1、課題1：微生物的實驗室培養(yǎng)1精選ppt1.了解有關培養(yǎng)基的基礎知識；2.掌握無菌操作技術；3.了解純化大腸桿菌的基礎知識。霉 菌細 菌酵母菌放線菌 上圖都是一些常見的微生物，微生物是結構簡單、形體微小的單細胞、多細胞或沒有細胞結構的低等生物，與人類關系密切。人工的培養(yǎng)和分離，使得我們更進一步認識微生物。 今天我們就來學習如何培養(yǎng)和分離大腸桿菌！1.特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小，通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構，且體內一般不含有葉綠素，不能進行光合作用。2.微生物包括五類病 毒細 菌放線菌真 菌原生動物 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長

2、繁殖使用的混合營養(yǎng)液。固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基的類型成分區(qū)別：瓊脂2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方細菌喜葷，霉菌喜素大腸桿菌配方 酵母提取物：0.25g 蛋白胨：0.5g Nacl：0.5g 瓊脂：1g 水：50ml3.培養(yǎng)基內所含的基本物質一般營養(yǎng)物質水、碳源、氮源、無機鹽其他物質pH、特殊營養(yǎng)物質,例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 4.培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌、工業(yè)生產固體培養(yǎng)基：純化（分離），鑒定、活菌計數、保藏菌種半固體培養(yǎng)基：動力檢測1.無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染

3、的方法。 無菌操作是培養(yǎng)微生物成功的關鍵?。?）消毒定義：2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2）滅菌的定義：是指殺滅病原微生物的方法。 是指殺滅或清除環(huán)境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法a.灼燒滅菌3.常用滅菌的方法b.干熱滅菌：160-170 下加熱1-2h。c.高壓蒸氣滅菌：100kPa、121 下維持15-30min.取2個250ml的三角瓶中分別裝入50mlLB液體培養(yǎng)基和50mlLB固體培養(yǎng)基（剛配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮紙包裝后高壓鍋滅菌15min。LB液體培養(yǎng)基細菌的擴大培養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基細菌的劃線分離滅菌后的培養(yǎng)基在無菌操作臺上倒入4個培養(yǎng)皿中，倒后立即置于水平位

4、置上，輕輕晃動，使培養(yǎng)基鋪滿平皿底部，待凝，使之形成平面。 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？ 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。 2.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。將斜面上培養(yǎng)的大腸桿菌菌種接種到滅菌后的液體培養(yǎng)基中，使其在37搖床培養(yǎng)12小時。 注意事項:1.火焰旁從斜面上用接種環(huán)取菌；2.取菌前接種環(huán)要用酒精燈灼燒滅菌

5、，冷卻后方能取菌；3.取菌后封口膜和棉塞復原。1.平板劃線法： 1）灼燒接種環(huán)； 2）接種環(huán)冷卻后，蘸取帶菌培養(yǎng)物； 3）在近火焰處，讓帶菌接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上劃線。 注意事項:1.接種環(huán)只蘸一次菌液，但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次。2.劃線首尾不能相接。3.劃線后，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)1224h。1 1.線條不重疊 2 2-3.從上次的末端開始，交叉23條線3 4 4.最后的劃線不能與第一區(qū)相連。分離后，一個菌體便會形成一個菌落，這是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選菌株的最簡便方法之一。2.稀釋涂布平板法稀釋操作 注意：移液管需要經過滅菌。操作時，試管口和移液管離火焰12cm處.1.臨時保藏

6、：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4冰箱保存。2.長期保存：甘油冷凍管藏法（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。實驗操作成果評價3（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學會發(fā)現這一點，并能觀察到其他一些細微

7、的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。1關微生物營養(yǎng)物質的敘述中，正確的是（ ）A.是碳源的物質不可能同時是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機物只提供無機鹽 D.無機氮源也能提供能量D解析：A、B選項的表達是不完整的。有的碳源只能是碳源；有的碳源可同時是氮源；有的碳源同時是能源；有的碳源同時是氮源，也是能源。對于C選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。對于D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細菌提供能量和氮源。2下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是（ ）A.防止雜菌污染 B.接種前菌種要進行滅菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌 D.滅菌必須在接種前B退出解析：發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），A正確；B錯誤，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微