脂繩小窩蛋白與脂繩功能紊亂

自1972年nicle提出膜流結(jié)構(gòu)模型以來(lái)，已經(jīng)有幾篇關(guān)于膜結(jié)構(gòu)的報(bào)告，發(fā)現(xiàn)在膜中有一個(gè)充滿(mǎn)膽固醇和水分的小區(qū)域。這個(gè)區(qū)域有許多名字：糖脂豐富的區(qū)域（dif）；該區(qū)域被稱(chēng)為豐富的糖脂處理區(qū)域（iii，ldti）。2001年，歐洲研究研討會(huì)在西班牙舉行。會(huì)議討論了“微區(qū)域、脂肪車(chē)、小窩”的主題。次年，meer總結(jié)了這個(gè)主題，并介紹了小型巢穴和脂肪車(chē)的結(jié)構(gòu)和功能。1小窩的黨組織變化1953年P(guān)alade用非離子去污劑提取內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞膜時(shí),發(fā)現(xiàn)在低溫下用非離子去污劑提取不溶的部分,經(jīng)浮力密度分離,仍可再分成兩部分,較沉的是骨架蛋白,上浮的是膜的另一些組分,從形態(tài)觀察似在質(zhì)膜上的囊泡,他設(shè)想這種囊泡可游走穿梭在細(xì)胞之間,所以起名為質(zhì)膜囊泡(plasmalemmalvesicles).1955年Yamado報(bào)道了與Palade相似的結(jié)果,將這種囊泡稱(chēng)小窩(caveolae),是拉丁字小洞(cave)的意思.Yamado所稱(chēng)的小窩即是現(xiàn)在所說(shuō)的“脂筏”之一,而且是其中最主要的一種.小窩由膽固醇、鞘脂(糖化神經(jīng)鞘脂、神經(jīng)鞘磷脂)及蛋白質(zhì)組成.大約有50～100nm,形態(tài)有多種多樣,根據(jù)其功能不同有瓶型、囊泡型及管型,多數(shù)是瓶型.在細(xì)胞表面有開(kāi)放型,如形成胞吐囊泡;也有封閉型,如形成胞吞囊泡.從冷凍刻蝕圖觀察,可見(jiàn)小窩表面有曲紋覆蓋.經(jīng)分析,曲紋主要由小窩蛋白結(jié)合膽固醇而成.小窩的組裝分兩個(gè)步驟:首先在高爾基體由鞘脂及膽固醇形成去污劑不溶的脂質(zhì)核,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成的糖肌醇磷脂-錨固蛋白(glycosylphosphatidylinosital-anchoredprotein,GPI-anchoredprotein)和小窩蛋白嵌入脂核體,形成初步的組裝體,然后運(yùn)往細(xì)胞表面.在此過(guò)程中小窩蛋白及膽固醇起關(guān)鍵作用,如果敲除小窩蛋白的基因,即不能形成小窩.膽固醇是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成,如合成受抑制,也不能形成小窩,膽固醇與小窩蛋白的比例大約在4.5∶1.所以小窩蛋白可作為小窩的標(biāo)記蛋白.小窩蛋白大約至少有4種:小窩蛋白1α、1β、2、3.在膜內(nèi),小窩蛋白-1易形成同型二聚體;在脂肪細(xì)胞中,小窩蛋白-1、-2共表達(dá),形成異二聚體;小窩蛋白-3主要分布在肌肉,其他細(xì)胞較少.小窩蛋白的結(jié)構(gòu)中都含有3個(gè)半胱氨酸(位于134,144,157)并在此部位進(jìn)行?；?小窩蛋白是一種絞架蛋白(scaffoldingprotein),絞架區(qū)基本已清楚,它可直接與膽固醇及鞘脂結(jié)合,又可與信息分子(Src-kinase,H-ras,eNOS,G-protein等)結(jié)合.小窩能募集多種蛋白質(zhì)可能與此結(jié)構(gòu)有關(guān).2脂農(nóng)業(yè)技術(shù)及耐藥機(jī)制脂筏是指膜脂雙層內(nèi)含有特殊脂質(zhì)及蛋白質(zhì)的微區(qū),微區(qū)內(nèi)陷可形成囊泡,近年發(fā)現(xiàn)脂筏不僅存于質(zhì)膜,亦可在高爾基體膜上.脂筏的概念早在發(fā)現(xiàn)小窩時(shí)即有了,經(jīng)長(zhǎng)期的爭(zhēng)論,直至1988年Simon才正式提出“脂筏”之稱(chēng).