細胞凋亡檢測技術演示文稿第一頁，共七十一頁。（優(yōu)選）細胞凋亡檢測技術第二頁，共七十一頁。1972年:Kerr等首次提出了細胞凋亡的概念，從形態(tài)學角度描述細胞的生理死亡，并認為這是維持組織細胞動力學平衡的一種基本生物學現象，可能具有十分重要的生物學意義。

1977年:人們注意到在生理或病理性刺激條件下，淋巴細胞發(fā)育過程中的凋亡現象。并認為這是維持組織細胞動力學平衡的一種基本生物學現象，可能具有十分重要的生物學意義。

第三頁，共七十一頁。

1980年:Wyllie研究胸腺細胞在糖皮質激素作用下引致的細胞凋亡變化，總結并建立了細胞凋亡的共同形態(tài)學特征，包括核固縮和DNA降解成寡核苷酸片段等。

1989年:0wen及其研究小組在研究胸腺細胞陰性選擇過程中，發(fā)現T細胞受體(TCR)與自身抗原相互作用與未成熟T細胞的PCD發(fā)生有關，并在體外證實剌激CD3分子可誘導未成熟T細胞PCD的發(fā)生。證明了信號傳遞物質對PCD的調控作用。第四頁，共七十一頁。

1991年:Ellis首先發(fā)現了線蟲(C.elegans)體內Ced-3、4兩個基因與PCD的發(fā)生密切相關，隨后逐漸發(fā)現了多種參與PCD的正相調節(jié)基因和負相調節(jié)基因，前者包括Ced-2、p53、c‐myc、Fas、糖皮質激素受體及白細胞介素1β轉化(ICE〉等基因，后者則有Ced-9、bcl-2、p53等基因.第五頁，共七十一頁。三、細胞凋亡的特征細胞凋亡與細胞壞死雖然都是細胞死亡，但細胞凋亡的形態(tài)及生化特征與壞死性細胞死亡的特點則不同第六頁，共七十一頁。（一）細胞凋亡的形態(tài)學改變：組織內單個細胞或小團細胞的死亡不引發(fā)細胞自溶，也不引起炎癥反應電鏡下可見：凋亡細胞固縮胞漿致密，細胞器密集、退變核染色質致密，聚集于核膜處胞核裂解，胞漿形成多發(fā)性芽突凋亡小體形成光鏡下：凋亡小體外被以胞膜，圓形或卵圓形，胞漿濃縮，強嗜酸性，可有可無固縮深染的核碎片。第七頁，共七十一頁。細胞凋亡與細胞壞死在形態(tài)學上的差別

細胞凋亡

細胞壞死

單細胞丟失細胞膜發(fā)泡但仍完整,細胞膜內陷將細胞分割成凋亡小體不發(fā)生炎癥反應被臨近正常細胞或吞噬細胞吞噬溶酶體完整染色質均一凝集細胞成群丟失細胞膜不完整,細胞腫脹、溶解發(fā)生嚴重炎癥反應被巨噬細胞吞噬溶酶體裂解染色質凝集成塊、不均一第八頁，共七十一頁。第九頁，共七十一頁。第十頁，共七十一頁。細胞壞死時核的變化第十一頁，共七十一頁。細胞壞死時的炎癥反應第十二頁，共七十一頁。(二)細胞凋亡的生化改變：凋亡過程中出現的生化改變以DNA的片段化及蛋白質的降解最為重要。1)DNA的片段化

組成染色質的DNA鏈被激活的核酸內切酶切割，可形成180—200bp或其整倍數的片段，電泳中呈特征灶的“梯”狀條帶，這是判斷凋亡發(fā)生的客

觀指標之一。2)蛋白質的降解

凋亡蛋白酶激活，水解細胞的蛋白質結構，導致細胞解體并形成凋亡小體、水解相關活性蛋白，從而使該蛋白獲得或喪失某種生物學功能。第十三頁，共七十一頁。細胞凋亡與細胞壞死在生物化學上的區(qū)別

