第33卷2009年第6期黑龍江醫(yī)學(xué)HEILONGJ-IANGMEDICALJOURNALV01.33。No.6Jun.200945l梅毒螺旋體的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)及臨床應(yīng)用歐春怡,苗巖(哈爾濱市紅十字中心醫(yī)院檢驗(yàn)科,黑龍江哈爾濱15(X76摘要:梅毒螺旋體的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要為血清學(xué)試驗(yàn),分為特異性和非特異性梅毒抗體檢測(cè)。這些方法對(duì)于各期梅毒的診斷具有極其重要的價(jià)值。本文對(duì)當(dāng)前梅毒螺旋體的檢測(cè)狀況及其臨床應(yīng)用作一綜述。關(guān)鍵詞:梅毒螺旋體;診斷;臨床應(yīng)用學(xué)科分類代碼:320.1160中圖分類號(hào):R446文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文章編號(hào):1004—5775(200906—0451—03TheDetectionTechniquetoTreponemaPailidumintheLaboratoryanditsClinicalApplicationOUChun—yi,MIAOYan(ClinicalLaboratory,HarbinRed—CrossCentralHospital,Harbin150076,ChinaAbstract:ThedetectiontechniquetoTrepenemapalliduminthelaboratoryisserologicaltest,includingantibodytestofnonspecificreaginandspecificantigentest,whichcanbeappliedinthediagnosisofsyphilisinvariousperiods.Keywords:Treponemapallidum;Diagnosis;Chnicalapplication梅毒(Syphilis,是由梅毒螺旋體(Treponemapallidum,TP引起的一種性傳播疾病。早期侵犯皮膚黏膜,傳染性強(qiáng);晚期以侵犯心血管和神經(jīng)系統(tǒng)為主,破壞性強(qiáng)。不僅引起全身性損害,同時(shí)還可能通過(guò)胎盤傳給胎兒,引起先天性梅毒。近年來(lái),梅毒在我國(guó)的發(fā)病率呈逐年增加的趨勢(shì)…,選擇敏感性及特異性高的診斷方法,對(duì)該病的防治具有重要意義。檢測(cè)梅毒螺旋體的方法很多,直接觀察梅毒螺旋體,可準(zhǔn)確診斷梅毒。人體感染梅毒螺旋體后,可產(chǎn)生兩類抗體:一類主要有IgM、IgG類兩種特異性抗螺旋體抗體;另一類非特異性抗體是受損的宿主細(xì)胞釋放出的具有抗原性的類脂質(zhì),它能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗類脂質(zhì)的抗體,又稱反應(yīng)素。目前,用于梅毒輔助診斷的檢驗(yàn)方法就是基于檢測(cè)這兩類抗體而設(shè)計(jì)的,包括梅毒螺旋體非特異性試驗(yàn)和梅毒螺旋體特異性試驗(yàn)。1常用的梅毒螺旋體檢測(cè)方法1.1梅毒螺旋體非特異性抗體血清學(xué)試驗(yàn)主要檢測(cè)方法有性病研究實(shí)驗(yàn)室(VDRL玻片試驗(yàn)、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(USR、甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(TRusT和快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR。這些非特異性試驗(yàn)的抗原以膽固醇晶粒為載體,包被上心磷脂和卵磷脂,構(gòu)成VDRL抗原顆粒。當(dāng)抗原與血清中反應(yīng)素以一定的比例相互作用時(shí),出現(xiàn)凝集。