第一章1、1928年弗萊明發(fā)現(xiàn)的產(chǎn)青霉素的菌種是（點(diǎn)青霉）。2、Florey從爛西瓜中分離出來的產(chǎn)青霉素的菌種是（產(chǎn)黃青霉）。3、青霉素是含有（β-內(nèi)酰胺環(huán)）結(jié)構(gòu)的抗生素，青霉素的母核是（6-APA）。4、人乙型肝炎免疫球蛋白適用于乙型肝炎表面抗原（HbsAg）陽性的母親及所生的嬰兒。2.意外感染的人群。3.與乙型肝炎患者和乙型肝炎病毒攜帶者密切接觸者。

OKT3為抗人類外周Ｔ淋巴細(xì)胞單克隆抗體；OKT3為高純度的Ｔ淋巴細(xì)胞抗體。其抗原取自人類Ｔ淋巴細(xì)胞的Ｔ3抗原，與小鼠脾臟產(chǎn)生抗體的細(xì)胞在體外與小鼠骨髓瘤細(xì)胞相融合，由篩選出的雜交瘤細(xì)胞所分泌的單克隆抗體。在體內(nèi)OKT3可與大部分外周血T細(xì)胞和機(jī)體組織中T細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，而不與其他血液成分或組織發(fā)生反應(yīng)。OKT3通過作用于T細(xì)胞表面的T3（CD3+）抗原識(shí)別結(jié)構(gòu)，不僅能清除CD3+細(xì)胞，阻斷T細(xì)胞識(shí)別抗原的功能，還能阻斷已產(chǎn)生的殺傷性T細(xì)胞的功能和細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，是目前公認(rèn)的一種能較好逆轉(zhuǎn)移植腎急性排斥反應(yīng)(AR)的免疫抑制劑。重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液：擁有多項(xiàng)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，被《科技日報(bào)》評(píng)為2005年度中國十大科技新聞之一的項(xiàng)目--世界首創(chuàng)重組血管內(nèi)皮抑素注射液（商品名:恩度,Endostar）的研制，近日在煙臺(tái)麥得津生物工程股份有限公司通過國家GMP生產(chǎn)驗(yàn)證。這標(biāo)志著中國在抗血管生成類腫瘤藥物的創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)化方面已經(jīng)走在了世界最前沿。40年前，美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院JudahFolkman教授提出了著名的“餓死腫瘤療法”理論，即通過阻斷腫瘤新生血管生成切斷腫瘤營養(yǎng)供給，達(dá)到抑制和治療腫瘤的目的。CEP：歐洲藥典適應(yīng)性認(rèn)證證書（CertificateofEuropeanPharmacopoeia）第二章復(fù)習(xí)1、在制藥工業(yè)中為什么要制備無熱原質(zhì)水？熱原質(zhì)的定義熱原質(zhì)的理化性質(zhì)熱原反應(yīng)引起熱原反應(yīng)的因素如何制無熱原質(zhì)水無熱原質(zhì)水的保存方式③水溶性及不揮發(fā)性：熱原本身不揮發(fā)，但可隨水氣霧滴夾帶入蒸餾水中，故制備注射用水的重蒸餾水器有隔沫裝置。④其他：熱原能被強(qiáng)酸強(qiáng)堿所破壞，也能被氧化劑如KMnO4或H2O2或超聲波所破壞，能被活性炭、石棉或吸附劑所吸附。熱原在溶液中帶有一定的電荷，因而可被某些離子交換樹脂吸附。發(fā)熱激活物（pyrogenicactivator）：能激活產(chǎn)內(nèi)生致熱原細(xì)胞，使其產(chǎn)生和釋放內(nèi)生致熱原的物質(zhì)。包括外致熱原（exogenouspyrogen)如內(nèi)毒素（LPS）和某些體內(nèi)產(chǎn)物。另外，LPS中的類脂A為親脂性基團(tuán)，能與血管壁細(xì)胞膜結(jié)合，改變血管通透性，使血壓下降導(dǎo)致休克。熱原的致熱反應(yīng)可被水楊酸類解熱劑所對(duì)抗。注射用水的制備、貯存和分配應(yīng)能防止微生物的滋生和污染。貯罐和輸送管道所用材料應(yīng)無毒、耐腐蝕。管道的設(shè)計(jì)和安裝應(yīng)避免死角、盲管。貯罐和管道要規(guī)定清洗、滅菌周期。注射用水貯罐的通氣口應(yīng)安裝不脫落纖維的疏水性除菌濾器。注射用水的貯存可采用80℃以上保溫、65℃以上保溫循環(huán)或4℃以下存放。蒸餾蒸餾不同于其它形式的水純化，因?yàn)樗畯牟粷嵉乃刑崛〕鰜?，水?jīng)過了相變，從液態(tài)至汽態(tài)又回到液態(tài)，污漬沸點(diǎn)高于水（100°C）將留在鍋爐內(nèi)，冷凝后，只有水及沸點(diǎn)低的殘?jiān)粝聛怼?/p>

蒸餾法對(duì)原水中不發(fā)揮性的有機(jī)物、無機(jī)物，包括懸浮物、膠體、細(xì)菌、病毒、熱原等雜質(zhì)有很好的去除作用。水生細(xì)菌對(duì)熱比較敏感，一般不會(huì)在高于60℃的條件下繁殖，且循環(huán)水對(duì)管道內(nèi)壁保持有較大的沖刷力，高流速的水可以將系統(tǒng)中的微生物或細(xì)小的固體顆粒帶走，以提高循環(huán)系統(tǒng)控制微生物污染的能力。因此，在貯存方式中，以65℃以上保溫循環(huán)較為常用。由于水在系統(tǒng)中循環(huán)時(shí)，溫度會(huì)有所改變，為了使系統(tǒng)溫度始終保持在65℃以上，在系統(tǒng)中設(shè)置熱交換器是很必要的。水在循環(huán)時(shí)流速應(yīng)高于2米/秒，即保持湍液循環(huán)狀態(tài)。中國藥典（2000年版）規(guī)定“本品（注射用水）為純化水經(jīng)蒸餾所得的水”。發(fā)熱發(fā)熱激活物外致熱原體內(nèi)產(chǎn)物外毒素內(nèi)毒素真菌等Ag-Ag復(fù)合物類固醇致炎物產(chǎn)內(nèi)生致熱原細(xì)胞內(nèi)生致熱原激活產(chǎn)生釋放3、5-氟尿嘧啶的作用機(jī)理5-氟尿嘧啶如果投與動(dòng)物，可和尿嘧啶同樣地被吸收而阻礙細(xì)胞的增殖。作用機(jī)理：5-FU在體內(nèi)必須轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的核苷酸才能發(fā)揮其抑制腫瘤的作用。本藥在體內(nèi)先轉(zhuǎn)變成５-氟-２-脫氧尿嘧啶核苷酸，抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，抑制DNA的生物合成，這是其抗腫瘤的主要機(jī)理；此外，還能滲入RNA，阻止尿嘧啶滲入RNA而抑制RNA的合成。

