第十四章影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素1動(dòng)物是活的非常復(fù)雜的有機(jī)體，受環(huán)境因素的影響，個(gè)體間存在差異，不像物理、化學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚓?xì)定量。物理實(shí)驗(yàn)：化學(xué)實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：可獲得一組存在差異的、呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，組與組之間的比較需要用生物統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析。3影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的幾個(gè)主要因素實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果其它：供試品儀器設(shè)備5

影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的環(huán)境諸因素氣候因素化學(xué)因素生物因素

溫度飼料營(yíng)養(yǎng)病毒濕度飲水

細(xì)菌氣流臭氣

寄生蟲物理因素

殺蟲劑

光照

消毒劑

社會(huì)因素

噪聲

污染毒物

飼養(yǎng)密度

粉塵6一、氣候因素（一）溫度不同動(dòng)物適應(yīng)的環(huán)境溫度不同。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的最適環(huán)境溫度為18-29℃，大小鼠屏障系統(tǒng)控制溫度為20-25℃。

恒溫動(dòng)物在一定的外界溫度變化范圍內(nèi)能保持體溫相對(duì)穩(wěn)定。環(huán)境溫度偏離動(dòng)物最適溫度過大，或溫度的突然升高或降低對(duì)動(dòng)物的健康影響很大。①影響代謝②影響生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖③影響生理功能④影響健康和抗感染能力⑤影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果：臟器重量、血液生化指標(biāo)、藥物反應(yīng)7環(huán)境溫度(℃)給藥動(dòng)物數(shù)(只)死亡動(dòng)物數(shù)(只)死亡率(%)12202010014202010016202010018201050202010502220105024201050262073528206303020115532201680不同環(huán)境溫度時(shí)腹腔注射戊巴比妥鈉（95mg/kg）導(dǎo)致大鼠死亡率比較9（二）相對(duì)濕度

實(shí)際水蒸氣分壓力相對(duì)濕度（%）=------------------×100%

飽和水蒸氣分壓力濕度與環(huán)境溫度、氣流速度共同影響動(dòng)物體溫。高濕度：引起動(dòng)物代謝紊亂和抵抗力下降飼料、墊料易霉變低濕度：體表易失水，引起大鼠環(huán)尾病；母鼠拒哺乳，環(huán)境塵埃多10（三）氣流和風(fēng)速合理的氣流組織和風(fēng)速能調(diào)節(jié)溫度和濕度，降低室內(nèi)粉塵和有害氣體，控制傳染病的流行。換氣次數(shù)：?jiǎn)挝粫r(shí)間的風(fēng)量/室內(nèi)容積要求：屏障系統(tǒng)換氣次數(shù)：≥15次/小時(shí)風(fēng)速：≤0.2m/s

新風(fēng)量：不得少于50%換氣次數(shù)過少，飼養(yǎng)室內(nèi)空氣污濁；風(fēng)速過大，動(dòng)物易脫水。（四）季節(jié)和晝夜實(shí)驗(yàn)動(dòng)物源自于野生動(dòng)物，在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中適應(yīng)了自然氣候的變化，形成了獨(dú)特的生物學(xué)特性。這些生物學(xué)特性也保留在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上。動(dòng)物的許多功能隨著季節(jié)產(chǎn)生規(guī)律性的變動(dòng)。已有大量資料表明，動(dòng)物對(duì)化學(xué)物作用的反應(yīng)也受到季節(jié)的影響。例如在春、夏、秋、冬分別給10只大鼠注入一定量的巴比妥鈉，發(fā)現(xiàn)入睡時(shí)間以春季最短，秋季最長(zhǎng)，而睡眠時(shí)間則相反，春季最長(zhǎng)，秋季最短。不同季節(jié)，動(dòng)物的機(jī)體反應(yīng)性有一定改變，如不同季節(jié)對(duì)輻射效應(yīng)有影響。犬和兔在春夏季對(duì)輻射的反應(yīng)比在秋冬季敏感，所以在春夏季經(jīng)輻射照射后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡率高；小鼠的放射敏感性在冬季顯著升高，而夏季則降低；大鼠的放射敏感性則沒有明顯的季節(jié)性波動(dòng)。因此，這種季節(jié)的波動(dòng)在進(jìn)行跨季度的慢性實(shí)驗(yàn)時(shí)必須注意的。嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和兔是夜行性動(dòng)物，它們的體溫，血糖、基礎(chǔ)代謝率、各種內(nèi)分泌激素的晝夜性節(jié)律變化與人不同。注意到動(dòng)物的這些節(jié)律性變化，應(yīng)選擇在同樣季節(jié)，每日在同樣的時(shí)間進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)才能得到正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1113

