標(biāo)準(zhǔn)的-定量Q-PCR儀器的具體使用步驟和操作方法標(biāo)準(zhǔn)的-定量Q-PCR儀器的具體使用步驟和操作方法標(biāo)準(zhǔn)的-定量Q-PCR儀器的具體使用步驟和操作方法資料僅供參考文件編號(hào)：2022年4月標(biāo)準(zhǔn)的-定量Q-PCR儀器的具體使用步驟和操作方法版本號(hào)：A修改號(hào)：1頁次：1.0審核：批準(zhǔn):發(fā)布日期：Q-PCR儀器使用具體步驟首先將Mx3000P電源打開，大約1min，將會(huì)聽到啟動(dòng)的聲音。然后打開桌面上的“Mx3000P軟件”，確定軟件界面右下面的聯(lián)機(jī)標(biāo)志呈綠色。如果不是綠色而是紅色，軟件會(huì)提示InstrumenttoPCcommunicationshavefailed,這時(shí)只需稍等片刻，待儀器自檢完成，會(huì)自動(dòng)連接計(jì)算機(jī)；在“Mx3000P軟件”的“NewExperimenttype”彈出框中選擇需要的實(shí)驗(yàn)類型：通常選擇“SYBRGreen(withdissociationcurve),點(diǎn)擊“OK鍵”；確定“Mx3000P軟件”界面上面（Selection命令下）的鹵鎢燈已經(jīng)打開。綠色說明已經(jīng)打開，黃色說明正在預(yù)熱，紅色說明沒有打開；最好在儀器與光源預(yù)熱20min后開始實(shí)驗(yàn)；在“PlateSetup”里，對(duì)96孔板的各空進(jìn)行設(shè)定。設(shè)定Standard(標(biāo)準(zhǔn)品)、NTC（陰性對(duì)照）、Unknown(樣品)等，并選擇正確的通道（FAM,HEX,ROX,Cy5）.對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)定其模板濃度，還需要對(duì)不同的樣品進(jìn)行編號(hào)?；蛘唿c(diǎn)擊“Import”,導(dǎo)入以前使用的96孔板設(shè)定。具體為：首先選擇Welltype中的Unknown，然后選擇下方的ROX、SYBR;選擇Referencedye的ROX用Replicatesymbol對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行標(biāo)記（1,2,3，XXX等）切換至“Thermolprofilesetup”界面,進(jìn)行PCR循環(huán)的設(shè)定。可以改變各項(xiàng)溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等，或者刪除、添加特定步驟和循環(huán)?；蛘唿c(diǎn)擊“Import”，導(dǎo)入以前設(shè)定的PCR程序。表示表示在這一步結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào)，代表在這一步的全過程中都采集熒光信號(hào)，一般用作溶解曲線分析。ENDALL“Thermolprofilesetup”設(shè)定結(jié)束后，點(diǎn)擊軟件界面右上方的“Run”,軟件界面右下方會(huì)出現(xiàn)運(yùn)行狀態(tài)顯示框“RunStatus”,可以選擇“Turnlampoffatendofrun”,點(diǎn)擊“start”開始實(shí)驗(yàn)，彈出“保存文件的對(duì)話框”，選擇后保存，彈出另外一個(gè)對(duì)話框，選擇第二個(gè)（預(yù)熱之后跑），另外在運(yùn)行過程中可通過點(diǎn)擊“Addcycles”來增加擴(kuò)增的循環(huán)數(shù)，在PCR運(yùn)行結(jié)束后軟件將自動(dòng)關(guān)閉鹵鎢燈。ENDALL在PCR運(yùn)行的過程中可以點(diǎn)擊“RawDataplots”,觀察樣品的實(shí)時(shí)擴(kuò)增原始結(jié)果?！芇CR運(yùn)行結(jié)束后，點(diǎn)擊“Analysis”,在點(diǎn)擊“Results”,軟件將會(huì)自動(dòng)進(jìn)行結(jié)果分析，也可以點(diǎn)擊∑手動(dòng)進(jìn)行結(jié)果分析。結(jié)果分析：將Q-PCR結(jié)果從電腦中拷出來，在電腦上打開文件；點(diǎn)擊菜單欄的“File”命令，選擇“ConverttoNewExperimenttype”子命令，彈出“SelectionnewExperimenttype”對(duì)話框；在“SelectionnewExperimenttype”對(duì)話框中選擇“ComparativeQuantitation(Calibrator)命令，將文件轉(zhuǎn)化成分析結(jié)果的模式，點(diǎn)擊OK鍵；彈出“Mx3000P軟件”界面，在“PlateSetup”界面中“首先選擇Welltype中的Unknown，然后選擇下方的ROX、SYBR;選擇Referencedye的ROX將96孔板中的Actin樣品選中，然后在Nomalizingassay中選擇SYBR；然后對(duì)相同模板的樣品標(biāo)記相同的字母，對(duì)相同引物的樣品標(biāo)記相同的數(shù)字；最后任意（通常選最左側(cè)的）選擇一列