實驗五

酵母(jiàomǔ)的顯微鏡直接計數(shù)第一頁，共12頁。

目的(mùdì)要求1.了解血球計數(shù)板的結構及計數(shù)原理(yuánlǐ)。2.掌握使用血球計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。

第二頁，共12頁。實驗(shíyàn)原理

測定微生物數(shù)量方法很多，通常采用的有顯微鏡直接計數(shù)法、平板計數(shù)法和光電比濁計數(shù)法。

顯微鏡直接計數(shù)法將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積(miànjī)和容積的載玻片上，又稱血球計數(shù)板，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。第三頁，共12頁。血球(xuèqiú)計數(shù)板的構造第四頁，共12頁。血球(xuèqiú)計數(shù)板的計算方法血球計數(shù)板上刻有一長寬各為1毫米的方形大格，其體積為0.1mm3。計數(shù)板有兩種刻度，一種是每大格分為(fēnwéi)16個中格，而每中格又分25個小格，每大格為16×25小格=400小格，而另一種，則是每大格分為(fēnwéi)25個中格，而每中格又分為(fēnwéi)16個小格，則每大格為25×16=400小格（計數(shù)板上的標識為XB·K25）計數(shù)時，如果使用16格×25格規(guī)格的計數(shù)室，要按對角線位，取左上、右上、左下、右下4個中格（即100個小格）的酵母菌數(shù)。如果使用25格×16格規(guī)格的計數(shù)室除了取其4個對角方位外，還需再數(shù)中央的一個中格(即80個小方格)的酵母菌數(shù)。

(6)當遇到位于大格線上的酵母菌，一般只計數(shù)大方格的上方和左方線上的酵母細胞(或只計數(shù)下方和右方線上的酵母細胞)。第五頁，共12頁。計數(shù)(jìshù)公式(1)16×25的血球(xuèqiú)計數(shù)板計算公式：酵母細胞數(shù)／ml=（100小格內酵母細胞個數(shù)／100）×400×10000×稀釋倍數(shù)(2)25x16的血球(xuèqiú)計數(shù)板計算公式：酵母細胞數(shù)／ml=（80小格內酵母細胞個數(shù)／80）×400×10000×稀釋倍數(shù)第六頁，共12頁。實驗(shíyàn)器材

顯微鏡、血球(xuèqiú)計數(shù)板、酵母菌液、蓋玻片、吸管、吸水紙。第七頁，共12頁。操作步驟1.鏡檢計數(shù)室先檢查計數(shù)板是否有破損，然后對計數(shù)板進行鏡檢，若有污物，則用自來水沖洗，用電吹風吹干后才能進行計數(shù)，并在顯微鏡下看清計數(shù)板結構。2.加樣品在血球計數(shù)板上蓋上蓋玻片,用滴管將搖勻的酵母菌液由蓋玻片邊的小槽滴一小滴（不宜過多）,讓菌液自行進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。3.計數(shù)靜置幾分鐘后將血球計數(shù)板置于載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室的位置，再換高倍鏡計數(shù)。25個中格的取計數(shù)板四角(sìjiǎo)和中間位置的五個中方格計菌數(shù)。重復計2-3次，取其平均值，按公式計算每毫升酵母菌液中菌體的個數(shù)。4.清洗血球計數(shù)板計數(shù)后將血球計數(shù)板用自來水沖洗干凈，勿用硬物刷，吹干后鏡檢。若不干凈，則必須重復洗滌干凈為止。第八頁，共12頁。注意事項1、加樣時先搖勻菌液，計數(shù)室中不可有氣泡產(chǎn)生。2、菌液濃度以每小格有5-10個菌體為宜。3、計數(shù)時，格線上的菌體只計左上或右下。4、如遇酵母出芽(chūyá)，芽體大小達到母細胞一半及以上時作為2個菌體計算。5、清洗計數(shù)板時切勿用手或硬物刷洗，在水龍頭上用水注清洗，直到洗凈為止。第九頁，共12頁。結果(jiēguǒ)記錄

第一個中格第二個中格第三個中格第四個中格第五個中格第一次測定第二次測定第三次測定平均第十頁，共12頁。思考題1.直接計數(shù)法的原理與優(yōu)缺點?