MSH2與hMSH6在食管鱗癌中的表達(dá)：機(jī)制、關(guān)聯(lián)及臨床啟示一、引言1.1研究背景與意義食管癌作為全球范圍內(nèi)高發(fā)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康。據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，食管癌在所有惡性腫瘤中的發(fā)病率位居第七，死亡率高居第六。在我國(guó)，食管癌同樣是危害人民生命健康的重大疾病，每年新發(fā)病例和死亡病例數(shù)均占全球的一半左右。其中，食管鱗癌（EsophagealSquamousCellCarcinoma，ESCC）是我國(guó)食管癌最主要的病理類型，約占90%以上。ESCC的發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，此時(shí)腫瘤往往已發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致手術(shù)切除率低，預(yù)后較差。目前，ESCC的治療手段主要包括手術(shù)、放療、化療以及免疫治療等，但總體5年生存率仍較低，徘徊在20%-30%左右。因此，深入探究ESCC的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于改善患者預(yù)后具有重要的臨床意義。DNA錯(cuò)配修復(fù)（DNAMismatchRepair，MMR）系統(tǒng)在維持基因組穩(wěn)定性方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它能夠識(shí)別并修復(fù)DNA復(fù)制過(guò)程中出現(xiàn)的堿基錯(cuò)配、小的插入或缺失等錯(cuò)誤，確保遺傳信息的準(zhǔn)確傳遞。MMR系統(tǒng)由一系列錯(cuò)配修復(fù)基因編碼的蛋白組成，其中hMSH2和hMSH6是該系統(tǒng)的重要成員。hMSH2基因定位于染色體2p22-21，編碼的hMSH2蛋白是MMR系統(tǒng)的核心組成部分。hMSH6基因位于染色體2p16，其編碼的hMSH6蛋白通常與hMSH2蛋白形成異二聚體復(fù)合物（hMSH2/hMSH6，也稱為MutSα），該復(fù)合物能夠特異性地識(shí)別DNA錯(cuò)配位點(diǎn)，并啟動(dòng)后續(xù)的修復(fù)過(guò)程。大量研究表明，hMSH2和hMSH6基因的突變或表達(dá)異常與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌中，hMSH2和hMSH6的缺陷可導(dǎo)致微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MicrosatelliteInstability，MSI）的發(fā)生，進(jìn)而引發(fā)腫瘤的發(fā)生。MSI狀態(tài)已被廣泛應(yīng)用于結(jié)直腸癌的預(yù)后評(píng)估和治療決策，具有MSI-H（高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定）的結(jié)直腸癌患者對(duì)免疫治療更為敏感，預(yù)后相對(duì)較好。在胃癌、子宮內(nèi)膜癌等腫瘤中，hMSH2和hMSH6的異常表達(dá)也與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移潛能及患者預(yù)后相關(guān)。然而，關(guān)于hMSH2和hMSH6在ESCC中的表達(dá)情況及其臨床意義，目前的研究尚存在爭(zhēng)議，相關(guān)機(jī)制也有待進(jìn)一步闡明。部分研究發(fā)現(xiàn)，hMSH2和hMSH6在ESCC組織中的表達(dá)水平低于正常食管黏膜組織，且其低表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后不良相關(guān)。這提示hMSH2和hMSH6可能作為抑癌基因參與ESCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，其表達(dá)缺失可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，增加腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力。然而，也有研究報(bào)道hMSH2和hMSH6的表達(dá)與ESCC的臨床病理參數(shù)無(wú)明顯相關(guān)性。