1、在大腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義摘要目的：研究細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(D147)在大腸癌組織中的表達(dá)及其與大腸癌臨床病理因素間的關(guān)系，討論其與大腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測88例大腸癌患者癌組織、癌旁組織和正常對照組織中D147的表達(dá)，以圖象分析軟件進(jìn)展半定量分析。結(jié)果：大腸癌組織、癌旁組織和正常對照組織中D147表達(dá)陽性率呈遞減改變。D147的表達(dá)與大腸癌患者年齡、腫瘤分型、腫瘤分化程度未見相關(guān)性(P0.05)，而在大腸癌患者伴轉(zhuǎn)移組顯著高于無轉(zhuǎn)移組(P0.05)。結(jié)論：D147在大腸癌患者組織中的表達(dá)增高與大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移親密相關(guān)。關(guān)鍵詞D147；大腸癌大腸癌

2、包括結(jié)腸癌和直腸癌，其預(yù)后與其侵襲性和轉(zhuǎn)移親密相關(guān)。D147和大腸癌侵襲、發(fā)生、開展有相關(guān)性，D147可促進(jìn)腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)(SAB)法檢測D147在大腸癌患者癌組織、癌旁組織及正常組織中的表達(dá)，討論D147與大腸癌侵襲、發(fā)生、開展的相關(guān)性以及其內(nèi)在聯(lián)絡(luò)。1對象與方法1.1對象搜集我院2022年1月2022年1月手術(shù)切除的大腸癌組織標(biāo)本88例，以癌組織中心組織為癌癥組，取癌組織與正常組織交界處為癌旁組，取距癌中心組織10處為正常對照組。88例大腸癌患者中，男性48例，年齡4179歲，平均58.25歲；女性40例，年齡3577歲，平均60.5歲。所有患者均無糖尿并糖耐量異常

3、病史，術(shù)前均未作放療和化療。按國際癌癥協(xié)會所定的標(biāo)準(zhǔn)行分化程度分級和Dukes分期，所有癌組織均經(jīng)病理檢驗確診，所有作為正常對照組織的斷端組織均未發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞。標(biāo)本均經(jīng)過4%中性甲醛溶液固定后常規(guī)石蠟包埋，4連續(xù)切片備用。兔抗人D147多克隆抗體購自北京中衫金橋生物技術(shù)，SAB免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物科技。采用HIAS22000型全自動彩色圖像分析系統(tǒng)。1.2方法1.2.1免疫組織化學(xué)方法檢測D147的表達(dá)采用鏈霉素-生物素-過氧化物酶復(fù)合體物法(SAB)對D147表達(dá)進(jìn)展檢測。以PBS代替一抗作為陰性對照。1.2.2用lypus顯微鏡及顯微攝像儀對染色組織切片進(jìn)展觀察、照相，使用HIA

4、S22000型全自動彩色圖像分析系統(tǒng)進(jìn)展圖像分析。先在低倍鏡(40)下觀察表達(dá)情況。腫瘤細(xì)胞胞膜下及胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為D147陽性表達(dá)，轉(zhuǎn)高倍鏡(400)，每張切片隨機(jī)觀察5個高倍視野計算均值，陽性結(jié)果判斷根據(jù)平均每高倍視野陽性癌細(xì)胞及異型增生腺上皮細(xì)胞數(shù)占所觀察癌細(xì)胞及異型增生腺上皮細(xì)胞總數(shù)的百分率。以陽性細(xì)胞數(shù)5%為(-)，5%25%為(+)，26%50%為(+)，50%為(+)區(qū)分染色強(qiáng)度。最后轉(zhuǎn)中倍鏡視野(200)攝像，隨機(jī)攝取5個高倍視野照相，由圖象分析軟件檢測該總視野內(nèi)的陽性面積和計算平均光密度值做半定量分析。1.3統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)展統(tǒng)計學(xué)處理，各組間陽性

5、表達(dá)率用2檢驗，多組間均數(shù)的比擬采用方差分析，兩組總體均數(shù)的比擬采用獨立樣本t檢驗。2結(jié)果2.1D147表達(dá)和分布D147在絕大局部癌癥組標(biāo)本(78/88，88.6%)中可見著色，呈棕黃色顆粒定位于細(xì)胞膜下和細(xì)胞質(zhì)中。陽性細(xì)胞呈彌漫分布，大局部位于腺癌腺體，少局部位于腺癌組織間質(zhì)，間質(zhì)陽性細(xì)胞染色深度稍大于腺體陽性細(xì)胞。局部癌旁組標(biāo)本(36/88，40.9%)和正常對照組標(biāo)本(22/88，25%)中也可見著色。詳細(xì)的染色強(qiáng)度見表1。大腸癌組織中D147的染色強(qiáng)度明顯高于癌旁組織和正常對照組織。癌組織陽性表達(dá)率也顯著高于癌旁組織和正常組織(P0.05)，而癌旁組織和正常對照組織比擬，差異無顯著性