臨床用于結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、絨毛膜上皮癌、惡性葡萄胎、頭頸部鱗癌、皮膚癌、肝癌、膀胱癌等。蛋白質(zhì)水解法：酸水解、堿水解和酶水解。鹽酸水解為常用方法，其優(yōu)點(diǎn)是水解迅速、完全，產(chǎn)物全部是L-型氨基酸，缺點(diǎn)是Trp全部被破壞，Ser等部分被破壞。堿水解法易產(chǎn)生消旋作用。酶水解法不夠完全。溶血性貧血患者血漿結(jié)合珠蛋白濃度下降。這是由于溶血時(shí)大量的Hb釋出，Hp與游離Hb結(jié)合成復(fù)合物而被肝細(xì)胞攝取、清除。

血紅素結(jié)合蛋白（hemopexin,Hpx）和游離血紅素有特異結(jié)合能力。它可配合結(jié)合珠蛋白對(duì)血紅蛋白進(jìn)行處理。當(dāng)廣泛溶血時(shí)，血漿結(jié)合珠蛋白耗竭，循環(huán)中游離的血紅蛋白可降解為珠蛋白和血紅素兩部分。血紅素不溶于水，可與Hpx結(jié)合成復(fù)合物而運(yùn)輸?shù)礁?，分子中的鐵可被機(jī)體重新利用，卟啉環(huán)降解為膽紅素而由膽管排出。Hb珠蛋白+血紅素Hpx血紅素Hpx鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(transferrin;Tf)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是由肝臟內(nèi)合成的糖蛋白，分子量約80,000。具高度多態(tài)性，目前已發(fā)現(xiàn)20多種不同類型的Tf。每分子Tf可結(jié)合2分子的Fe3+。鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的生理功能是將鐵運(yùn)送到需要鐵的組織與細(xì)胞。每天血紅蛋白分解代謝，釋出25mg左右的鐵。游離鐵有毒性，它與Tf結(jié)合后不僅毒性降低而且還將鐵運(yùn)送到需鐵部位。鐵是許多含鐵蛋白質(zhì)生物活性的發(fā)揮所必不可少的，如血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素、過氧化物酶等。因此，任何生長、增殖細(xì)胞的膜上都有鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的受體。攜帶Fe3+的Tf與受體結(jié)合后經(jīng)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，供細(xì)胞內(nèi)合成利用。銅藍(lán)蛋白(ceruloplasmin;Cp)也是由肝臟合成的一種糖蛋白。每分子Cp可牢固地結(jié)合6個(gè)銅離子，并因攜銅而呈藍(lán)色。Cp除作為銅的載體外，還具有氧化酶的活性，可將Fe2+氧化為Fe3+，利于鐵摻入鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，促進(jìn)鐵的運(yùn)輸。

正常人體內(nèi)含銅約100-150mg。血漿中的銅90%由Cp轉(zhuǎn)運(yùn)，10%與白蛋白結(jié)合而運(yùn)輸。成人每日攝取銅2mg，主要在小腸上段吸收，同白蛋白結(jié)合送輸?shù)礁?，即摻入肝?xì)胞合成Cp。部分銅可從膽汁中排出。肝病時(shí)銅藍(lán)蛋白合成減少，血漿Cp含量降低。α1-AT缺乏時(shí)，這些酶均可侵蝕肝細(xì)胞，尤其是新生兒腸腔消化吸收功能不完善，大分子物質(zhì)進(jìn)入血液更多，α1-AT缺乏的嬰兒肝臟更易受損害。此外，α1-AT還具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、影響抗原-抗體免疫復(fù)合物清除、補(bǔ)體激活以及炎癥反應(yīng)的作用，并可抑制血小板的凝聚和纖溶的發(fā)生。α1-AT缺乏時(shí)上述機(jī)體平衡的機(jī)制失調(diào)，導(dǎo)致組織損傷?？鼓[瘤的酶L-門冬酰胺酶、谷氨酰胺酶、蛋氨酸酶、組氨酸酶、酪氨酸氧化酶等。L-門冬酰胺酶：臨床上主要用于白血病的治療。

L-門冬酰胺酶門冬酰胺門冬氨酸+氨門冬酰胺是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)及增殖生長所必需的氨基酸。正常細(xì)胞有自身合成門冬酰胺的功能，而急性白血病等腫瘤細(xì)胞則無此功能，因而當(dāng)用本品使門冬酰胺急劇缺失時(shí)，腫瘤細(xì)胞因既不能從血中取得足夠門冬酰胺，亦不能自身合成，使其蛋白質(zhì)合成受障礙，增殖受抑制，細(xì)胞大量破壞而不能生長、存活。

適用于治療急性淋巴細(xì)胞性白血病(簡稱急淋)、急性粒細(xì)胞性白血病、急性單核細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、何杰金病及非何杰金病淋巴瘤、黑色素瘤等。透明質(zhì)酸（Haluronicacid、HA）又名玻璃酸，透明質(zhì)酸是一種酸性粘多糖，美國Meyer等首先從牛眼玻璃體中分離出該物質(zhì)。透明質(zhì)酸以其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機(jī)體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，如潤滑關(guān)節(jié)，調(diào)節(jié)血管壁的通透性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，水、電解質(zhì)擴(kuò)散及運(yùn)轉(zhuǎn)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等。尤為重要的是，透明質(zhì)酸具有特殊的保水作用，是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中保濕性最好的物質(zhì)，被稱為理想的天然保濕因子（Naturalmoisturizingfactor，NMF）例如：2％的純透明質(zhì)酸水溶液能牢固地保持98％水分。透明質(zhì)酸是一種多功能基質(zhì)，透明質(zhì)酸（玻璃酸）HA廣泛分布于人體各部位。其中皮膚也含有大量的透明質(zhì)酸。人類皮膚成熟和老化過程也隨著透明質(zhì)酸的含量和新陳代謝而變化，它可以改善皮膚營養(yǎng)代謝，使皮膚柔嫩、光滑、去皺、增加彈性、防止衰老，在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收促進(jìn)劑。與其他營養(yǎng)成分配合使用，可以起到促進(jìn)營養(yǎng)吸收的更理想效果。