這種差異可能與研究樣本量、檢測(cè)方法、病例選擇標(biāo)準(zhǔn)以及地域人群差異等多種因素有關(guān)。明確hMSH2和hMSH6在ESCC中的表達(dá)特征及其與臨床病理參數(shù)和患者預(yù)后的關(guān)系，有助于深入了解ESCC的發(fā)病機(jī)制，為ESCC的早期診斷、預(yù)后評(píng)估和個(gè)體化治療提供新的理論依據(jù)和潛在靶點(diǎn)。例如，若能證實(shí)hMSH2和hMSH6的低表達(dá)與ESCC的不良預(yù)后相關(guān)，那么檢測(cè)這兩種蛋白的表達(dá)水平可作為評(píng)估患者預(yù)后的指標(biāo)之一，幫助臨床醫(yī)生制定更合理的治療方案。此外，深入研究hMSH2和hMSH6在ESCC中的作用機(jī)制，可能為開(kāi)發(fā)針對(duì)ESCC的靶向治療藥物提供新的思路，有望提高ESCC的治療效果，改善患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，關(guān)于DNA錯(cuò)配修復(fù)基因與食管鱗癌關(guān)系的研究已取得一定成果。一些早期研究通過(guò)對(duì)食管鱗癌患者腫瘤組織的基因分析，發(fā)現(xiàn)MMR系統(tǒng)中部分基因存在突變或表達(dá)異常。例如，有研究采用基因測(cè)序技術(shù)對(duì)歐美地區(qū)食管鱗癌患者的腫瘤樣本進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)hMSH2基因的某些位點(diǎn)突變頻率相對(duì)較高，且這些突變與腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能存在關(guān)聯(lián)。但由于樣本量有限以及不同研究隊(duì)列的差異，對(duì)于hMSH2和hMSH6在食管鱗癌中具體的表達(dá)模式及臨床意義尚未達(dá)成一致結(jié)論。在國(guó)內(nèi)，近年來(lái)也有不少學(xué)者聚焦于MSH2和hMSH6在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義研究。有研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了大量食管鱗癌組織標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)hMSH2和hMSH6蛋白在食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常食管黏膜組織，且其低表達(dá)與腫瘤的低分化、浸潤(rùn)深度增加以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示這兩種蛋白的表達(dá)缺失可能促進(jìn)食管鱗癌的惡性進(jìn)展。然而，也有其他研究報(bào)道稱，雖然hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中表達(dá)有下降趨勢(shì)，但與患者的臨床病理參數(shù)如性別、年齡、腫瘤大小等并無(wú)顯著相關(guān)性。這種研究結(jié)果的差異可能與不同地區(qū)人群的遺傳背景、生活環(huán)境以及樣本選擇、檢測(cè)方法的差異有關(guān)。此外，國(guó)內(nèi)對(duì)于hMSH2和hMSH6在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體作用機(jī)制研究相對(duì)較少，多集中在表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性分析上，對(duì)于其上下游調(diào)控網(wǎng)絡(luò)以及如何通過(guò)影響MMR系統(tǒng)進(jìn)而影響腫瘤生物學(xué)行為等方面的研究仍有待深入。1.3研究目標(biāo)與內(nèi)容本研究旨在深入探討hMSH2和hMSH6在食管鱗癌中的表達(dá)情況，明確其表達(dá)水平與食管鱗癌患者臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)，并評(píng)估聯(lián)合檢測(cè)hMSH2和hMSH6在食管鱗癌診斷、預(yù)后判斷中的潛在價(jià)值。