醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)“三基”訓(xùn)練

實(shí)驗(yàn)理論與技能分冊科研處編北京老年病醫(yī)療研究中心科研處編首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院200年分子生物學(xué)基本概念,基本理論1、什么是分子生物學(xué)?答:分子生物學(xué)是1945年由WilliamAstbury首次提出的,指的是對生物大分子的化學(xué)和物理結(jié)構(gòu)的研究。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,它已滲透到各個學(xué)科,成為各學(xué)科領(lǐng)域的不可分割的部分。2、生物大分子主要包括哪幾類?答:生物大分子主要有三類:蛋白質(zhì)、核酸和多糖,它們分別是氨基酸、核甘酸和糖的多聚體，分子量相當(dāng)大（104?10吐）。3、蛋白質(zhì)的基本概念是什么?答：蛋白質(zhì)是由若干個氨基酸構(gòu)成的多聚物，也稱為多肽。相鄰的氨基酸之間通過肽鍵相連。蛋白質(zhì)一端具有一個游離的ーNH2,稱作氨基端或N端,另一端具有一個游離的-COOH,稱作按基端或C端。4、核酸的基本概念是什么?答：核酸是由核甘酸組成的多聚物，每個核甘酸由下列三種成分組成：戊糖（五碳糖）：在RNA為核糖,在DNA為2，脫氧核糖。堿基：連接在糖的1'一碳原子上的噁吟堿基（腺噪吟A和鳥噁吟G）或喀咤堿基（胞嚥咤C、胸腺嘴咤T和尿嗑咤U）DNA和RNA都含AGC,T只在DNA中發(fā)現(xiàn),U只在RNA中發(fā)現(xiàn)。（3）磷酸基：磷酸基接在糖的5’碳原子上。（1）和（2）組成核甘，核甘和磷酸組成核甘磷酸，即核甘酸。5、多糖的基本概念是什么?答：多糖是糖（最常見的是葡萄糖）的多聚物或糖的衍生物的多聚體。6、決定蛋白質(zhì)和核酸三維結(jié)構(gòu)的非共價作用有哪些?答：有氫鍵、疏水鍵、離子鍵、范德瓦耳斯鍵。7、什么是DNA的ー級結(jié)構(gòu)?答：DNA的ー級結(jié)構(gòu)是指DNA的核甘酸順序。研究DNA的核甘酸順序是進(jìn)ー步研究基因的結(jié)構(gòu)、調(diào)控及DNA高級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)。8、什么是DNA的二級結(jié)構(gòu)?答：DNA的二級結(jié)構(gòu)分兩類，ー類是右手螺旋。如A、B、C型DNA,另ー類是局部的左手螺旋，即Z-DNA。9、什么是DNA的高級結(jié)構(gòu)?答:DNA的高級結(jié)構(gòu)也稱超螺旋結(jié)構(gòu),是指DNA雙螺旋鏈的扭曲。DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)使DNA處于能量最低的狀態(tài)。10、簡述DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)(Watson-Crick模型)答:DNA由兩條鏈彼此盤繞形成雙股螺旋,糖ー磷酸骨架在分子的外側(cè)沿螺旋軌跡運(yùn)行,堿基在中央成螺旋排列，-一條鏈的堿基與另一條鏈的堿基氫鍵配對,形成噁吟與嘴咤堿基對A-T和G-C。每ー個堿基對的兩個堿基位于同一平面,垂直于螺旋軸，每相鄰的堿基對旋轉(zhuǎn)36℃,相距3.4A。因此每匝螺旋有10對堿基,長34A。雙螺旋的直徑是20A。螺旋外部有兩個螺旋形槽，深寬的稱為大溝,淺窄的稱為小溝。11、簡述DNA的堿基配對原則?答：[A]=[T],[G]=[C],A-T之間有兩對氫鍵,G-C之間有三對氫鍵。12、什么叫DNA的變性?答:雙鏈DNA(或天然DNA)兩條鏈之間的結(jié)合力遭到破壞,兩條鏈分離成單鏈DNA的過程叫做變性。通常用加熱或髙PH的方法使DNA變性。13、什么是熔解曲線?什么是Tm值?答：當(dāng)DNA溶液通過加熱變性時，其性質(zhì)的變化與溫度之間的關(guān)系圖稱為解鏈曲線或熔解曲線。檢測DNA變性的方法可以是測定DNA溶液在260nm波長處的紫外光吸收值[A260],隨溫度的升高,A260升高，當(dāng)A260升高達(dá)到最大值一半時的溫度，稱作解鏈溫度;用Tm表示。14、什么是DNA的呼吸現(xiàn)象?答:DNA雙鏈的某些區(qū)域被打開變成單鏈的泡，這種現(xiàn)象稱作DNA的“呼吸”,可使特定的蛋白質(zhì)與DNA分子發(fā)生相互作用和“閱讀”它編碼的信息。A-T區(qū)比富含G-C區(qū)更容易發(fā)生呼吸。15、什么是DNA的復(fù)性?答：變性DNA溶液經(jīng)處理后可重:新形成天然DNA,這ー過程稱作變性或退火。16、RNA主要有幾種類型?各有什么功能?答:RNA主要有三種類型：核糖體RNA(rRNA)、轉(zhuǎn)移RNA(tRNA)和信使RNA(mRNA)。rRNA為蛋白質(zhì)的合成場所、tRNA是氨基酸的搬運(yùn)工具，mRNA貯存編碼信息。17、什么是DNA的復(fù)制?答:DNA以原來的分子為模板合成新的DNA分子的過程,叫DNA復(fù)制。18、什么是DNA的半保留復(fù)制?答:DNA復(fù)制時首先雙鏈之間氫鍵斷開,以每條單鏈作為模板合成新鏈,因此新的DNA雙螺旋,一條來自親代鏈、一條為新合成的子鏈。DNA的這種復(fù)制方式叫做DNA的半保留復(fù)制。19、什么是復(fù)制叉和復(fù)制子?答:DNA復(fù)制是由一個固定的起始點(diǎn)進(jìn)行的，DNA雙鏈在此點(diǎn)上解旋成雙股單鏈呈叉形，稱復(fù)制叉。ー般把一個生物體的單獨(dú)復(fù)制單位稱為ー個復(fù)制子。ー個復(fù)制子只含一個復(fù)制起點(diǎn)。20、什么是拓?fù)洚悩?gòu)酶?答：拓?fù)洚悩?gòu)酶能使DNA產(chǎn)生各種拓?fù)鋵W(xué)的變化,最常見的是產(chǎn)生負(fù)超螺旋性和消除超螺旋性。多見的有兩類,拓?fù)洚愇锩窱和拓?fù)洚愇锩窰。21、DNA復(fù)制的特點(diǎn)有哪些?答：(1)半保留復(fù)制(2)忠實(shí)性(3)半不連續(xù)復(fù)制。22、DNA復(fù)制過程中有哪幾種聚合酶參與?有哪些共同點(diǎn)?答：DNA聚合酶I(P0I1)和DNA聚合酶HI(POLIH)在DNA復(fù)制過程中起作用。其共同點(diǎn)是：(1)同時要有帶ー個游離3,~0H基團(tuán)的引物和一個模板。(2)聚合作用是生長鏈末端的3'-0H基團(tuán)與加上去的核昔ー5-,三磷酸之間的反應(yīng)。因此鏈的生長是自5'-3’方向進(jìn)行的。23、P0LI有哪些生物活性?答：(1)5'-3'聚合酶活性:使DNA復(fù)制進(jìn)行。3'-5'外切酶活性：可以切除誤配對的堿基,也稱poll的校對功能。5，一3’外切能活性:主要功能是切除核糖核甘酸引物。24、POLIH具有哪些生物活性?答：5'-3‘聚合隨活性：DNA復(fù)制的主要聚合前。3'f5‘外切酶活性：DNA復(fù)制中起校對功能。25、什么是DNA連接酶?答：DNA連接酶能把3'-0H基因與5'-P基因相連接,在DNA復(fù)制過程和其他重要過程中發(fā)揮作用。答:DNA復(fù)制時,在不同點(diǎn)形成許多小片段,再連接成整鏈,這稱作DNA的不連續(xù)復(fù)制,這些小片段稱岡崎片段。27、什么是DNA的0復(fù)制?答:大部分DNA分子以環(huán)狀結(jié)構(gòu)進(jìn)行復(fù)制,這些環(huán)像希臘字母9,所以習(xí)慣稱其為。復(fù)制。環(huán)復(fù)制引起的拓?fù)鋵W(xué)問題靠DNA促旋前來解決。28、DNA復(fù)制起始時前導(dǎo)鏈或引物的合成是山什么酶催化完成的?答：ー種是RNA聚合酶,另ー種是引物合成酶。29、DNA復(fù)制起始時雙螺旋的解鏈?zhǔn)巧绞裁疵复呋瓿傻?答：解旋前。30、什么是ssb蛋白?答：大腸桿菌DNA復(fù)制時,為了避免單鏈區(qū)退火或形成鏈內(nèi)氫鍵,有一種蛋白結(jié)合在單鏈DNA上,稱單鏈結(jié)合蛋白(ssbprotein)〇31、簡述大腸桿菌DNA的復(fù)制過程?答:解旋酶由ATP水解所驅(qū)動，并可能借助于ssb蛋白的結(jié)合把螺旋解開。不配對的堿基為ssb蛋白所覆蓋。前導(dǎo)鏈由polIH催化加上核甘酸而沿著一條親鏈前進(jìn)。DnaB蛋白復(fù)合物沿另一條親鏈移動,預(yù)引發(fā)它使引物合成酶合成引物RNA。pollll把核甘酸加到引物上,從而合成了前體片段。這種合成繼續(xù)到前ー個前體片段的引物;這時由polI取代polIH,通過切口平移除去RNA,并由DNA取代，RNA一旦除去，DNA連接酶就封閉切口,從而使前體片段參入后隨鏈。復(fù)制又繼續(xù)前進(jìn)直至完成復(fù)制。32、DNA復(fù)制的起始有哪兩種方式?答:(1)全程起始:其中前導(dǎo)鏈從頭開始。(2)共價延伸:其中前導(dǎo)鏈共價連接到親鏈。33、DNA復(fù)制主要有哪種方式?答：(1)線性DNA雙向復(fù)制。(2)環(huán)狀DNA0型復(fù)制。(3)環(huán)狀DNA滾環(huán)復(fù)制。(4)環(huán)狀DNADー環(huán)復(fù)制。34、什么是D環(huán)?答：在DNA復(fù)制的全程起始中,前導(dǎo)鏈的合成先于后隨鏈的合成。在第一個前體片段合成開始前，存在著ー個復(fù)制泡,是由一個雙鏈分去（由一條親鏈與前導(dǎo)鏈配對而成）和一個單鏈分去（是未復(fù)制的第二條親鏈）所組成。因?yàn)榍皩?dǎo)鏈置換了未復(fù)制的親鏈,所以這個泡稱為置換環(huán)或D環(huán)。35、什么叫滾環(huán)復(fù)制或6復(fù)制?答:DNA雙螺旋環(huán)產(chǎn)生一含3'-0H和5'-P末端的切口,在解旋酶和ssb影響下,形成一復(fù)制叉。前導(dǎo)鏈的合成從3,-0H端開始延伸，并與后隨鏈的親鏈共價連接。后隨鏈以新合成的前導(dǎo)鏈為模板合成。這一復(fù)制模式的結(jié)果是產(chǎn)生帶有線狀分去的環(huán),類似于希臘字母5,被稱為6復(fù)制或滾環(huán)復(fù)制。