硫酸軟骨素硫酸軟骨素是從動(dòng)物組織中提取制備的酸性粘多糖類物質(zhì)，分子中帶有大量的負(fù)電荷，具有調(diào)脂、抗炎及弱的抗凝血、抗血栓生物活性，對(duì)維持細(xì)胞環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定性和正常功能具有重要作用。硫酸軟骨素對(duì)角膜膠原纖維具有保護(hù)作用，能促進(jìn)基質(zhì)中纖維的增長，增強(qiáng)通透性，改善血液循環(huán)，加速新陳代謝，促進(jìn)滲透液的吸收及炎癥的消除；其聚陰離子具有強(qiáng)的保水性，能改善眼角膜組織的水分代謝，對(duì)角膜有較強(qiáng)的親和力，能在角膜表面形成一層透氣保水膜，促進(jìn)角膜創(chuàng)傷的愈合及改善眼部干燥癥狀。第三章復(fù)習(xí)干擾素（interferon）。（干擾素）是最早發(fā)現(xiàn)、研究最多、第一個(gè)被克隆、第一個(gè)用于臨床治療疾病的細(xì)胞因子。干擾素在生物中普遍存在，是一組多功能細(xì)胞因子，在正常個(gè)體的脾臟、肝臟、腎臟、外周血淋巴細(xì)胞和骨髓中都可以檢出，又可以被多種因素誘發(fā)分泌，如各種病毒、雙鏈RNA、細(xì)胞內(nèi)繁殖的微生物、細(xì)菌產(chǎn)物、多聚體等，其中以（病毒）和（雙鏈RNA）的誘導(dǎo)最為有效。3.1.1.2干擾素的分類1）根據(jù)對(duì)酸和熱的耐受性可將天然干擾素分為兩種類型：Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型干擾素可以耐受pH2處理或60℃1h的加熱，而Ⅱ型干擾素則被這種處理滅活。2）根據(jù)干擾素蛋白質(zhì)的氨基酸結(jié)構(gòu)、抗原性和細(xì)胞來源，可將其分為：IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFN-ω、IFN-τ。IFN-α由（白細(xì)胞）產(chǎn)生，IFN-β由（成纖維細(xì)胞）產(chǎn)生，但它們的生物學(xué)活性相近，作用于相同的細(xì)胞受體。而IFN-γ主要由（T淋巴細(xì)胞）和（NK細(xì)胞）產(chǎn)生，屬于Ⅱ型干擾素。在同一型干擾素內(nèi)按照氨基酸序列和組成的差異又可分為不同的亞型，IFN-α有25個(gè)亞型、IFN-β有4個(gè)亞型、IFN-γ有4個(gè)以上亞型。在同一亞型內(nèi)又因個(gè)別氨基酸的差異而細(xì)分，如α1a、α2a、α2b。中國人在受病毒攻擊后白細(xì)胞所產(chǎn)生的多種IFN-α中，以α1b型為主。rhIFN-α1b是我國藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)上市的第一個(gè)基因工程藥物。2)IFN-βIFN-β與IFN-α基因的同源性高達(dá)80%，IFN-β是由成纖維細(xì)胞受病毒或干擾素誘導(dǎo)劑產(chǎn)生的一種具有生物學(xué)活性的糖蛋白。誘導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生的因素與誘導(dǎo)IFN-α相同。IFN-β本身還可以誘生多種細(xì)胞因子，如誘生IL-1，而IL-1反過來又可以誘生IFN-α、IFN-β、IL-1~6、GM-CSF、TNF-β等細(xì)胞因子，因此IFN-β在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。3.1.1.4干擾素的生物學(xué)活性1)抗病毒活性2)抑制細(xì)胞增殖活性和抗腫瘤活性3)免疫調(diào)節(jié)活性1)抗病毒活性IFN是機(jī)體抗病毒感染的第一道防線，在免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用前使細(xì)胞形成抗病毒狀態(tài)，抑制病毒增殖，防止病毒擴(kuò)散。2)抑制細(xì)胞增殖活性和抗腫瘤活性無論是對(duì)轉(zhuǎn)化細(xì)胞還是正常細(xì)胞的生長，IFN均具有抑制作用。調(diào)節(jié)癌基因的表達(dá)是IFN抗腫瘤活性的一個(gè)重要機(jī)制。正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過程在一定程度上受癌基因的調(diào)控，IFN能夠抑制一些前癌基因的表達(dá)，從而選擇性地減少癌基因的表達(dá)，阻止或減慢正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過程。3)免疫調(diào)節(jié)活性IFN對(duì)整個(gè)機(jī)體的免疫功能包括免疫監(jiān)視、免疫防御、免疫穩(wěn)定等均有不同程度的調(diào)節(jié)作用。3.1.2白細(xì)胞介素類白細(xì)胞介素（interleukin,IL）是一類免疫調(diào)節(jié)因子。這個(gè)名稱是1979年在第二屆國際淋巴因子研討會(huì)提出的，意指由各種白細(xì)胞產(chǎn)生的，介導(dǎo)細(xì)胞之間相互作用的細(xì)胞因子。它們主要由激活的淋巴細(xì)胞分泌，作為免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子信使發(fā)揮作用。3.1.2.1白細(xì)胞介素的種類、結(jié)構(gòu)與特性1）人IL-2人IL-2主要由激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生的一種糖蛋白，又稱T細(xì)胞生長因子，由133個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽，分子量為15~17.5Ku，pI6.8~8.2。結(jié)構(gòu)中有3個(gè)Cys58、Cys105、Cys125，僅在Cys58和Cys105之間形成分子內(nèi)二硫鍵才有生物活性。Cys125易形成二硫鍵錯(cuò)配，形成二聚體，降低甚至失去IL-2的生物學(xué)活性。將Cys125突變?yōu)榻z氨酸或丙氨酸后，可改善其活性和穩(wěn)定性。這種突變體也已批準(zhǔn)上市。3.1.3集落刺激生長因子3.1.3.1集落刺激生長因子的種類、結(jié)構(gòu)及性質(zhì)1966年Bradey等人在進(jìn)行造血細(xì)胞體外半固體培養(yǎng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)一類蛋白質(zhì)可刺激造血細(xì)胞集落形成，從而發(fā)現(xiàn)一組特異性的造血生長因子。用集落培養(yǎng)方法發(fā)現(xiàn)的造血細(xì)胞生長因子稱為集落刺激因子（colonystimulatingfactor,CSFs）CSFs不是單一成分，不同的CSF刺激生成由不同的細(xì)胞系組成的細(xì)胞集落。嚴(yán)格講，CSF主要是GM-CSF、G-CSF、M-CSF和Multi-CSF（或IL-3）4種。GM-CSF：granulocyte-macrophageCSF，粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子G-CSF：granulocyteCSF，粒細(xì)胞集落刺激因子M-CSF：macrophageCSF，巨噬細(xì)胞集落刺激因子Multi-CSF（或IL-3）：多能集落刺激因子維持細(xì)胞存活（細(xì)胞膜完整）；刺激造血細(xì)胞增殖；引導(dǎo)造血細(xì)胞分化定型；刺激終末細(xì)胞的功能活性。CSFs對(duì)效應(yīng)細(xì)胞具有4種作用：3.1.4紅細(xì)胞生成素紅細(xì)胞生成素（erythropoietin,EPO）,又稱促紅細(xì)胞生成素或紅細(xì)胞生產(chǎn)刺激因子（erythropoieticstimulatingfactor,ESF），是調(diào)節(jié)紅系祖細(xì)胞、紅細(xì)胞生成的主要激素。1971年研究人員從貧血羊血漿中純化出羊EPO。1977年Miyake從再生障礙性貧血病人的尿液中分離獲得人EPO純品，但含量甚微。性質(zhì)：EPO具有一定的酸穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性，4℃可保存2年以上，耐有機(jī)溶劑，但對(duì)蛋白水解酶敏感，特別是對(duì)唾液酸酶更敏感，去除唾液酸的EPO完全失去體內(nèi)生物學(xué)活性。在人類胎兒和新生兒時(shí)期，肝臟是產(chǎn)生EPO的主要器官。成年期，EPO主要產(chǎn)生于腎臟，但肝臟仍保留產(chǎn)生EPO的能力。一些腫瘤細(xì)胞也能產(chǎn)生EPO。機(jī)體缺氧和貧血能誘導(dǎo)產(chǎn)生EPO，鈷鹽、錳鹽和雄激素等也能誘導(dǎo)產(chǎn)生EPO。3.1.5腫瘤壞死因子腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor,TNF）早在19世紀(jì)，人們發(fā)現(xiàn)某些腫瘤患者感染細(xì)菌后，常導(dǎo)致腫瘤縮小或自發(fā)消退。為此，1893年美國學(xué)者Coley開始使用被殺死的細(xì)菌混合物治療癌癥病人，此混合物被稱為Coley`s毒素。1934年美國醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)宣稱Coley`s毒素是當(dāng)時(shí)全身性治療癌癥的惟一辦法。由此引發(fā)出臨床上采用菌苗抗癌的免疫療法。1971年Old等人發(fā)現(xiàn)，給感染BCG的小鼠注射LPS后，其血清中含有一種使小鼠肉瘤細(xì)胞出血性壞死的因子。Carswell等報(bào)道經(jīng)BCG感染的家兔兩周后通過靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素，2h內(nèi)該家兔血清中便出現(xiàn)一種腫瘤細(xì)胞毒因子，這種因子能使動(dòng)物腫瘤發(fā)生出血壞死，對(duì)正常組織細(xì)胞沒有毒性。與內(nèi)毒素不同的是，它在體外也能抑制腫瘤細(xì)胞的生長。實(shí)際上，內(nèi)毒素的腫瘤壞死效應(yīng)是通過單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用而殺傷腫瘤的，其本身并無直接抗癌作用。