1、11872141001V15糖類抗原19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA 19-9） 2007-08, V 15 中文 5/5 Elecsys 和 cobas e 分析儀11776193 122 100測(cè)試本試劑盒適用的分析儀Elecsys 1010Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601注意：CA 19-9的檢測(cè)結(jié)果與檢測(cè)方法密切相關(guān)。因此實(shí)驗(yàn)室結(jié)果報(bào)告應(yīng)注明檢測(cè)方法。不同檢測(cè)方法間的結(jié)果不能直接比較，以免引起臨床解釋的錯(cuò)誤。在療效觀察過(guò)程中，如果檢測(cè)方法變動(dòng)，必須使用原檢測(cè)方法同時(shí)平行測(cè)定

2、。主要用途用于體外定量檢測(cè)人體血清或血漿中的CA 19-9。Elecsys和cobas e 免疫分析儀的工作原理是電化學(xué)發(fā)光免疫分析“ECLIA”。臨床應(yīng)用Elecsys CA 19-9檢測(cè)使用1116-NS-19-9單克隆抗體。1116-NS-19-9的反應(yīng)位點(diǎn)位于糖脂分子上，分子量約為10,000道爾頓。這種黏液素類似Lewis血型家族的半抗原決定簇，屬于黏膜細(xì)胞的組成部分。1，23-7%的人存在Lewis a-陰性/b-陰性的血型結(jié)構(gòu)，其不能表達(dá)類似CA 19-9的這類黏液素。因此在解釋結(jié)果的時(shí)候，必須注意。3黏液素由胎兒的胃、腸、胰臟上皮細(xì)胞分泌。在成年人的肝臟、肺和胰臟組織也能發(fā)現(xiàn)低

3、濃度的黏液素。3，4CA19-9的檢測(cè)值可以幫助鑒別診斷胰腺癌以及監(jiān)測(cè)胰腺癌患者（敏感性達(dá)到70-87%）。5，6，7，腫瘤的大小和CA19-9的檢測(cè)值之間沒(méi)有相互關(guān)系，但是，血清CA19-9水平超過(guò)10，000 U/mL以上的患者幾乎都存在腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。3CA19-9不能作為胰腺癌的早期檢查指標(biāo)。8，9，10對(duì)于膽管癌CA19-9的敏感性約為50-75%。對(duì)于胃癌建議同時(shí)檢測(cè)CA 72-4和CEA。對(duì)于結(jié)、 結(jié)腸癌中建議只檢測(cè)CEA。極少數(shù)CEA陰性的病例檢測(cè)CA19-9才有價(jià)值。3由于黏液素經(jīng)肝臟分泌，輕微的膽汁淤積都能導(dǎo)致血清CA19-9水平的明顯升高。胃腸道和肝臟的良性病變或炎癥也會(huì)

4、導(dǎo)致CA19-9水平的升高，比如囊性纖維化。3，6，9檢測(cè)原理雙抗體夾心法，總檢測(cè)時(shí)間：18分鐘第一次孵育：10l標(biāo)本、生物素化的CA19-9單克隆特異性抗體和釕（Ru）a標(biāo)記的CA19-9特異性單克隆抗體一起孵育，形成抗原抗體夾心復(fù)合物。第二次孵育：添加包被鏈霉素的磁珠微粒進(jìn)行孵育，復(fù)合體與磁珠通過(guò)生物素和鏈霉素的作用結(jié)合。將反應(yīng)液吸入測(cè)量池中，通過(guò)電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過(guò)ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過(guò)光電倍增器測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度。儀器自動(dòng)通過(guò)2點(diǎn)校正的定標(biāo)曲線計(jì)算得到檢測(cè)結(jié)果。 試劑工作溶液M包被鏈霉素的磁珠微粒（透明瓶蓋），每瓶

5、6.5ml；包被鏈霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑。R1 生物素化的抗CA 19-9單克隆抗體（灰蓋），每瓶，10ml：生物素化的抗CA 19-9抗體（鼠）濃度3mg/L，磷酸緩沖液100mmol/L，pH 6.5；防腐劑。R2 Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗CA 19-9單克隆抗體（黑蓋），每瓶，10 ml，釕標(biāo)記的抗CA 19-9 單抗（鼠）濃度4 mg/L，磷酸緩沖液100 mmol/l，pH6.5；防腐劑。警告和注意事項(xiàng)僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時(shí)必需遵循所有試驗(yàn)室試劑操作的注意事項(xiàng)。所有廢棄物必需按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)報(bào)告。避免試劑和樣本（樣本、