36、什么是雙向復(fù)制?答:DNA分子通過兩個復(fù)制叉沿著環(huán)按相反方向移動，稱為雙向復(fù)制。37、真核生物DNA的復(fù)制與原核生物DNA復(fù)制的相同點(diǎn)和不同點(diǎn)有哪些?答：相同點(diǎn)：都是半保留復(fù)制,半不連續(xù)復(fù)制,復(fù)制過程都存在引發(fā)、延長和終止三個階段,都必須有相應(yīng)功能的蛋白質(zhì)（如ssb）和前（如DNA聚合酶）參與等等。相異之處在于：（1）真核生物每條染色質(zhì)上可以有多處起始點(diǎn),而原核生物的起始點(diǎn)只有一個,（2）真核生物的染色體在全部復(fù)制完成之前,各個起始點(diǎn)上DNA的復(fù)制不能再開始;而原核生物在起始點(diǎn)上可以連續(xù)地開始新的DNA復(fù)制，表現(xiàn)為雖有一個復(fù)制子,但可有多個復(fù)制叉。38、真核細(xì)胞中存在哪幾種DNA聚合酶?答：在真核細(xì)胞中存在四種DNA聚合酶,通常將這些能依次稱為DNA聚合酣a、B、Y和線粒體DNA聚合防。其中a酶在細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制中起關(guān)鍵作用,B酶在DNA損傷修復(fù)中起作用，Y前在分裂細(xì)胞的DNA復(fù)制調(diào)控方面起作用。39、DNA復(fù)制的調(diào)控有哪幾方面?答：（1）復(fù)制起點(diǎn)的調(diào)節(jié):通過復(fù)制起點(diǎn)區(qū)反轉(zhuǎn)重復(fù)順序的變構(gòu)與一些特異蛋白結(jié)合來調(diào)節(jié)復(fù)制的方向、速度等。（2）起始蛋白的調(diào)節(jié):起始蛋白與DNA起始部位的結(jié)合,導(dǎo)致局部結(jié)構(gòu)變化,從而引起DNA復(fù)制。（3）復(fù)制過程的調(diào)節(jié)：DNA復(fù)制過程中常受到ー些蛋白及DNA聚合酶的調(diào)節(jié)。（4）夏制頻率的調(diào)節(jié):每種生物體DNA復(fù)制與其細(xì)胞周期有關(guān)。如真核生物每個細(xì)胞周期有?次全DNA的復(fù)制，而原核生物中某些質(zhì)粒在細(xì)菌細(xì)胞ー個細(xì)胞周期中可以復(fù)制若干拷貝。（5）生物膜可能參與DNA復(fù)制的起始過程。40、引起DNA分子改變的原因有哪些?答：有3種機(jī)制改變DNA的結(jié)構(gòu)：（1）復(fù)制過程中的堿莽置換;（2）山堿基或Nー糖糖鍵固有的化學(xué)不穩(wěn)定性所引起的堿基變化;（3）其他化學(xué)物質(zhì)和環(huán)境因素的作用所引起的變化。41、DNA分子改變的類型有哪幾種?答:（1）堿基置換:由于復(fù)制過程中校對功能的遺漏,基自發(fā)脫氨作用使嘴咤變?yōu)槟虼鼗蚴瓜賴g吟變?yōu)榇吸S噪吟,使一條鏈上的錯誤堿基不能與另?條鏈的相應(yīng)堿基形成氫鍵。堿基丟失:喋吟核甘酸的Nー糖甘鍵在生理溫度下自發(fā)斷裂，使喋吟從DNA上脫落，這ー過程稱為脫嗦吟作用。堿基改變:許多化學(xué)試劑和物理因素能使堿基變成截然不同的化合物。如紫外線照射形成的胸腺嚅咤二聚體。（4）單鏈斷裂:許多試劑能裂解磷酸二酯鍵,如過氧化物、硫基化合物和某些金屬離子（如Fe?+和Cu2+）單鏈斷裂往往通過DNA連接酶的作用來修復(fù)。雙鏈斷裂：足夠多的單鏈斷裂可使雙鏈彼此相對，結(jié)果就出現(xiàn)雙螺旋斷裂。雙鏈斷裂往往不能修復(fù)。交聯(lián)：某些抗生素（如絲裂霉素C）和某些試劑（亞硝酸離子）能使DNA分子一條鏈上的堿基與互補(bǔ)鏈上的相應(yīng)堿基形成共價連接。42、胸腺喀咤二聚體的修復(fù)途徑有哪些?答:有4條途徑：①光修復(fù)②切割修復(fù)③重組修復(fù)④SOS修復(fù)。43、什么是轉(zhuǎn)錄?答:遺傳信息從DNA分子傳遞到RNA分子的過程叫轉(zhuǎn)錄。44、RNA的合成包括哪幾個階段?答:RNA的合成包括4個階段:①RNA聚合酶結(jié)合在模板的特定部位上②起始③鏈延伸④鏈終止和釋放。45、RNA合成的基本特性是什么?答:①RNA合成的前體是4種5'ー核甘三磷酸（rNTP）即ATP,GTP,CTP和UTP。②在聚合反應(yīng)中，ー個核甘酸上的3,-0H基因與第二個核甘酸上的5，磷酸基團(tuán)發(fā)生反應(yīng),釋放出焦磷酸二酯鍵。③RNA分子的堿基順序由DNA的堿基順序所決定。A-U,T-A,GV,C-G。④DNA分子的雙鏈中,只有一條鏈作模板。⑤RNA鏈按5'-3’方向延伸。⑥RNA聚合酸能起始鏈的生長，也就是說,它不需要引物。46、大腸桿菌RNA聚合前由哪幾個亞基組成?答：由5個亞基組成，2個相同的a亞基，B,B’和6亞基各1個。完整的酶稱為全酶，不含6亞基的酶稱為核心防。47、什么是Pribnow順序?什么是“保守的「’？答:大腸桿菌DNA轉(zhuǎn)錄起始時,拷貝出的!nRNA的第一個堿基左側(cè)的5-10個堿基區(qū)域是Pribnow順序的右末端,其全部順序都可認(rèn)為是基本順序TATAATG的變式。黑體的T是Pribnow順序中的第6個堿基,在至今定序的所有啟動子中都有這一堿基,因此被稱作‘‘保守的『’,通常把保守的T垂直對齊即可比較不同的順序。Pribnow順序被認(rèn)為是給RNA聚合酶取向的順序,使從左到右進(jìn)行合成;它也是打開雙螺旋形成開放啟因子復(fù)合物的區(qū)域。真核生物中相應(yīng)的一致順序是TATAAAA,稱TATA順序或Hogness順序。48、什么是ー35順序?答:真核生物啟動子中,拷貝出的niRNA的第一個堿基左側(cè)第35個堿基位置有一9個堿基的區(qū)域,被認(rèn)為是RNA聚合酶結(jié)合的起始點(diǎn),習(xí)慣稱作一35順序。49、什么是開放啟動復(fù)合物（Open-promotercomplex）?答：開放啟動復(fù)合物由RNA聚合酶和啟動子結(jié)合形成,是ー種高度穩(wěn)定的復(fù)合物,是鏈起始中的活性中間物。在這個復(fù)合物中，DNA雙螺旋的局部松開（“解鏈”）從Pribnow順序左側(cè)的10個堿基開始一直擴(kuò)展到轉(zhuǎn)錄的第一個堿基部位。這種解鏈?zhǔn)沁M(jìn)入的核甘酸進(jìn)行配對所必需。50、RNA聚合能起始部位結(jié)合哪種核苜三磷酸?答:只結(jié)合噁吟核苜三磷酸,即ATP和GTP。其中之一（往往是ATP）是鏈中的第一個核甘酸。51、RNA合成的終止順序有什么特征?答：RNA合成的終止發(fā)生在DNA分子的特定堿基順序上,它們有三個重要區(qū)域:第一區(qū)域是中央含非重復(fù)片段的反向重復(fù)堿基順序;如ABCDEF-XPZ-F'E'D'C'B'A',其中A-A’、B-B’等是互補(bǔ)的堿基。因此這個順序能在鏈內(nèi)堿基配對,在RNA轉(zhuǎn)錄物中和可能在DNA鏈中形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。第二個區(qū)域是在莖的近環(huán)端（有時全在莖內(nèi)）,是ー個G+C富集的順序。第三個區(qū)域（有時不存在）是A-T配對的順序,使RNA中產(chǎn)生6-8個尿嚥陡,其后往往跟隨一個腺噁吟。52、什么是5循環(huán)?答：RNA合成過程中，鏈延伸約8個核甘酸時,RNA聚合酶結(jié)構(gòu)改變,6亞基脫落:當(dāng)合成終止時，核心酶從DNA上解離,核心酶與8亞基重新結(jié)合形成全酶。這ー過程稱8循環(huán)。答:DNA轉(zhuǎn)錄成RNA時,只有雙鏈中的一條鏈轉(zhuǎn)錄,這條鏈就叫有義鏈。未被轉(zhuǎn)錄的DNA鏈稱為反義鏈。54、什么是順反子(Cistron)?答:相應(yīng)于一條多肽鏈的DNA片段加上起始信號和終止信號,被稱作順反子。編碼單個多肽的mRNA稱作單順反子mRNA;編碼不同的多肽鏈的mRNA稱作多順反子mRNA。55、什么是前導(dǎo)區(qū)(Leader)?弱化子(attenuator)?間隔順序(spacer)?答：mRNA分子編碼區(qū)之前的非翻譯區(qū)段稱為前導(dǎo)區(qū)。前導(dǎo)區(qū)中含有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成速度的調(diào)節(jié)區(qū),稱為弱化子。多順反子mRNA分子可能含有順反子間順序，長達(dá)幾萬個堿基，稱間隔順序(spacer)。56、核糖體RNA(rRNA)和轉(zhuǎn)移RNA(tRNA)經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后修飾后有哪些性質(zhì)?答:rRNA和tRNA經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后修飾或加工具有下列3個性質(zhì):①分子的末端為5,ー單磷酸，而非初級轉(zhuǎn)錄物的末端三磷酸;②rRNA和tRNA分子比初級轉(zhuǎn)錄物小得多;③所有tRNA分子都含有A,G,C,U以外的堿基，這些所謂的‘‘稀有”堿基并不存在于初級轉(zhuǎn)錄物中。57、真核生物與原核生物轉(zhuǎn)錄有什么區(qū)別?答:真核生物中的轉(zhuǎn)錄和mRNA的基本特性與細(xì)菌中的相類似，然而有下列5個明顯的區(qū)別。①真核生物細(xì)胞含3大類核內(nèi)RNA聚合酶,負(fù)責(zé)各類RNA的合成。②許多mRNA是長壽的。③5’和3’末端都受到修飾:5’末端形成“帽子(CAP)結(jié)構(gòu)“，3’末端有一多聚腺甘酸順序(Poly(A)④用作蛋白質(zhì)合成的mRNA模極只占初級轉(zhuǎn)錄物的1/10,在mRNA加工過程中,切除稱為內(nèi)含子(intron)的內(nèi)插順序，留下的片段重新連接。⑤所有真核生物的mRNA分子都是單順反子。58、真核生物RNA聚合能有幾類,分別參與哪種RNA的合成?答：真核生物含3類RNA聚合酶,分別以I、II、III表示。