1、渝產(chǎn)續(xù)斷多糖超聲波輔助提取工藝的優(yōu)化-農(nóng)學論文渝產(chǎn)續(xù)斷多糖超聲波輔助提取工藝的優(yōu)化張 丹1,陶燕鐸2,談利紅1,余 保1,顏學偉1,曹緯國1(1 .重慶醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，重慶4 0 0 0 1 6;2 .中國科學院西北高原生物研究所，西寧8 1 0 0 0 0 )摘要： 為建立渝產(chǎn)續(xù)斷(Dipsacusasperoids)多糖的最佳超聲波輔助提取工藝，設計正交試驗，以續(xù)斷多糖的提取率為評價指標， 對 續(xù)斷多糖的超聲波輔助提取工藝參數(shù)進行考察。結果表明，最佳超聲波輔助提取 工藝為料液比1 ：20(g：mL)，提取時間60 min，提取4次，測得續(xù)斷多 糖的平均提取率為7.472%,RSD為2.

2、12%，表明續(xù)斷多糖超聲波輔 助提取工藝穩(wěn)定，質量可控。關鍵詞：續(xù)斷(Dipsacus asperoids);多糖；正交試 驗；超聲波輔助中圖分類號：S567.23 + 9;R284.2文獻標識碼：A文章編號：0439 8114 (2015) 02 0431 03D0I:10.14088/ki.issn0439 8114.2015.02.0 44續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷(Dipsacusasperoids )的干燥根1,又名川斷，具有補肝腎、強筋骨、續(xù)折傷、止崩漏、安胎等功效， 主要用于胎漏、胎動不安、滑胎、腰膝酸軟、跌打損傷和骨折等癥。續(xù)斷化學成 分研究已較為深入，且多集中于其皂苷類成分2,

3、3，已有研究表明續(xù)斷類 藥材多糖含量較高，重慶作為續(xù)斷的主產(chǎn)區(qū)之一，目前尚未有關于重慶產(chǎn)續(xù)斷多 糖的研究報道。多糖尤其是中藥多糖具有增強機體免疫功能及抗腫瘤等藥理作用，因此續(xù)斷藥材中含量較高的多糖類成分具有潛在的研究價值。 本試驗以重慶 產(chǎn)續(xù)斷為原料，采用正交試驗法優(yōu)選續(xù)斷多糖的超聲波輔助提取工藝， 為續(xù)斷多 糖的深入研究奠定基礎。I1材料與方法材料與儀器續(xù)斷藥材采自重慶武隆后坪鄉(xiāng)，經(jīng)重慶醫(yī)科大學王剛副教授鑒定為川續(xù)斷。UV- 1 7 5 0型紫外可見分光光度計（島津儀器有限公司）；HH6型數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市榮華儀器制造有限公司）；AL204型電子分析天平（瑞士梅特勒托利多集團）；KH 5

4、 2 0 0 DA型數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng) 超聲儀器有限公司），DGG9240A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海森信實 驗儀器有限公司）。葡萄糖標準品（中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號為1 1 0 8 3 3 ），濃硫酸、正丁醇、氯仿、丙酮、無水乙醇、9 5%乙醇、石油醚、純凈水等均為分析純。試驗方法標準品溶液的配制 室溫下精密稱取干燥至恒重的葡萄糖標準品5 1.8 mg,置50 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻即得。供試品溶液的制備 稱取已烘干的續(xù)斷藥材粉末10 g,置圓底燒瓶中加入8 0 mL石油醚回流提取脫脂，共計2次，每次2 h。藥渣揮 去溶劑后，加入8 0 mL 9 5%乙

5、醇回流提取2次，每次1.5 h,藥渣揮 去溶劑后，加水2 0 0mL，100 C水浴提取5次，每次2 h，合并提取液，濃縮并定容至10 0 0 mL,即得供試品溶液。標準曲線的制備 吸取上述標準品溶液0、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL于50 mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，得系列葡萄糖標準品溶液。各吸取0.5 mL置于10 mL具塞試管中，再分別加入5%苯酚1. 0 mL，搖勻后迅速加入濃硫酸4.0 mL，搖勻后3 0 C水浴3 0 min，冰水浴冷卻15 min，在4 8 9 nm下測定其吸光度， 以吸光度A為縱坐標，葡萄糖標準品濃度C為橫坐標制作標準曲線4，5。正交試驗設

