實(shí)驗(yàn)一天然產(chǎn)物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)天然產(chǎn)物中所含的化學(xué)成分種類很多，在深入研究之前應(yīng)首先了解其中含有哪些類型的化學(xué)成分，如生物堿、皂甘、黃酮類等等。這就需要進(jìn)行各類化學(xué)成分的系統(tǒng)定性預(yù)試驗(yàn)。或根據(jù)研究的需要進(jìn)行單項(xiàng)預(yù)試法來初步判斷。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求掌握未知成分的天然產(chǎn)物是怎樣初步提取分離的，熟悉各主要成分的試管試驗(yàn)、沉淀反應(yīng)和紙層析、薄層層析的方法并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果判斷含有什么類型的化學(xué)成分。二、基本原理利用各類成分的顏色反應(yīng)和沉淀反應(yīng)，對天然產(chǎn)物的提取液進(jìn)行檢查可以初步判斷其中的化學(xué)成分。由于提取液大多數(shù)顏色較深，影響對顏色變化的觀察，可以使用薄層層析（TLC）或紙層析（PC）等方法對天然產(chǎn)物的提取液進(jìn)行初步分離，再進(jìn)一步檢查。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：利用不同成分在各種溶劑中的溶解度的不同，一般可采用以下3種溶劑分別提取，試驗(yàn)。.水浸液：取中草藥粗粉5g加水60ml,在50?60℃的水浴上加熱1小時(shí)，過濾，濾液進(jìn)行下列試驗(yàn)。

*在試管進(jìn)行，△在濾紙或硅膠CMC-Na薄層板上進(jìn)行，下檢查項(xiàng)目試劑名稱糖*1、酚醛縮合反應(yīng)*2、菲林試劑—酚類△1%FeCl8試劑—鞣質(zhì)△1、1%FeCl8試劑營類或多糖*1、酚醛縮合反應(yīng)—*2、加6NHCl酸化，加熱煮沸數(shù)分鐘，冷后仔細(xì)觀察有無絮狀沉淀*3、菲林試劑，觀察水解前后也。沉淀量有無增加。2皂昔*泡沫試驗(yàn)生物堿*1、碘化鉍鉀試劑*2、硅鴇酸試劑同。糖鑒定(1)a-萘酚一硫酸試劑 檢查還原糖。①溶液I：10%a-萘酚乙醇溶液。溶液H：硫酸。取1ml樣品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I2滴?3滴，混勻，沿試管壁緩緩加入少量溶液11,二液面交界處產(chǎn)生紫紅色環(huán)為陽性反應(yīng)。(2)斐林試劑檢查還原糖。溶液I：6.93g結(jié)晶硫酸銅溶于100ml水中。溶液II：34.6g酒石酸鉀鈉、10g氫氧化鈉溶于100ml水中。取1ml樣品熱水提取液，加入4滴?5滴用時(shí)配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，產(chǎn)生磚紅色沉淀為陽性反應(yīng)。如檢查多糖和甘，取1ml樣品水提液，加入1m110%鹽酸溶液，在沸水浴上加熱10min,過濾，(成鹽去除雜質(zhì))再用10%氫氧化鈉溶液調(diào)至中性，按上述方法檢查還原糖?；蛘咧苯佑酶咝б合嗌V看色譜圖。酚類鑒定試劑(1)三氯化鐵試劑檢查酚類化合物、鞣質(zhì)1%?5%三氯化鐵水溶液或乙醇溶液，加鹽酸酸化。取1ml樣品的乙醇溶液，加入試劑1滴?2滴，顯綠、藍(lán)綠或暗紫色為陽性反應(yīng)。作色譜顯色劑用，噴灑后，顯綠或蘭色斑點(diǎn)為陽性。.乙醇提取液取中草藥粗粉5g,加5?12倍量95%乙醇，在水浴上加熱回流提取1小時(shí)，過濾，濾液留2ml作（1）項(xiàng)試驗(yàn)，其余回收乙醇至無醇味，并濃縮成浸膏狀，浸膏分為二部分，一部分加少量2%HCL振搖溶過濾。