第I類存在于核仁內(nèi)，參與rRNA的合成;第1［類存在于核質(zhì)內(nèi),參與mRNA的合成;第HI類存在于核質(zhì)內(nèi),參與tRNA和5sRNA的合成。59、什么是真核生物mRNA的帽子結(jié)構(gòu)?答:真核生物mRNA分子的5'一端有甲基化的鳥背衍生物7一甲基鳥背(7-MeG),呈異常的5'-5‘鏈連到5’端核甘酸上,偶爾相鄰核甘酸的糖也被甲基化。7-(MeG)-5'-ppp-(G或A,可能甲基化的核糖)-3'-P-,這ー結(jié)構(gòu)被稱為帽子(Cap),其中，P和PPP分別代表單磷酸和三磷酸基因。帽子的功能可能是保護(hù)mRNA免受核酸酶的降解、或?yàn)榈鞍踪|(zhì)合成提供識別特征。60、什么是RNA的拚接(RNASplicing)?答:真核生物mRNA分子中內(nèi)含子切除和外顯子連接成成熟mRNA分子的過程,稱作RNA拚接。61、什么是斷裂基因?答:由于基因中有內(nèi)含子,使編碼ー個蛋白質(zhì)或多肽的DNA順序在基因上呈不連續(xù)狀,稱斷裂基因。62、什么是翻譯（translation）?答:細(xì)胞內(nèi)DNA指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的過程叫做翻譯。包括編碼和蛋白質(zhì)合成兩步。編碼就是將DNA的堿基順序翻譯成肽鏈的氨基酸順序。蛋白質(zhì)合成包括合成起始、鏈的延伸終止、釋放、折疊及合成后修飾過程。63、什么密碼子?有哪些特點(diǎn)?答：密碼子是指對應(yīng)于各種氨基酸的mRNA分子上的堿基順序,通常由3個堿基組成,密碼子有下述特性:①通用性：在所有生物中,密碼子ー氨基酸關(guān)系都是相同的（線粒體、葉綠體除外）；②簡并性：編碼同一氨基酸的密碼子往往不止ー個（甲硫氨酸和色氨酸除外）,它們往往只是第3個堿基不同;③起始密碼子標(biāo)志著肽鏈合成的起始，即AUC,編碼甲硫氨酸；④終止密碼子,3種密碼子標(biāo)志著肽鏈合成的終止,即UAA,UAG和UGA。64、什么是解碼作用?答;解碼作用是把mRNA分子中的堿基順序變成翻譯到蛋白質(zhì)分子中的氨基酸順序,這是由mRNA分子和氨酰tRNA合成酶完成的。65、簡述tRNA分子的二維結(jié)構(gòu)特征?答;tRNA分子的二維結(jié)構(gòu)類似平面的三葉草形,包括以下幾個結(jié)構(gòu)區(qū):①受體臂；3,-0H端有一個4堿基組成的單鏈區(qū),順序?yàn)镃CA-3'-0H,稱CCA或受體臂，其中A為氨基酸結(jié)合部位。②有三個大的單鏈環(huán)。（a）反密碼子環(huán);含有反密碼子,由3個堿基組成，與mRNA中的密碼子順序進(jìn)行堿基配対。（b）二氫尿嘴嚏環(huán)（DHULOOP）:含有二氫尿嚥嚏。（c）TWC環(huán);含有T-W-C順序;W為假尿喀咤。③有四個稱為干（臂）的雙鏈區(qū)。④有一額外臂（extaarm）o66、什么是搖擺假說（wobblehypothesis）?答;搖擺假說是用來解釋某些tRNA分子對應(yīng)于幾種密碼子的現(xiàn)象。這種假說認(rèn)為,因?yàn)榉疵艽a子位于單鏈RNA環(huán)中,密碼子一反密碼子相互作用也許不需要形成雙螺旋常見的空間結(jié)構(gòu),這樣對密碼子的第三個位置上的堿基要求是不太嚴(yán)格的,這樣通過結(jié)構(gòu)的稍稍搖擺,在密碼子和反密碼子之間可以存在其他的堿基對如AT,U-I,C-I和G-U等等，這樣就解釋了一種tRNA分子可對應(yīng)于幾種密碼子。也就是說，密碼子的簡并現(xiàn)象是由密碼子第三個堿基配對時搖擺引起的。67、什么是重疊基因(orerlappinygene)?答:?個DNA片段含有多重讀框,從而編碼多種不同的蛋白分子,這種現(xiàn)象稱重疊基因。68、肽鏈合成分哪幾個階段?各階段主要特征是什么?答:肽鏈合成分三個階段:①起始階段:mRNA結(jié)合到核糖體上,選擇起始密碼子，和攜帶第一個氨基酸的?；痶RNA結(jié)合;②延伸階段:通過肽鍵把兩個氨基酸相連,mRNA和核糖體彼此相對移動，使密碼子能成功地翻譯。③終止階段：合成好的蛋白質(zhì)從合成機(jī)構(gòu)上解離,釋放出核糖體開始另ー輪合在成。69、筒述大腸桿菌核糖體的結(jié)構(gòu)?答：大腸桿菌核糖體的完整顆粒稱為70s核糖體(S為沉降速率),含兩個亞基，分別為30S和50S。每個30S亞基含1個16SrRNA分子和21種蛋白質(zhì);第個50S亞基含2個rRNA分子(1個5srRNA分子和1個23SrRNA分子)和32種蛋白質(zhì)。70、什么是Shine-Dalgarno順序?答：在原核生物mRNA分子中有一特定的堿基順序AGGAGGU,能夠識別作為起始信號的特定AUG密碼子,稱作Shine-Dalgarno順序或核糖體結(jié)合部位。71、什么是30S前起始復(fù)合物和70S起始復(fù)合物?答：細(xì)菌中多肽合成由30S亞基、mRNA分子、fMet-tRNA、起始因子以及GTP一起組成30S前起始復(fù)合物,再與50S亞基連接形成70s起始復(fù)合物。72、什么是質(zhì)粒?質(zhì)粒有哪些基本特性?答：質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外的一些雙鏈閉環(huán)的DNA分子,是能夠進(jìn)行復(fù)復(fù)和遺傳的輔助性遺傳單位,其大小范圍從1Kb至200Kb以上不等。質(zhì)粒的基本特性如下：復(fù)制能力和不相容性：質(zhì)粒DNA能夠依賴于宿主編碼的酶和蛋白質(zhì)來進(jìn)行復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。利用同一復(fù)制系統(tǒng)的不同質(zhì)粒不能穩(wěn)定的和平共處，可稱之為不相容質(zhì)粒。當(dāng)兩個上述質(zhì)粒被導(dǎo)入同一細(xì)胞時,它們在復(fù)制及隨后分配到子細(xì)胞的過程中彼此競爭,細(xì)胞生長幾代后,占少數(shù)的質(zhì)粒將會喪失殆盡。轉(zhuǎn)移性：在自然條件下,很多質(zhì)粒都可以通過ー種稱為細(xì)菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)。選擇性標(biāo)記:質(zhì)粒能夠編碼ー些可識別性表型,稱作可選擇標(biāo)記。最常用的可選擇標(biāo)記是抗生素抗性基因，所涉及的抗生素包括氨葦青霉素、四環(huán)素、氯霉毒和卡那霉素(或新霉素)等。73、質(zhì)粒DNA小量制備過程中容易出現(xiàn)的問題及對策有哪幾種?答:質(zhì)粒DNA不能被限制酶所切割，主要是由于從細(xì)菌沉淀或從核酸沉淀中去除所有上清液時注意得不夠。大多數(shù)情況下,用酚氯仿對溶液進(jìn)行抽提可以去除小量制備物中的雜質(zhì)。若問題依然存在,可用離心柱層析法純化DNA?個別小量制備物會出現(xiàn)無質(zhì)粒DNA的現(xiàn)象,這幾乎肯定是由于核酸沉淀顆粒已同乙醉ー起被棄去。74、在大量制備質(zhì)粒DNA過程中,可通過什么方法來提高質(zhì)粒的產(chǎn)量?答:將細(xì)菌在豐富的培養(yǎng)基中37℃振搖一定時間(約25小時)，所得培養(yǎng)物的ODeoo達(dá)到約0.4,此時加氯霉素溶液,使終濃度為170ug/ml,于37℃劇烈振搖，繼續(xù)培養(yǎng)12-16小時。75、用于去除質(zhì)粒DNA中RNA的酶的名稱是什么?一般工作濃度是什么?答:核糖核酸酶A,習(xí)慣稱無DNA酶的胰RNA酶。一般工作濃度為20ug/ml。76、答:影響外源DNA片段和質(zhì)粒載體連接的因素有哪些?(1)外源DNA片段末端的性質(zhì)，見下表:外源DNA片段所帶末端克隆的要求說明平端要求髙濃度的DNA和連接酶①非重組體克隆的背景可能較高②質(zhì)粒和外源DNA接合處的限制酶切位點(diǎn)消失③重組質(zhì)粒會帶有外源DNA的串聯(lián)拷貝不同的突出端用兩種限制隨消化后,需純化質(zhì)粒載體以晝提高連接效率①質(zhì)粒與外源DNA接合處的酶切位點(diǎn)?？杀Ａ簪诜侵亟M體克隆的背景較低③外源DNA只以ー個方向插入到重組質(zhì)粒中相同的突出端線狀質(zhì)粒DNA常用磷酸酶處理①質(zhì)粒與外源DNA接合處的限制酶切位點(diǎn)常可保留②外源DNA會以兩個方向插入③重組質(zhì)粒會帶有外源DNA的串聯(lián)拷貝質(zhì)粒載體和外源DNA中限制能切位點(diǎn)的性質(zhì)：有兩種方案可以解決質(zhì)粒與外源DNA限制酶切位點(diǎn)的不匹配：A.在線狀質(zhì)粒的末端和(或)外源DNA片段的末端接上合成的接頭或銜接頭;B.控制反應(yīng)條件，用大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段部分補(bǔ)平帶3’凹端的DNA片段。77、對于常規(guī)的連接反應(yīng)來講，質(zhì)粒DNA與外源DNA的比率應(yīng)為多少?答：對于常規(guī)的連接反應(yīng)，質(zhì)粒DNA與外源DNA的比率應(yīng)〈1,這樣將可得到數(shù)量相宜的有效重組體。78、平端DNA的連接需要哪些基本條件?答:平端連接是低效反應(yīng),它要求以下4個條件:(1)低濃度(0.5mmol/l)的ATP；(2)不存在亞精胺ー類的多肽;(3)極高濃度的連接能(50Weiss單位/!nl)；(4)高濃度的平端。79、在平端DNA連接時,常常在反應(yīng)混合物中加入凝聚劑,常用的有哪些?它們的作用是什么?答:在平端DNA連接時,常常在反應(yīng)混合物中加入一些可促進(jìn)大分子群聚作用并可導(dǎo)致DNA分子凝聚成聚集體的物質(zhì),常用的有聚乙二醇和氯化六氨合高鉆。在連接反應(yīng)中,這些物質(zhì)具有兩個作用：(1)它們可使平端DNA的連接效率加大1-3個數(shù)量級，因此可使連接反應(yīng)在酶和DNA濃度不高的條件下進(jìn)行。(2)它們可以改變連接產(chǎn)物的分布，分子內(nèi)連接受到抑制，所形成的連接產(chǎn)物一律是分子間連接的產(chǎn)物。