細胞凋亡細胞壞死生理因素誘導非生理因素造成的意外損傷受大分子合成和激活過程的嚴格調控離子穩(wěn)態(tài)調節(jié)喪失需要能量不需要能量需要大分子合成不需要核酸和蛋白質的合成有新基因從頭轉錄沒有新基因轉錄染色質非隨機降解為DNA“梯帶”染色質DNA隨機降解第十四頁，共七十一頁。四、細胞凋亡的過程與調控

凋亡信號轉導凋亡基因激活細胞凋亡的執(zhí)行凋亡細胞的清除(一)凋亡的四個階段：

第十五頁，共七十一頁。凋亡誘導因素+受體cAMPCa2+神經酰胺死亡信號凋亡基因激活DNase激活Caspase激活巨噬細胞吞噬分解凋亡細胞第十六頁，共七十一頁。（二）細胞凋亡的調控1.細胞凋亡的相關因素（1）誘導性因素激素和生長因子失衡：缺乏（IL-2↓，淋巴細胞凋亡）或過多（糖皮質激素↑，淋巴細胞凋亡）

理化因素：射線、高溫、強酸、強堿、乙醇、抗癌藥物等免疫性因素：如，CTL分泌粒酶→靶細胞凋亡微生物因素：細菌、病毒及毒素。（HIV）

第十七頁，共七十一頁。（2）抑制性因素：

細胞因子：IL-2、神經營養(yǎng)因子激素：ACTH、睪丸酮、雌激素等二價金屬陽離子：Zn2+藥物：苯巴比妥、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、中性氨基酸病毒：EB病毒、牛痘病毒CrmA第十八頁，共七十一頁。2.細胞凋亡信號轉導凋亡信號轉導系統是連接凋亡誘導因素與核DNA片段化斷裂及細胞結構蛋白降解的中間環(huán)節(jié)。凋亡信號轉導系統的特點：①多樣性：不同種類細胞有不同系統②耦聯性：凋亡與增殖分化系統在某些環(huán)節(jié)交、耦聯，同一因素既可引起凋亡也可引起增殖③同一性：不同凋亡誘導因素可通過同一信號轉導系統④多途性：同一凋亡誘導因素可通過不同信號轉導系統第十九頁，共七十一頁。研究較多的系統：依據：①細胞凋亡時胞內游離Ca2+濃度顯著上升②用Ca2+載體A23187人為升高B淋巴細胞Ca2+水平，B淋巴細胞凋亡③用Ca2+絡合劑降低胞內Ca2+水平，阻止細胞凋亡激活Ca2+依賴谷氨酰胺轉移酶Ca2+↑活化核轉錄因子1．胞內Ca2+信號系統（Ca2+為第二信使）第二十頁，共七十一頁。2．cAMP/PKA信號系統（cAMP為第二信使）依據：①雙丁酰cAMP可引起培養(yǎng)的髓樣白血病細胞及胸腺細胞凋亡②糖皮質激素使cAMP上升cAMP↑→激活PKA→使靶蛋白某些氨基酸（蘇、絲AA）殘基磷酸化→改變蛋白質功能第二十一頁，共七十一頁。3．Fas蛋白/Fas配體信號系統Fas蛋白：細胞膜跨膜蛋白Fas蛋白+Fas配體（抗Fas）→細胞凋亡機制：①Fas蛋白+Fas配體（抗Fas）→神經鞘磷脂酶活性↑→產生神酰胺→蛋白激酶激活→細胞凋亡②Fas蛋白+抗Fas、TNF→激活ICE樣caspase→降解H1組蛋白→染色體松馳→DNA暴露內切酶位點③通過Ca2+信號系統傳遞死亡信息引起細胞凋亡第二十二頁，共七十一頁。4．神經酰胺信號系統神經酰胺：神經鞘磷脂（SM）在神經鞘磷脂酶的作用下產生的一類新型第二信使物質。介導細胞凋亡的依據：用天然神經酰胺處理u937白血病細胞，誘導細胞凋亡神經酰胺途徑相關誘因：電離輻射、TNF-α、Fas抗原、糖皮質激素第二十三頁，共七十一頁。5．二酰甘油/蛋白激酶C（PKC）信號系統二酰甘油：磷脂酰肌醇和磷脂酰膽堿在磷脂酶C催化下產生的一種第二信使物質。依據：①活化的PKCβ1可誘導u937白血病細胞凋亡②抑制PKC活性可抑制糖皮質激素誘導的小鼠胸腺細胞凋亡③PKC激動劑佛波脂可抑制某些類型細胞凋亡（糖皮質激素、T細胞受體激活、IL-2撤除）第二十四頁，共七十一頁。6．酪氨酸蛋白激酶系統生長因子或細胞因子→激活酪氨酸蛋白激酶→靶蛋白酪氨酸磷酸化→Ras蛋白激活→通過Raf-1、MAPKK、MAPK→蛋白質磷酸化→細胞分化生長因子或細胞因子撤除→不能激活酪氨酸蛋白激酶系統→細胞凋亡第二十五頁，共七十一頁。3.凋亡相關基因三類：抑制凋亡基因：Bcl-2、EIB、IAP促進凋亡基因：P53、Bax、ICE雙向調節(jié)基因：c-myc、Bclx第二十六頁，共七十一頁。(B細胞淋巴瘤/白血病-2[Bcelllymphoma/leukemia-2]基因的縮寫)