為了能肉眼觀察到這種凝集,把抗原結(jié)合到各種有色物質(zhì)上,如RPR用活性炭,使凝集顆粒呈黑色;TRUST用特制的甲苯胺紅,使凝集顆粒呈紅色反應(yīng)。這些試驗(yàn)具有相同的標(biāo)準(zhǔn)化抗原,敏感性相似,其操作簡(jiǎn)易,費(fèi)用低廉,目前多數(shù)醫(yī)院將此類試驗(yàn)列為梅毒的常規(guī)篩查試驗(yàn)。1.2梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗(yàn)主要包括熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FrA—ABS、梅毒螺旋體血細(xì)胞凝集試驗(yàn)(11PHA、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(rIP—ELISA、膠體金免疫層析法(GIcA、梅毒螺旋體免疫印跡試驗(yàn)(Westernimmunoblottingtechnique,咖。此類試驗(yàn)采用活的或死的梅毒螺旋體或它的某些特異肽段作抗原,檢測(cè)血清中的梅毒螺旋體的特異性tsG和IsM抗體,其特異性和靈敏度都比非特異性抗體高,一般用作確認(rèn)試驗(yàn)。2梅毒螺旋體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的臨床應(yīng)用2.1篩查試驗(yàn)的應(yīng)用目前,對(duì)反應(yīng)素的來(lái)源尚有爭(zhēng)議。多數(shù)人認(rèn)為【2],它是人體感染梅毒螺旋體后組織受到破壞裂解出來(lái)的一種類脂成分,這種成分與梅毒螺旋體的蛋白質(zhì)結(jié)合,成為抗原,刺激機(jī)體產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗體,即反應(yīng)素。梅毒螺旋體破壞組織可使機(jī)體產(chǎn)生萬(wàn)方數(shù)據(jù)第33卷4522009年第6期黑龍江醫(yī)學(xué)HEILONGJIANGMEDICALJOURNALV01.33,N0.6Jun.2009反應(yīng)素,而其他破壞機(jī)體的過(guò)程也可產(chǎn)生反應(yīng)素,所以梅毒患者梅毒螺旋體非特異性試驗(yàn)呈陽(yáng)性,但陽(yáng)性者并不一定就是感染了梅毒螺旋體。人體某些生理狀態(tài)(如懷孕;患有急性傳染病(如風(fēng)疹、水痘、病毒性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、上呼吸道感染、肺結(jié)核等;許多慢性病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性心臟病、肝硬化、慢性腎炎和海洛因成癮等梅毒螺旋體非特異性試驗(yàn)結(jié)果也可以呈陽(yáng)性。因此,篩查試驗(yàn)具有假陽(yáng)性。但由于反應(yīng)素的量可反映組織的損傷程度,該方法可半定量血清中的反應(yīng)素,而且抗體滴度與梅毒活動(dòng)度有關(guān)。早期梅毒經(jīng)過(guò)治療后,非特異性的反應(yīng)素滴度一般很快下降甚至轉(zhuǎn)陰。用TRUST檢測(cè)梅毒在治療過(guò)程中的非特異性抗體的滴度變化,可以進(jìn)行病情及治療效果的監(jiān)測(cè)以及復(fù)發(fā)及再感染的判斷,這是其他方法不可替代的【3J。2.2確認(rèn)試驗(yàn)的應(yīng)用TPPA、TPHA、ELISA、GICA等方法用于梅毒的確認(rèn)試驗(yàn),檢測(cè)的是抗梅毒螺旋體特異性抗體tgG或tsM。IgG抗體即使經(jīng)足夠的抗梅毒治療后,血清檢測(cè)仍可保持陽(yáng)性,因而這類試驗(yàn)不能作為判定是否需要治療和監(jiān)測(cè)療效的手段。2.2.1TPHA:用經(jīng)過(guò)醛化和鞣酸化的雞紅細(xì)胞做抗原載體,吸附從兔睪丸中提取的粗制梅毒螺旋體粉碎物抗原,檢測(cè)血清中特異性梅毒螺旋體抗體,該方法抗體滴度l:80陽(yáng)性才有診斷意義。