80、影響轉(zhuǎn)化效率的因素有哪些?答:下述3個因素對于獲得持續(xù)高的轉(zhuǎn)化效率來說是至關(guān)重要的:(1)轉(zhuǎn)化緩沖液中試劑的純度:務(wù)必使用所能得到的最高質(zhì)量的試劑,這些試劑應(yīng)分裝成小份，避光保存于冷處。(2)細(xì)胞的生長狀態(tài)：由于ー些不清楚的原因，直接用貯存于ー70C冰凍培養(yǎng)基中的貯存原種接種而進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)菌，所得到的轉(zhuǎn)化效率最高，不應(yīng)使用在實(shí)驗(yàn)室中連續(xù)傳代，貯存于4℃或貯存于室溫的培養(yǎng)物。(3)玻璃和塑料器皿的淸潔度：痕量的去污劑或其它化學(xué)物質(zhì)的存在可能大大地降低細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率,所以最好拔出ー批玻璃器皿專用于制備感受態(tài)細(xì)菌，而不作它用。這些玻璃器皿應(yīng)用手洗刷，再灌滿純水(Milli-Q級或其相當(dāng)?shù)募墑e),然后高壓滅菌,臨用前才把水倒掉。81、鑒定含單組質(zhì)粒的細(xì)菌菌落的方法有哪些?答：常用4種方法來鑒定含重組質(zhì)粒的細(xì)菌菌落：小規(guī)模制備質(zhì)粒DNA進(jìn)行限制酶切分析:a互補(bǔ)插入失活雜交篩選82、簡述aー互補(bǔ)的原理?答:現(xiàn)在使用的許多載體(如PUC系列)都帶有一個大腸桿菌DNA的短片段,其中含有a一半乳糖甘醜基因(lacZ)的調(diào)控序列和頭146個氨基酸的編碼信息。這個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點(diǎn),它并不破壞讀框，但可使少數(shù)兒個氨基酸插入到B一半乳糖甘酶的氨基端,而不影響功能。這種載體適用于可編碼B一半乳糖甘酶C端部分序列的宿主細(xì)胞。雖然宿主和質(zhì)粒編碼的片段各自都沒有酶活性，但它們可以融為一體,形成具有駒學(xué)活性的蛋白質(zhì)。這樣lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的B一半乳糖甘酶陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ),這訓(xùn)互補(bǔ)現(xiàn)象叫a互補(bǔ)。由a互補(bǔ)而產(chǎn)生的lac+細(xì)菌易于識別,因?yàn)樗鼈冊谏孜?ー澳ー4ー氨ー35弾朵ーB-D一半乳糖苜（X-lac）存在下形成藍(lán)色菌落,然而外源DNA片段插入到質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)后，幾乎不可避免地導(dǎo)致產(chǎn)生無a互補(bǔ)能力的氨基端片段。因此,帶重組質(zhì)粒的細(xì)菌形成白色菌落。這ー簡單的顏色試驗(yàn)大大簡化了在這種質(zhì)粒載體中鑒定市組體的工作,通過目測即可識別可能帶有重組質(zhì)粒的菌落。83、X噬菌體的復(fù)制方式有哪幾種?答:X噬菌體有下述兩種復(fù)制方式:在裂解性生長過程中，環(huán)狀病毒DNA分子被復(fù)制了許多倍，X噬菌體基因產(chǎn)物大量合成，并組裝成子代X噬菌體顆粒,最終宿主細(xì)胞裂解,釋放出許多感染性顆粒。在溶源性生長過程中,X噬菌體基因組通過位點(diǎn)專一重組整合入宿主菌DNA分子中,隨宿主菌DNA復(fù)制并轉(zhuǎn)入子代細(xì)菌中。在溶源狀態(tài)下,只有一個X噬菌體基因，即CI基因，處于表達(dá)狀態(tài)，它編碼ー個阻抑物。84、X噬菌體載體有哪兩種類型?答:只有一個限制酶切位點(diǎn)可供插入入源DNA的載體，稱作插入性教體。在可被外源DNA置換的X噬菌體DNA非必需區(qū)兩側(cè)有一對限制酶切位點(diǎn)的載體稱作置換性載體。85、簡述Xgt11載體的特征。答:Xgt11載體是ー個常用的，可用于免疫學(xué)篩選的載體。DNA片段（可達(dá)7.2Kb）插入lacZ內(nèi)的單ーECORI位點(diǎn)，如果插入片段的讀框與lacZ的讀框相吻合，就可表達(dá)出融合蛋白。該載體需要SupF宿主菌進(jìn)行增殖和篩選。在非抑制性宿主菌內(nèi)，由于Sam100突變的存在可以防止細(xì)菌裂解,所以表達(dá)的融合蛋白就會在細(xì)菌內(nèi)累積。該載體帶有red和gam基因，可以在recA-宿主菌內(nèi)生長。載體上的溫度敏感阻抑物可用來控制筮菌體的復(fù)制和融合蛋白的表達(dá)。86、X噬菌體大規(guī)模制備的方法有哪兩種?答：大規(guī)模制備X噬菌體有下述兩種方法:（1）低復(fù)數(shù)感染;（2）高復(fù)數(shù)感染。87、純化X噬菌體的方法有哪幾種?答:（1）氯化艷梯度離心;（2）沉淀噬繭體顆粒;（3）甘油分級梯度離心;（4）氯化絕平衡離心。88、用X噬菌體進(jìn)行克隆包括哪些步驟?答:用X噬菌體進(jìn)行克隆包括5個步驟:（1）用適當(dāng)限制酶消化的載體DNA的制備;酶切的載體與帶匹配粘端的外源DNA片段的連接;將連接的DNA包裝入噬菌體顆粒中,在適當(dāng)?shù)乃拗骶闲纬墒砂?帶有目的外源DNA序列的X噬菌體重組體的鑒定;對選出的重組噬菌體進(jìn)行噬斑純化,然后進(jìn)行外源DNA的分析。89、大腸桿菌絲狀噬菌體有哪幾種?它們有什么用途?答;大腸桿菌絲狀噬菌體包括M13噬菌體、fl噬菌體和fd噬菌體。這些噬菌體均含ー個約6400個核甘酸的單鏈閉環(huán)DNA分子。在用作克隆載體時,這些噬菌體有一個得天獨(dú)厚的優(yōu)點(diǎn),即可以產(chǎn)生大量含有外源DNA某一條鏈的DNA分子。這種單鏈DNA分子可以在下列工作中用作模板:（1）用雙脫氧鏈終止法進(jìn)行DNA序列測定（2）制備僅有一條鏈得到放射性標(biāo)記的雜交用DNA探針（3）利用寡核甘酸進(jìn)行定點(diǎn)誘變。90、什么是限制性內(nèi)切能?分幾類?答:限制性內(nèi)切能是指能特異性地結(jié)合于一段特殊DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點(diǎn)上,并在此切割雙鏈DNA的ー類蛋白質(zhì)。它可分3類。I類和HI類限制酶在分子克隆中不常用,常規(guī)應(yīng)用于分子克隆中的限制酶為H類。91、什么是同裂酶?答:不同來源的限制能可切割同?靶序列,這些酶即稱為同裂前。92、大腸桿菌DNA聚合酶I有哪些活性?在切口平移法標(biāo)記DNA時利用的是哪ー活性?答:DNA聚合酶I具有3種活性:（1）5'f3'DNA聚合酶活性;（2）5'-3Z外切核酸酶活性;（3）3'-5,外切核酸醜活性。在切口平移法標(biāo)記DNA中利用的是其5'-3'外切核酸酶活性。93、什么是大腸桿菌DNA聚合前I大片段（Klenow段）?在分子克隆中有哪些用途?答：利用蛋白醜解作用（如枯草桿菌蛋白前）去除大腸桿菌DNA聚合酶I的5，一3’外切核酸酶活性,而聚合酶活性3'f5’外切核酸酶活性切不受影響。這種經(jīng)蛋白酶作用后的DNA聚合酶I就叫做DNA聚合酶I大片段或Klenow片段。用途：（1）補(bǔ)平限制酶切割切割DNA產(chǎn)生的3,凹端。（2）用ピP]dNTPネト平3，凹端;對DNA片段進(jìn)行末端標(biāo)記;（3）対帶3‘突出端的DNA進(jìn)行末端標(biāo)記：（4）在cDNA克隆中，用于合成cDNA第二鏈;（5）在體外誘變中,用于從單鏈模板合成雙鏈DNA；（6）應(yīng)用Sanger雙脫氧末端終止法進(jìn)行DNA測序;（7）消化某些限制前作用后產(chǎn)生的3，突出端;（8）也可用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）o94、/噬菌體DNA聚合酶的用途有哪些?答:（1）補(bǔ)平或標(biāo)記限制酶消化的3,凹端:（2）對帶有3，突出端的DNA分子進(jìn)行末端標(biāo)記;（3）標(biāo)記用作探針的DNA片段;（4）將雙鏈DNA的末端轉(zhuǎn)化成平端;（5）使結(jié)合于單鏈DNA模板上的誘變寡核甘酸引物得到延伸。95、什么是測序酶（Sequenase）?答:測序酶是經(jīng)修飾的?噬菌體DNA聚合酶,其99%以上的3,-5‘外切核酸酶活性由氧自由基介導(dǎo)的位點(diǎn)特異性修飾作用而滅活,但其聚合酶活性則無明顯改變,它是用雙脫氧鏈終止法對長段DNA進(jìn)行測序的理想用酶。96、什么是TaqDNA聚合酶?其用途有哪些?答:TaqDNA聚合酶是一種耐熱的依賴于DNA的TagDNA聚合酶（分子量65000D）它最初是從極度嗜熱的棲熱水生菌Thermusaquaticus中純化而來的。TaqDNA聚合酶可用于對DNA進(jìn)行測序及通過聚合前鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對DNA分子的特定序列進(jìn)行體外擴(kuò)增。TaqDNA聚合酶作用時需要Mg七磷酸鹽緩沖液抑制TaqDNA聚合酶的活性,因此忌用之。97、什么是連接前?主要有哪幾種?答:用于將兩段DNA拼接起來的酶叫連接酶。分子克隆中最常用的連接酶是，菌體DNA連接酶，還有一種大腸桿菌DNA連接酶。98、常用的核酸酶有哪些?各有什么活性?答:①BAL31核酸酶:3‘外切核酸酶活性和內(nèi)切核酸前活性。②ホ核酸酶:降解單鏈DNA或RNA,產(chǎn)生帶5’磷酸的單核苜酸或寡核甘酸③綠豆核酸酶：降解單鏈DNA,產(chǎn)生帶5’磷酸的單核甘酸或寡核甘酸。④核糖核酸酶A：RNA酶A是內(nèi)切核糖核酸醜，可特異地攻擊RNA上嗑咤殘基的3’端，切割與相鄰核甘酸形成的磷酸二酯鍵。產(chǎn)生帶嗑咤3,磷酸的寡核甘酸或嚥臟3’磷酸。⑤核糖核酸酶RNA酶「是內(nèi)切核糖核酸能,它特異地作用于鳥噪吟核苜酸3ノ磷酸并切割與相鄰核昔酸相連的磷酸二酯健。產(chǎn)物為鳥噁吟核甘3，磷酸或帶鳥噁吟核甘3，磷酸的寡核甘酸。⑥脫氧核糖核酸酶!：DNA酶1為ー內(nèi)切核酸酶。