Bcl-2蛋白：229個氨基酸（人）、236個氨基酸（小鼠）分布：線粒體內膜、細胞膜內膜、內質網、核膜作用：Bcl-2高表達能阻抑多種凋亡誘導因素所引起的細胞凋亡依據：①導入Bcl-2基因質?？煞乐股窠浖毎虺烦窠浬L因子所誘導的凋亡②淋巴細胞有20%呈Bcl-2陽性時，預后不佳（耐受放射線、抗癌藥物）1.Bcl-2第二十七頁，共七十一頁。①直接的抗氧化作用②抑制線粒體釋放促凋亡蛋白質（細胞色素C、AIF）③抑制促凋亡性調節(jié)蛋白質Bax、Bak的細胞毒作用④抑制凋亡蛋白酶（caspases）的激活⑤維持細胞鈣穩(wěn)態(tài)Bcl-2抗凋亡作用機制：第二十八頁，共七十一頁。作用：野生型（wtP53）：DNA結合蛋白，誘導細胞凋亡（“分子警察”）突變型：抑制細胞凋亡野生型P53的作用機制：P53蛋白→細胞周期G1期檢查染色體DNA損傷（檢查點功能）→發(fā)現DNA損傷→剌激CIP的表達→阻止細胞進入下一周期，啟動DNA修復機制→修復失敗→啟動細胞凋亡機制→細胞凋亡2.P53第二十九頁，共七十一頁。c-myc:一種癌基因，它能誘導增殖，也能誘導細胞凋亡，具有雙向調節(jié)作用。作用機制：c-myc蛋白為重要的轉錄調節(jié)因子，既可介導細胞增殖的基因，也可激活介導細胞凋亡的基因，其作用取決于細胞接受何種信號及細胞的生長環(huán)境（有生長因子→增殖，無生長因子→凋亡）。Bcl-x：能翻譯Bcl-XL和Bcl-Xs兩種蛋白，Bcl-XL蛋白抑制細胞凋亡，Bcl-Xs蛋白促進細胞凋亡（合成以誰為主）