6、定標(biāo)液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒（M,R1和R2）為即用型，不能分開使用。試劑相關(guān)信息可以通過(guò)試劑條形碼閱讀獲取。儲(chǔ)存及穩(wěn)定性存放于28。請(qǐng)垂直擺放Elecsys CA 19-9試劑盒，確保儀器的自動(dòng)攪拌器能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開封試劑，288周放置分析儀MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e 601上6周放置分析儀Elecsys 2010 和 cobas e 411上8周放置分析儀Elecsys 1010上4周（試劑交替放置于冰箱和20-25的分析儀中，持續(xù)開蓋的情況下至多20小時(shí)）樣本的采集和準(zhǔn)備僅以下羅列的樣本類型通

7、過(guò)實(shí)驗(yàn)符合檢測(cè)要求。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰、肝素鈉、肝素胺、K3-EDTA抗凝的血漿都適用。不能使用枸櫞酸鈉抗凝血漿。標(biāo)準(zhǔn)：回收率90-110%，斜率0.9-1.1，截距0.95。穩(wěn)定性： 2-8可保存30天；-20可保存3個(gè)月。11選擇合適的試管進(jìn)行不同類型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測(cè)。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。如果使用原始管進(jìn)行檢測(cè)（樣本前處理系統(tǒng)）時(shí)，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。有沉淀的樣本檢測(cè)前必須先作離心處理。避免使用熱滅活的樣本。添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品均不能使用。檢測(cè)前，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品須室溫平

8、衡(20-25)。由于蒸發(fā)因素的影響，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品在分析儀上的檢測(cè)必須2小時(shí)內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑工作溶液”章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號(hào)11776215, CA19-9 CalSet, 規(guī)格4 x 1ml貨號(hào)11776452, PreciControl Tumor Marker，規(guī)格2 x 3ml，分別為PreciControl Tumor Marker 1和2貨號(hào)11732277，Diluent Universal，2 x 16 ml樣本稀釋液，或貨號(hào)03183971,Diluent Universal，2 x 36ml樣本稀釋液實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 1010/201

9、0 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析儀Elecsys 1010/2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號(hào)11662988, ProCell, 6 x 380 mL ,系統(tǒng)緩沖液貨號(hào)11662970, CleanCell, 6 x 380 mL,測(cè)量池洗液 貨號(hào)11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液貨號(hào)11933159, SysClean 適配器 貨號(hào)11706829, Elecsys 1010分析杯, 12 x 32反應(yīng)管或者貨號(hào)11706802, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反

10、應(yīng)管貨號(hào)11706799, Elecsys 2010 分析吸頭, 30 x 120移液吸頭MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀所需材料：貨號(hào)04880340,ProCell M, 2 x 2 L 系統(tǒng)緩沖液貨號(hào)04880293, CleanCell M, 2 x 2 L測(cè)量池洗液 貨號(hào)03023141, PC/CC杯, 12個(gè)用于在檢測(cè)前預(yù)熱Procell M及Cleancell M。貨號(hào)03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測(cè)完畢后或更換試劑時(shí)清洗試劑針。貨號(hào)12102137,反應(yīng)杯/吸頭 組合裝84反應(yīng)杯/吸

11、頭 組合裝48盒,廢物袋 貨號(hào)03023150, WasteLiner,廢物袋 貨號(hào)03027651,系統(tǒng)清潔適配器 M所有分析儀需要：貨號(hào)11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 檢測(cè)要優(yōu)化檢測(cè)性能，請(qǐng)遵照本說(shuō)明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)，并參照分析儀操作手冊(cè)。試劑使用前分析儀自動(dòng)攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過(guò)條形碼自動(dòng)讀取，在特殊情況下，分析儀無(wú)法自動(dòng)讀取條碼信息時(shí)，請(qǐng)輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放

12、置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀能自動(dòng)調(diào)節(jié)試劑溫度和開、關(guān)各試劑盒瓶蓋。Elecsys 1010 分析儀: 將冷藏試劑室溫平衡至20-25C左右，放置分析儀的試劑盤（20- 25C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。使用前后手動(dòng)開關(guān)試劑盒瓶蓋。使用后保存于2-8C冰箱。定標(biāo)溯源性：該檢測(cè)方法可溯源至Enzymun-Test CA19-9測(cè)量程序。每套Elecsys CA 19-9試劑的條碼標(biāo)簽上均含有其批特異的定標(biāo)信息。使用Elecsys CA 19-9定標(biāo)液可調(diào)整預(yù)設(shè)置的定標(biāo)曲線。定校頻率：新批號(hào)試劑必須進(jìn)行定標(biāo)（新試劑盒在分析儀上放置不能超過(guò)24小時(shí)）。以下情況建議重新進(jìn)行定標(biāo)：MODU

13、LAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析儀:使用同一批號(hào)試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）Elecsys 1010 分析儀:每盒試劑7天后（室溫 20-25C）3天后（室溫 25-32C）所有儀器根據(jù)需要：如失控。質(zhì)控可使用Elecsys PreciControl Tumor Marker1和2。其他合適的質(zhì)控品也適用。各濃度質(zhì)控至少每24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)一次，每次更換試劑盒或定標(biāo)后也須進(jìn)行質(zhì)控。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)各自的情況設(shè)定合適的控制限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每個(gè)試驗(yàn)室必須采取相應(yīng)的糾正措施。請(qǐng)遵循政府法