它優(yōu)先從喙喔核甘酸的位置水解雙鏈或單鏈DNA,產(chǎn)物為5’磷酸單核甘酸及寡核甘酸的混合物。⑦外切核甘酸III:從雙鏈DNA的3’羥基端逐一去除單核甘酸，結(jié)果是在雙鏈DNA上產(chǎn)生長的單鏈區(qū)。⑧入噬菌體外切核酸酶:可催化從雙鏈DNA中持續(xù)地逐ー釋放5’単核甘酸的反應(yīng)。99、影響瓊脂糖凝膠DNA遷移速率的因素有哪些?答:①DNA的分子大小:DNA在凝膠中的遷移速率與其分子大小成反比。②瓊脂糖濃度：DNA電泳遷移率與凝膠濃度成反比。③DNA的構(gòu)象:分子量相同的超螺旋環(huán)狀（I型）、帶切口環(huán)狀（H型）及線狀（川型）DNA通過凝膠時速度不一。④所加電壓：在低甩壓時,線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比⑤電場方向：通過電場方向周期性改變,可分辨極大的DNA分子。⑥堿基組成與溫度：4-30C之間影響不明顯。⑦嵌入染料的存在：浪化乙錠可使線狀DNA的遷移率降低!5%.⑧電泳緩沖液的組成：電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的電泳遷移率。100、從凝膠中回收DNA的常用方法有哪兒種?答：①電泳到DEAEー纖維素膜上。②電洗脫到透折袋中。③利用低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠。101、聚丙烯酰胺凝膠與瓊脂糖凝膠相比有哪些優(yōu)點(diǎn)?答：有3個主要優(yōu)點(diǎn)：①分辨カ很強(qiáng),長度僅僅相關(guān)0.2%的DNA分子即可分開;②所能裝載的DNA量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于瓊脂糖凝膠;③從聚丙烯酰胺凝膠屮回收的DNA純度很高，可適用于要求最高的實(shí)驗(yàn)（如鼠胚微注射）。102、RNA提取和純化過程中應(yīng)怎樣控制RNA酶的活性?答：①實(shí)驗(yàn)程序中控制RNA酶活性:A、玻璃制品、塑料制品和電泳槽:滅菌的一次性使用的塑料制品基本上無RNA酶，可以不經(jīng)預(yù)處理直接用于制備和貯存RNA。實(shí)驗(yàn)室用的普通玻璃器皿和塑料制品經(jīng)常有RNA酶污染，使用前必須于180℃干烤8小時以上（玻璃器皿）或用氯仿沖洗（塑料制品）。另ーー種方法是用0.1%焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用于制備RNA的燒杯、試管和其它用品。灌滿DEPC的器皿在37C放置2小時，然后用滅菌水淋洗數(shù)次,并于100C干烤15分鐘，在15lbf/in2（1.034X105Pa）高壓下滅菌15分鐘。用于RNA電泳的電泳槽應(yīng)用去污劑洗凈,再用水沖洗，用乙醉干燥，然后灌滿3%的ル〇ユ溶液：于室溫放置10分鐘，然后用0.1%DEPC處理過的水徹底沖洗電泳槽。最好能留出ー些玻璃品皿、塑料制品和電泳槽作上特殊標(biāo)記,存放在指定地點(diǎn);為RNA實(shí)驗(yàn)專用。B、研究人員的手是RNA前最主要的潛在污染源,因此在準(zhǔn)備分離和分折RNA的材料和溶液時，以及在涉及RNA的一切操作過程中，都應(yīng)戴一次性手套，按觸“臟的”物品后,手套就可能污染上RNA酶,因此進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時應(yīng)勤換手套。C、溶液配制:用高壓滅菌的水和RNA研究專用的化學(xué)試劑配制溶液,同干烤過的藥匙稱取試劑,將溶液裝入無RNA前的玻璃器皿?？赡艿脑?溶液均應(yīng)用0.1%DEPC于37℃至少處理12小時,然后于100C加熱15分鐘或在15lbf/in11.034XlO'Pa）的高壓下蒸氣滅菌15分鐘。②RNA酶的抑制劑:主要有下述3種。A、RNA前的蛋白質(zhì)抑制劑:從胎盤分離的ー種蛋白質(zhì)可與多種RNA能緊密結(jié)合，形成非共價結(jié)合的等摩爾復(fù)合物,使RNA酶失活。B、氧鈕核糖核昔復(fù)合物:它能與多種RNA能結(jié)合并幾乎能百分之百地抑制RNA的活性。C、Macalod（硅藻土）:是g種粘土,能吸附RNA酶。③破碎細(xì)胞和滅活RNA酶同步進(jìn)行:用強(qiáng)烈變性劑如鹽酸脈或硫氟酸脈溶液能迅速溶解蛋白質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎，核蛋白由于其二級結(jié)構(gòu)的破壞而從核酸上解離下來。103、進(jìn)行RNA分折的方法有哪些?答:①Northern雜交（RNA印亦法）；②斑點(diǎn)和快線雜交;③進(jìn)行RNA的シ核酸醜或核糖核酸酶作圖;④引物延伸法；⑤溶液雜交;⑥濾膜雜交。104、Northern雜交主要有哪些步驟?答:①變性RNA瓊脂糖凝膠電泳。②分級分離的RNA轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜或尼龍膜。③同放射性標(biāo)記的探針對固定在膜上的RNA進(jìn)行雜交。105、構(gòu)建CDNA文庫常見的步驟有哪些?答:①制備用于CDNA克隆的mRNA。②CDNA第一鏈的合成。③CDNA第二鏈的合成。④雙鏈CDNA的分子克?。ê铣山宇^的加入和雙鏈CDNA克隆入X噬菌體載體）。106、從哺乳動物細(xì)胞中分離DNA的方法有哪些?答:下面介紹從哺乳動物細(xì)胞中分離DNA的三種程序:①利用蛋白前K,SDS和酚，所獲DNA的大?。?00-150kb）適用于在噬菌體載體上的構(gòu)建基因組DNA文庫;②用蛋白酶K消化，用高濃度甲酰胺使DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物解離，以及通過火棉膠透折袋透折除去殘存的蛋白酶K等步驟,這樣得到的DNA分子量非常大，但濃度頗低。③用鹽酸臟裂解細(xì)胞，所生成的DNA較?。s80Kb）,用于Southern雜交，效果極佳。107、簡述Southern雜交的步驟。答:①瓊脂糖凝膠電泳分離哺乳動物基因組DNA的限制酶切片段。②將DNA從瓊脂糖凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體上。③放射性標(biāo)記的探針與固定化的核酸雜交。108,將DNA或RNA從凝膠轉(zhuǎn)移到大相支持體（硝酸纖維素濾膜或尼龍膜）的方法有哪幾種?答:①毛細(xì)管轉(zhuǎn)移:核酸片段由液流攜帶從凝膠轉(zhuǎn)移并聚集于固相支持體表面。②電轉(zhuǎn)移:不適用于硝酸纖維素膜。適用于尼龍膜。③真空轉(zhuǎn)移:109、雜交試驗(yàn)中常用降低背景的封閉劑有哪些?答:①Denhardt試劑:適用于Southern,Northern雜交②BLOTTO:適用于Grusteiu-Hoyness雜交。③肝素:適用于Southern雜交;原位雜交。④經(jīng)變性并被打斷的鮭精DNA：適用于Southern,Northern雜交。110、放射性標(biāo)記核酸探針的方法有哪幾種?答：①磷酸化法:由T4噬菌體多核甘酸激酶催化,將ATP的丫磷酸轉(zhuǎn)移到DNA或RNA的5'羥基端:②切口平移法：利用大腸桿菌DNA聚合酶!,把雙鏈DNA未標(biāo)記的核甘酸置換成a-32P標(biāo)記的核甘酸。③將克隆化DNA區(qū)段體外轉(zhuǎn)錄成高比活度的單鏈RNA。111、篩選表達(dá)文庫時所用的配體有哪幾類?答：篩選表達(dá)文庫時,要利用ー個能與目的蛋白特異結(jié)合的配體,這樣的配體分成3類:①已知可在體內(nèi)與目的蛋白作用的蛋白質(zhì)或小分子化合物;②抗H的蛋白抗原表位的免疫球蛋白:③可被蛋白質(zhì)識別的小段DNA序列，比如真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)系統(tǒng)中的反式作用因子。112、目前常用的DNA序列測定方法有哪兒種?答：醜法和化學(xué)降解法。113、簡述Sanger雙脫氧鏈終止法的原理。答:Sanger雙脫氧終止法的特征是引入了雙脫氧核甘三磷酸（ddNTP）作為鏈終止劑。2'3'ddNTP與普通dNTP不同之處在于它們在脫氧核的3,位置缺少ー個羥基。它們可以在DNA聚合酶作用下通過基5‘三磷酸基因摻入到正在增長的DNA鏈中,但由于沒有3’羥基,它們不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵，因此正在增長的DNA鏈不可能繼續(xù)延伸。這樣在DNA合成反應(yīng)混合物的4種普通dNTP中加入少量的ー種ddNTP后,鏈延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止展開競爭,反應(yīng)產(chǎn)物是一毓的核甘酸鏈,其長度取決于從用以起始DNA合成的引物末端到出現(xiàn)過早鏈終止的位置之間的距離。在4組獨(dú)立的酶反應(yīng)中分別加入4種不同的ddNTP,結(jié)果將產(chǎn)生4組寡核甘酸,它們將分別終止于模板鏈的每一個A、第一個C、每一個G或每ー個T的位置上。114、簡述Maxam-GiIbertDNA化學(xué)降解法測序原理。答:在這ー方法中，ー個末端標(biāo)記的DNA片段在5組互相獨(dú)立的化學(xué)反應(yīng)中分別得到部分降解,其中每ー組反應(yīng)特異地針對某ー種或某ー類堿基。因此生成5組放射性標(biāo)記的分子，從共同起點(diǎn)（放射性標(biāo)記末端）延續(xù)到發(fā)生化學(xué)降解的位點(diǎn)。每組混合物中均含有長短不一的DNA分子，其長度取決于該組反應(yīng)所針對的堿基在原DNA全片段上的位置。此后各組均通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分離;再通過放射自顯影來檢測末端標(biāo)記的分子。115、什么是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction,PCR）0答:PCR用于擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA區(qū)段。