脂質(zhì)的雙層有不同的脂筏:外層的微區(qū)主要含有鞘脂、膽固醇及GPI-錨固蛋白,因?yàn)榍手虚L(zhǎng)鏈飽和脂肪酸,Tm溫度較高,流動(dòng)性差,而且粘稠,鄰近的磷脂區(qū)其脂肪酸多不飽和,Tm溫度較低,所以出現(xiàn)分相;膜內(nèi)側(cè)也有相似的微區(qū),與外側(cè)的脂質(zhì)不完全相同,主要是在此區(qū)有許多酰化的蛋白質(zhì),特別是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白(圖1).雖然兩層分別有脂筏,但它們是偶聯(lián)的,因?yàn)橛梅请x子去污劑提取時(shí),不僅有外層的GPI-錨固蛋白,還有許多信息分子共同被提出.用一種GPI-錨固蛋白的抗體介導(dǎo)錨固蛋白聚集,與此同時(shí)Src家族的酪氨酸激酶也被激活.如換成糖鞘脂的抗體,也有同樣的現(xiàn)象.GPI蛋白及糖鞘脂都存于膜外側(cè),Src酪氨酸激酶在膜內(nèi)側(cè),這表明脂筏內(nèi)外層之間是有聯(lián)系的.用不同的去污劑或改變?nèi)芙鈺r(shí)的溫度,所得到的脂質(zhì)及蛋白質(zhì)都有差異,說(shuō)明細(xì)胞膜上的脂筏并不都等同.脂筏可能有三類(lèi):小窩、富含糖鞘脂膜區(qū)(glycosphingolipidenrichmembrane)、富含多磷酸肌醇(PIP2)膜區(qū).不同的脂筏有其各自的特異蛋白,并有不同的功能.脂筏的部分脂質(zhì)及蛋白質(zhì)的組分見(jiàn)表1.脂筏內(nèi)的蛋白質(zhì),有的是經(jīng)跨膜直接插入膜,但更多的蛋白質(zhì)需?；?由酰化后的脂肪酸插入膜.Zacharias的實(shí)驗(yàn)表明,用水母蛋白的兩個(gè)變異體,分別融合藍(lán)熒光蛋白(CFP)及綠熒光(YEP)蛋白,然后在多肽鏈上分別聯(lián)接脂化(棕櫚酸、豆蔻酸、異戊二烯)的特異共同序列,用熒光能量共振轉(zhuǎn)移(fluorescenceresonanceenergytransfer)測(cè)定鄰近效應(yīng),發(fā)現(xiàn)棕櫚?；岸罐Ⅴ；牡鞍踪|(zhì)在脂筏的小窩區(qū),而異戊二烯化的蛋白質(zhì)形成二聚體,不在小窩區(qū),對(duì)膽固醇不敏感,可能是另一類(lèi)的脂筏.說(shuō)明不同的?；鞍撞迦氩煌闹?Stuermer在神經(jīng)元細(xì)胞膜內(nèi),發(fā)現(xiàn)兩個(gè)新蛋白質(zhì)——flotillin-1及flotillin-2,其不溶于去污劑,與脂質(zhì)形成脂筏.用其抗體進(jìn)行免疫組化染色,在光鏡及電鏡下可見(jiàn),flotillin-1,2排列在細(xì)胞膜的胞漿面,在延伸的軸突及絲足上都存在.它不僅存于神經(jīng)細(xì)胞,而且在人JurkatT-淋巴細(xì)胞株的細(xì)胞上也可被發(fā)現(xiàn),并且與Thy-1,Fyn蛋白交聯(lián),參與淋巴細(xì)胞活化,如加入Thy-1抗體,可見(jiàn)與flotillin-1,2共聚,但在這個(gè)脂筏內(nèi)沒(méi)有小窩蛋白,這說(shuō)明,含有flotillin的結(jié)構(gòu)可組成另一類(lèi)的脂筏.Salzer用鈣誘導(dǎo)紅細(xì)胞時(shí),從形態(tài)及生化的分析發(fā)現(xiàn)有兩種囊泡:一種稱(chēng)微囊泡(microvesicle),直徑約150nm;另一種稱(chēng)納諾囊泡(nanovesicle),直徑約60nm.兩種囊泡除都共有GPI-錨固蛋白外,其他的組分不完全相同.微囊泡含有兩種蛋白質(zhì):stomatin及flotillin-1,2.Stomatin是棕櫚?；鞍踪|(zhì),以棕櫚酸插入脂筏區(qū),作用很像小窩蛋白.Flotillin-1,2也在脂筏區(qū),但它沒(méi)有被酰化,在囊泡及質(zhì)膜都存在.納諾囊泡還有另兩種蛋白質(zhì)——會(huì)聯(lián)蛋白(synexin)及抗藥蛋白(sorcin).會(huì)聯(lián)蛋白是膜聯(lián)蛋白(annexin)家族的成員annexinⅦ(可介導(dǎo)分泌小泡的聚集),負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)及膜的組裝.它與鈣結(jié)合后,轉(zhuǎn)到膜上形成膜融合蛋白.