6、計6, 7 選定影響多糖提取率的料液比（g： mL,下同）、提取時間以及提取次數(shù)作為考察因素，以多糖提取率作為考察指標，選用L9（34 ）正交表安排試驗考察各因素的影響，因素與水平見表1。表I因索與水平因蕭料酒悵欄職時間出）如訶槌戦次數(shù)（G174403356042 結果與分析最大吸收波長的確定精密量取供試品溶液與標準品溶液各0 .05mL,置5 mL容量瓶中，分別加1. 0 mL去離子水、4%苯酚溶液1. 0 mL，搖勻，加入濃硫酸5. 0 mL，40 C水浴加熱15 min,置冰水浴中冷卻5 min,以相應的試 劑為空白，同時制備供試品與標準品的未顯色樣品，按照紫外可見分光光度法， 在200

7、8 0 0 nm范圍內(nèi)進行光譜掃描，續(xù)斷多糖與葡萄糖樣品顯色后均 在4 8 9 nm處有最大吸收，且對應未顯色樣品在4 8 9 nm處基本沒有吸收，結果見圖1。因此選擇4 8 9nm為測定波長止直霸艷顯色前圈I紫外可見光譜掃描圖標準曲線的繪制精密吸取上述標準品溶液0、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0mL于5 0 mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，得系列葡萄糖標準品溶液。以吸光度A為縱坐標，葡萄糖標準品濃度C為橫坐標進行線性回歸， 得到標準曲 線為：A=7.87C+0.00436,r = 0.9993,結果表明，葡萄糖濃度在0.010360. 1036 0 mg/mL范圍內(nèi)線性關系良好。

8、正交試驗結果以續(xù)斷多糖的提取率為評價指標，篩選續(xù)斷多糖的超聲波輔助提取工藝，正 交試驗結果見表2。由表2極差分析可知，各因素的主次順序為A、C、E，最 佳提取工藝為A2C3B3，即用1 : 20的料液比提取4次，提取時間為60 m in，且續(xù)斷多糖超聲波輔助提取工藝中一定要控制好料液比和提取次數(shù)。分別精密稱取3份續(xù)斷藥材，每份5 0g,依據(jù)正交試驗優(yōu)選的最佳工藝條件提取續(xù)斷多糖，結果測得續(xù)斷多糖的平均提取率為7.472%,RSD為2. 12%,說明該工藝穩(wěn)定可行。表2正交試驗結果AHI1I4.1712i24 J123t3342126.0395T372623I6.56?7336.921g3些I5

9、.N?9332Xi4/)155.7106.6245.5K76.4A4f?476.K5Ia1.7(Na76S131ft3 小結與討論本研究通過正交試驗設計，初步建立了渝產(chǎn)續(xù)斷多糖的超聲波輔助提取工藝為料液比1 ：20，提取時間為60 min，提取4次，結果測得續(xù)斷多糖的平均提取率為7.472 %，RSD為2.12%，表明該工藝穩(wěn)定可行，為渝產(chǎn)續(xù) 斷的進一步開發(fā)利用奠定了基礎。與已有研究結果8 1 0相比，渝產(chǎn)續(xù)斷多糖含量高于黔產(chǎn)續(xù)斷和五鶴續(xù)斷， 說明續(xù)斷多糖的含量產(chǎn)地差異性較大， 重慶 為續(xù)斷主產(chǎn)區(qū)，續(xù)斷質量較優(yōu)。苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與

10、苯酚生成橙黃色化合物，顏色持久，在4 9 0nm左右有最大吸收，采用紫外可見分光光度法測定，簡單、快速、靈敏、重復性好。參考文獻：1國家藥典委員會中華人民共和國藥典一部M 北京：中國醫(yī)藥 科技出版社，2010.劉 永，衛(wèi)瑩芳，閆 婕，等不同產(chǎn)地續(xù)斷中總皂苷的含量測定J 時珍國醫(yī)國藥，2009,20 (11):2767 2768.董玉瓊，何曉紅，鐘國躍，等.正交法優(yōu)選川續(xù)斷的提取工藝J.中國中藥雜志，2007，32 (11): 1 1 0 7 1 1 0 9.王文平，郭祀遠，李 琳，等苯酚-硫酸法測定野木瓜中多糖含量的研究J 食品科學，2007，28 (4): 2 7 6 2 7 9.李 妍，魏建和，許旭東，等苯酚-硫酸法定量測定桔梗多糖的研究J 時珍國醫(yī)國藥，2009，20(1): 5 7.吳 彥，魏和平大薊多糖提取分離及含量測定J 光譜實驗室，2 0 10，2 7 ( 1 ) : 9 8 1 0 1.李 強，謝 楊，丁宗保，等正交設計優(yōu)選黃石斛多糖提取工藝J.安徽農(nóng)業(yè)科學，2010，38 (28): 15608 15609.翟 琨，向東山，武 蕓，等五鶴續(xù)斷中多糖提取工藝