分出酸液，作（2）項(xiàng)式驗(yàn)，附于濾紙上的一部分再以少量乙醇溶解，溶液作（3）項(xiàng)試驗(yàn)；另一部分浸膏以少量乙酸乙酯溶解，溶液置分液漏斗中加適量5%NaOH振搖，使酚性物質(zhì)及有機(jī)酸等轉(zhuǎn)入下層氫氧化鈉水溶液中，剩下的乙酸乙酯為中性部分，用蒸餾水洗去堿性即可備用，將乙酸乙酯液2?3ml，在水浴上蒸干，以1~2ml乙醇溶解作（4）項(xiàng)試驗(yàn)（1）項(xiàng)試驗(yàn)檢查項(xiàng)目酚 類鞣 質(zhì)試劑名稱△1%FeCl3△1%FeCl3結(jié) 果（2）項(xiàng)試驗(yàn)

3、石油醚提取液取中草藥粗粉1g,加10ml石油酷（沸程60?90℃）,放置2~3小時(shí)，過濾，濾液置表面皿上任其揮發(fā)，殘留物進(jìn)行下列試驗(yàn)：檢查項(xiàng)目甾體或三萜類揮發(fā)油和油酯試劑名稱*1、醋酎一濃硫酸試驗(yàn)石油酸提取液滴于濾紙片上，觀察有無油斑并在加熱后能否發(fā)揮結(jié)果黃酮類鑒定試劑（1）鹽酸-鎂粉試劑檢查黃酮（醇）、二氫黃酮（醇）類化合物。取1ml樣品的乙醇溶液，加入數(shù)毫克鎂粉，滴加數(shù)滴鹽酸，必要時(shí)水浴上微熱，顯紅-紫色為陽性反應(yīng)。（3）三氯化鋁試劑檢查具有鄰二酚羥基或3-羥基、4-酮基或5-羥基、4-酮基的黃酮類化合物。1%三氯化鋁乙醇溶液或5%三氯化鋁乙醇溶液。噴灑前、后將薄層板置日光下和紫外光燈下觀察，呈黃色或黃綠色熒光為陽性反應(yīng)也可在濾紙上或試管中進(jìn)行。(3)醋酸鎂試劑 檢查黃酮類，二氫黃酮類化合物，及羥基蒽醍類衍生物。1%醋酸鎂甲醇溶液。在濾紙或薄層板上，點(diǎn)1滴樣品醇溶液，揮去醇后，點(diǎn)1滴試劑于樣品斑點(diǎn)邊緣，加熱干燥，于紫外燈下觀察，黃酮類顯黃色熒光，二氫黃酮類呈天藍(lán)色熒光。顯橙紅色為大黃素型蒽醍，顯紫色為茜草型蒽醍。生物堿鑒定試劑(1)改良碘化鉍鉀試劑為生物堿通用顯色劑。溶液I：0.85g次硝酸鉍溶于10ml冰醋酸，加水40ml。溶液H：8g碘化鉀溶于20ml水中。溶液I和H等量混合，于棕色瓶中可以保存較長時(shí)間。目前市場上有碘化鉍鉀試劑可供直接配制：7.3g碘化鉍鉀、冰醋酸10ml加水60ml。取1m1樣品的稀酸溶液加1滴?2滴試劑，產(chǎn)生桔紅色渾濁或沉淀為陽性反應(yīng)。如作薄層色譜顯色劑，取混合液1m1、醋酸2ml、水10ml混合即得。噴灑后呈桔紅色斑點(diǎn)為陽性反應(yīng)(2)苦味酸試劑 為生物堿通用沉淀試劑?？辔端?g溶于100ml水中。取1ml樣品中性溶液，加入試劑1滴?2滴，產(chǎn)生黃色晶形沉淀。(3)硅鴇酸試劑 為生物堿通用沉淀試劑。1g硅鴇酸溶于20ml水中，加10%鹽酸使成pH2左右。取1ml樣品的稀酸溶液，加入1滴?2滴試劑，產(chǎn)生白色至褐色沉淀為陽性反應(yīng)。四、藥品試劑：中藥飲片每組每種8克生物堿試劑(1)碘化鉍鉀(Dragendorff)試劑：出現(xiàn)桔紅色或黃色沉淀。(2)苦味酸(Hager)試劑，樣品液需調(diào)至中性后加試劑，出現(xiàn)黃色晶形沉淀。(3)硅鴇酸(Bertrand)試劑：出現(xiàn)淡黃色或灰白色沉淀，在薄層板上應(yīng)時(shí)，加熱后出現(xiàn)黑色斑點(diǎn)。酚類、鞣質(zhì)試劑1%三氯化鐵水或乙醇試劑氨基酸、蛋白質(zhì)試劑茚三酮(Ninnydrin)試劑糖、多糖和甘試劑(1)a-萘酚試劑、Molish試劑(2)菲林氏反應(yīng)(Fehling試劑):溶液I：69.3克結(jié)晶硫酸銅溶于1000毫升水中。