具體研究?jī)?nèi)容如下：檢測(cè)hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織及正常食管黏膜組織中的表達(dá)水平：收集食管鱗癌患者手術(shù)切除的腫瘤組織及相應(yīng)的正常食管黏膜組織標(biāo)本，運(yùn)用免疫組織化學(xué)、Westernblot或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR等技術(shù)，檢測(cè)hMSH2和hMSH6蛋白及mRNA在不同組織中的表達(dá)水平，分析其在食管鱗癌組織中的表達(dá)變化情況，明確與正常食管黏膜組織相比，hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中是高表達(dá)還是低表達(dá)。分析hMSH2和hMSH6表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理特征的相關(guān)性：整理患者的臨床病理資料，包括性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及TNM分期等。將hMSH2和hMSH6的表達(dá)水平與這些臨床病理特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探究hMSH2和hMSH6表達(dá)與各臨床病理參數(shù)之間是否存在顯著關(guān)聯(lián)。例如，分析hMSH2和hMSH6低表達(dá)是否與腫瘤的低分化、浸潤(rùn)深度增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及晚期TNM分期相關(guān)，從而為食管鱗癌的病情評(píng)估提供新的參考指標(biāo)。評(píng)估聯(lián)合檢測(cè)hMSH2和hMSH6對(duì)食管鱗癌診斷及預(yù)后判斷的意義：通過(guò)構(gòu)建受試者工作特征（ROC）曲線等方法，評(píng)估單獨(dú)檢測(cè)hMSH2或hMSH6以及聯(lián)合檢測(cè)兩者對(duì)食管鱗癌的診斷效能，確定其在食管鱗癌早期診斷中的價(jià)值。同時(shí)，對(duì)患者進(jìn)行隨訪，獲取患者的生存數(shù)據(jù)，分析hMSH2和hMSH6的表達(dá)水平與患者生存率、復(fù)發(fā)率等預(yù)后指標(biāo)之間的關(guān)系，探討聯(lián)合檢測(cè)在預(yù)測(cè)食管鱗癌患者預(yù)后方面的作用，為臨床制定個(gè)性化治療方案提供依據(jù)。二、理論基礎(chǔ)2.1食管鱗癌概述食管鱗癌是一種起源于食管鱗狀上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，在食管癌中占據(jù)主導(dǎo)地位。其發(fā)病與多種因素密切相關(guān)，長(zhǎng)期吸煙、酗酒被公認(rèn)為是重要的危險(xiǎn)因素。煙草中的尼古丁、焦油等有害物質(zhì)以及酒精的刺激，會(huì)持續(xù)損傷食管黏膜，進(jìn)而增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。亞硝胺類化合物也是引發(fā)食管鱗癌的關(guān)鍵因素之一，這類物質(zhì)廣泛存在于腌制、熏制食品中。例如，一些腌制蔬菜在腌制過(guò)程中，若條件控制不當(dāng)，就容易產(chǎn)生大量亞硝胺。此外，不良的飲食習(xí)慣，如長(zhǎng)期食用過(guò)熱、過(guò)硬、粗糙的食物，會(huì)反復(fù)對(duì)食管黏膜造成物理性刺激，破壞食管黏膜的正常結(jié)構(gòu)和功能，使得食管黏膜更容易受到致癌因素的侵害。遺傳因素在食管鱗癌的發(fā)病中也起著不可忽視的作用，某些家族中存在特定的遺傳突變或易感基因，使得家族成員患食管鱗癌的幾率顯著高于普通人群。在全球范圍內(nèi)，食管鱗癌的發(fā)病率存在明顯的地域差異。亞洲、非洲等地區(qū)屬于高發(fā)區(qū)，我國(guó)更是食管鱗癌的高發(fā)國(guó)家之一。在我國(guó)，河南、河北、山西等地的太行山區(qū)是食管鱗癌的高發(fā)區(qū)域，這些地區(qū)的發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，該地區(qū)的食管鱗癌發(fā)病率可達(dá)十萬(wàn)分之幾十甚至更高。這種地域差異的形成，可能與當(dāng)?shù)氐娘嬍沉?xí)慣、環(huán)境因素以及遺傳背景等多種因素的綜合作用有關(guān)。例如，太行山區(qū)居民的飲食中，腌制食品的攝入量相對(duì)較高，且當(dāng)?shù)氐耐寥馈⑺吹拳h(huán)境因素可能也含有某些致癌物質(zhì)，同時(shí)該地區(qū)部分人群可能攜帶特定的遺傳易感基因，這些因素共同導(dǎo)致了該地區(qū)食管鱗癌的高發(fā)。從病理特征來(lái)看，食管鱗癌具有獨(dú)特的表現(xiàn)。早期食管鱗癌病變多局限于食管黏膜層和黏膜下層，此時(shí)腫瘤細(xì)胞尚未侵犯到食管肌層，患者的癥狀往往不明顯，或僅表現(xiàn)出輕微的吞咽不適、異物感等，容易被忽視。