是由DNA聚合能催化的ー系列合成反應(yīng),有兩段寡核甘酸作為反應(yīng)的引物，分別與模板DNA兩條鏈兩側(cè)的一段序列互補(bǔ)。反應(yīng)時，首先在摩爾數(shù)大大過量的兩段引物及4種dNTP參與下對模板DNA進(jìn)行加熱變性。隨之，將反應(yīng)混合液冷卻至某ー溫度，使引物與模板靶序列發(fā)生退化。此后退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。如此反復(fù)變性、退化和DNA合成這ー循環(huán)。116、PCR技術(shù)主要有哪些用途?答：①臨床診斷：診斷遺傳性疾患，檢測臨床標(biāo)本中病原體的核酸序列,對法醫(yī)學(xué)標(biāo)本（如單根毛發(fā)或單個精子的DNA）作遺傳學(xué)鑒定，以及分析激活癌基因中的突變情況等。②分子克?。篈、生成克隆化雙鏈DNA中的特異序列作為探針;B、通過選擇性擴(kuò)增特定DNA區(qū)段，生成某些未克隆化基因的特異性探針;C、由少量mRNA生成CDNA文庫;D、生成大量DNA進(jìn)行序列測定;E、突變分折;F、染色體緩移。117、在克隆化基因中導(dǎo)入的突變分哪幾類?答：①簡單的缺人或或插入②系統(tǒng)的缺失，插入或成串堿基的置換;③單個堿基的置換。118、寡核甘酸介導(dǎo)的誘變方案通常包括哪些步驟?答：①將適當(dāng)?shù)腄NA片段克隆于MB噬菌體②從重組MB噬菌體中制備單鏈DNA③設(shè)計前合成誘變寡核甘酸④誘變寡核甘酸與靶DNA雜交⑤利用DNA聚合酶延伸己雜交的寡核甘酸⑥轉(zhuǎn)染易感細(xì)菌⑦篩選出帶H標(biāo)突變的噬菌體噬斑⑧從誘變的重組噬菌體制備單鏈DNA⑨通過測序確證誘變的MB噬菌體DNA帶有目標(biāo)突變且沒有其他突變⑩從重組MB噬菌體雙鏈復(fù)制型中回收突變的DNA片段QD用誘變的片段置換野生型DNA中的相應(yīng)片段119、在蛋白質(zhì)編碼區(qū)插入六聚體接頭方法包括哪些步驟?答:①將靶DNA克隆于適當(dāng)?shù)馁|(zhì)粒中②用在靶序列內(nèi)切點(diǎn)頻繁出現(xiàn)并可產(chǎn)生粘端的限制酶進(jìn)行部分消化,以使質(zhì)粒DNA線狀化③將單鏈六聚體接頭連接于所產(chǎn)生的粘端上④用適當(dāng)限制酶進(jìn)行切割,以除去過量的接頭⑤將帶有選擇標(biāo)記（常為Kan'）的DNA片段連接于接頭的粘端⑥篩選同時帶卡那霉素和氨不青霉素抗性的轉(zhuǎn)化菌落⑦用適當(dāng)限制酶進(jìn)行切割，以除去帶選擇標(biāo)記的DNA片段⑧使失卻Kan,基因的線狀DNA分子重新環(huán)化⑨用亜新環(huán)化的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌⑩篩選所帶質(zhì)粒在靶序列內(nèi)部具有新的限制能切位點(diǎn)的轉(zhuǎn)化菌落120、從克隆化基因（在哺乳動物細(xì)胞）表達(dá)蛋白質(zhì)有哪些用途?答:①通過對所編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫學(xué)檢測或生物活性測定，確證所克隆的基因②對所編碼的蛋白質(zhì)須進(jìn)行糖基化或蛋白水解等翻譯后加工的基因進(jìn)行表達(dá)③大量生產(chǎn)從自然界中一般只能小量提取到的某些生物活性蛋白④研究在各種不同類型細(xì)胞中表達(dá)的蛋白質(zhì)的生物合成以及在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的情況⑤通過分析正常蛋白及其突變體的特性,闡明蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系⑥使帶有內(nèi)含子而不能在原核生物或酵母中正確轉(zhuǎn)錄為mRNA的基因組序列得到表達(dá)⑦提示某些與基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)的DNA序列元件。121、用于在哺乳動物細(xì)胞中導(dǎo)入和表達(dá)克隆化基因的載體有哪幾類?答：①不帶其核復(fù)制子的簡單質(zhì)粒型載體②帶有真核病毒基因組元件的復(fù)雜質(zhì)粒載體,這些元件可以提髙轉(zhuǎn)染DNA的拷貝數(shù)和外源蛋白的表達(dá)效率。③有利于對整合于宿主細(xì)胞基因組的轉(zhuǎn)染DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增的載體

122、用于表達(dá)外源DNA序列所必需的真核表達(dá)元件包括什么?答:①啟動子和增強(qiáng)子元件:②終止信號和加Poly(A)信號③剪接信號④用于復(fù)制和選擇的元件:a.病毒復(fù)制子b.選擇標(biāo)記基因123、常用的帶真核病毒調(diào)控序列元件的質(zhì)粒表達(dá)載體有哪些?答：①SV40載體;②牛乳頭瘤病毒載體;③Epstein-Barr病毒載體124、重組載體導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞的方法有哪幾種?答：①磷酸鈣或DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染②Polybrene(聚季胺鹽)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染③原生質(zhì)體融合④電穿孔⑤脂質(zhì)體⑥細(xì)胞核直接微注射125、LB培養(yǎng)基有哪些組份?答:1%胰化蛋白陳,0.5%酵母提取物,l%NaCl和偵。126、用分光光度法怎樣計算DNA或RNA的含量和純度?答:在260nm處的讀數(shù)用于計算樣品中核酸的含量,0D值為1相當(dāng)于大約50mg/ml雙鏈DNA,40ug/ml單鏈DNA或RNA,以及大約20ug/ml的單鏈寡核甘酸。根據(jù)在260nm和280nm的讀數(shù)比值(OD260/OD280)估計核酸的純度,DNA及RNA純品的0D260/0D280值分別為1.8和2.〇。生物化學(xué)部分ー、 基礎(chǔ)理論:1、組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸共有幾種?山其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)R基有無極性可分為幾大類?答:組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸共有20種，由其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)R基有無極性可分為:非極性氨基酸極性氨基酸極性氨基酸不帶電荷極性氨基酸帶電荷極性氨基酸2、哪些氨基酸具有紫外吸收作用?有何意義?答:具有紫外吸收作用的氨基酸有苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。其中以色氨酸吸收紫外光的能力最強(qiáng),其次是酪氨酸和苯丙氨酸。它們在280nm波長附近有最高吸收峰。因?yàn)槎鄶?shù)蛋白質(zhì)中均含有這些氨基酸,故常用紫外分光光度法(在280nm波長處)作為蛋白質(zhì)的定量方法。3、什么叫肽鍵?肽鍵有什么性質(zhì)?答:蛋白質(zhì)是由許多氨基酸組成的高分子化合物。兩個氨基酸分子間脫縮水合形成肽鍵(peptidebond,-C0-NH-,或稱酰胺腱)。R,〇 R2〇 Ri〇HK2Q-H2OH2N—C—C—OH+H2N-C—c-OH H2N—C—G—N—C—C—OH+h2oレ H H肽鍵H氨基酸借肽犍連接起來的化合物稱為肽(peptide),兩個氨基酸形成的肽稱為二肽，以此類推可形成三肽、四肽等。許多氨基酸組成的肽稱為多肽(polypeptide)或稱多肽鏈。組成肽的氨基酸分子已不完整，因此，肽中的每ー個氨基酸單位稱為氨基酸殘基(aminoacidresidue)〇蛋白質(zhì)多肽鏈中的主要共價鍵是肽鍵。多肽鏈基本結(jié)構(gòu)如下:Ri〇 R20 R30 Rn〇N——末端H2N—CH—C—NH—CH―C——NH——CH—C NH—CH—C—OHC—末端氨基酸殘基氨基酸縮合成肽后，開鏈肽在兩端有自由的aー氨基和a一規(guī)基，它們分別稱為氨基末端(簡稱N-末端或N端)和陵基末端(簡稱C-末端或C端),按通常慣例N端寫在左邊，C端寫在右邊，這兩個基因有時還結(jié)合上其它基團(tuán)，如乙?；Ⅴ０坊?。肽的化學(xué)性質(zhì)與氨基酸類似，而各種氨基酸殘基的R基對肽的性質(zhì)有較大的影響，因此,肽的性質(zhì)和功能與氨基酸乂有頗大差異。例如，氨基酸的許多呈色反應(yīng),肽也有，但是含有兩個或兩個以上肽鍵的肽都有一種特殊的雙縮麻反應(yīng)(biuretreaction),而氨基酸則無。這一反應(yīng)被廣泛用于肽和蛋白質(zhì)的定性、定量分析。4、蛋白質(zhì)共有幾級結(jié)構(gòu)?它們的定義是什么?答:蛋白質(zhì)共有四級結(jié)構(gòu)ー級結(jié)構(gòu):指蛋白質(zhì)分子中殘基的排列順序。二級結(jié)構(gòu):指蛋白質(zhì)中一條多肽鏈主鏈原子的局部空間構(gòu)象,但不包括側(cè)鏈基因的構(gòu)象。三級結(jié)構(gòu)：指具有二級結(jié)構(gòu)的多肽鏈進(jìn)ー步盤曲折疊而成的空間構(gòu)象。四級結(jié)構(gòu)：由兩條或兩條以上具有獨(dú)立結(jié)構(gòu)的多肽鏈,通過次級鍵相互締合而成的蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu),稱為四級結(jié)構(gòu)。5,何謂蛋白質(zhì)變性?答：在某些物理和化學(xué)因素的作用下,蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)被破壞而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變（如溶解度降低）及生物學(xué)活性喪失的現(xiàn)象，稱為蛋白質(zhì)的變性作用（benaturation）。