1、秦巴山區(qū)智力低下兒童FRAXF基因多態(tài)性研究張素珍，張富昌，謝學(xué)建，魏亞寧，舒青【關(guān)鍵詞】?jī)和疭tudynFRAXFgeneplyrphisinhildrenithentalretardatininQinbauntaindistrit【Abstrat】AI:TinvestigatetheassiatinbeteenFRAXFgeneplyrphisandthehildintelligeneinQinbauntaindistrit.ETHDS:FRAXFgentypeasdetetedin84entalretardatin(R)hildrenand74nralntrlsbyusingPRandp

2、lyarylaidegeleletrphresis(PAGE)ethds.TheassiatinfFRAXFgeneplyrphisandthehildintelligeneasstudied.RESULTS:NineteenalleleshadbeenhekedutinRgrupiththerepeatfrequenyranging728.Tentynealleleshadbeenhekedutinntrlgrup,therepeatfrequenyranging120.ThedistributinfFRAXFgentypeassignifiantlydifferentbeteenRandn

3、trlgrups(2=14.05,P0.005).NLUSIN:ThereasanassiatinbeteenFRAXFgeneplyrphisandthehildintelligene.FRAXFgeneaybeneftheandidategenespredispsingtR.【Keyrds】plyrphis(genetis);hild;intelligene;FRAXF【摘要】目的：研究秦巴山區(qū)兒童FRAXF位點(diǎn)多態(tài)性與兒童智力之間的關(guān)系.方法：應(yīng)用多聚酶鏈?zhǔn)椒错慞R結(jié)合聚丙烯酰胺電泳凝膠分析系統(tǒng)分析技術(shù)對(duì)84例智力低下兒童及對(duì)照組72例智力正常兒童的FRAXF基因多態(tài)性進(jìn)展檢測(cè)比擬，討論

4、FRAXF基因多態(tài)性對(duì)兒童智力的影響.結(jié)果：病例組共檢出該位點(diǎn)19個(gè)等位基因，重復(fù)次數(shù)范圍為728.對(duì)照組共檢出該位點(diǎn)21個(gè)等位基因，重復(fù)次數(shù)范圍在120.通過2檢驗(yàn)，兩組之間等位基因多態(tài)性分布差異顯著2=14.05,P0.005.結(jié)論：結(jié)果提示FRAXF基因的不穩(wěn)定性可能與兒童的智力發(fā)育有關(guān).FRAXF基因可能是兒童智力低下的易感基因之一.【關(guān)鍵詞】多態(tài)現(xiàn)象遺傳學(xué)；兒童；智力；FRAXF0引言1969年Lubs等首次發(fā)現(xiàn)X染色體上具有1個(gè)脆性位點(diǎn)FRAXA1，此后遺傳學(xué)家相繼在人類基因組上發(fā)現(xiàn)了26個(gè)脆性位點(diǎn)，其中3個(gè)位于Xq2728區(qū)帶上FRAXA,FRAXF及FRAXE2-4.過去認(rèn)為除

5、FRAXA和FRAXE之外，其他24個(gè)脆性位點(diǎn)只是人類基因組中正常的多態(tài)性位點(diǎn)5.FRAXF基因是否可以作為R的候選基因尚在討論.秦巴山區(qū)地處秦嶺深處，交通不便，地域因素造成了互相較為隔絕的人群，平均每個(gè)自然村智力低下患者到達(dá)7%8%，是智力低下兒童基因多態(tài)性研究的一個(gè)特殊群體.本研究通過對(duì)這個(gè)特殊地區(qū)的正常兒童及智力低下兒童FRAXF基因多態(tài)性的檢測(cè)，討論了FRAXF基因多態(tài)性與兒童智力之間的關(guān)系.1對(duì)象和方法1.1對(duì)象智力低下entalretardatin,R組為84(男45，女39)例,均為柞水安康兩地經(jīng)智商測(cè)定(采用韋克斯勒兒童智力表法)為R兒童，年齡014歲.對(duì)照組72(男35,女3

6、7)例，為同一地區(qū)同齡智力正常兒童，年齡014歲.R者與對(duì)照組在年齡上進(jìn)展了匹配，二者無顯著性差異.引物由上海博亞生物技術(shù)合成，TaqDNA聚合酶購自鼎國公司.PR擴(kuò)增試劑盒購自寶生物公司.測(cè)序由上海基康生物公司完成.采集研究對(duì)象的外周靜脈血5L，加AD抗凝，保存于-20冰箱中，全血經(jīng)蛋白酶K消化，采用酚/氯仿法抽提基因組DNA.1.2方法1.2.1基因多態(tài)性檢測(cè)PR引物序列參照文獻(xiàn)Fu等,1991.基因序列從美國生物信息中心NBI網(wǎng)站上查詢.擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為360bp.引物序列P1:5TGAGGTTATGGGGAGAA3,P2：5GTATAGTAT3.PR反響體系：模板DNA50g/L2L，引

