1、PAGE3基因工程的基本操作程序1基因工程載體的構建需要考慮哪些方面的因素道理何在主要考慮以下幾方面的因素。（1）基因的特點：如果一個來自動物的目的基因含有內(nèi)含子，就不能用于轉(zhuǎn)基因植物，因為動物中內(nèi)含子的剪接系統(tǒng)與植物的不同，植物不能將動物基因的內(nèi)含子剪切掉，只能用該基因的cDNA?；虻漠a(chǎn)物如果是一個糖蛋白，那么該基因在原核生物細菌中表達出來的蛋白就可能不具備天然狀態(tài)下的活性，因為糖蛋白上的糖鏈是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體上加上的，而細菌無這些細胞器。（2）要選擇強啟動子或組織特異性啟動子。啟動子有強有弱，選擇強啟動子可以增加轉(zhuǎn)錄活性，使基因產(chǎn)物量增多。如果希望基因在生物的某個組織表達，如只在植物種

2、子中表達，就要選擇種子中特異表達的啟動子。（3）要有選擇標記基因，如抗生素基因，以便選擇出真正的轉(zhuǎn)基因生物。2什么是分子雜交技術的顯示帶分子雜交技術是基因工程中使用頻率很高的一項技術，主要用于檢測和鑒定，可以分為核酸分子之間的雜交和蛋白質(zhì)分子之間的雜交。常用的技術有：Southern雜交DNA和DNA分子之間的雜交。目的基因是否整合到受體生物的染色體DNA中，這在真核生物中是目的基因可否穩(wěn)定存在和遺傳的關鍵。如何證明這一點，就需要通過Southern雜交技術。基本做法是：第一步，將受體生物DNA提取出來，經(jīng)過適當?shù)拿盖泻?，走瓊脂糖凝膠電泳，將不同大小的片段分開；第二步，將凝膠上的DNA片段轉(zhuǎn)移

3、到硝酸纖維素膜上；第三步，用標記了放射性同位素（或生物素）的目的DNA片段作為探針與硝酸纖維素膜上的DNA進行雜交；第四步，將X光底片壓在硝酸纖維素膜上，在暗處使底片感光；第五步，將X光底片沖洗，如果在底片上出現(xiàn)黑色條帶，則表明受體植物染色體DNA上有目的基因。Northern雜交DNA和RNA分子之間的雜交。它是檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA的方法，具體做法與Southern雜交相同，只是第一步從受體植物中提取的是mRNA而不是DNA，雜交帶的顯現(xiàn)也與Southern雜交相同。Western雜交蛋白質(zhì)分子（抗原抗體）之間的雜交。它是檢測目的基因是否表達出蛋白質(zhì)的一種方法。具體做法是：第一步，將目的基因在大腸桿菌中表達出蛋白質(zhì)；第二步，將表達出的蛋白質(zhì)注射動物進行免疫，產(chǎn)生相應的抗體，并提取出抗體（一抗）；第三步，從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，走凝膠電泳；第四步，將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上；第五步，將抗體（一抗）與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交，這時抗體（一抗）與目的基因表達的蛋白（抗原）會特異結(jié)合。由于這種抗原抗體的結(jié)合顯示不出條帶，所