3.c-myc,Bcl-x第三十頁，共七十一頁。五、細胞凋亡的發(fā)生機制（一）氧化損傷氧化損傷的后果之一：細胞凋亡依據：①各種氧化劑（H2O2）可直接誘導細胞凋亡②抑制超氧化物歧化酶（SOD）活性可誘導細胞凋亡③抗氧化劑（VitE、胡蘿卜素等）可阻斷有氧化應激背景的各種凋亡誘導因素（TNF-а、電離輻射）引起的細胞凋亡第三十一頁，共七十一頁。①引起DNA損傷，激活P53基因②引起DNA損傷，活化多聚ADP核糖合成酶，耗竭NAD，消耗大量ATP③攻擊細胞膜不飽和脂肪酸，脂質過氧化，細胞膜損傷或產生過氧羥基24碳四烯酸④激活Ca2+/Mg2+依賴的核酸內切酶⑤細胞膜損傷，Ca2+內流增多及損傷線粒體，通透性增加膜電位改變⑥活化核轉錄因子NF-кB、AP-1，加速凋亡相關基因表達氧化損傷引起細胞凋亡的可能機制：第三十二頁，共七十一頁。（二）鈣穩(wěn)態(tài)失衡細胞鈣穩(wěn)態(tài)失衡是細胞凋亡的重要機機制之一依據：①各種凋亡刺激所引起的凋亡是鈣依賴過程②凋亡發(fā)生時胞漿Ca2+濃度顯著上升，并在隨后的一系列凋亡改變中起關鍵性作用（核酸內切酶激活、需鈣蛋白酶、磷脂酶、谷氨酰胺轉移酶的激活，細胞膜的空泡化）③鈣穩(wěn)態(tài)失衡參與多種凋亡相關疾病的發(fā)?。ㄉ窠浲诵行约膊。┑谌?，共七十一頁。①激活Ca2+/Mg2+依賴的核酸內切酶，降解DNA鏈②激活谷氨酰胺轉移酶，催化肽鏈間的?；D移酶，肽鏈間形成共價鍵，使細胞骨架蛋白分子間發(fā)生廣泛交聯，有利于凋亡小體形成③激活核轉錄因子，加速凋亡相關基因表達④Ca2+在ATP的配合下使DNA鏈舒展，暴露核小體之間的連接區(qū)內的酶切位點，有利于DNA內切酶切割DNA鈣穩(wěn)態(tài)失衡引起細胞凋亡的可能機制：第三十四頁，共七十一頁。（三）線粒體損傷線粒體的改變：線粒體內膜通透性增大，線粒體內膜跨膜電位（△ψm）下降，能量代謝水平顯著降低線粒體改變在細胞凋亡發(fā)生中起關鍵作用依據：①抑制線粒體的三羧酸循環(huán)或呼吸鏈功能可誘導細胞凋亡②在細胞核出現凋亡改變之前，常先有線粒體內膜跨膜電位（△ψm）下降③阻止線粒體通透性的改變，可防止細胞凋亡（Bcl-2）第三十五頁，共七十一頁。線粒體改變引起細胞凋亡的機制：

Ca2+NO缺血原卟啉Ⅸ活性氧線粒體△ψm下降Bcl-2(-)PTP開放Apaf+Cyt.CCaspase-9酶原Caspase-9(+)Caspase-3酶原Caspase-3(+)Caspase抑制劑AIF(-)蛋白質水解細胞凋亡DNA斷裂無活性核酸內切酶核酸內切酶激活(+)(+)第三十六頁，共七十一頁。第二節(jié)細胞凋亡的檢測方法

細胞凋亡檢測方法：歸納起來，可分三方面，即根據凋亡的形態(tài)學特征、細胞凋亡的生化特征以及細胞凋亡的流式細胞儀檢測。本節(jié)主要介紹細胞凋亡的常用病理學檢測方法。第三十七頁，共七十一頁。一、蘇木精-伊紅染色方法(HE染色)1．石蠟組織切片HE染色（略）2．細胞爬片或細胞涂片的HE染色第三十八頁，共七十一頁。（1）細胞爬片或細胞涂片的制備：貼壁生長細胞(包括腫瘤細胞)：讓細胞生長在蓋玻片使其在上面爬行生長。取出蓋玻片，經PBS輕輕漂洗后，用4%的甲醛或多聚甲醛在常溫下固定5－10min，即可染色。懸浮生長細胞(包括腫瘤細胞)或貼壁生長的細胞經消化脫壁成單細胞懸液后，可經細胞涂片后染色。（2）染色方法:同石蠟組織切片HE染色，免去第1和第2步。