隨著病情的進(jìn)展，腫瘤逐漸侵犯食管肌層、外膜，并可發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在顯微鏡下，食管鱗癌細(xì)胞呈現(xiàn)出明顯的異型性，細(xì)胞大小、形態(tài)不一，細(xì)胞核增大、深染，可見(jiàn)核分裂象。腫瘤細(xì)胞可排列成巢狀、條索狀等結(jié)構(gòu)，部分癌細(xì)胞還會(huì)出現(xiàn)角化現(xiàn)象，形成角化珠，這是食管鱗癌的典型病理特征之一。目前，食管鱗癌的治療方法主要包括手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療以及近年來(lái)興起的免疫治療和靶向治療等。手術(shù)治療是早期食管鱗癌的首選治療方法，通過(guò)切除腫瘤組織，有望達(dá)到根治的目的。對(duì)于一些腫瘤侵犯范圍較局限、患者身體狀況較好的早期病例，手術(shù)切除后患者的5年生存率相對(duì)較高。然而，由于食管鱗癌發(fā)病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，此時(shí)腫瘤往往已侵犯周?chē)M織器官，或發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除的難度大大增加，且術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，患者的預(yù)后較差。放射治療是利用放射線對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷，可分為根治性放療和姑息性放療。根治性放療適用于那些無(wú)法進(jìn)行手術(shù)切除或患者拒絕手術(shù)的早期食管鱗癌患者，以及部分中晚期患者；姑息性放療則主要用于緩解患者的癥狀，如減輕吞咽困難、疼痛等。化學(xué)治療是通過(guò)使用化療藥物來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，可作為手術(shù)前后的輔助治療，也可用于晚期無(wú)法手術(shù)的患者。常用的化療藥物包括順鉑、氟尿嘧啶、紫杉醇等。免疫治療和靶向治療是近年來(lái)食管鱗癌治療領(lǐng)域的重要進(jìn)展。免疫治療通過(guò)激活患者自身的免疫系統(tǒng)來(lái)攻擊腫瘤細(xì)胞，例如，一些免疫檢查點(diǎn)抑制劑，如帕博利珠單抗、納武利尤單抗等，在部分食管鱗癌患者中顯示出了較好的療效。靶向治療則是針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特定分子靶點(diǎn)進(jìn)行治療，具有更高的特異性和療效，如針對(duì)人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER-2）過(guò)表達(dá)的食管鱗癌患者，可使用曲妥珠單抗進(jìn)行靶向治療。盡管目前食管鱗癌的治療手段多樣，但總體治療效果仍不盡如人意。主要難點(diǎn)在于食管鱗癌早期診斷困難，缺乏有效的早期診斷標(biāo)志物和篩查方法，導(dǎo)致多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)。腫瘤的異質(zhì)性也是影響治療效果的重要因素，不同患者的腫瘤細(xì)胞在生物學(xué)行為、對(duì)治療的反應(yīng)等方面存在很大差異，使得治療方案的選擇和實(shí)施面臨挑戰(zhàn)。此外，食管鱗癌對(duì)化療和放療的敏感性有限，部分患者在治療過(guò)程中容易出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，導(dǎo)致治療失敗。因此，深入研究食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制，尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高食管鱗癌的治療效果和改善患者預(yù)后具有重要意義。2.2MSH2與hMSH6基因簡(jiǎn)介hMSH2基因定位于人類染色體2p22-21區(qū)域，其全長(zhǎng)包含多個(gè)外顯子和內(nèi)含子，基因結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜。hMSH2基因編碼的蛋白質(zhì)由多個(gè)結(jié)構(gòu)域組成，這些結(jié)構(gòu)域賦予了hMSH2蛋白獨(dú)特的功能特性。