要求12h:12h/10h:14h明暗交替人工光照周期，最好漸明漸暗。工作照度：150-300lx動(dòng)物照度：15-20lx

存在問題：自然光太陽光直射動(dòng)物不規(guī)則開關(guān)照明燈光照分布不均衡：定期更換籠盒的不同位置，避免光照對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響14（二）噪聲噪聲來源：空調(diào)、通風(fēng)設(shè)備，人員活動(dòng)噪聲對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響1）影響神經(jīng)及心血管系統(tǒng)功能：煩躁不安、緊張、呼吸心跳加快、血壓升高2）影響消化及內(nèi)分泌系統(tǒng)功能：消化系統(tǒng)功能紊亂，腎上腺素分泌增加。3）影響繁殖及幼小動(dòng)物生存：交配減少、妨礙受精卵著床、繁殖率降低；妊娠動(dòng)物流產(chǎn)、拒絕哺乳、吃仔等。要求：60分貝以下15（三）粉塵粉塵來源：空氣中塵埃、飼料屑、墊料塵埃、動(dòng)物脫毛、排泄物等粉塵對(duì)動(dòng)物的影響：1）引起呼吸系統(tǒng)疾病2）粉塵是病原微生物的載體，可促進(jìn)微生物的擴(kuò)散粉塵對(duì)人的影響：重要的過敏原（進(jìn)動(dòng)物飼養(yǎng)室要戴口罩）17三、生物因素（二）社會(huì)因素在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人工飼養(yǎng)環(huán)境下，動(dòng)物的社會(huì)性已被剝奪，可能會(huì)引起動(dòng)物的生理和精神行為的改變。建議大小鼠不單籠單養(yǎng)。不是同窩從小一起生長(zhǎng)的雄性動(dòng)物放在一起常會(huì)引起打架爭(zhēng)斗，甚至致死。18（三）飼養(yǎng)密度不同動(dòng)物個(gè)體所需最小占有面積國(guó)際上有標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)密度過高影響生長(zhǎng)繁殖飼養(yǎng)密度過高不符合動(dòng)物福利19指標(biāo)單位屏障環(huán)境普通環(huán)境溫度攝氏（℃）20-2518-29日溫差攝氏（℃）≤4≤4濕度相對(duì)濕度（%）40-7040-70換氣量次/小時(shí)≥15≥8氣流速度米/秒≤0.2≤0.2梯度壓差帕斯卡（Pa）≥10-空氣潔凈度級(jí)7-落下菌數(shù)個(gè)/平皿≤3≤3氨濃度毫克/立方米（mg/m3）≤14≤14噪聲分貝（dB）≤60≤60工作照度勒克斯（Lux）≥200≥200動(dòng)物照度勒克斯（Lux）15-2015-20晝夜明暗交替時(shí)間12/12或10/1412/12或10/14動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制指標(biāo)一、種屬因素不同種屬哺乳動(dòng)物的生命現(xiàn)象具有一定的共性，而且種屬越近，其生命現(xiàn)象也越接近。這正是在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中可以將動(dòng)物作為人的模型進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。不同種屬的動(dòng)物，在解剖、生理生化和代謝特征上，又各有個(gè)性，表現(xiàn)在不同種屬動(dòng)物對(duì)同一實(shí)驗(yàn)刺激的反應(yīng)性不同。嗎啡雌激素氯貝丁酯益母草浸膏為了避免動(dòng)物種屬因素對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的影響，在藥物藥效學(xué)和毒理學(xué)試驗(yàn)中規(guī)定至少需用兩種動(dòng)物，它們的種屬差異愈大愈好。21二、品種、品系因素封閉群動(dòng)物因保持群體的基因雜合狀態(tài)，即使是同一年齡、同一性別，動(dòng)物個(gè)體間對(duì)同一刺激反應(yīng)的差異相對(duì)較大，表現(xiàn)為數(shù)據(jù)的離散度較大，但它反映了種屬對(duì)實(shí)驗(yàn)刺激的反應(yīng)。