14、規(guī)和當(dāng)?shù)匦袠I(yè)導(dǎo)則進(jìn)行質(zhì)量控制計(jì)算儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算每個(gè)樣本中的分析物濃度（單位是U/mL或kU/L）。干擾因素檢測(cè)結(jié)果不受黃疸（膽紅素1112mol/L或66 mg/dL）, 溶血（血紅蛋白1.4mmol/L或 2.2g/dL）, 脂血(脂肪乳劑 1500mg/dL)和生物素5mg/天），必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集樣本。檢測(cè)結(jié)果不受類風(fēng)濕因子影響（RF1500 IU/ml）。CA19-9檢測(cè)不受hook效應(yīng)影響（濃度達(dá)500，000 U/mL）體外對(duì)27種常用藥物進(jìn)行試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。由于檢測(cè)試劑使用單克隆抗鼠抗體，因此接受過(guò)小鼠單抗診療的病人會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果。試劑的添加物可將影響因素

15、降到最低。少數(shù)病例中高濃度的釕抗體會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。作為診斷指標(biāo)，必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來(lái)綜合評(píng)估檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)范圍0.600-1000 U/mL（通過(guò)最低檢出限和廠商定標(biāo)曲線的最高值確定）。低于檢出限的值報(bào)告1000 U/mL 。(1:10稀釋結(jié)果可報(bào)告至10，000 U/mL)稀釋高于檢測(cè)范圍的標(biāo)本可用通用稀釋液（Elecsys Diluent Universal）稀釋。建議稀釋度1:10（MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 1010/2010 和cobas e 分析儀可以自動(dòng)稀釋，也可以手工稀釋）。稀釋的標(biāo)本CA19-9濃度必須高于50 U/m

16、l。如用手工稀釋，結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)。如果是機(jī)器自動(dòng)稀釋，機(jī)器會(huì)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。期望值通過(guò)檢測(cè)381例樣本（187例健康受試者，194例獻(xiàn)血員）結(jié)果如下：27 U/mL (第95百分位數(shù))34 U/mL (第97.5百分位數(shù))39 U/mL (第99百分位數(shù))每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定參考范圍的適用性，必要時(shí)建立本實(shí)驗(yàn)室的參考范圍。特殊的性能指標(biāo)試劑在分析儀上的性能試驗(yàn)數(shù)據(jù)如下。各實(shí)驗(yàn)室由于具體情況不同，所得出的數(shù)據(jù)可能會(huì)稍有差異。精密度應(yīng)用Elecsys試劑盒、人混合血清樣本和質(zhì)控品驗(yàn)證重復(fù)性，按照NCCLS的EP5-A執(zhí)行：每天6次，共10天 (n=60)。批內(nèi)精密度由 MODULAR ANAL

17、YTICS E170分析儀完成，n=21下面是獲得的結(jié)果。分析靈敏度（最低檢出限） 0.60 U/mL最低檢出限指區(qū)別于零濃度的分析物最低檢測(cè)濃度。最低檢出限是最低濃度標(biāo)準(zhǔn)品+2SD得到的濃度（廠商定標(biāo)品1+2SD，批內(nèi)精密度，n=21）。方法學(xué)比較使用臨床標(biāo)本比較Elecsys CA19-9檢測(cè)（y） 和 CA19-9酶免疫檢測(cè)（x），相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：標(biāo)本數(shù)n=78Passing/Bablok12 線性回歸y = 0.99x + 0.87 y = 0.99x + 2.68T = 0.766 r = 0.944樣品比較的濃度范圍約為4.5216 U/mL。分析特異性The Elecsys CA

18、 19-9腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法基于單克隆抗體1116-NS-19-9建立的，該抗體為Fujirebio診斷公司的專利。該檢測(cè)方法的性能特點(diǎn)只能依賴此抗體得出，而不能用其他抗體替代。參考文獻(xiàn)1. Koprowski H, Steplewski Z, Mitchell K, Herlyn M, Herlyn D,Fulner P. Colorectal carcinoma antigens detected by hybridoma antibodies. Somat Cell Genet 1979;5:957-972.2. Hansson GC, Zopf D. Biosynthesis of t

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20、rloffstein-Rathsberg (1993).4. Herlyn M, et al. Monoclonal antibody detection of a circulating tumor-associated antigen. Presence of antigen in sera of patients with colorectal, gastric and pancreatic carcinoma. J Clin Immunol 1982;2:135-140.5. Ritts RE Jr, Del Villano BC, Go VLV, Herbermann RB, Klu

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