變性后的蛋白質(zhì)稱為變性蛋白質(zhì)（benaturebprotein）〇使蛋白質(zhì)變性的因素有物理因素如加熱、放射線、超聲波等?；瘜W(xué)因素如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬、生物堿試劑、有機(jī)溶劑等。變性只有蛋白質(zhì)分子空間構(gòu)象的改變,而無共價鍵斷裂。6、何謂蛋白質(zhì)導(dǎo)電點(diǎn)?有何意義?答：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于某ーPH環(huán)境中,所帶正、負(fù)電荷恰好相等，即凈電荷為零，呈兼性離子，此時溶液的PH值被稱為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（PI）。各種蛋白質(zhì)所含的可解離基團(tuán)數(shù)目及其可解離基團(tuán)的解離度不同,PI也各不相同。蛋白質(zhì)在低于其等電點(diǎn)的環(huán)境中，帶正電荷,在電場中向負(fù)極移動。在高于其等電點(diǎn)的環(huán)境中，帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動。處于等電點(diǎn)環(huán)境時,蛋白質(zhì)凈電荷為零，在電場中既不向正極移動,也不向負(fù)極移動。這種帶電荷的蛋白質(zhì)分子在電場中移動的現(xiàn)象,稱為蛋白質(zhì)電泳。蛋白質(zhì)分子在電場中移動的速度和方向,取決它所帶電荷的性質(zhì)、數(shù)目以及蛋白質(zhì)分子的大小和形狀。帶電少、分子大的泳動速度慢，反之，則泳動速度快。由于在一定的PH條件下，混合蛋白質(zhì)溶液中各種蛋白質(zhì)分子所帶電荷數(shù)目不同,故在電場中的泳動速度不同。這些性質(zhì)常應(yīng)用于蛋白質(zhì)的分離、純化、鑒定等實(shí)驗(yàn)中。7、蛋白質(zhì)分子平均含氮量有多少?有什么意義?答：各種蛋白質(zhì)含氮量都很相近,平均約為16%。故可利用測定樣品中的含氮量來推算出蛋白質(zhì)的含量。100樣品中蛋白質(zhì)含量=樣品含氮重量（按克或毫克計算）X——=樣品含氮重X6.25100克樣品中蛋白質(zhì)的含量（克%）=每克樣品中含氮克數(shù)X6.25X100。8、什么叫輔酶?有哪些重要的輔酶?答:由蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩部分組成的酶稱為結(jié)合蛋白酶。其蛋白質(zhì)部分為酶蛋白,非蛋白質(zhì)部分稱為輔助因子（cotactor）.根據(jù)與酶蛋白結(jié)合的牢固程度,輔助因子又可分為輔酶和輔基兩種。與酚蛋白結(jié)合疏松,經(jīng)透析能與酶蛋白分離的輔助因子稱為輔酶,而用上述簡單方法不能將其分開，結(jié)合相對牢固的輔助因子稱為輔基。輔助因子可分為三類，第一類是金屬離子。作為輔助因子的金屬有Mgス、2ぐ、ドザ（或ドベ）、（:ピ‘（或Cu）,K\Na’、Mn2\Mo"等。第二類是金屬有機(jī)化合物:如細(xì)胞色素的輔基鐵咋琳屬于此類。第三類輔助因子是維生素B族衍生物，如尼克酰胺腺噂吟二核甘酸（NAD'）及黃素腺噁吟二核甘酸（FAD）等。含維生素的輔酶及其功能ー維生素軸醐形式反應(yīng)類形ー硫胺素（Bi）焦磷酸硫胺素（TPP）aー酮酸氧化脫竣反應(yīng)S硫辛酸二硫辛酸（L）a-酮酸氧化脫按反應(yīng)S核黃素（4）黃素單核甘酸（FMN）、黃素腺噁吟氧化還原反應(yīng)二核甘酸（FAD）尼克酸或尼克酰胺尼克酰胺腺噁吟二核甘酸（NAD'）氧化還原反應(yīng)(PP)尼克酰胺腺喋吟二核甘酸磷酸(NADP')泛酸輔酶A(CoA.SH)?；茡Q反應(yīng)毗哆醇、u比哆醛磷酸毗哆胺、磷酸毗哆醛胺基移換反應(yīng)H比哆胺（Be）生物素生物胞素C6轉(zhuǎn)移葉酸四氫葉酸ー碳単位轉(zhuǎn)移鉆胺素（B.2）5'-脫氧腺昔鉆胺素，甲基鉆胺素1,2ー氫原子轉(zhuǎn)移，甲基轉(zhuǎn)移9、酶促反應(yīng)有哪些特點(diǎn):答：醜的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，故酶與一般催化劑不同，有它的特點(diǎn)。主要是催化的（1）高效率（2）對底物的高度專一性。（絕對專ー性，相對專ー性，立體異物專ー性，）（3）可調(diào)控性，（4）高度穩(wěn)定性。10、影響酶促反應(yīng)速度的因素有哪些?答：影響能促反應(yīng)的因素有酶濃度、底物濃度、溫度、PH、激動劑和抑制劑。底物濃度遠(yuǎn)大于酶濃度時，陋濃度和能促反應(yīng)的速度成正比。底物濃度的影響：酶濃度恒定時,底物濃度對反應(yīng)速度的影響呈矩形雙曲線,V最大[S]可以用米曼氏議程式表示:V= Km+lSJ式中v為酶促反應(yīng)速度,V最大為反應(yīng)最大速度,Km為米氏常數(shù),其值等于酶促反應(yīng)速度為最大速度一半時的底物濃度,[S]為底物濃度。溫度:一般反應(yīng)速度隨溫度t而加快。因能是蛋白質(zhì),會隨溫度t而失活，因此酶促速度會漸漸降低，酶促反應(yīng)速度最快時的溫度稱為酶促反應(yīng)最適溫度。PH：酶反應(yīng)體系的PH影響酶和輔助因子與底物的離解狀態(tài),也影響它們之間的混合,因此,出影響前促活性，醉促反應(yīng)速度最大時的PH稱最適PH。激動劑:使酶活性t ??い不可逆性抑制 、.抑制劑：使酶活性I又可分為く' 競爭性抑制可逆性抑制^—非競爭性抑制、反競爭性抑制11、什么叫競爭性抑制與非競爭性抑制?答：競爭性抑制作用，某些和底物結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)能和底物分子競爭與酶的活性中心相結(jié)合，酶與這種物質(zhì)結(jié)合后，不能再與底物結(jié)合,這種作用稱為競爭性抑制作用。這種物質(zhì)稱為競爭性抑制劑。例如丙二酸、草酰乙酸、蘋果酸與琥珀酸脫氫前的底物城珀酸結(jié)構(gòu)相似，故它們能競爭與酶的活性中心結(jié)合〇非競爭性抑制作用：非競爭性抑制劑（I）和底物（S）均可逆性地與酶結(jié)合，分別生成ES和EI,而游離的底物也可與E!結(jié)合生成EIS以及抑制劑與ES結(jié)合生成EIS,但生成的EIS不能分解生成產(chǎn)物。顯然抑制劑的存在，并不抑制底物與酶的結(jié)合,只是減少游離酶的濃度,減少ES濃度,使酶促反應(yīng)減慢。這種抑制劑只與酶活性中心以外區(qū)域（基因）相結(jié)合,不能用增加底物濃度來解除抑制劑對酶的抑制作用。由于這種抑制劑并不與底物競爭酶的活性中心,故將這種抑制稱為非競爭性抑制作用。12、什么叫前元的激活?答：有些酶在細(xì)胞內(nèi)合成或初分泌時，沒有催化活性，這種無活性狀態(tài)的前前身物稱為酶原（zymogen）。消化道中的酶類、血液凝固中的ー些酶,均是以酶原的形式存在。無活性的酶原在一定條件下,能轉(zhuǎn)變成有活性的前,此過程稱為前原的激活（actiyation）。的原激活的機(jī)理是分子內(nèi)肽鏈的ー處或多處被切除部分肽段后，使分子構(gòu)象發(fā)生一定程度的改變，從而形成酶的活性中心。13、什么叫同功能?舉例說明其臨床意義。答：能催化相同反應(yīng)，而分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫學(xué)性質(zhì)不同的ー組酶稱為同工酶（isoenzyme,isozyme）〇這類酶可存在于同種生物或同一個體的不同組織，也可存在于同一組織，同一-細(xì)胞的不同細(xì)胞器中?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有500多種同工酶，如乳酸脫氫酶、6ー磷酸葡萄糖脫氫能、磷酸肌酸激酶、堿性磷酸醒、醛縮酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)匆酶、膽堿酯酶等。磷酸肌酸激酶(creatinephosphate,CPK)同工酶含有M型及B型兩種亞基,共組成MM、MB,BB三種同工酶。腦組織中為BB,心肌同時含有MM和MB,骨骼肌中為MM。正常血清同工醃電泳譜一般只出現(xiàn)MM譜帶的CPK。急性心肌梗塞后3小時,即出現(xiàn)明顯的MB酶譜帶,36小時后陽性率可達(dá)100%,對心肌梗塞的早期診斷有很高的價值。而在腦創(chuàng)傷或腦手術(shù)后可出現(xiàn)BB酶譜帶。14、組成核酸的噂吟堿與喀咤堿有哪幾種?它們在核酸中的配對原則?答:DNA和RNA均含有噂吟堿,腺噪吟(adenine,A)和鳥噪吟(guanine,GKDNA含有胸腺喘暖(thymine,T)和胞喀咤(cytosine,C)RNA含有尿嗑咤(uracil,U)和胞啥咤。配對原則為:A=TA=UC=G15、什么叫核背與核甘酸?答:噪吟堿或喀嚏堿和戊糖之間通B-N-糖昔鍵相連成核苛(nucleoside),例如腺噁吟核甘(腺甘)和胞喘咤脫氧核甘(脫氧胞甘)分別由腺喋吟可核糖及胞嚥咤與2ー脫氧核糖所組成。常見核糖核昔有腺喋吟核甘(腺甘,A)、鳥噁吟核昔(鳥昔,G)、胞嚥咤核甘(胞甘,〇和尿啥嚏核甘(尿甘，U)。同樣，脫氧核糖核甘有腺噁吟脫氧核甘(脫氧腺甘，dA)、鳥噁吟脫氧核甘，dG)、胞喀嗟脫氧核甘(脫氧胞甘，dC)和胸腺唸嗟脫氧核甘(脫氧胸背，dt或T)。核甘酸:核甘與磷酸通過磷酸酯鍵相連成核甘酸(nucleotise)。磷酸化作用一般發(fā)生在戊糖的C5'位置，但核糖的C2‘和C’及脫氧核糖的C3’位置也可磷酸化。常見核甘酸有腺甘酸(adenylicacid,AMP)、鳥甘酸(guanylicacid,GMP)、胞昔酸(cytidylicacid,CMP)、和尿甘酸(uridylicacid,UMP)?同樣，脫氧核甘酸有氧腺甘酸(deoxyadenylicacid,dAMP)、脫氧鳥甘酸(deocyguanylicacid,dGMP)脫氧胞甘酸(deocycytidylicacid,dCMP)-和脫氧胸甘酸(seoxythymidylicacid,dTMP)。