試劑制備過(guò)程排除了各種非特異性反應(yīng)。因此,TPHA的敏感性和特異性較高。但檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng),不適于大批量的篩選實(shí)驗(yàn),價(jià)格昂貴,且判斷結(jié)果難以自動(dòng)化,試驗(yàn)結(jié)果判定常帶有主觀性。2.2.2TPPA:在TPHA的基礎(chǔ)上,以明膠顆粒作為抗原載體代替綿羊紅細(xì)胞,檢測(cè)血清中特異性梅毒螺旋體抗體,敏感性高于TPHA的1—3個(gè)稀釋度[4],是目前臨床上常用的梅毒血清試驗(yàn)。,IP隊(duì)操作較簡(jiǎn)便,結(jié)果清晰易判斷,但價(jià)格昂貴,且結(jié)果判斷難以自動(dòng)化。2.2.3TP—ELISA:采用基因工程體外表達(dá)得到的梅毒螺旋體特異抗原包被微孔滴定板,檢測(cè)血清中的抗TP—IgM和抗TP—IsG抗體,利用酶的放大效應(yīng),提高檢測(cè)的靈敏度,且采用純化的基因重組抗原,提高了其檢測(cè)的特異性。此方法操作簡(jiǎn)便,不受樣本纖維蛋白和溶血等影響,一次可完成多份標(biāo)本的檢測(cè),試驗(yàn)結(jié)果由儀器分析,客觀而準(zhǔn)確,被公認(rèn)為梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷的首選方法【5J。2.2.4GICA:采用純化的基因重組,IP抗原,以膠體金作為標(biāo)記物,于硝酸纖維素膜上進(jìn)行反應(yīng),以雙抗原夾心法原理快速定性檢測(cè)人血清中的TP特異性IgM和IgG抗體。GICA法的敏感性和特異性與ELISA法基本一致,差異無(wú)顯著性(P>0.05{6],但其影響因素小,操作簡(jiǎn)單,耗時(shí)較短,抗體滴度低時(shí)更易觀察結(jié)果【7],適用于性病門診的快速檢測(cè)、街頭無(wú)償血者的篩查以及緊急用血,特別是成分血(如血小板的篩檢。2.2.5唧:用聚丙烯凝膠電泳將梅毒螺旋體上的各種抗原分子分開(kāi),再轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上作為抗原檢測(cè)病人血清,如果出現(xiàn)梅毒螺旋體的特異性區(qū)帶,即可確診。免疫印跡技術(shù)用于血清中的抗體檢測(cè),特異性好,操作簡(jiǎn)便,判斷結(jié)果客觀準(zhǔn)確。利用此技術(shù)檢測(cè)抗梅毒螺旋體IgM抗體,有利于作出以下判斷:①早期梅毒;②先天梅毒;③梅毒螺旋體再感染。梅毒螺旋體進(jìn)入機(jī)體后,首先產(chǎn)生的是tgM抗體,然后是IgG、IgA抗體。因此,IgM抗體檢測(cè)可應(yīng)用于梅毒的早期診斷。在先天性梅毒的檢測(cè)方面,由于IgG抗體是持續(xù)存在的,而且梅毒孕婦的IsG抗體可以穿透胎盤滋養(yǎng)層,進(jìn)入胎兒的血液循環(huán)中,因此對(duì)胎兒做梅毒血清學(xué)檢測(cè)并不能確定血清反應(yīng)的抗體是否來(lái)自胎兒本身。而IsM分子量較大,一般不能夠通過(guò)胎盤,所以當(dāng)新生兒血清中檢測(cè)到特異性的IgM抗體時(shí),說(shuō)明胎兒在母體宮內(nèi)時(shí)已經(jīng)受到了梅毒的感染[8]。因此,IgM的檢測(cè)可以作為早期先天梅毒的確診試驗(yàn)。經(jīng)過(guò)抗梅毒治療后,人體內(nèi)的tsG仍然持續(xù)存在,而I洲抗體水平下降并消失,當(dāng)梅毒再次感染人體時(shí),人體內(nèi)的IgM會(huì)再次升高,所以IgM的檢測(cè)還可以用于梅毒復(fù)發(fā)再感染的確診指標(biāo)。參考文獻(xiàn):[1]邵勇.梅毒流行病學(xué)特點(diǎn)及防治研究[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,7(2:15—16.[2]孟冬婭,方秀菊.常用梅毒檢測(cè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