第三十九頁，共七十一頁?！窘Y果判斷】

1.光學顯微鏡下細胞核呈藍黑色，胞漿呈淡紅色。凋亡細胞在組織中單個散在分布，表現為核染色質致密濃縮，核碎裂等。2.在細胞爬片上，凋亡的細胞變圓、變小，可見細胞核固縮、碎裂，染色體被染成深藍色或藍黑色；可見細胞膜皺折、卷曲和出泡，以及芽生形成膜包裹的凋亡小體(apoptoticbodies〉。而正常細胞經染色后仍保持細胞原有的生長形狀(如梭形或多角形)，細胞核規(guī)整，染成均一藍色。細胞涂片時可見凋亡細胞核固縮、碎裂，染色變深；正常細胞染色體顯均勻淡藍色或藍色，而壞死細胞細胞腫脹，可見細胞膜的連續(xù)性破壞，核染色體染成很淡的藍色甚至消失。第四十頁，共七十一頁。第四十一頁，共七十一頁。

嗜酸性小體(凋亡)嗜酸性變及嗜酸性小體肝細胞體積縮小，胞漿濃縮紅染，呈嗜酸性變；或胞漿進一步濃縮，細胞變圓，核碎裂、溶解消失，呈嗜酸性小體狀第四十二頁，共七十一頁。二、甲基綠-派諾寧染色法第四十三頁，共七十一頁?！救旧怼?/p>

細胞凋亡和細胞壞死均可表現為細胞核固縮等細胞死亡形態(tài)，但兩者發(fā)生機制不同。細胞凋亡是一種細胞主動死亡過程，需要有細胞內蛋白酶的激活，細胞質內常有mRNA表達的增強。而細胞壞死則是一種被動的細胞死亡過程，細胞質內常有RNA的損失。根據這一特點，可應用試劑甲基綠對DNA染色的特異性和派諾寧對RNA的親和性，使甲基綠對固縮細胞核內的脫氧核糖核酸著染，如果細胞質內核糖核酸呈派諾寧陽性染色者為凋亡細胞，呈陰性染色者為壞死細胞。第四十四頁，共七十一頁?！驹噭┘芭渲啤?.組織固定液無水乙醇600ml氯仿300ml冰乙酸100ml

第四十五頁，共七十一頁。2.甲基綠純化

新購買的甲基綠(methylgreen)需用氯仿進行純化處理以去除甲基紫。方法是將2%甲基綠水溶液20ml傾入潔凈分液漏斗，加入氯仿20ml充分混勻，使其內的甲基紫溶于氯仿中而呈紫紅色。旋動分液漏斗下部的砂塞，慢慢把下沉帶紫紅色的氯仿移去，再加入新的氯仿10ml，如此反復更換氯仿，直到無紫紅色為止。該液作為貯存液，4℃保存。第四十六頁，共七十一頁。3.染色液甲基綠貯存液5m15%派諾寧水溶液lm1蒸餾水12m12mol/L乙酸鈉(pH4.8)18ml(臨用前配制，濾紙過濾)第四十七頁，共七十一頁?！静僮鞣椒ā?.新鮮取材組織置組織固定液中4℃固定3－6h；2.直接轉入95%乙醇脫水和無水乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋；3.切片經二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化至蒸餾水；4.置染色液中室溫下染片約lh；5.取出切片，不經水洗，用濾紙吸干多余染液；6.插入丙酮中迅速分化；7.轉入丙酮二甲苯(1:1)稍洗；8．二甲苯透明2－3次；9．中性樹膠封固