溶液H：349克灑石酸鉀鈉及氫氧化鈉100克，溶于1000毫升水中。皂營試劑濃硫酸試劑黃酮類試劑鹽酸一一鎂粉反應(yīng)醋酸鎂反應(yīng)1%三氯化鋁乙醇液香豆素試劑1%三氯化鐵水溶液Gibb氏反應(yīng)：4-氨基安替比林-鐵氰化鉀(Emerson)4、玻璃儀器：(每2人或3人一組，每組一套)(1)試管10個(gè)，滴管2個(gè)，玻棒1支(2)100ml圓底燒瓶一個(gè)，250ml圓底燒瓶一個(gè)，25cm球型或蛇型冷凝管一個(gè)，有機(jī)溶劑蒸餾回收裝置1套，50ml燒杯3個(gè)，25ml具塞錐形瓶，(3)有孔白瓷板1個(gè)(4)濾紙，乳膠管、藥勺儀器：(1)普通天平，(2)分析天平，(4)電水浴鍋五、思考題實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：9學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)二蘆丁的提取、分離及鑒定一、目的要求.以蘆丁為實(shí)例學(xué)習(xí)黃酮類成分的提取分離方法。.掌握用黃酮甘水解制取黃酮甘元的方法。.了解黃酮類化合物的一般性質(zhì)。二、基本原理槐米系豆科屬植物槐樹SopHorajaponica.L.的花蕾，歷來作為止血藥，治療痔瘡、子宮出血、吐血、鼻出血，并有清肝瀉火，治療肝熱目赤，頭痛眩暈的功能。其主要化學(xué)成分為蕓香甘(蘆丁)，含量高達(dá)12%?20%,蕓香甘廣泛存在于植物中，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含有蕓香甘的植物高達(dá)70種以上，尤以槐米和喬麥中含量最高。藥理實(shí)驗(yàn)證明蕓香甘有調(diào)節(jié)毛細(xì)血管滲透作用，臨床上用作毛細(xì)血管性止血藥，常作為高血壓癥的輔助用藥?；泵字兄饕煞值奈锢硇再|(zhì).蕓香甘（蘆丁， rutin）：cho.3ho，淡黃色針狀結(jié)晶，mpl74℃?178℃,無水物為188℃?190℃。溶解度：冷水中1：8000,熱水中1：200,冷乙醇中1：300,熱乙醇中1：30,冷吡啶中1：12,微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、石油醚等溶劑。易溶于堿液，呈黃色，酸化后又析出，可溶于硫酸和鹽酸，呈棕黃色，加水稀釋又析出。UV九EtoHnm：259,299sh,359。max.槲皮素（quercetin）：cho.2ho,黃色結(jié)晶，mp313℃?314℃,無水物為316℃。15 107 2溶解度：冷乙醇中1：290,沸乙醇中1：23,可溶于甲醇、乙酸乙酯、吡啶、丙酮等溶劑，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。UV九EtoHnm：255,269sh,301sh,max370。蕓香甘（蘆丁， rutin）.蕓香甘分子中具有酚羥基，顯弱酸性，在堿水中成鹽增大溶解能力，用堿水為溶劑煮沸提取，提取液加酸酸化后又成為游離的蕓香甘而析出。并利用蕓香甘對冷水和熱水的溶解度相差懸殊的特性進(jìn)行精制。.黃酮甘可通過酸水解得到昔元和糖，并可通過薄層色譜法和紙色譜法進(jìn)行檢識。.利用黃酮類化合物對紫外光有特定吸收的特征進(jìn)行結(jié)構(gòu)測定；也可制備乙?；镞M(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1自槐花米中提取蘆?。?提取方法：稱取槐花米粗粉20g（壓碎），加沸水300ml,加熱煮沸30min,四層紗布趁熱過濾，殘?jiān)ㄔ俨僮饕淮危喜纱螢V液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，減壓抽濾，用蒸餾水洗滌蕓香甘結(jié)晶，抽干，得粗制蕓香甘，置空氣中干燥后，稱重。.