值得一提的是，TNF–β和TNF–α在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，都能誘導(dǎo)正常細(xì)胞和動(dòng)物產(chǎn)生錳過氧化物歧化酶，保護(hù)正常細(xì)胞免受輻射或抗瘤藥物的損傷，同時(shí)增加腫瘤細(xì)胞對(duì)輻射的敏感性，這對(duì)腫瘤放射治療的效果及愈后有積極作用。3.1.6表皮生長因子3.1.6.1表皮生長因子的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)表皮生長因子(epidermalgrowthfactor,EGF)首先是20世紀(jì)60年代從小鼠頜下腺中發(fā)現(xiàn)的一種活性多肽，它由53個(gè)aa組成，含3對(duì)二硫鍵，分子質(zhì)量約6ku。人表皮生長因子，因其可抑制胃酸的分泌，又稱抑胃素。表皮生長因子的臨床應(yīng)用中國科學(xué)院上海生化所成功地利用分泌型大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)了EGF，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所利用酵母體系高效表達(dá)了hEGF，兩種體系表達(dá)的EGF均獲得了新藥證書（外用型）1）促進(jìn)外科手術(shù)傷口及創(chuàng)面愈合；2）促進(jìn)眼角膜創(chuàng)傷的愈合；3）對(duì)胃腸道潰瘍的治療作用；EGF的生物學(xué)作用廣泛，對(duì)外胚層和內(nèi)胚層來源的一些組織有促分裂和刺激合成的作用。EGF促進(jìn)細(xì)胞增殖分化，存在內(nèi)用安全性問題，故內(nèi)用rhEGF至今未獲批準(zhǔn)臨床應(yīng)用。3.1.7干細(xì)胞因子干細(xì)胞因子（stemcellfactor,SCF）又稱為干細(xì)胞生長因子（SCGF），肥大細(xì)胞生長因子（mastcellgrowthfactor,MCGF），是1990年發(fā)現(xiàn)的一種重要的造血細(xì)胞因子。它在造血及維持肥大細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和精原細(xì)胞的存活、增殖和分化過程中起著重要作用。尤其是在干細(xì)胞移植、干細(xì)胞生物工程研究和應(yīng)用迅速的今天，SCF在這一領(lǐng)域?qū)⒄加衅渌?xì)胞因子不可替代的重要地位，越來越受到生物學(xué)家和臨床學(xué)家的重視。血小板生成素（thrombopoetin,TPO），是血小板生成的主要生理調(diào)節(jié)因子，主要通過刺激巨核細(xì)胞分化、增殖及成熟來調(diào)節(jié)體內(nèi)血小板的生成，故又稱巨核細(xì)胞生長發(fā)育因子（Megakaryocytegrowthanddevelopmentfactor,MGDF）。3.1.8血小板生成素糖基化與否并不影響IL-2的功能，故可以用大腸桿菌來生產(chǎn)重組人IL-2。大腸桿菌表達(dá)的無糖基化的rhGM-CSF比天然糖基化GM-CSF具有更高的生物學(xué)活性，更長的半衰期和更強(qiáng)的結(jié)合受體親和力。糖基化與否對(duì)SCF的活性沒有影響，這樣可以用大腸桿菌表達(dá)體系來大量表達(dá)生產(chǎn)重組人SCF。糖基對(duì)EPO的生物學(xué)活性是到至關(guān)重要的，因此基因工程的EPO只能利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)（CHO）生產(chǎn)天然的TPO是高度糖基化的，糖基化有助于提高TPO的活性，還可延長其半衰期。3.2.1胰島素胰島素insulin是最早（Banting和Best，1921年）發(fā)現(xiàn)的一種具有激素作用的蛋白質(zhì)，也是最先（Abel，1926年）結(jié)晶、確定氨基酸殘基序列（Sanger等，1955年）、人工化學(xué)合成（Du等，1964年；龔岳亭等，1965年）以及采用基因工程技術(shù)批量生產(chǎn)并投放市場供應(yīng)臨床（1982年）的第一種蛋白質(zhì)。3.2.1.2胰島素的生物功能及臨床應(yīng)用生物學(xué)功能胰島素具有非常廣泛的調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝等的生物學(xué)功能，是維持人體正常代謝和生存所必需的激素。胰島素是機(jī)體內(nèi)唯一降低血糖的激素，也是唯一同時(shí)促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成的激素。1）調(diào)節(jié)糖代謝：胰島素能夠降低血糖；2）調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)代謝：胰島素通過增加肌肉等組織及細(xì)胞對(duì)氨基酸的提取，促進(jìn)核糖蛋白對(duì)mRNA的翻譯，加速蛋白質(zhì)的合成；胰島素還可降低蛋白水解酶的活性，抑制蛋白質(zhì)的分解代謝和氨基酸的氧化；3）調(diào)節(jié)脂肪代謝：胰島素能促進(jìn)脂肪酸的合成和碳水化合物轉(zhuǎn)換為脂肪。通過降低細(xì)胞內(nèi)脂解酶的活性而抑制脂肪分解，使酮體生成減少，糾正酮癥酸中毒。4）其它功能：胰島素可促進(jìn)鉀離子和鎂離子穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；可促進(jìn)DNA、RNA及ATP的合成。3.2.4心鈉素及利鈉多肽家族心鈉素（atrialnatriureticpeptide，ANP）人心鈉素是由28個(gè)氨基酸殘基組成的活性多肽，其分子中含2個(gè)半胱氨酸形成的二硫鍵，使ANP分子呈環(huán)狀結(jié)構(gòu)。具有降壓及減少血容量作用，并在維持水電解質(zhì)平衡及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面扮演重要角色3.3.1鏈激酶鏈激酶(streptokinase)是在1933年由Tillet和Garner首先在多株鏈球菌的培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)的，也是最先用于臨床治療的溶栓藥。最初的藥物是從β-溶血性鏈球菌的培養(yǎng)液中提取的，產(chǎn)量低、成本高，而且制品中殘存的溶血素對(duì)心肌和肝臟有一定的損害。以后改用基因工程技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)的重組鏈激酶避免了該危害。鏈激酶是一種非酶性單鏈蛋白，本身不能激活纖溶酶原，它的激活機(jī)制是間接的，即先要與纖溶酶原以1：1的比例結(jié)合成鏈激酶－纖溶酶原復(fù)合物，此時(shí)的復(fù)合物才能激活在纖維蛋白表面的或游離在血液中的纖溶酶原，使之成為纖溶酶，溶解纖維蛋白。該復(fù)合物的催化作用很快。鏈激酶溶栓作用機(jī)理纖溶酶原激活劑前體內(nèi)皮細(xì)胞因子纖維蛋白鏈激酶溶血栓過程1:1activate鏈激酶尿激酶是直接起作用，且作用較慢，它對(duì)纖維蛋白也無選擇性，也容易引起出血等不良反應(yīng)。優(yōu)點(diǎn)：但尿激酶價(jià)格低廉，不產(chǎn)生抗體，不引起過敏反應(yīng)，在我國是主要的溶栓藥。3.3.3組織型纖溶酶原激活劑它是由Astrump等首先在組織中發(fā)現(xiàn)的，故被命名為組織型纖溶酶原激活劑（tissue-typeplasminogenactivator，t-PA），人體很多組織均能產(chǎn)生t-PA，它主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生。1983年P(guān)ennica等從Bowes黑色素瘤細(xì)胞系中提取了t-PA的cDNA，并在大腸桿菌中表達(dá)成功，但由于復(fù)性困難，未能形成產(chǎn)品。1987年，美國Genetech公司用CHO細(xì)胞生產(chǎn)的t-PA，是第一個(gè)被美國FDA批準(zhǔn)的用動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模生產(chǎn)的基因工程產(chǎn)品。t-PA是繼鏈激酶和尿激酶之后屬于第二代溶栓藥，它與第一代溶栓藥相比，優(yōu)點(diǎn)在于對(duì)血栓的特異性溶栓作用。游離的t-PA對(duì)纖溶酶原的親和力很低，因此對(duì)血液中的纖溶酶原一般不會(huì)產(chǎn)生激活作用，而對(duì)纖維蛋白卻有很強(qiáng)的親和力，與纖維蛋白結(jié)合的t-PA對(duì)纖溶酶原的激活作用比游離的t-PA強(qiáng)100倍。由于正常人的血液中很少有纖維蛋白，因此一般不會(huì)產(chǎn)生非特異性的全身性纖溶狀態(tài)。t-PA激活3.3.4水蛭素19世紀(jì)80年代，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)吸血水蛭含有一種具有抗凝性質(zhì)的活性成分，將其暫命名為水蛭素（hirudin），直到20世紀(jì)50年代，隨著蛋白質(zhì)化學(xué)和血液凝固生物化學(xué)研究技術(shù)的發(fā)展，科學(xué)家才從汲血水蛭唾液腺分離出這種抗凝物質(zhì)，正式命名為水蛭素。水蛭素是由65個(gè)aa組成的活性多肽，是目前已知的最強(qiáng)有效的凝血酶抑制劑，是預(yù)防血栓形成的有效輔助藥物。已從水蛭素cDNA文庫中分離出編碼水蛭素的cDNA，在酵母菌中表達(dá)了有活性的水蛭素。臨床上防治血栓性疾病的藥物有多種，其中包括抗血栓藥物和溶栓藥。水蛭素屬于抗血栓藥。水蛭素是一種凝血酶抑制劑，直接作用于凝血酶，與凝血酶形成穩(wěn)定的特異復(fù)合物，阻斷凝血酶的蛋白水解功能。第四章復(fù)習(xí)抗體分子的結(jié)構(gòu)—CDR區(qū)在V區(qū)中，某些特定位置的氨基酸殘基顯示更大的變異性，構(gòu)建了抗體分子和抗原分子發(fā)生特異性結(jié)合的關(guān)鍵部位，稱為互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）。而C區(qū)則決定了Ig分子的異種抗原性。改造鼠源性單克隆抗體的目的：一是降低免疫原性；二是降低相對(duì)分子量，增加組織通透性。改造后的單抗的類型和特性類型基本結(jié)構(gòu)相對(duì)分子質(zhì)量人-鼠嵌合抗體人IgC-小鼠IgV150000改形抗體小鼠CDRs替換人CDRs150000Fab完整L鏈和Fd（VH+CH1）50000FVVH和VL25000單鏈抗體VH-多肽-VL27000單域抗體VH或VL