第四十八頁，共七十一頁?！窘Y果判斷】

凋亡細胞：光學顯微鏡下凋亡細胞細胞核固縮呈綠色或綠藍色著染，胞質呈紅紫色著染。觀察時可用凋亡指數進行計數，即隨機選擇約10－20個視野(每張切片約1000－2500個細胞〉，計數凋亡細胞百分率。細胞壞死：只有固縮細胞核呈綠色著染。

第四十九頁，共七十一頁。第五十頁，共七十一頁。三、吖啶橙染色法【染色原理】吖啶橙的熒光隨pH而變，其正色為綠色，隨pH下降可變到橙紅色。吖啶橙與DNA和RNA通過兩個部位結合，連接堿基對和磷酸鹽基團，吖啶橙與堿基對結合，形成第一復合物。第二復合物在多核苷酸表面，由吖啶橙與磷酸鹽基團連接而成。pH6.0時，DNA結合染料的聚合加速，pH低于3.8時，聚合受抑制，而RNA在pH6.0和3.8都能聚合而使顏色變紅。

第五十一頁，共七十一頁?！驹噭┘芭渲啤?/p>

吖啶橙貯存液:10mg吖啶橙溶解于100mlPBS中，pH4.8－6.0濾過，40C避光保存【操作方法】1.制備活細胞懸液，濃度約為107/ml2.取95μl細胞懸液，加5μl吖啶橙貯存液混勻3.吸一滴混合液滴于潔凈玻片上，直接用蓋玻片封片4.熒光顯微鏡選用激發(fā)濾片BG12，BV等，阻斷濾片用515nm或SP3

第五十二頁，共七十一頁?！窘Y果判斷】正常細胞：在熒光顯微鏡下，細胞核DNA為黃色或黃綠色均勻熒光，細胞質和核仁的RNA為桔黃或桔紅色熒光凋亡細胞：細胞核或細胞質內可見致密濃染的黃綠色染色，甚或見黃綠色碎片壞死細胞：細胞質內黃綠色或桔黃色熒光均可減弱或消失

第五十三頁，共七十一頁。第五十四頁，共七十一頁。四、原位末端標記

原位末端標記（ISEL)是將滲入到凋亡細胞中的外源性核苷酸在酶〔末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）和DNA聚合酶I或KIenow大片段〕的催化下與凋亡細胞因內源性核酸酶的激活而產生的單股或雙股斷鏈相結合，再通過一定的顯示系統使之顯示出來。通常有兩種方法:①末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記(簡稱TUNEL)；②DNA聚合酶I或Klenow大片段介導的原位缺口平移(簡稱INST)。在不考慮所使用的催化酶時，統稱為原位末端標記。第五十五頁，共七十一頁。

TUNEL鑒定的原理基于細胞凋亡時產生DNA斷鏈，所介導的酶是TdT，該酶能將外源性的生物素或地高辛標記的dUTP無需DNA模板連接到凋亡細胞核的DNA斷鏈的3-羥基(3'-0H〉末端，DNA斷鏈可是單股斷鏈也可是雙股斷鏈，兩種斷鏈都有游離的3'-羥基末端，因此，TUNEL鑒定可以檢測凋亡細胞核中的單股和雙股DNA斷鏈。第五十六頁，共七十一頁?！驹噭蕚浜团渲啤?.0.15mol/L的PBS:0.15mol/LNaCl，0.1mol/L磷酸鹽緩沖液；2．蛋白酶K20μg/ml，0.15mol/L的PBS配制；3．組織預處理液(2×SSC溶液):先配制20×SSC溶液作為儲存液，用時10倍稀釋(1×SSC溶液含0.3mol/LNaCl，30mmol/L枸橡酸納)；4．內源酶阻斷劑:3%H202-甲醇溶液（或PBS）第五十七頁，共七十一頁。5．緩沖液A(bufferA〉250mmol/LTris-HCl，5mmol/LMgC12，10mmol/Lβ-巰基乙醇，0.005%BSA，pH7.56．鏈卵白素標記的辣根過氧化物酶；7．DAB-H202顯色液:DAB用0.1mol/LTris-Cl(pH7.6)配成0.4%，分裝一20℃避光保存；8．TdT緩沖液(pH6.8)二甲胂酸納(Na-Cacodylate〉100mmol/L二琉基蘇糖醇(dithiothrenol〉0.1mmol/L氯化鉆(C00)5mmol/L9．TdT反應液在TdT緩沖液中加入TdT酶100U/ml，0.001mmol/Lbiotin-11-dUTP第五十八頁，共七十一頁?！救旧襟E】1.切片常規(guī)脫蠟，復水，后續(xù)過程在濕盒內進行；2.3%的H202阻斷內源性過氧化物酶30min；3.0.15mol/L的PBS洗3次，每次5min；4.切片浸泡在2×SSC80℃20min；5.0.15mol/L的PBS洗3次，每次5min；6.蛋白酶K消化0－20min；7.0.15mol/L的PBS洗3次，每次5min；8.TdT緩沖液孵育10min第五十九頁，共七十一頁。9.