抗藥蛋白也可與鈣結(jié)合,結(jié)合后,暴露出疏水基團(tuán),直接插入膜,有觀點(diǎn)認(rèn)為抗藥蛋白與會(huì)聯(lián)蛋白都在脂筏上,但分別在不同的區(qū)域或兩者結(jié)合后進(jìn)入脂筏.這說(shuō)明在紅細(xì)胞的囊泡中也有脂筏.3脂棧革命:蛋白質(zhì)引導(dǎo)蛋白質(zhì)成長(zhǎng)從結(jié)構(gòu)及組分分析,脂筏有兩個(gè)特點(diǎn):a.許多蛋白質(zhì)聚集在脂筏內(nèi),便于相互作用.b.脂筏的環(huán)境有利于蛋白質(zhì)的變構(gòu),形成有效的構(gòu)象.所以它具有許多功能.3.1脂農(nóng)業(yè)和lps受體由于脂筏內(nèi)有多種信號(hào)分子,它可以參與許多的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路.以T細(xì)胞為例:T細(xì)胞膜上有T細(xì)胞抗原抗體(TCR),當(dāng)它活化后可引起許多信息分子聚集形成復(fù)合體.最近Zhang報(bào)道這種復(fù)合體形成的關(guān)鍵是脂筏提供了平臺(tái).在靜止的T細(xì)胞脂筏內(nèi)富含Src家族激酶Lck、Fyn及跨膜的銜接子(linkeractivatedTcell,LAT),還有少量的CD4和CD3,其中最重要的是LAT.它是一個(gè)跨膜蛋白,是伸向胞漿的一段肽鏈,富含酪氨酸,另外LAT的半胱氨酸還可?；貦八?以此插入脂筏.當(dāng)TCR被激活,Src酪氨酸激酶活化引起LAT的多個(gè)酪氨酸被磷酸化,然后,LAT募集多種底物進(jìn)行磷酸化,包括ZAP70、PLCγ1、PI3K、Vav,形成活化的大復(fù)合體.這些反應(yīng)都必須在脂筏內(nèi)完成,如果LAT不能進(jìn)入脂筏,T-細(xì)胞便不能執(zhí)行其重要的增殖及分化功能.其他免疫識(shí)別受體,如B細(xì)胞抗原受體(BCR)、肥大細(xì)胞高親和IgE受體(FcζRI)等也都以脂筏作為傳遞信息的場(chǎng)所.Roy報(bào)道調(diào)節(jié)小窩蛋白的表達(dá),可直接影響信息蛋白分子(包括癌基因).他發(fā)現(xiàn)小窩蛋白-1的啟動(dòng)子有膽固醇的調(diào)節(jié)位點(diǎn),小窩蛋白在小窩內(nèi)有運(yùn)轉(zhuǎn)及調(diào)節(jié)膽固醇水平的作用,所以調(diào)節(jié)小窩蛋白的表達(dá),可以間接影響信息的傳遞.Parton制備了一個(gè)小窩蛋白的變異體(gavDGV),可抑制H-Ras介導(dǎo)Raf的活化,如加入膽固醇可改善抑制作用.他設(shè)想H-Ras是Ras的異構(gòu)體,有棕櫚酸化,需要富有膽固醇的脂筏才能活化Raf,這個(gè)筏區(qū)被小窩蛋白變異體破壞.HIa發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)膜有溶血卵磷脂類(lèi)(LPs)的受體,這種受體是一個(gè)大家族,大約有12個(gè)左右,它與G蛋白偶聯(lián),稱(chēng)G蛋白偶聯(lián)受體(Gprotein-coupledreceptors,GPCRs).LPs受體位于膜富含鞘磷脂的小窩區(qū).LPs包括溶脂酸(LPA)、溶血卵磷脂(LPC)、鞘磷酸膽堿(SPC)及鞘磷脂-1-磷酸(S-I-P).LPs受體的作用包括:參與調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移、增殖及存活;調(diào)節(jié)血管系統(tǒng)的成熟;激活eNOS及活化磷脂酶C(PKC)等.Nanjundan從鼠肺細(xì)胞內(nèi)提取出一種脂質(zhì)磷酸水解酶(LLP),活化的LLP存于小窩內(nèi),它可水解LPA、PA和鞘氨醇-1-磷酸,水解后的產(chǎn)物皆為第二信使.3.2參與細(xì)胞蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移3.2.1小分子化合物運(yùn)轉(zhuǎn)通道文獻(xiàn)報(bào)道,分布在內(nèi)皮細(xì)胞的小窩囊泡,開(kāi)口于細(xì)胞的表面,細(xì)胞與細(xì)胞之間的囊泡可形成一個(gè)通道,小分子物質(zhì)可相互交換,小窩成為一些小分子化合物運(yùn)轉(zhuǎn)的通路.3.2.2胞漿和受體分離小窩內(nèi)包含許多受體蛋白,小窩將它們運(yùn)送到細(xì)胞內(nèi)可利用不同的途徑:a.