12500最小識(shí)別單位（MRU）一個(gè)CDR<2000而具有完整抗原結(jié)合位點(diǎn)的Fab、Fv及ScFv是目前小分子抗體研究的重點(diǎn)。4.3.4雙功能抗體雙功能抗體就是雙特異性抗體（biospecificantibody,BsAb）。雙功能抗體，是指一類具有雙特異性的抗體雜合子，它們在功能上是單價(jià)的，化學(xué)結(jié)構(gòu)是雙價(jià)的。雙功能抗體具有雙重特異性，這種新型抗體的兩個(gè)Fab段能同時(shí)與不同的兩個(gè)抗原結(jié)合。即抗體的一臂與腫瘤標(biāo)記結(jié)合，另一臂則與藥物、毒素或細(xì)胞毒性細(xì)胞結(jié)合，雙功能抗體應(yīng)用于輔助癌癥的治療，這些作用能直接導(dǎo)向瘤細(xì)胞.噬菌體抗體庫技術(shù)噬菌體抗體是在膜表面表達(dá)抗體分子Fab或ScFv，這種膜表達(dá)是通過Fab段或ScFv與單鏈?zhǔn)删w外殼蛋白形成融合蛋白而完成，其特點(diǎn)是它既可以識(shí)別相應(yīng)抗原與其相結(jié)合，又能夠感染宿主菌進(jìn)行再擴(kuò)增。將B細(xì)胞全套可變區(qū)基因克隆出來，組裝成噬菌體抗體的群體，則成為噬菌體抗體呈現(xiàn)技術(shù)。診斷血清診斷方法凝集反應(yīng)：是指顆粒型抗原（如細(xì)菌或吸附在乳膠、離子交換樹脂等不溶性的顆粒上的抗原），以及細(xì)胞型抗原（如紅細(xì)胞或吸附在紅細(xì)胞上的抗原）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時(shí)間，可形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊。直接凝集反應(yīng)(directagglutination)

