸光度。如果樣品中含-胡蘿

14、卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干擾測定，可將濃縮蒸干的樣品用正己烷溶解，以氧化鋁為吸附劑，丙酮、乙烷混合液為洗脫劑進(jìn)行柱層析。 （三）水溶性維生素的測定 水溶性維生素B1、B2和C，廣泛存在于動植物組織中，飲食來源充足。但是由于它們本身的水溶性質(zhì)，除滿足人體生理、生化作用外，任何多余量都會從小便中排出。為避免耗盡，需要經(jīng)常地由飲食來提供。 水溶性維生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多數(shù)有機(jī)溶劑。在酸性介質(zhì)中很穩(wěn)定，既使加熱也不破壞；但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定，易于分解，持別在堿性條件下加熱，可大部或全部破壞。它們易受空氣、光、熱、酶、金屬離子等的影響； 維生素B2對光，特別是紫外線敏感，易被光線

15、破壞； 維生素C對氧、銅離子敏感，易被氧化。（三）水溶性維生素的測定根據(jù)上述性質(zhì)，測定水溶性維生素時(shí)，一般都在酸性溶液中進(jìn)行前處理。 維生素Bl、B2 鹽酸水解 酶解 提取 純化 維生素C通常采用草酸、草酸醋酸、偏磷酸醋酸溶液直接提取。在一定濃度的酸性介質(zhì)中，可以消除某些還原性雜質(zhì)對維生素C的破壞作用。草酸價(jià)廉，使用方便，對維生素C有很好保護(hù)作用。淀粉酶、淀粉酶、木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶活性人造浮石、活性人造浮石、硅鎂吸附劑硅鎂吸附劑（三）水溶性維生素的測定 維生素C是一種己糖醛基酸，有抗壞血病的作用，所以又稱作抗壞血酸。維生素C廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉

16、、獼猴桃、柑桔等食品中含量尤豐富。 維生素C具有較強(qiáng)的還原性，對光敏感，氧化后的產(chǎn)物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活性。進(jìn)一步水解則生成2，3 -二酮古樂糖酸，失去生理作用。1.維生素C的測定（三）水溶性維生素的測定 維生素C具有烯二醇結(jié)構(gòu)，具有較強(qiáng)的還原性，可發(fā)生氧化還原反應(yīng)；對光敏感，氧化后的產(chǎn)物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活性。進(jìn)一步水解則生成2，3 -二酮古樂糖酸，失去生理作用。 與糖類似的結(jié)構(gòu)：具有糖類似的性質(zhì)和反應(yīng)，可用于鑒別。 1.維生素C的測定OHOHOHOHOHO（三）水溶性維生素的測定 總維生素C包括：還原型、脫氫型及二酮古樂糖酸。 維生素C常用的測定方法有1.維生素C的

17、測定測測定定方方法法 二氯靛酚法（還原型二氯靛酚法（還原型V VC C） 熒光法熒光法2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （總（總V VC C）碘酸法碘酸法 碘量法碘量法 （三）水溶性維生素的測定（一）二氯靛酚法（測定還原型抗壞血酸， GB/T 619586 ）原理1.維生素C的測定還原型還原型抗壞血酸抗壞血酸還原型還原型2，6-二二氯靛酚氯靛酚（無色）（無色）H H+ +2，6-二氯靛二氯靛酚（粉紅色）酚（粉紅色）+脫氫型脫氫型抗壞血酸抗壞血酸+ 還原型抗壞血酸可以還原染料2，6-二氯靛酚。該染料在酸性溶液中呈粉紅色(在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色)，被還原后顏色消失。 還原型抗壞血酸還原染

18、料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時(shí)，一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)染料液的量，與樣品中抗杯血酸含量成正比。（三）水溶性維生素的測定 試劑1.維生素C的測定（1）2%草酸溶液（2）0.000167mol/L KIO3標(biāo)液（3）1%淀粉溶液；（4）6%KI溶液； 088. 0=21VVTC6H8O6I2= C6H6O62HI3(-)+5 I(-)+6 H(+)=3 I2+3 H2O （5）抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/ml)需標(biāo)定標(biāo)定：吸標(biāo)液（VC）5ml于三角瓶加6%KI溶液0.5ml加1%淀粉3滴用0.00167mol/L KIO3標(biāo)液滴定到淡蘭色。二氯靛酚法（三）水溶性維生素的測定 試

19、劑1.維生素C的測定（6）0.02%2，6二氯靛酚溶液 標(biāo)定：吸5ml已知濃度V C標(biāo)液 加5ml 1%草酸 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉紅色，在15秒不褪色為終點(diǎn)。 計(jì)算：每毫升2，6-二氯靛酚相當(dāng)于維生素C的毫克數(shù)等于滴定度（T）21=VVCT二氯靛酚法（三）水溶性維生素的測定 測定步驟1.維生素C的測定樣品樣品還原型還原型VcVc的提取的提取還原型還原型VcVc的測定的測定（1）提取 鮮樣的提取：稱100g鮮樣加等量1%草酸溶液，倒入搗碎機(jī)中打成勻漿，取10-40g勻漿（含1-2 mg抗壞血酸）倒入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液稀釋定容，混勻。 干樣的制備：稱1-4g （含1

