氯霉素的藥物分析2023/8/23第1頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月一化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)二鑒別試驗(yàn)三檢查四含量測(cè)定主要內(nèi)容第2頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月一化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)氯霉素結(jié)構(gòu)中含有對(duì)硝基苯基、丙二醇與二氯二酰胺三個(gè)部分，抗菌活性主要與丙二醇有關(guān)。

本品為D-蘇式-（—）-N-[α-（羥基甲基）-β-羥基-對(duì)硝基苯乙基]-2,2-二氯乙酰胺。按干燥計(jì)算，含C11H12Cl2N2O5應(yīng)為98.0%?102.0%。第3頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）性質(zhì)1.穩(wěn)定性性質(zhì)穩(wěn)定，能耐熱，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、微溶于水等。干燥時(shí)穩(wěn)定，在中性、弱酸性（pH4.5—7.5）溶液中較穩(wěn)定，煮沸不分解。2.水解性●強(qiáng)堿性（pH>9）氯水解●強(qiáng)酸性（Ph<2）酰胺水解第4頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月3.旋光性

氯霉素結(jié)構(gòu)中具有兩個(gè)手性碳，有四個(gè)旋光異構(gòu)體。僅1R,2R（—）或者（—）蘇阿糖型（Threo）有抗菌活性，臨床使用。此藥物在無水乙醇中呈右旋性，在醋酸乙酯中呈左旋性。第5頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月4.紫外吸收本類抗生素分子內(nèi)具苯環(huán)含有共軛雙鍵系統(tǒng)，在紫外光區(qū)有吸收。在277nm波長處有最大吸收。5.氧化性氯霉素含有對(duì)硝基苯基，其中硝基具有氧化性，可以將其還原成胺基。第6頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月二鑒別試驗(yàn)1.色譜法

高效液相色譜法

ChP采用高效液相色譜法鑒別氯霉素，在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液的主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。2.光譜法

紫外吸收光譜利用最大吸收波長鑒定法來鑒別。將供試品配成適當(dāng)濃度的溶液，直接測(cè)定紫外吸收光譜，根據(jù)其最大吸收波長或最大吸收波長處的吸光度進(jìn)行鑒定。第7頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月3.鑒別反應(yīng)●

氯霉素中的丙二醇能發(fā)生醛酮縮合反應(yīng)，酸水解后產(chǎn)物與過碘酸作用，氧化生成對(duì)硝基苯甲醛；與2，4-硝基苯肼縮合，生成苯腙。第8頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月●

本品分子中的硝基經(jīng)鋅粉還原成羥胺衍生物，在乙酸鈉存在下與苯甲酰氯進(jìn)行苯甲?；?，再在弱酸性溶液中與高鐵離子生成紫紅色的絡(luò)合物。例：ChP(2010)取本品10mg,加稀乙醇1ml溶解后加1%氯化鈣溶液3ml與鋅粉50mg置水浴上加熱10分鐘，傾取上清液，加苯甲酰氯約0.1ml立即強(qiáng)力振搖1分鐘，加三氯化鐵試液0.5ml與三氯甲烷2ml，振搖，水層顯紫紅色。第9頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月●取氯霉素1ml，加氫氧化鈉的乙醇溶液2ml，再加硝酸2ml，加硝酸銀3滴，生成白色沉淀，沉淀加氨試液溶解，再加硝酸銀5滴，沉淀復(fù)生（氯離子的鑒別）。第10頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月三檢查結(jié)晶性

取本品少許，依法檢查（附錄IXD），應(yīng)符合規(guī)定。酸堿度

取本品，加水制成每1ml中含25mg的混懸液，依法測(cè)定（附錄VIH），pH值應(yīng)為4.5—7.5。比旋度

取本品精密稱定，加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含50mg的溶液，依法測(cè)定（附錄VIE），比旋度為+18.5?至+21.5?。干燥失重在105?C干燥至恒重，減失重量不得過0.5%（附錄VIIL）。熾灼殘?jiān)?/p>