因封閉群的群體基因雜合狀態(tài)與人類比較接近，因而常用于藥理學(xué)、毒理學(xué)研究。近交系動(dòng)物因基因高度純合，動(dòng)物個(gè)體間對(duì)同一刺激反應(yīng)的差異相對(duì)較小，表現(xiàn)為數(shù)據(jù)的離散度較小，因而可以用較少的動(dòng)物得出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果來。因近交系獨(dú)特的基因型對(duì)實(shí)驗(yàn)刺激的反應(yīng)不能代表了種屬的“共性”，因而一般不用于藥理學(xué)、毒理學(xué)研究。不同近交品系動(dòng)物由于各自具有獨(dú)特的基因型，對(duì)同一刺激的反應(yīng)各不相同，甚至差異很大。如：內(nèi)源性激素：A系小鼠的促性腺激素含量比DBA小鼠低1.5倍；外源性激素：C57BL小鼠對(duì)腎上腺皮質(zhì)激素的敏感性比DBA及BALB/c小鼠高12倍；酶活性：A系小鼠肝臟的β葡萄糖酸活性只有C3H小鼠的十幾分之一；用激素超排卵：C57BL屬高排卵品系，而BALB/c屬低排卵品系；物理因素：DBA小鼠對(duì)聲音刺激非常敏感，35日齡DBA/2N小鼠聞電鈴聲后可出現(xiàn)特殊的發(fā)作性痙攣，甚至死亡，而C57BL小鼠則否；化學(xué)試劑：對(duì)相同濃度的氯仿，DBA/2雄性小鼠死亡率為75%，DBA為51%，C3H為32%，BALB/c為10%；病毒：DBA/2及C3H小鼠對(duì)雞新城疫病毒的反應(yīng)和DBA/1小鼠完全不同，前者引起肺炎而后者引起腦炎；自發(fā)性腫瘤：C3H、津白Ⅱ等品系小鼠易致癌，C57、C58、津白Ⅰ等品系不易致癌，AKR、DBA/2等品系易致白血病，C3H雌鼠乳腺癌自發(fā)率高達(dá)90%，AKR小鼠白血病自發(fā)率可達(dá)65%；23封閉群或近交系的選擇例：某中藥復(fù)方治療膽汁性肝硬化的藥效學(xué)研究，用膽管結(jié)扎制備肝硬化模型，用肝功能和病理學(xué)指標(biāo)觀察療效。此實(shí)驗(yàn)用封閉群？用近交系？例：進(jìn)一步觀察炎癥介質(zhì)

（IL-1，IL-2）

在肝硬化形成過程中和中藥治療過程中的消長(zhǎng)情況，此實(shí)驗(yàn)用封閉群？用近交系？253.性別因素性別亦影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,特別是對(duì)藥物的毒性作用表現(xiàn)得尤為明顯。造成性別差異的原因可能與性激素或肝臟微粒體藥物代謝酶的活性有關(guān)。一般而言，由性別引起毒性差異較動(dòng)物種系及個(gè)體差異要小。在實(shí)驗(yàn)研究中如無特殊要求，一般宜選用雌雄各半，以避免由性別差異造成的誤差。有的試驗(yàn)刺激并無明顯的性別差異，可用單性別動(dòng)物。26

第三節(jié)飼料營(yíng)養(yǎng)因素291.不同種屬動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬不同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求也不相同。嚙齒類動(dòng)物豚鼠和兔同屬草食類動(dòng)物，但豚鼠對(duì)粗蛋白的需求為18～20%，而兔對(duì)粗蛋白的需求為14～17%，兩者相差很大。豚鼠體內(nèi)因缺乏合成維生素C的酶，需要從飼料中補(bǔ)充足夠的維生素C,而兔體內(nèi)可合成維生素C,不需在飼料中添加維生素C。302.不同生長(zhǎng)發(fā)育階段動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求繁殖料供繁殖種群食用，育成料供成年動(dòng)物食用，前者的粗蛋白含量高于后者約10%。涉及動(dòng)物的交配、妊娠、哺乳階段的實(shí)驗(yàn)，如生殖毒性試驗(yàn)、遺傳工程小鼠制備時(shí)所需的種公鼠、供受精卵雌鼠、結(jié)扎公鼠和假孕雌鼠，要飼喂繁殖料。313.飼料營(yíng)養(yǎng)因素對(duì)動(dòng)物血液生化等檢測(cè)指標(biāo)的影響飼料中粗蛋白含量過低導(dǎo)致大鼠血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、血清總蛋白、血清白蛋白值均降低，同時(shí)，降低血清中促甲狀腺激素、胰島素和皮質(zhì)類固醇激素的水平。粗蛋白含量過高，引起肝中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)和山梨醇脫氫酶(SDH)的活性增高。324.與疾病動(dòng)物模型有關(guān)的營(yíng)養(yǎng)問題制作各種動(dòng)物模型時(shí)，常伴有因各種原因（如失血性貧血、肝腎功能不全等）引起的低蛋白血癥，進(jìn)而導(dǎo)致動(dòng)物的免疫功能低下。在觀察藥物治療這些疾病的同時(shí)，不要忽略營(yíng)養(yǎng)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，即應(yīng)同時(shí)給予高蛋白飼料，以補(bǔ)充機(jī)體組織修復(fù)對(duì)外源蛋白質(zhì)的需求。大動(dòng)物手術(shù)后要增添額外高蛋白飼料，以促進(jìn)傷口的愈合。335.自行設(shè)計(jì)飼料配方中的營(yíng)養(yǎng)問題在一些與攝入營(yíng)養(yǎng)有關(guān)的代謝性疾病和營(yíng)養(yǎng)缺陷動(dòng)物試驗(yàn)研究中，常常需要根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康淖孕信渲铺厥馀浞斤暳?，人為地增加或減少某些營(yíng)養(yǎng)素的比例，以制作代謝性疾病和某種營(yíng)養(yǎng)缺陷的動(dòng)物模型。誤區(qū)：忽略過量添加成分對(duì)總蛋白含量的稀釋忽略有的營(yíng)養(yǎng)成分的實(shí)際粗蛋白含量，例如奶粉實(shí)際蛋白含量為25%，蛋清蛋白實(shí)際蛋白含量為80-90%，玉米淀粉實(shí)際蛋白含量為0.5%。34為此，在配制特殊配方飼料時(shí)，應(yīng)從以下幾個(gè)方面進(jìn)行考慮：1.根據(jù)文獻(xiàn)資料、專業(yè)知識(shí)和試驗(yàn)?zāi)康模_定飼料配方中應(yīng)增加（或減少）哪個(gè)營(yíng)養(yǎng)成分及增加（或減少）的比例數(shù)。2.應(yīng)考慮增加的營(yíng)養(yǎng)成分是否稀釋了粗蛋白的含量。3.統(tǒng)籌平衡配方中各營(yíng)養(yǎng)成分的比例，特別是調(diào)整蛋白質(zhì)飼料原料的比例，用高蛋白飼料原料代替低蛋白飼料原料，以保證動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的蛋白攝入量。3536自行設(shè)計(jì)飼料配方中的營(yíng)養(yǎng)問題直接在基礎(chǔ)飼料中加入脂肪成分稀釋了飼料中蛋白質(zhì)含量