20、-2 mg抗壞血酸）放入研缽內(nèi)，加入1%草酸溶液磨成勻漿，用草酸溶液定容到100ml。 上述溶液若顏色深，可加入白陶土，將上述溶液過濾，濾液備用。二氯靛酚法（三）水溶性維生素的測定 測定步驟1.維生素C的測定（2）滴定 吸取5-10ml濾液，置于50ml三角瓶，快速加入2,6二氯靛酚溶液滴定，直到紅色不能立即消失，而后再盡快，逐滴加入，以呈現(xiàn)的粉紅色在15秒內(nèi)不消失為終點(diǎn)。二氯靛酚法（三）水溶性維生素的測定 計(jì)算1.維生素C的測定V -消耗染料體積（ml）V0-滴定空白時(shí)所消耗的燃料的體積（ml）T -1ml染料所能氧化維生素C的毫克數(shù) 含有樣品的克數(shù)M-滴定時(shí)所取濾液中含樣品重量，g100)

21、-(=)100/0MTVVgmgC（維生素二氯靛酚法（三）水溶性維生素的測定 說明及注意事項(xiàng)1.維生素C的測定（1）樣品采取后，應(yīng)浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止維生素C氧化損失，測定過程要迅速。（2）若樣品濾液顏色較深，可加入白陶土再過濾。不能使用活性碳進(jìn)行脫色處理，因?yàn)榛钚蕴紩趸S生素C，同時(shí)還會吸附維生素C。（3）貯存過久的罐頭食品，可能含大量的Fe2+，要用8%的醋酸代替2%草酸。 （4）本法適用于果品、蔬菜及其加工制品中還原型抗壞血酸的測定（不含二價(jià)鐵、二價(jià)錫、一價(jià)銅、二氧化硫、亞硫酸鹽和硫代硫酸鹽）。（5）若樣品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等還原性

22、雜質(zhì)時(shí)，會使結(jié)果偏高。 二氯靛酚法（三）水溶性維生素的測定（二） 2，4-二硝基苯肼法（GB/T 5009.86-2003）原理1.維生素C的測定還原型抗壞血酸脫氫型抗壞血酸氧化氧化二酮古樂糖酸氧化氧化二酮古樂糖酸2，4-二硝基苯肼脎濃硫酸濃硫酸雙-2，4-二硝基苯500nm比色（三）水溶性維生素的測定 試劑1.維生素C的測定4.5mol/L硫酸（9:1）硫酸:H2O2% 2，4-二硝基苯肼2%草酸抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1mg/ml2%硫尿1%硫尿1mol/ml鹽酸1%草酸活性炭2，4-二硝基苯肼法（三）水溶性維生素的測定 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制1.維生素C的測定 加2g活性碳 于50ml 1mg/ml抗壞血

23、酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中，振搖1min，過濾。取10ml濾液置于500ml容量瓶中，加5.0g硫尿，用1%草酸溶液稀釋至刻度，抗壞血酸濃度為20ug/ml。2，4-二硝基苯肼法（三）水溶性維生素的測定 測定步驟1.維生素C的測定樣品的制備顯色硫酸處理比色氧化稱一定樣（100g)鮮樣 加等量2%草酸 于高速搗碎機(jī)搗碎 取勻漿140g 用1%草酸定容100ml 過濾濾液待用取濾液25ml 加2g活性炭 搖1分鐘 靜置過濾 棄去初濾液，取濾液10ml 加入2%硫脲溶液 混勻 得樣品氧化液取上述氧化液各4ml于三支試管中向其中兩支管加入2%2，4-二硝基苯肼1.0ml,另一管作空白 將三支管加蓋 于37保溫箱3小

24、時(shí) 取出后樣品管放入冰水中 樣品空白管取出后冷至室溫 在樣品空白管加入2，4-二硝基苯肼 1ml 置于室溫下放置10-15min 樣品管和空白管都于冰浴中 向上述已放入冰水中的三支試管各加入（9:1）H2SO4 5ml于各管中（邊加邊搖） 將試管從冰浴中取出 室溫下放置30分鐘后立即比色，在520nm測吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的含量2，4-二硝基苯肼法（三）水溶性維生素的測定 測定步驟1.維生素C的測定取7個100ml容量瓶編號 1 2 3 4 5 6 7加VC標(biāo)液20ug/ml 5 10 20 25 40 50 60ml加硫脲溶液（ml） 95 90 80 75 60 50 40ml2，