受體與配基結(jié)合后,被小窩囊泡運(yùn)送到胞漿,配基與受體分離,受體隨囊泡回到質(zhì)膜;b.小窩囊泡載著受體與配基,通過(guò)胞漿,在細(xì)胞的反方向開(kāi)口將配基釋放到細(xì)胞外基質(zhì).有些毒素(如霍亂毒素)與細(xì)胞上的受體結(jié)合,也以這種方式進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi).3.2.3mdck細(xì)胞的t-blot檢測(cè)Martin介紹了一個(gè)膜內(nèi)在蛋白MAL.MAL屬?；鞍踪|(zhì)家族,存于Madin-Darby犬腎細(xì)胞(Madin-Darbycaninekidney,MDCK),有多個(gè)疏水基團(tuán)插入極化的上皮細(xì)胞(polarizedepithilia)的脂筏.MAL直接參與極化分選(apicalsorting).在MDCK細(xì)胞內(nèi)如加入MAL反義寡核苷酸,就無(wú)分選功能.MAL即像一個(gè)貨車(chē),可在質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體之間循環(huán),運(yùn)送蛋白.另外BENE蛋白,和MAL一樣,也屬?；鞍踪|(zhì)家族.它與小窩蛋白-1結(jié)合,位于小窩內(nèi),可能這兩個(gè)蛋白質(zhì)是脂筏的新成員.Millan報(bào)道當(dāng)T-淋巴細(xì)胞執(zhí)行其功能時(shí),發(fā)生極化形態(tài).細(xì)胞的一端延伸,形成特殊的突起——“尾足”(uropod),隨后選擇性地將一些粘附分子(ICAM-1,ICAM-2,ICAM-3,CD43,CD44)濃縮在尾足的脂筏區(qū).血粘素(hemaglutinine,HA)在T淋巴細(xì)胞的高爾基體合成后,進(jìn)入脂筏囊泡,隨囊泡也被送到尾足的表面,說(shuō)明尾足富含脂筏.細(xì)胞的另一端稱(chēng)前緣,對(duì)抗原及細(xì)胞因子很敏感,其復(fù)雜的免疫反應(yīng)都在前緣脂筏區(qū)進(jìn)行.4小窩蛋白基因的基因型檢測(cè),為動(dòng)力的應(yīng)用提供了依據(jù)脂筏的生理功能具有多向性,如果它的正常生理過(guò)程發(fā)生改變,則會(huì)引發(fā)多種疾病.近來(lái)由于一些小窩蛋白基因缺陷的動(dòng)物模型的建立,為人們理解和發(fā)現(xiàn)與脂筏相關(guān)的疾病創(chuàng)造了條件.4.1小鼠骨髓源性肥中小窩內(nèi)張量的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)吞作用可以發(fā)生在小窩結(jié)構(gòu)上.許多病原體如病毒、寄生蟲(chóng)、細(xì)菌及其毒素都能經(jīng)由小窩進(jìn)入宿主細(xì)胞.這些病原體或毒素通過(guò)小窩的內(nèi)化作用進(jìn)入宿主細(xì)胞后,并不與溶酶體融合(與溶酶體融合導(dǎo)致內(nèi)吞物的降解是經(jīng)典細(xì)胞內(nèi)吞作用的途徑),這樣,外源物質(zhì)就可以避開(kāi)機(jī)體的免疫反應(yīng)和一系列的清除行為,得以在體內(nèi)生存并發(fā)揮其致病作用.Abraham等向人們展示了細(xì)菌在小鼠骨髓源性肥大細(xì)胞(mousebonemarrow-derivedmastcells,BMMCs)上經(jīng)由小窩包裹形成囊后進(jìn)入噬菌細(xì)胞的機(jī)制.Oppenheim等的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了SV40經(jīng)由小窩內(nèi)吞后,未與溶酶體結(jié)合,而轉(zhuǎn)運(yùn)至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的特殊感染途徑.