亞鐵血紅素亞鐵血紅素

珠蛋白

亞鐵血紅素亞鐵血紅素血紅蛋白結(jié)構(gòu)示意圖（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（Hemoglobin，Hb或HGB）第1頁/共21頁第一頁，共22頁。

珠PrNNFeNN（O2）亞鐵血紅素結(jié)構(gòu)示意圖第2頁/共21頁第二頁，共22頁。HbA：α2β2

成人占90%以上正常血紅蛋白的種類(根據(jù)珠蛋白肽鏈的組成)HbA2：α2δ2

成人約占2～3%HbF(胎兒Hb)：α2γ2

成人2%以下第3頁/共21頁第三頁，共22頁。HbO2(氧合血紅蛋白)根據(jù)鐵原子第六配位鍵的結(jié)合情況，血紅蛋白可分為Hbred(還原血紅蛋白)HbCO(碳氧血紅蛋白)Hi(高鐵血紅蛋白)SHb(硫化血紅蛋白)主要成分少量與氧結(jié)合空著與CO結(jié)合Fe2＋→Fe3＋與S結(jié)合第4頁/共21頁第四頁，共22頁。氰化高鐵血紅蛋白測定法（HiCN法）堿羥高鐵血紅素法（AHD575法）十二烷基硫酸鈉血紅蛋白法(SDS-Hb法)比色法血紅蛋白測定方法沙利(Sahli)法(縣及縣以上醫(yī)院已淘汰)第5頁/共21頁第五頁，共22頁。一.原理Hb＋CN－氧化HiCN為棕紅色，最大吸收峰540nm。根據(jù)標(biāo)本的吸光度可知Hb濃度。HiCNHi氰化高鐵血紅蛋白測定法(HiCN法)注：硫化血紅蛋白(SHb)不能被轉(zhuǎn)化第6頁/共21頁第六頁，共22頁。氰化鉀0.05g高鐵氰化鉀0.2g磷酸二氫鉀0.14g非離子表面活性劑1.0ml蒸餾水加至1000ml二.試劑HiCN轉(zhuǎn)化液(文齊液)調(diào)pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。氧化調(diào)節(jié)pH促溶,防混濁氰化高鐵血紅蛋白測定法(HiCN法)提供CN-第7頁/共21頁第七頁，共22頁。三.方法氰化高鐵血紅蛋白測定法4.實(shí)際工作中，可用HiCN參考液，按生化方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，或求出K值后計(jì)算。

K＝∑Hb（g）/∑A

1.

5.0

ml

Hb轉(zhuǎn)化液＋血20ul,混勻,靜置5min。2.分光光度計(jì)比色，波長540nm，以空白轉(zhuǎn)化液調(diào)零，測定吸光度“A”。3.如用符合WHO標(biāo)準(zhǔn)的光度計(jì)，則可據(jù)“A”直接計(jì)算Hb濃度。Hb(g/L)＝A540

/44000×64458×251＝A×367.7第8頁/共21頁第八頁，共22頁。Hb(g/L)A500.1281000.2651500.3852000.523K=∑Hb/∑A=500/1.301=384.32Hb=KA氰化高鐵血紅蛋白測定法第9頁/共21頁第九頁，共22頁。1.KCN為劇毒藥品，防污染。2.Hb轉(zhuǎn)化液不能存于塑料瓶中。否則CN-下降，結(jié)果偏低。3.分光光度計(jì)應(yīng)校正后使用。4.標(biāo)準(zhǔn)曲線或K值應(yīng)定期校正。四.注意事項(xiàng)氰化高鐵血紅蛋白測定法第10頁/共21頁第十頁，共22頁。方法學(xué)評(píng)價(jià)HiCN法SDS-Hb法優(yōu)點(diǎn)：操作簡單；結(jié)果穩(wěn)定。缺點(diǎn)：氰化鉀有劇毒；高白細(xì)胞或高球蛋白血癥可致渾濁；

HbCO轉(zhuǎn)化較慢。推薦方法優(yōu)點(diǎn)：操作簡單；結(jié)果穩(wěn)定；無公害。缺點(diǎn)：摩爾消光系數(shù)未確定；SDS本身質(zhì)量差異較大；破壞白細(xì)胞。次選方法第11頁/共21頁第十一頁，共22頁。如何采用SDS-Hb法進(jìn)行血紅蛋白測定？1.HiCN法標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制2.SDS-Hb法標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制1)取4份不同濃度抗凝血或溶血液用HiCN法測定吸光度，并求出其Hb濃度。2)再用SDS-Hb法測定4份標(biāo)本的吸光度。3)以4份標(biāo)本Hb濃度為橫坐標(biāo)，SDS-Hb法測得的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。3.SDS-Hb法測定待測標(biāo)本第12頁/共21頁第十二頁，共22頁。成男：120～160g/L成女：110～150g/L新生兒：170～200g/L血紅蛋白參考值第13頁/共21頁第十三頁，共22頁。RBC和Hb生理性變化一.年齡與性別的差異二.精神因素激動(dòng)、恐懼、冷水浴使↑三.劇烈體力運(yùn)動(dòng)和勞動(dòng)缺氧，使↑四.氣壓降低缺氧，使↑五.妊娠中、后期血液稀釋，使↓6個(gè)月～2歲嬰幼兒造血原料不足，使↓某些老人造血功能減退，使↓新生兒母體內(nèi)相對(duì)缺氧，使↑第14頁/共21頁第十四頁，共22頁。第15頁/共21頁第十五頁，共22頁。一.相對(duì)性增多二.絕對(duì)性增多2.繼發(fā)性紅細(xì)胞增多1.原發(fā)性紅細(xì)胞增多RBC和Hb病理性增多血液濃縮常見于：心血管疾病、肺部疾病、異常血紅蛋白病等常見于真性紅細(xì)胞增多癥等第16頁/共21頁第十六頁，共22頁。見于各種貧血貧血的病因分類RBC和Hb病理性減少RBC、Hb和Hct低于參考值下限。

貧血：1.紅細(xì)胞生成障礙2.紅細(xì)胞破壞過多3.紅細(xì)胞丟失過多造血原料不足骨髓造血功能減退見于各種溶貧見于各種出血第17頁/共21頁第十七頁，共22頁。貧血時(shí)RBC和Hb減少程度可不一致正色素性貧血：二者成比例減少小細(xì)胞低色素性貧血：RBC↓，Hb↓↓大細(xì)胞性貧血：RBC↓↓，Hb↓第18頁/共21頁第十八頁，共22頁。1.說出氰化高鐵血紅蛋白測定法的原理。

2.紅細(xì)胞和血紅蛋白在何種情況下增多？

3.紅細(xì)胞和血紅蛋白濃度是否越高越健康？4.選擇題(1)HiCN法中哪種血紅蛋白不能被轉(zhuǎn)化為氰化高鐵血紅蛋白

A、HbO2B、HbredC、SHbD、HbCOE、HbS復(fù)習(xí)思考題第19頁/共21頁第十九頁，共22頁。(2)HiCN法中哪種血紅蛋白轉(zhuǎn)化較慢

A、HBAB、HBCOC、HBO2

D、HBSE、SHB(3)HiCN法的最大吸收峰是A、560nmB、540nmC、510nmD、450nmE、520nm

第20頁/共21頁第二十頁，共22頁。感謝您的觀看！第21頁/共21頁第二十一頁，共22頁。內(nèi)容總結(jié)亞鐵血紅素亞鐵血紅素。第2頁/共21頁。Fe2＋→Fe3＋。十二烷基硫酸鈉血紅蛋白法(SD