TdT反應液37℃孵育1h；10.切片浸泡在2×SSC溶液10min，以終止反應；11.

0.15mol/L的PBS洗3次5min；12.

鏈卵臼素標記的辣根過氧化物酶孵育30min（POD）；13.

0.15mol/L的PBS洗3次，每次5min；14.0.04%的DAB顯色5－10min，鏡下控制時間；15.蘇木精對比染色10-30sec，常規(guī)復水、透明和封固。

第六十頁，共七十一頁?！窘Y果判斷】

凋亡細胞的核呈棕色或棕褐色著染，細胞核形態(tài)呈碎點狀，不規(guī)整，大小不一致。而正常非凋亡細胞和陰性對照片核被蘇木素復染呈藍色，核相對較大，形態(tài)大小較為一致第六十一頁，共七十一頁。第六十二頁，共七十一頁。第三節(jié)細胞凋亡的應用一．細胞凋亡與機體發(fā)育

細胞凋亡是多細胞動物生命活動過程中不可缺少的組成內容，是動物借以存活的需要，因而貫穿于動物全部壽命周期中。無論是低等動物還是高等動物，都是如此。在哺乳動物胚胎發(fā)生、發(fā)育和成熟過程中，構成組織的細胞生死交替，細胞凋亡是保證個體發(fā)育成熟所必需的。

第六十三頁，共七十一頁。二．細胞凋亡與機體穩(wěn)態(tài)

組成機體的細胞不但需要不斷地與環(huán)境進行物質、信息和能量的交換，而且這些細胞本身也處在不斷的更新中。這種更新是以細胞數量上的恒定為前提的，因此是一種動態(tài)平衡狀態(tài)，顯然，各種細胞數量上穩(wěn)定，不但保證了機體各組織器官具有形態(tài)學上的穩(wěn)定性，同時也是機體生理功能或內環(huán)境穩(wěn)定的必要條件。沒有這種細胞生理性死亡，細胞更新就不可能發(fā)生，因此，細胞產生與細胞凋亡之間的平衡是機體穩(wěn)態(tài)的基本條件，它們的平衡一旦破壞，就會導致疾病的產生

第六十四頁，共七十一頁。三、細胞凋亡與疾?。ㄒ唬┘毎蛲霾蛔?.腫瘤發(fā)生機制：目前認為：細胞增殖過度是腫瘤發(fā)病的一個途徑，凋亡受抑、細胞死亡不足是腫瘤發(fā)病的另一途徑，結果導致病變組織內腫瘤細胞存活延長，存活大于死亡，腫瘤細胞數目凈增長加大，形成新生物。凋亡受抑的依據：①多種腫瘤組織中Bcl-2表達顯著高于周圍組織②許多腫瘤P53發(fā)生突變，突變型P53抑制細胞凋亡（肺小細胞癌等）第