加入脂肪后，增加魚粉或豆粕，調(diào)整蛋白含量到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)37用不同配方高脂高糖飼料飼喂大鼠

制作糖尿病模型的體重增長(zhǎng)情況將配方1進(jìn)行了調(diào)整，增加了動(dòng)物蛋白質(zhì)的含量，減少了碳水化合物的含量，制成配方2高脂飼料。配方2高脂飼料營(yíng)養(yǎng)成分比為：碳水化合物37%，蛋白質(zhì)21.6%，脂肪20%及其他。高脂高糖飼料配方1：在基礎(chǔ)飼料配方中增加20%脂肪。這樣營(yíng)養(yǎng)成分的比例為碳水化合物56%，蛋白質(zhì)16%，脂肪20%及其它

第四節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作因素381.運(yùn)輸和適應(yīng)性飼養(yǎng)運(yùn)輸、飼養(yǎng)條件和飼料的改變等，均會(huì)引起動(dòng)物的恐懼和應(yīng)激，改變動(dòng)物的生理生化和免疫學(xué)數(shù)據(jù)。適應(yīng)性飼養(yǎng)的時(shí)間一般急性實(shí)驗(yàn)為2-3天，長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)為7天。對(duì)于如犬、猴等大動(dòng)物，需要時(shí)間更長(zhǎng)，犬為2周，猴為1-2個(gè)月，并在此期間進(jìn)行觀察記錄、微生物學(xué)檢查、驅(qū)腸蟲和接種疫苗等檢疫工作。392.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作當(dāng)動(dòng)物遭受到強(qiáng)行抓取、保定，施與手術(shù)等意外刺激，或突然改變?cè)雀鞣N穩(wěn)定的飼養(yǎng)條件等，其神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、以及機(jī)體代謝都會(huì)受到很大影響，甚至改變動(dòng)物的生理狀態(tài)，從而得到不正確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)盡可能采用溫柔的手法和正確的動(dòng)物抓取、固定方法，保持動(dòng)物的正常生理狀態(tài)。在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下，可采取麻醉方法，使動(dòng)物保持安靜。如果采取不正確的固定方法，實(shí)驗(yàn)處理施加的痛苦造成動(dòng)物的恐懼掙扎，在這種情況下做的實(shí)驗(yàn)，數(shù)據(jù)不可靠，其生理生化指標(biāo)均有改變。40應(yīng)養(yǎng)成日常善待動(dòng)物，并熟練掌握捉拿、固定、注射、給藥、手術(shù)等技能，盡量減少對(duì)動(dòng)物施加的不良刺激和痛苦。在犬、猴等大動(dòng)物整個(gè)飼養(yǎng)過程中，飼養(yǎng)人員和實(shí)驗(yàn)人員均應(yīng)經(jīng)常去親近它們、安撫它們，使它們?cè)黾訉?shí)驗(yàn)人員的信任感，提高對(duì)痛苦的忍耐度和對(duì)實(shí)驗(yàn)的配合，并能促進(jìn)外科創(chuàng)傷的愈合。413.麻醉麻醉的目的是消除手術(shù)過程中引起的痛苦和不適，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安全和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)過程中