是將細(xì)菌或紅細(xì)胞等顆粒性抗原與其相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。

（1）玻片法（同種紅細(xì)胞凝集反應(yīng)）

如檢查血型的血細(xì)胞凝集現(xiàn)象

（2）試管法

如診斷傷寒病的肥達(dá)氏反應(yīng)（Widalreaction）

2、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的反向被動(dòng)血凝診斷試劑將抗體吸附于載體上（常用紅細(xì)胞），用以檢測抗原的間接凝集反應(yīng)，其與傳統(tǒng)的間接凝集反應(yīng)（抗原吸附于載體上）相反，稱為反向間接凝集反應(yīng)。該方法用紅細(xì)胞作為載體時(shí)，稱為反向被動(dòng)血凝試驗(yàn)。試劑制備的原理：血細(xì)胞經(jīng)甲醛處理后，在酸性條件下能吸附蛋白質(zhì)，當(dāng)純化的抗HBsAg血清吸附其上時(shí)便具有抗體活性，若待測樣品中存在有HBsAg時(shí)，則發(fā)生特異性結(jié)合而使血細(xì)胞發(fā)生凝集。反向被動(dòng)血凝試驗(yàn)3、妊娠診斷試劑人體絨毛膜促性腺激素（HumanChorionicGonadotropin，HCG）成熟女性因受精的卵子移動(dòng)到子宮腔內(nèi)著床后，形成胚胎，在發(fā)育成長為胎兒過程中，胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生大量的HCG，可通過孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中。當(dāng)妊娠1～2.5周時(shí)，血清和尿中的HCG水平即可迅速升高，第8孕周達(dá)到高峰，至孕期第4個(gè)月始降至中等水平，并一直維持到妊娠末期。

間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination)

是用可溶性抗原包被在一種與免疫無關(guān)的，具一定大小的不溶性顆粒（即載體顆粒，如：乳膠顆?；蚣t細(xì)胞）的表面，然后與相應(yīng)抗體作用，在有適宜電解質(zhì)存在的條件下，結(jié)合產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象。

間接凝集抑制試驗(yàn)：將可溶性抗原與相應(yīng)抗體預(yù)先混合，充分作用后，再加入相應(yīng)致敏顆粒，此時(shí)因抗體已被可溶性抗原結(jié)合，不再能與致敏顆粒表面相應(yīng)抗原結(jié)合，故不能出現(xiàn)致敏顆粒被動(dòng)凝集的現(xiàn)象。4、抗ABO血型系統(tǒng)血清按人紅細(xì)胞表面帶有的A或B種凝集原，可將血型分為A、B、AB和O型4種。ABO血型抗血清的制備血型鑒定的方法：玻片直接凝集方法抗B凝集素和抗A凝集素人血型的常規(guī)ABO分型