不得過0.1%（附錄VIIIN）。第11頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月溶出度取本品，照溶出度測(cè)定法（附錄Ⅹ

C第一法），以鹽酸溶液（9→1000）900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，依法操作，30分鐘時(shí)，取溶液適量，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅤA），在278nm的波長處測(cè)定吸光度，按C13H12CI2N2O3的吸收系數(shù)（E1%1cm）為298，計(jì)算每片的溶出量，限度為標(biāo)示量的70%，應(yīng)符合規(guī)定。第12頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月有關(guān)物質(zhì)

目前各國藥典均采用HPLC法檢測(cè)

精密稱取本品適量，加甲醇適量（每10mg氯霉素加甲醇1ml）使溶解后，用流動(dòng)相定量稀釋制成每1ml中含0.5mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取氯霉素二醇對(duì)照品與對(duì)硝基苯甲醛對(duì)照品適量，加甲醇適量（每10mg氯霉素二醇物加甲醇1ml）使溶解，用流動(dòng)相定量稀釋制成每1ml中含氯霉素二醇物5μg與對(duì)硝基苯甲醛3μg的混合溶液，作為雜質(zhì)對(duì)照品溶液。第13頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取雜質(zhì)對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使氯霉素二醇物峰的峰高約為滿量程的25%；精密量取供試品溶液與雜質(zhì)對(duì)照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含氯霉素二醇物不得過1.0%，含對(duì)硝基苯甲醛不得過0.5%。第14頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月殘留溶劑

乙醇與氯苯取本品0.5g，精密稱定，置10ml量瓶中，加二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品貯備液，精密量取2ml置頂空瓶中，再精密加二甲基亞砜1ml，搖勻，作為供試品溶液；精密稱取氯苯約36mg、乙醇約500mg，置100ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液；精密量取對(duì)照品貯備液1ml置頂空瓶中，再精密加二甲基亞砜2ml，搖勻，密封，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液；精密量取對(duì)照品貯備液1ml置頂空瓶中，精密加供試品貯備液2ml，搖勻，密封，作為對(duì)照品溶液，第15頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月照殘留溶劑測(cè)定法（附錄ⅧP第二法）測(cè)定，以6%清丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或極性相近）為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱，起始溫度為40℃，維持10分鐘，再以每分鐘10℃的速率升至200℃，維持4分鐘；進(jìn)樣口溫度為250℃；檢測(cè)器溫度為300℃；頂空平衡溫度為85℃，平衡時(shí)間為45分鐘。取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液頂空進(jìn)樣，洗脫順序依次為：乙醇、氯苯，各色譜峰之間的分離度應(yīng)符合要求，取對(duì)照品溶液頂空進(jìn)樣，計(jì)算數(shù)次連續(xù)進(jìn)樣結(jié)果，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過5.0%。取供試品溶液與對(duì)照溶液分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，用標(biāo)準(zhǔn)加入法以峰面積計(jì)算，均應(yīng)符合規(guī)定。第16頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月四含量測(cè)定

氯霉素的含量測(cè)定主要用的是HPLC，除此之外還可以用UV、TLC、LC/MS等方法第17頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月高效液相色譜

色譜條件

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠

流動(dòng)相：0.01mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液（磷酸

二氫鉀6.8g0.01mol/L庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀

釋，加三乙胺5ml，磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5）

檢測(cè)波長：277nm

對(duì)照品：氯霉素第18頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月測(cè)定法

精密稱取本品適量，加甲醇適量（每10mg氯霉素加甲醇1ml）使溶解，用流動(dòng)相定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，搖勻，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另外再精密稱取氯霉素對(duì)照品適量，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。第19頁，課件共21頁，創(chuàng)作于2023年2月按下式計(jì)算含量(外標(biāo)法)含量（CX）=CR·(

AX?AR)標(biāo)示量%=CR·(AX/AR)·D·WW·