用藥物阻斷這一通路中某些蛋白質(zhì)的組裝,就可以抑制感染的發(fā)生.目前還有待在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和分子水平上闡述小窩在感染性疾病中發(fā)揮的作用,借此,人們將利用更為合理的傳送途徑來(lái)設(shè)計(jì)藥物以達(dá)到更為有效的阻斷病原體感染的治療目標(biāo).4.2小窩蛋白及相關(guān)蛋白基因內(nèi)皮來(lái)源的一氧化氮生物利用率低下,在動(dòng)脈粥樣硬化癥發(fā)生過(guò)程中起著關(guān)鍵作用.內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)直接受到小窩蛋白的調(diào)節(jié),與小窩關(guān)系密切.實(shí)驗(yàn)表明,利用氧化型的低密度脂蛋白作為膽固醇的接收體,可以導(dǎo)致小窩的耗竭,也可以抑制由乙酰膽堿誘導(dǎo)的eNOS的活性,但不影響eNOS的數(shù)量和環(huán)前列腺素的產(chǎn)量,也不影響eNOS的肉豆蔻?；?、棕櫚酰化和磷酸化.去除氧化型低密度脂蛋白,小窩的結(jié)構(gòu)可以得到恢復(fù),并且eNOS亦可再與小窩結(jié)合.Bucci等在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了小窩蛋白-1對(duì)eNOS信號(hào)通路起著首要的作用,一旦eNOS通路出現(xiàn)抑制,則會(huì)消除由NO介導(dǎo)的血管滲透和收縮反應(yīng).隨后,Razani和Drab兩個(gè)研究小組利用敲除小窩蛋白-1基因的小鼠,在離體大動(dòng)脈血管收縮緊張度測(cè)量的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),小窩蛋白-1的缺乏導(dǎo)致eNOS活性水平低并導(dǎo)致血管彈性降低,在動(dòng)脈血管中也發(fā)現(xiàn)了這一現(xiàn)象.另外,糖化終末產(chǎn)物(advancedglycationendproducts,AGEs)通過(guò)其受體介導(dǎo),在糖尿病并發(fā)癥中發(fā)揮著重要的作用.Stitt等發(fā)現(xiàn),在視網(wǎng)膜微循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞中,AGEs與其受體的相互作用是在小窩中進(jìn)行的.由此表明,小窩的內(nèi)化及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能或許可以調(diào)控AGE受體介導(dǎo)的血管功能障礙.4.3小窩蛋白-1的活性及其與肺癌相關(guān)的基因表達(dá)許多原癌基因和抑癌基因是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中處于不同階段的蛋白質(zhì),當(dāng)它們的生理功能發(fā)生改變或缺失時(shí)就會(huì)促進(jìn)腫瘤形成.脂筏可以參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo).由此自然讓人聯(lián)想到,脂筏結(jié)構(gòu)和功能的變化與腫瘤發(fā)生有密切的關(guān)系.小窩蛋白-1基因被作為一種候選的抑癌基因.小窩蛋白-1的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平在腫瘤轉(zhuǎn)化的NIH-3T3培養(yǎng)細(xì)胞中出現(xiàn)下調(diào),在乳腺癌轉(zhuǎn)基因小鼠中以及其他起源于人腫瘤的細(xì)胞系中這種基因的表達(dá)也出現(xiàn)下調(diào).一般來(lái)說(shuō),確定小鼠的一種原癌基因或抑癌基因需要分析原始鼠胚胎纖維原細(xì)胞的生長(zhǎng)特性,因此,在對(duì)小窩蛋白-1進(jìn)行了細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期評(píng)估后,發(fā)現(xiàn)小窩蛋白-1敲除的小鼠胚胎纖維原細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞周期整體活性增加,主要出現(xiàn)合成期的增加.Pramudji等利用腺病毒載體介導(dǎo)小窩蛋白-1啟動(dòng)子對(duì)原位前列腺癌動(dòng)物模型進(jìn)行基因治療,結(jié)果出現(xiàn)新生物的壞死.