人紅細(xì)胞與血清的反應(yīng)人血清與紅細(xì)胞的反應(yīng)解釋抗A血清抗B血清A細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞ABO血型--++-O+--+-A-++--B++---AB毒素的來源植物毒蛋白及其A鏈類似物（也稱核糖體失活蛋白，RIP），以及細(xì)菌毒蛋白。常用的毒素有：細(xì)菌毒素：白喉毒素（DT）、綠膿桿菌外毒素（PE）植物毒素：蓖麻毒素、相思子毒蛋白。這些毒素的特點(diǎn)：在進(jìn)入胞漿后，能使蛋白質(zhì)生物合成停止，從而使細(xì)胞死亡。它們都是高效的細(xì)胞毒劑，理論上只要1、2個(gè)毒蛋白A鏈分子進(jìn)入胞漿，即可殺死一個(gè)細(xì)胞，因此它們是“生物導(dǎo)彈”相當(dāng)理想的“彈頭”。植物毒素A鏈能催化真核細(xì)胞核糖體60S亞基的失活，使核糖體失去與肽鏈延伸因子2結(jié)合的能力，從而使蛋白質(zhì)生物合成停止。植物毒素B鏈能與細(xì)胞表面多糖的半乳糖殘基結(jié)合，并插入細(xì)胞膜，形成孔道，幫助A鏈進(jìn)入胞漿。毒素A、B鏈之間由二硫鍵相連。當(dāng)毒素與細(xì)胞表面結(jié)合后，細(xì)胞膜內(nèi)凹，形成吞噬泡，然后經(jīng)高爾基體，轉(zhuǎn)到溶酶體中。在這過程中，一部份毒素A鏈可能在B鏈幫助下，穿過膜進(jìn)入胞漿，使蛋白質(zhì)合成停止，其他毒素分子可能為溶酶體內(nèi)的水解酶降解。第五章復(fù)習(xí)5.2.1動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞形態(tài)的分化（特化）離體培養(yǎng)細(xì)胞類型：貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、兼性貼壁細(xì)胞5.5.1動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法懸浮培養(yǎng)貼壁培養(yǎng)貼壁—懸浮培養(yǎng)，或稱假懸浮培養(yǎng)5.5.2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作方式分批式操作半連續(xù)式操作連續(xù)式操作灌流式操作1、分批式操作一種是將細(xì)胞和培養(yǎng)基一次性加入反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，此后細(xì)胞不斷增長，產(chǎn)物不斷形成和積累，最后將條件培養(yǎng)基，即經(jīng)培養(yǎng)已含有細(xì)胞產(chǎn)物的培養(yǎng)基，或連同細(xì)胞一并取出，培養(yǎng)結(jié)束。另一種是先將細(xì)胞和培養(yǎng)基加入反應(yīng)器，待細(xì)胞生長至一定密度后，向反應(yīng)器內(nèi)加入誘導(dǎo)劑或病毒等，經(jīng)一段時(shí)間作用后，將反應(yīng)物取出，如產(chǎn)生Namalwa干擾素和疫苗等。3連續(xù)式操作連續(xù)式培養(yǎng)是一種常見的懸浮培養(yǎng)模式，采用機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器系統(tǒng)。該模式是將細(xì)胞接種與一定體積的培養(yǎng)基后，為了防止衰退期的出現(xiàn)，在細(xì)胞達(dá)最大密度之前，以一定速度向生物反應(yīng)器連續(xù)添加新鮮培養(yǎng)基；同時(shí)，含有細(xì)胞的培養(yǎng)物以相同的速度連續(xù)從反應(yīng)器流出，以保持培養(yǎng)體積的恒定。理論上講，該過程可無限延續(xù)下去。4、灌流式操作該方式是當(dāng)細(xì)胞和培養(yǎng)基一起加入反應(yīng)器后，在細(xì)胞增長和產(chǎn)物形成過程中，不斷地將部分條件培養(yǎng)基取出，同時(shí)不斷地補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基。它與半連續(xù)式操作不同之處在于取出部分條件培養(yǎng)基時(shí)，絕大部分細(xì)胞仍保留在反應(yīng)器內(nèi)，而半連續(xù)式培養(yǎng)則同時(shí)也取出了部分細(xì)胞。該操作方式是近代用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)各種藥品最被推崇的方式。5.6.1動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器的類型及其基本結(jié)構(gòu)攪拌罐式生物反應(yīng)器氣升式生物反應(yīng)器中空纖維式生物反應(yīng)器透析袋或膜式生物反應(yīng)器固定床或流化床式生物反應(yīng)器ATryn（α-antithrombin）-首個(gè)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)的藥物獲準(zhǔn)上市2009-11-1016:04:12

作者：新特藥房

來源：中國新特藥網(wǎng)

美國麻省生物技術(shù)公司（GTCBiotherapeutics）ATryn：人抗凝血酶重組蛋白，它是第一個(gè)在世界上得到認(rèn)可的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)的蛋白。GTC生物治療公司正在開發(fā)人類血漿蛋白的重組蛋白、單克隆抗體。這些產(chǎn)品可能應(yīng)用于血液學(xué)、腫瘤學(xué)和自身免疫疾病。ATryn是從經(jīng)過基因修飾的奶山羊分泌出的羊奶中提取純化，它是用于治療遺傳性抗凝血酶缺乏癥的疾病。第六章復(fù)習(xí)6.2.3根據(jù)抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)分類(1)β-內(nèi)酰胺類抗生素包括青霉素類、頭孢菌素類等。它們都包含一個(gè)四元內(nèi)酰胺環(huán)。這是在當(dāng)前通受重視的一類抗生素。(2)氨基糖苷類抗生素包括鏈霉素、慶大霉素等。6-APA(3)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素如紅霉素、麥迪加霉素。(4)四環(huán)類抗生素如四環(huán)素、土霉素等。(5)多肽類抗生素如多粘菌素、桿菌肽等。它們多由細(xì)菌、特別是由產(chǎn)孢子的桿菌產(chǎn)生，6.2.4根據(jù)抗生素的作用機(jī)制分類(1)抑制細(xì)胞壁合成的抗生素如青霉素、頭孢菌素。(2)影響細(xì)胞膜功能的抗生素如多烯類抗生素。(3)抑制病原菌蛋白質(zhì)合成的抗生素如四環(huán)素。(4)抑制核酸合成的抗生素如絲裂霉素C。(5)抑制生物能作用的抗生素如抑制電子轉(zhuǎn)移的抗霉素(antimycinl)。②提取精制：將青霉素發(fā)酵液冷卻，過濾。濾液在pH2～2.5的條件下，于萃取機(jī)內(nèi)用醋酸丁酯進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，得到丁酯萃取液，轉(zhuǎn)入pH7.0～7.2的緩沖液中，然后再轉(zhuǎn)入丁酯中，將此丁酯萃取液經(jīng)活性炭脫色，加入成鹽劑，經(jīng)共沸蒸餾即可得青霉素G鉀鹽。青霉素G鈉鹽是將青霉素G鉀鹽通過離子交換樹脂（鈉型）而制得。6.4青霉素生產(chǎn)工藝簡述6.4.1菌種產(chǎn)黃青霉(Penicillumchrysogenum)