16、核酸有幾大基本類型,它們之間有何不同?答：核酸分為DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)它們的區(qū)別見表：DNA和RNA的比較DNARNA堿基噁吟AAGG喀咤CCTU17、何謂核酸的變性與復(fù)性?答:核酸的變性是指天然有序的雙螺旋DNA分子在加熱、酸、堿、尿素和甲酰胺等理化因素作用下變成任意纏繞的無序狀態(tài)，稱變性作用。變性DNA的堿基對之間的氫鍵斷裂,兩條互補(bǔ)多核甘酸鏈可以27分開。DNA分子變性時分子內(nèi)部雙螺旋區(qū)域也變?yōu)闊o序纏繞。DNA變性后對260nm紫外線的吸光度增強(qiáng)達(dá)37%左右,此現(xiàn)象稱增色效應(yīng)。DNA復(fù)性:溶液中變性DNA可經(jīng)適當(dāng)方法處理恢復(fù)其天然DNA性質(zhì),這ー過程稱為復(fù)性(renaturation)或退火(reannealing)〇復(fù)性時要求環(huán)境有足夠高的鹽濃度(0.15-0.50MNaCL溶液)和適當(dāng)髙的溫度,一般比Tm值低20-25C為宜。復(fù)性作用是ー個緩慢的過程。雜交作用(hybridization)兩條來源不同具有互補(bǔ)堿基順序的多核甘酸片段在溶液中冷卻時可以再形成雙螺旋結(jié)構(gòu),稱為雜交作用。形成的雜交分子可以是DNA/DNA、RNA/RNA或DNA/RNA。18、喋吟的最終代謝產(chǎn)物是什么?答:黃噂吟在黃噂吟氧化酶催化下進(jìn)ー步氧化為尿酸(uricacid)?尿酸是人和猿、鳥類及爬蟲類體內(nèi)噁吟核甘酸分解的終產(chǎn)物。19、DNA復(fù)制是以哪種方式進(jìn)行的?復(fù)制時DNA鏈的延伸方向。答:DNA在生物體內(nèi)是以半保留復(fù)制的方式進(jìn)行復(fù)制。延伸方向?yàn)閺?，端向3’端方向延伸。20、雙螺旋模型有哪些主要內(nèi)容?答:Watson-Crick(1953)根據(jù)Chargaff關(guān)于DNA堿基組成的研究成果和Wilkins等對DNAX射線衍射圖顯示存在雙螺旋資料的分析提出DNA雙螺旋模型學(xué)說。在此模型中糖ー磷酸骨架處于分子外邊,堿基在中央呈螺旋狀排列。?條鏈的堿基與另?條鏈的對應(yīng)堿基之間以A.T和C.G相配対。堿基對共處于同一平面且垂直于螺旋軸。相鄰堿基對之間旋轉(zhuǎn)36℃,每10個堿基對(basepair,bp)使螺旋上升1圈,因此DNA雙螺旋1圈的長度為34A(314nm)?雙螺旋的直徑為20A(2nm)?21、什么叫轉(zhuǎn)錄?RNA合成時鏈的延伸方向?可生成哪幾種RNA?答:以DNA為模板指導(dǎo)合成RNA的過程稱為轉(zhuǎn)錄RNA合成時鏈的延伸方向?yàn)?'~3'可生成mRNA,tRNA,rRNA二種RNA22、何謂反轉(zhuǎn)錄?答:以RNA為模板，按照RNA中核甘酸序列,以dNTPs為原料合成DNA,即RNA指導(dǎo)的DNA合成,因與通常轉(zhuǎn)錄中遺傳信息從DNA傳到相反,故稱反向轉(zhuǎn)錄或稱逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄由逆轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscriptase)催化，該酶也稱RNA指導(dǎo)的DNA聚合蘭(RNA-directedDNApolymerase,RDDP)O23、遺傳密碼有哪些特點(diǎn)?答：遺傳密碼有下列共同特點(diǎn):(1)、密碼有方向性能mRNA分子從5'-3'方向，每三個堿基形成的三聯(lián)體組成一個遺傳密碼，mRNA中含四種不同的堿基可排列組合成4ら64種不同的密碼子,其中有三種代表蛋白質(zhì)合成的終止密碼,即UAA、UGA和UAG,其余的61種分別代表20種氨基酸,每ー個氨基酸致少有一種密碼子,多的可以有6種。另外AUG代表甲硫氨基酸的密碼子，當(dāng)其處在mRNA起動部位時即代表肽鏈合成的起動信號。起動信號總是在mRNA的5，端,而終止密碼在3,端。密碼的方向性,也就決定了多肽從N端到C端的氨基酸順序。(2)、密碼間無間隔壁兩個密碼子之間沒有任何核甘酸加以隔開,即無“標(biāo)點(diǎn)”。因此要正確地閱讀密碼，就必須從一個正確的起點(diǎn)開始，依次連續(xù)不斷地ー個密碼子接著ー個密碼子往下讀，直至終止密碼出現(xiàn)為止。(3)、密碼有簡并性(degeneracy)從密碼表中可以看出，除色氨酸和甲硫氨酸各有一個密碼子,共它皴基酸的密碼子均在兩種以上,如絲氨酸、精氨酸和亮氨酸最多，各有六種密碼子。ー個氨基酸具有兩個以上的密碼子，稱為密碼簡并性。這種簡并性主要由于密碼子的第三位堿基呈擺動現(xiàn)象(wobble)而形成的，即密碼子的專一性主要由頭兩個堿基決定,第三位堿基即使發(fā)生突變，通常是一種喋吟代替了另一種噁吟，或ー種喀咤代替了另ー種嚅咤，如A==G,C==U仍能翻譯成正確的氨基酸來，從而使合成的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)不變,這就有利于維持生物遺傳的穩(wěn)定性。(4)、密碼的通用性能從低等生物到高等生物,遺傳密碼都是相同的。這就使得遺傳工程得以廣泛應(yīng)用。24、什么叫翻譯?答:把mRNA中遺傳信息轉(zhuǎn)變成蛋白質(zhì)中氨基酸排列順序的過程稱為翻譯(translation).25、三種RNA各有什么作用?答:tRNA:轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸,每種tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)特定氨基酸。rRNA:與蛋白質(zhì)ー起構(gòu)成抗糖體,作為蛋白質(zhì)合成的場所。mRNA:攜帶DNA的遺傳信息，作為蛋白質(zhì)合成的模板。26、簡述蛋白質(zhì)生物合成過程的幾個階段?答:分為：氨基酸的活化肽鏈合成的起始肽鏈合成的延長：又分進(jìn)位,肽鍵形成和移位三個過程。肽鏈合成的終止和釋放。新生肽鏈的修飾和改造。27、血糖的來源去路有哪些?答:血糖的來源是食物中淀粉等糖類經(jīng)消化吸收為葡萄糖后進(jìn)入血液，這是血糖的主要來源。其它糖類如果糖、半乳糖等在肝臟也可轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?。肝糖原分解成葡萄糖是空腹血糖的直接來源。非糖物質(zhì)如乳酸、甘油、生糖氨基酸等通過肝臟糖異生作用合成葡萄糖,以補(bǔ)充血糖。血糖的去路是血糖由肝臟及各組織細(xì)胞攝取利用。（1）葡萄糖在各組織細(xì)胞徹底氧化分解供能,這是血糖的主要去路。（2）合成糖原儲存于肝臟、肌肉等組織細(xì)胞中。糖原是糖的儲存形式,儲存于肝臟的糖原稱肝糖原,儲存于肌肉的糖原稱為肌糖原。（3）轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌俏镔|(zhì),如核糖、脫氧核糖、氨基多糖、糖醛酸等。（4）可轉(zhuǎn)變?yōu)榉翘俏镔|(zhì)，如甘油三脂、非必需氨基酸等。（5）血糖過高，如高于160mg/dl（8.9mmol/L）,則超過腎小管重吸收糖的能力（稱腎糖閾）時,尿中可出現(xiàn)糖（為尿糖）28、調(diào)節(jié)血糖濃度的因素有哪些?答:肝臟是調(diào)節(jié)血糖的主要器官，血糖濃度受神經(jīng)和激素的整體調(diào)節(jié)，并通過對酶水平的基本調(diào)節(jié)方式使體內(nèi)各種代謝以及各器官之間能得以精確協(xié)調(diào),使血糖濃度維持恒定，以保證腦組織從血液獲得足夠葡萄糖，肝臟對血糖濃度變化非常敏感，進(jìn)食后血糖濃度升高，糖類食物通過消化吸收變?yōu)槠咸烟呛蟠罅咳胙?，?jīng)門靜脈進(jìn)入肝臟，促進(jìn)肝細(xì)胞合成糖原，故不致有過量的葡萄糖進(jìn)入全身循環(huán)。饑餓時血糖降低,肝臟通過肝葡萄糖ー6ー磷酸筋的作用，使肝糖原分解提供葡萄糖,以補(bǔ)充血糖不足。肝臟還能通過糖異生合成葡萄糖來補(bǔ)充血糖。激素對血糖濃度以及糖代謝的調(diào)節(jié)起著亜要作用,多種激素參與調(diào)節(jié)血糖濃度。根據(jù)對血糖濃度升高或降低的作用可將它們分為兩類:ー類是升高血糖的激素，有胰高血糖素、腎上腺素、糖皮質(zhì)激素和生長素等;另ー類是降低血糖的激素，即胰島素。這兩類激素作用的途徑和效果雖各不相同，但它們互相協(xié)調(diào)又互相制約，通過改變體內(nèi)糖代謝方向以調(diào)節(jié)血糖濃度的恒定。29、糖酵解的生理意義?答:糖酵解是生物界普遍存在的重要代謝途徑之一,其主要生理意義是機(jī)體在無氧或缺氧狀態(tài)獲得能量的一種有效方式,也是機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)時產(chǎn)生能量的重要途徑，以滿足機(jī)體的生理需要。葡萄糖生成內(nèi)酮酸的反應(yīng)序列是糖在有氧條件下徹底氧化的準(zhǔn)備階段。有些組織細(xì)胞如紅細(xì)胞、視網(wǎng)膜、角膜、晶體、睪丸、腎髓質(zhì)等，即使在有氧時,仍依賴于酵解獲得能量。在某些病理情況如循環(huán)功能不全或呼吸衰竭（失血、休克、心功能不全等），因氧供給不足,酵解過度，嚴(yán)重者引起乳酸積累而導(dǎo)致乳酸血癥。糖酵解繞過能障的逆過程是非糖物質(zhì)異牛.為糖的途徑。30、血漿脂蛋白有哪些分類方法?各種血漿脂蛋白的主要生理作用?答:脂蛋白（Lipoprotein）由蛋白質(zhì)、磷酸、膽固醇、膽固醇脂及三脂酰廿油組成。各類脂蛋白所含脂類及蛋白質(zhì)不盡相同，因而其密度、顆粒大小,表面電荷、電泳行為及免疫學(xué)特性也均不相同，可采用適當(dāng)方法將它們分開。超離心分類法（密度分類法）將血漿在一定密度的鹽溶液中進(jìn)行超速離心分離，其所含各種脂蛋白因密度不同而漂浮或沉降。這樣即可將脂蛋白分為:乳糜微粒、極低密