腫瘤抗藥性是導(dǎo)致對(duì)癌癥患者化療失敗的原因.研究發(fā)現(xiàn)多藥耐藥(multidrugresistant,MDR)的癌細(xì)胞可表達(dá)高水平和高密度的小窩.這給人們了解多藥效耐藥細(xì)胞的產(chǎn)生機(jī)制和設(shè)計(jì)有針對(duì)性的藥物起到了指導(dǎo)作用.4.4小窩蛋白-3是動(dòng)態(tài)平衡小窩蛋白-1和小窩蛋白-2廣泛分布在組織細(xì)胞上,而小窩蛋白-3僅僅局限地分布于肌肉組織,這一點(diǎn)顯現(xiàn)出小窩蛋白-3可能在肌肉組織功能障礙中起到某些作用.杜興肌營(yíng)養(yǎng)不良(Duchennemusculardystrophy,DMD)是一種嚴(yán)重的肌肉功能紊亂疾病,其特征是缺乏了肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白.肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白是一種細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì),是DMD基因的表達(dá)產(chǎn)物,可以聯(lián)系細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞骨架和細(xì)胞外基質(zhì),這一作用對(duì)于保持正常肌肉功能和肌肉纖維的完整性是極為必要的.免疫電鏡觀察到肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白局限在肌肉細(xì)胞的小窩上.還有一些形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的觀察發(fā)現(xiàn),在DMD病理過(guò)程中有小窩和小窩蛋白-3的參與.很早的時(shí)候,人們利用電鏡和冰凍蝕刻技術(shù)在DMD患者的骨骼肌中發(fā)現(xiàn)小窩數(shù)目的增多.與此結(jié)果相一致的是,最近,在mdx小鼠(一種肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白缺陷的DMD動(dòng)物模型)和患者的骨骼肌中發(fā)現(xiàn),小窩蛋白-3的表達(dá)增高了2～3倍.在超表達(dá)小窩蛋白-3的轉(zhuǎn)基因小鼠中,表現(xiàn)出杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良樣癥狀.這種轉(zhuǎn)基因模型的建立,有助于人們更好地研究和理解人類(lèi)DMD的病理發(fā)生機(jī)制.肌帶型肌營(yíng)養(yǎng)不良(limb-girdlemusculardystrophy,LGMD-1C)是另一種肌營(yíng)養(yǎng)不良癥,是由于小窩蛋白-3基因突變?cè)斐傻?這種突變基因編碼的蛋白質(zhì)很不穩(wěn)定,易被降解,所以存在甚少.Galbiati等模擬人的基因突變點(diǎn),構(gòu)建缺失小窩蛋白-3基因的小鼠,證實(shí)小窩蛋白-3是形成肌細(xì)胞內(nèi)小窩的主體.正常動(dòng)物肌細(xì)胞內(nèi)小窩蛋白-3與肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白及糖蛋白形成復(fù)合體,存于脂筏.基因突變的小鼠,無(wú)脂筏,所以不能形成復(fù)合體.說(shuō)明小窩蛋白-3的突變是產(chǎn)生LGMD-1C的分子基礎(chǔ).由此可見(jiàn),正常生理?xiàng)l件下,小窩蛋白的表達(dá)是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的過(guò)程.4.5prpsc基因型的構(gòu)建朊病毒病包括人克雅氏病(Creutzfeldt-Jako