6、(P0.05)。2.2D147在各組組織中平均光密度值的比擬運(yùn)用圖像軟件分析檢測到的各組染色平均積分光密度值(表2)，在癌組織與正常對照組間,癌癥組與癌旁組間比擬,差異有顯著性(P0.05)。2.3半定量分析D147的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系D147的表達(dá)在大腸癌Dukes分期+D組明顯高于A+B組(P0.05)，見表3。低分化組的平均積分光密度值也高于中、高分化組，年齡大于55歲組表達(dá)高于年齡小于55歲組，但差異無顯著性(P0.05)，且與腫瘤分型也無相關(guān)性。3討論腫瘤的侵襲生長是一個多因素參與、多步驟完成的過程，細(xì)胞外基質(zhì)(主要是型膠原蛋白)，不僅是腫瘤細(xì)胞賴以生存的場所，而且還是腫瘤細(xì)胞

7、遷徙所遇到的天然屏障。D147參與機(jī)體多種生理過程，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞間及細(xì)胞與間質(zhì)的黏附作用1，且在多種腫瘤組織中2，3表達(dá)增高。本組資料中D147在大腸癌癌細(xì)胞膜，且癌組織、癌旁組織和正常組織中表達(dá)同樣呈遞減趨勢。D147的表達(dá)在臨床病理因素上的分析結(jié)果顯示與大腸癌Dukes分期顯著相關(guān)，+D(有轉(zhuǎn)移)組顯著高于A+B(無轉(zhuǎn)移)組。說明D147與大腸癌患者癌癥進(jìn)展親密相關(guān)，腫瘤進(jìn)展程度越高，其表達(dá)越強(qiáng)，含量也越高，而在癌組織、癌旁組織和正常對照組織間的表達(dá)和含量遞減趨勢也提示隨腫瘤的浸潤侵襲而表達(dá)逐步增高，并可能會成為大腸癌侵襲程度的一個判斷指標(biāo)。D147的表達(dá)在年齡和腫瘤分型上無相關(guān)性，說明大

8、腸癌的進(jìn)展程度與年齡和腫瘤的分型無關(guān)，而在腫瘤分化程度上，低分化組中D147的表達(dá)明顯高于高中分化組，說明D147與大腸癌患者癌癥進(jìn)展親密相關(guān)。體外實驗4和體內(nèi)研究5證實D147可刺激腫瘤周圍的纖維母細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶，通過激活、促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶(P)的表達(dá)，進(jìn)而影響癌癥的侵襲與轉(zhuǎn)移?；|(zhì)金屬蛋白酶不僅在癌細(xì)胞漿中有表達(dá)，間質(zhì)細(xì)胞中也可見表達(dá)6，7，而D147主要表達(dá)于癌細(xì)胞膜下和胞漿中，間質(zhì)和正常組織中表達(dá)很少，說明腫瘤組織中的P可能來源于兩個途徑：一是腫瘤細(xì)胞膜外表D147分子游走至間質(zhì)組織刺激纖維母細(xì)胞分泌P；二是腫瘤細(xì)胞本身內(nèi)在的D147激活自身分泌P。由此可見，D147的高表達(dá)

9、與大腸癌的侵襲和開展親密相關(guān)。且該作用原因之一可能是通過激活和促進(jìn)P的高表達(dá)來實現(xiàn)。鑒于D147對P的合成及活性調(diào)節(jié)作用以及二者在大腸癌組織中表達(dá)的親密關(guān)系，以后有望以此二者作為靶點，進(jìn)一步開展針對大腸癌浸潤轉(zhuǎn)移的控制和治療方面的研究。參考文獻(xiàn)1SuzukiS,Sat,SenH,etal.DiretellellinteratinenhanesprP2prdutinandativatatininultureflaryngealanerellsandfibrblasts:invlveentfEPRINandT1PJ.ExpellRes,2022,293:259-266.2LiHG，XieDR，Sh

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