重結(jié)晶方法：取粗蘆丁2g,加去離子水或蒸餾水400ml,加熱煮沸，趁熱抽濾，放置過夜析晶（或放冷析晶），抽濾，得精制蘆丁。記錄：粗蘆丁得率多少？精制蘆丁得率多少？熔點(diǎn)？.蘆丁的水解：取蘆丁1g,加2%H2sO’80ml,小火加熱微沸回流30分鐘至1小時(shí)。開始加熱10分鐘為澄清溶液，逐漸析出黃色小針狀結(jié)晶，即槲皮素，抽濾取結(jié)晶（保留濾液20毫升，以檢查其中所含單糖），沉淀物為蕓香甘甘元（槲皮素），用蒸餾水洗至中性，抽干水分，晾干，稱量。得粗制槲皮素，再用乙醇重結(jié)晶得精制槲皮素。加50%乙醇(按1克90ml量)加熱回流使槲皮素粗晶溶解，趁熱抽濾，放置析晶，抽濾得精制品，在減壓下110℃干燥可得槲皮素?zé)o水物。測熔點(diǎn)，進(jìn)行薄層層析鑒定。取蕓香甘水解后的濾液20ml,加飽和氫氧化鋇溶液中和至中性(攪拌下進(jìn)行)，濾去白色的硫酸鋇沉淀，濾液濃縮至2ml?3ml或蒸于后，加2ml?3ml乙醇溶解，作為糖的供試液。.鑒定呈色反應(yīng)取蕓香甘及槲皮素精品約10mg,各用5ml乙醇溶解，制成樣品溶液，按下列方法進(jìn)行試驗(yàn)，比較昔元和昔的反應(yīng)情況。(1)Molish反應(yīng)取樣品溶液1ml,加100%a—萘酚溶液1ml,振搖后斜置試管，沿管壁滴加0.5ml硫酸，靜置，觀察并記錄液面交界處顏色變化。(2)鹽酸一鎂粉反應(yīng) 蕓香甘與槲皮素溶液分別置于兩試管中，加入金屬鎂粉少許，鹽酸2滴?3滴，觀察并記錄顏色變化。(3)醋酸鎂紙片反應(yīng) 取兩張濾紙條，分別滴兩滴蕓香甘、槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸鎂甲醇溶液兩滴，于紫外光燈下觀察熒光變化，記錄現(xiàn)象。(4)利三氯化鋁紙片反應(yīng)在兩張濾紙條上分別滴加蕓香甘、槲皮素醇溶液后，各加1%三氯化鋁乙醇溶液兩滴，于紫外光燈下觀察熒光變化，記錄現(xiàn)象。（5）鋯一檸檬酸反應(yīng)取樣品溶液2ml,加2%二氯氧鋯甲醇溶液3滴?4滴，觀察顏色，然后加入2%檸檬酸甲醇溶液3滴?4滴，觀察并記錄顏色變化。色譜鑒定（1）蕓香甘和槲皮素的薄層色譜樣品自制蘆丁、槲皮素對照品蘆丁、槲此素展開劑（1）正丁醇-醋酸-水（4：1：5上層或4：1：1）；（2）25%醋酸水溶液；（3）85%醋酸水溶液顯色（1）可見光下觀察，再在紫外光下觀察；（2）經(jīng)氨氣熏后再觀察；（3）噴三氯化鋁試劑后再觀察點(diǎn)樣：提取的槲皮素及蕓香甘的乙醇溶液和對照品的乙醇溶液。展開劑：正丁醇一醋酸一水（4：l：5）上層溶液。展開方式：預(yù)飽和后，上行展開。顯色：噴灑三氯化鋁試劑前后，置日光及紫外光燈（365nm）下檢視色斑的變化。觀察記錄：記錄圖譜及斑點(diǎn)顏色。（2）蕓香甘與槲皮素的聚酰胺色譜層析材料：聚酰胺薄膜。點(diǎn)樣：提取的蕓香甘與槲皮素的乙醇溶液和對照品的乙醇溶液。展開劑：乙醇-水（7：3）,水飽和的正丁醇一醋酸（10：0.2）。展開方式：上行展開。顯色：噴灑三氯化鋁試劑前后，置日光及紫外燈光（365nm）下檢視色斑的變化。觀察記錄：記錄圖譜及斑色顏色。（3）糖的色譜鑒定層析材料：新華層析濾紙NO.2。點(diǎn)樣：（三）中糖的供試液及葡萄糖、鼠李糖對照品溶液。展開劑：正丁醇一醋酸一水（4：l：5）上層溶液。展開方式：上行展開。顯色：氨性硝酸銀試液，噴灑后先用電吹風(fēng)冷吹至于，再吹熱風(fēng)至出現(xiàn)斑點(diǎn)為止。觀察記錄：記錄圖譜及斑點(diǎn)顏色。四、藥品試劑藥品：每組槐花米20克主要儀器及試劑儀器:（1）燒杯（100ml,500ml）；（2）圓底燒瓶（100ml,150ml）；（3）冷凝管