7、物50pl/3L1.5L,10ldNTP2.4L,Taq酶33.34kat/L1L,10Buffer(g+)3L,H221.6L,總體積30L.擴(kuò)增反響在PerkinEler9600擴(kuò)增儀中進(jìn)展.反響條件：95變性7in后加Tag酶；94變性2in，55退火1in,72延伸2in，循環(huán)30次后，72延伸7in,擴(kuò)增產(chǎn)物4冰箱保存.通過15g/LAgrse凝膠電泳觀察是否有PR擴(kuò)增產(chǎn)物，通過80/L聚丙烯酰胺凝膠電泳，凝膠分析系統(tǒng)分析，確定PR擴(kuò)增產(chǎn)物堿基個(gè)數(shù)，同時(shí)隨機(jī)挑選PR產(chǎn)物由上?；导夹g(shù)測(cè)序，進(jìn)一步確定所擴(kuò)片段是否準(zhǔn)確以及側(cè)翼序列的堿基個(gè)數(shù).多態(tài)位點(diǎn)G重復(fù)次數(shù)nPR擴(kuò)增產(chǎn)物堿基數(shù)量-側(cè)翼

8、序列堿基個(gè)數(shù)/3，從而確定G的個(gè)數(shù).鑒定基因型.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：組間基因頻率差異用2檢驗(yàn).所用統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS10.0軟件包.2結(jié)果2.1智力低下兒童FRAXF基因多態(tài)性檢測(cè)了84例智力低下兒童外周血標(biāo)本，72例正常兒童對(duì)照.病例組共檢出該位點(diǎn)19個(gè)等位基因，片段大小381444bp，基因頻率在0.8%13.3%之間，重復(fù)次數(shù)范圍為728.重復(fù)次數(shù)多為11,13.對(duì)照組共檢出該位點(diǎn)21個(gè)等位基因，片段大小360420bp，基因頻率在1.8%11.9%之間，重復(fù)次數(shù)范圍為120，重復(fù)次數(shù)多為9次(圖1).兩組之間等位基因多態(tài)性分布差異顯著2=14.05,P0.05，表2.2.3PR產(chǎn)物測(cè)序確定擴(kuò)增

9、片段(G)重復(fù)次數(shù)及片段大小(圖2).表1FRAXF基因多態(tài)性在病例組與對(duì)照組之間的分布略表2FRAXF基因在病例組及對(duì)照組中男女之間的分布略圖1FRAXF基因多態(tài)性在病例組及對(duì)照組中的柱形分布圖略圖2FRAXF基因多態(tài)性的測(cè)序圖譜略3討論1943年artin首次報(bào)道了一個(gè)X連鎖形式的智力低下家系，以后命名為脆性X綜合癥.FRAX系X性遺傳疾病，是兒童R的常見原因，在人群中發(fā)病率男性約1/4000，女性稍低5.其分子學(xué)機(jī)制是因FR1基因第1外顯子非翻譯區(qū)G重復(fù)區(qū)異常擴(kuò)增及異常甲基化，引起FR1基因此不轉(zhuǎn)錄，或轉(zhuǎn)錄后翻譯效率低，生成編碼蛋白脆X智力低下蛋白(fragileXentalretard

10、atinprtEin,FRP)減少或不能生成FRP所致6.因?yàn)橹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)發(fā)育多有FRI基因的高度表達(dá)，假設(shè)FR1RNA缺乏可能會(huì)損害皮層和邊緣系統(tǒng)的發(fā)育，影響依賴于皮層和邊緣系統(tǒng)功能意志、學(xué)習(xí)和記憶行為7.現(xiàn)研究說明，除FRAXA基因外，其他FRAX基因尚無足夠的證據(jù)證明其與R有關(guān).提示FRAXF基因多態(tài)性與兒童智力有相關(guān)性.該基因G重復(fù)次數(shù)大于20時(shí)，兒童智力異常的可能性較大.本研究是在秦巴山地區(qū)這個(gè)物殊兒童群體進(jìn)展FRAXF基因多態(tài)性的研究，發(fā)現(xiàn)FRAXF基因多態(tài)性與兒童智力可能有相關(guān)性，該位點(diǎn)等位基因分布符合Hardyeinberg平衡遺傳定律8，具有代表性.多態(tài)信息量PI：0.86，結(jié)果說明該位點(diǎn)具有