P-8，由山東魯抗醫(yī)藥公司保存。6.4.2培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基：玉米漿，蔗糖，硫酸銨，碳酸鈣，豆油，消沫劑；pH6.2～6.5。發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米漿，磷酸二氫鉀，無水硫酸鈉，碳酸鈣，硫酸錳，硫酸亞鐵，消沫劑；pH4.7～4.9。添加苯乙酸或者苯乙酰胺，可以借?；D(zhuǎn)移的作用，將苯乙酸轉(zhuǎn)入青霉素分子，提高青霉素G的生產(chǎn)強(qiáng)度，但苯乙酸對(duì)發(fā)酵有影響，一般以苯乙酰胺較好。添加苯氧乙酸則產(chǎn)生青霉素V（苯氧甲基青霉素）

。由于在發(fā)酵過程中CO2的不斷產(chǎn)生，培養(yǎng)基中有很多有機(jī)氮源含有蛋白質(zhì)，因此在發(fā)酵罐內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量泡沫，苯氧甲基青霉素如不嚴(yán)加控制，就會(huì)產(chǎn)生發(fā)酵液逃液，導(dǎo)致染菌的后果。采用植物油消沫仍舊是個(gè)好方法，一方面作為消沫劑，另一方面還可以起到碳源作用，但現(xiàn)在已普遍采用合成消沫劑（如聚酯、聚醇類消沫劑）代替豆油。6.4.3生產(chǎn)6.4.3.1種子制備種子制備是指孢子接入種子罐后，在罐中繁殖成大量菌絲的過程，其目的是使孢子發(fā)芽、繁殖和獲得足夠數(shù)量的菌絲，以便接種到發(fā)酵罐當(dāng)中去。種子罐級(jí)數(shù)是指制備種子需逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的次數(shù)，一般根據(jù)種子的生長特性、孢子發(fā)芽及菌體繁殖速度，以及發(fā)酵罐的容積而定。青霉素種子制備一般為二級(jí)種子罐擴(kuò)大培養(yǎng)。6.4.3.2發(fā)酵過程控制接種量一般為5～20%。1、碳源控制：乳糖是青霉素生物合成的最好碳源，葡萄糖也是比較好的碳源，但必須控制其加入的濃度，因?yàn)槠咸烟且妆痪w氧化并產(chǎn)生抑制抗生素合成酶形成的物質(zhì)，從而影響青霉素的合成，所以可以采用連續(xù)添加葡萄糖的方法代替乳糖。苯乙酸或其衍生物苯乙酰胺等均可作為青霉素G的側(cè)鏈前體。苯乙酰胺和苯乙酸的毒性取決于培養(yǎng)基的pH和前體的濃度。堿性時(shí)，苯乙酰胺有毒；酸性和中性時(shí)，苯乙酸毒性較大；前體用量大于0.1%時(shí)，青霉素的生物合成均下降。所以一般發(fā)酵液中前體濃度以始終維持在0.1%為宜。在堿性條件下，苯乙酸被菌體氧化的速率隨培養(yǎng)基pH上升而增加。年幼的菌絲不氧化前體，而僅利用它來構(gòu)成青霉素分子。隨著菌齡的增大，氧化能力逐漸增加。為了盡量減少苯乙酸的氧化，生產(chǎn)上多用間歇或連續(xù)添加低濃度苯乙酸的方法，以保持前體的供應(yīng)速率略大于生物合成的需要。2、pH控制：如pH過高，則添加糖、硫酸或無機(jī)氮源；若pH過低，則加入碳酸鈣、氫氧化鈉、氨或尿素，也可提高通氣量。另外，也可利用自動(dòng)加入酸或堿的方法，使發(fā)酵液pH維持在6.8～7.2，以提高青霉素產(chǎn)量。

3、溫度控制：青霉菌生長的適宜溫度為30℃，而分泌青霉素的適宜溫度是20℃左右，因此生產(chǎn)上采用變溫控制的方法，使之適合不同階段的需要。4、補(bǔ)料控制：發(fā)酵過程中除以中間補(bǔ)糖控制糖濃度及pH外，補(bǔ)加氮源也可提高發(fā)酵單位。硫酸銨5、鐵離子的影響：三價(jià)鐵離子對(duì)青霉素生物合成有顯著影響，一般若發(fā)酵液中鐵離子含量超過30～40μg/ml，則發(fā)酵單位增長緩慢。因此鐵罐在使用前必須進(jìn)行處理，可在罐壁涂上環(huán)氧樹脂等保護(hù)層，6.4.4提純工藝6.4.4.1發(fā)酵液預(yù)處理

發(fā)酵液中的雜質(zhì)如高價(jià)無機(jī)離子（Fe2+、Ca2+、Mg2+）和蛋白質(zhì)在離子交換的過程中對(duì)提煉影響甚大，不利于樹脂對(duì)抗生素的吸收。如用溶媒萃取法提煉時(shí)，蛋白質(zhì)的存在會(huì)產(chǎn)生乳化，使溶媒和水相分離困難。對(duì)高價(jià)離子的去除，可采用草酸或磷酸。草酸與鈣離子生成的草酸鈣還能促使蛋白質(zhì)凝固以提高發(fā)酵濾液的質(zhì)量。磷酸（或磷酸鹽），既能降低鈣離子濃度，也利于去除鎂離子。加黃血鹽及硫酸鋅，則前者有利于去除鐵離子，后者有利于凝固蛋白質(zhì)。此外，兩者還有協(xié)同作用。他們所產(chǎn)生的復(fù)鹽對(duì)蛋白質(zhì)有吸附作用。為了有效的去除發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)，需加入絮凝劑。絮凝劑是一種能溶于水的高分子化合物。6.4.4.2提取常用的提取方法有溶媒萃取法、離子交換法和沉淀法等。

1、溶媒萃取法

這是利用抗生素在不同的p