25、4-二硝基苯肼（ml） 1 1 1 1 1 1 1ml 按樣品測定步驟進(jìn)行顯色反應(yīng)，形成脎并比色。以抗壞血酸為縱坐標(biāo)，吸光度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2，4-二硝基苯肼法（三）水溶性維生素的測定 結(jié)果計(jì)算1.維生素C的測定式中：X-樣品中總抗壞血酸含量，mg/100g c- 從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得“樣品氧化液”中總Vc的濃度，ug/ml V-試樣用1%草酸定容的體積，ml m-樣品質(zhì)量，g F-樣品氧化處理過程中的稀釋倍數(shù)1000100=FmVCX2，4-二硝基苯肼法（三）水溶性維生素的測定 注意事項(xiàng)1.維生素C的測定 活性炭對抗壞血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧進(jìn)行界面反應(yīng)，加入量過低，氧化不充分，

26、過高則導(dǎo)致對抗壞血酸的吸附作用，使測定結(jié)果偏低。 操作過程應(yīng)避光。 試管從冰水中取出后，由于糖類的影響造成顯色不穩(wěn)定，顏色會逐漸加深，30min后影響將減小，故加入硫酸后30min準(zhǔn)時(shí)比色。 檢出限：112ug/mL，所測結(jié)果為總量2，4-二硝基苯肼法（三）水溶性維生素的測定 注意事項(xiàng)1.維生素C的測定 活性炭對抗壞血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧進(jìn)行界面反應(yīng)，加入量過低，氧化不充分，過高則導(dǎo)致對抗壞血酸的吸附作用，使測定結(jié)果偏低。 操作過程應(yīng)避光。 試管從冰水中取出后，由于糖類的影響造成顯色不穩(wěn)定，顏色會逐漸加深，30min后影響將減小，故加入硫酸后30min準(zhǔn)時(shí)比色。 檢出限：112u

27、g/mL，所測結(jié)果為總量2，4-二硝基苯肼法（三）水溶性維生素的測定 VB2在440500nm波長下光照產(chǎn)生綠色熒光，稀溶液中其熒光強(qiáng)度與濃度呈正比。一般在525nm下測定熒光強(qiáng)度。再在試液中加入低亞硫酸鈉（Na2S2O4）還原VB2，使其熒光消失，再次測量試液中殘余熒光，兩者相減極為VB2熒光強(qiáng)度，進(jìn)一步查標(biāo)準(zhǔn)曲線測算。3.維生素B2的熒光測定法(GB 5413.92010 ) 高效液相色譜法測定維生素是近幾年發(fā)展起來的方法，此法能快速分離和測定維生素和它的同分異構(gòu)體、酯及其衍生物。 高效液相色譜法（HPLC）是20世紀(jì)60年代末70年代初發(fā)展起來的一種新型分離分析技術(shù)，隨著不斷改進(jìn)與發(fā)展，

28、目前已成為應(yīng)用極為廣泛的化學(xué)分離分析的重要手段。它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動化的特點(diǎn)。（一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) (GB 5413.92010 ) 原理（一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),

29、在兩相中作相對運(yùn)動時(shí), 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。(GB 5413.92010 ) 原理（一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運(yùn)動時(shí), 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產(chǎn)

30、生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。(GB 5413.92010 ) 原理（一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)示如下圖，一般可分為4個主要部分：高壓輸液系統(tǒng)，進(jìn)樣系統(tǒng)，分離系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)。此外還配有輔助裝置：如梯度淋洗，自動進(jìn)樣及數(shù)據(jù)處理等。其工作過程如下：注入欲分離的樣品時(shí)，流動相將樣品帶入色譜柱進(jìn)行分離，然后依先后順序進(jìn)入檢測器，記錄儀將檢測器送出的信號記錄下來，由此得到液相色譜圖。 (GB 5413

31、.92010 ) 原理（一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) (GB 5413.92010 )（一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) u高壓輸液系統(tǒng)由于高效液相色譜所用固定相顆粒極細(xì)，因此對流動相阻力很大，為使流動相較快流動，必須配備有高壓輸液系統(tǒng)。它是高效液相色譜儀最重要的部件，一般由儲液罐、高壓輸液泵、過濾器、壓力脈動阻力器等組成，其中高壓輸液泵是核心部件。對于一個好的高壓輸液泵應(yīng)符合密封性好，輸出流量恒定，壓力平穩(wěn)，可調(diào)范圍寬，便于迅

32、速更換溶劑及耐腐蝕等要求。常用的輸液泵分為恒流泵和恒壓泵兩種。恒流泵特點(diǎn)是在一定操作條件下，輸出流量保持恒定而與色譜柱引起阻力變化無關(guān)；恒壓泵是指能保持輸出壓力恒定，但其流量則隨色譜系統(tǒng)阻力而變化，故保留時(shí)間的重現(xiàn)性差，它們各有優(yōu)缺點(diǎn)。目前恒流泵正逐漸取代恒壓泵。(GB 5413.92010 )（一）高效液相色譜法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) u高壓輸液系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn)：泵容積小，易于清洗及更換流動相，泵壓較高，可達(dá)400MPa。缺點(diǎn)：脈沖較大，需要有阻尼器或采用雙泵系統(tǒng)來克服脈沖，達(dá)到恒定的流速。雙泵系統(tǒng)根據(jù)連接方式的不同分為串聯(lián)式和并聯(lián)式雙柱塞往復(fù)泵。 (GB 5413.92010 )（一