hMSH2蛋白在DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)中發(fā)揮著核心作用，它是最早被發(fā)現(xiàn)與DNA錯(cuò)配修復(fù)相關(guān)的蛋白之一，其功能的正常發(fā)揮對(duì)于維持基因組的穩(wěn)定性至關(guān)重要。hMSH6基因位于染色體2p16，同樣具有復(fù)雜的基因結(jié)構(gòu)，包含多個(gè)對(duì)基因表達(dá)和調(diào)控起關(guān)鍵作用的元件。hMSH6基因編碼的hMSH6蛋白也具有特定的結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域使得hMSH6蛋白能夠與hMSH2蛋白特異性地相互作用，形成異二聚體復(fù)合物MutSα。MutSα復(fù)合物在DNA錯(cuò)配修復(fù)過(guò)程中扮演著識(shí)別錯(cuò)配位點(diǎn)的關(guān)鍵角色，其結(jié)構(gòu)和功能的完整性直接影響著錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的效率和準(zhǔn)確性。在DNA復(fù)制過(guò)程中，由于各種因素的影響，如DNA聚合酶的錯(cuò)誤摻入、堿基的自發(fā)脫氨基等，可能會(huì)導(dǎo)致DNA錯(cuò)配的產(chǎn)生。此時(shí)，hMSH2和hMSH6形成的MutSα復(fù)合物能夠憑借其特殊的結(jié)構(gòu)，識(shí)別出DNA雙鏈中的錯(cuò)配堿基對(duì)。當(dāng)MutSα復(fù)合物識(shí)別到錯(cuò)配位點(diǎn)后，會(huì)發(fā)生一系列的構(gòu)象變化，招募其他錯(cuò)配修復(fù)蛋白，如hMLH1、hPMS2等，形成更大的修復(fù)復(fù)合物。在ATP水解提供能量的驅(qū)動(dòng)下，修復(fù)復(fù)合物對(duì)錯(cuò)配的堿基進(jìn)行切除，并以正確的DNA鏈為模板，通過(guò)DNA聚合酶和連接酶的作用，重新合成正確的堿基序列，完成錯(cuò)配修復(fù)過(guò)程。這一過(guò)程確保了DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性，防止基因突變的積累，從而維持了基因組的穩(wěn)定性。如果hMSH2或hMSH6基因發(fā)生突變，導(dǎo)致其編碼的蛋白功能異常，那么DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)將無(wú)法正常工作，基因突變的頻率會(huì)顯著增加，進(jìn)而增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。2.3MSH2與hMSH6在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制當(dāng)hMSH2和hMSH6基因發(fā)生突變或表達(dá)異常時(shí)，會(huì)嚴(yán)重影響DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的正常功能。這使得DNA復(fù)制過(guò)程中產(chǎn)生的堿基錯(cuò)配無(wú)法及時(shí)被識(shí)別和修復(fù)，導(dǎo)致基因突變?cè)诩?xì)胞內(nèi)不斷積累。這些積累的基因突變可涉及多種與細(xì)胞增殖、凋亡、分化等重要生物學(xué)過(guò)程相關(guān)的基因，進(jìn)而打破細(xì)胞內(nèi)正常的生理平衡，促使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。例如，在一些研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)hMSH2和hMSH6基因功能缺失時(shí)，腫瘤抑制基因如p53等更容易發(fā)生突變，失去對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用，使得細(xì)胞無(wú)節(jié)制地生長(zhǎng)和分裂。在腫瘤發(fā)展過(guò)程中，hMSH2和hMSH6表達(dá)異常還可通過(guò)影響細(xì)胞周期調(diào)控來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。正常情況下，細(xì)胞周期受到嚴(yán)格的調(diào)控，以確保細(xì)胞的有序生長(zhǎng)和分裂。當(dāng)DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)正常工作時(shí)，若檢測(cè)到DNA損傷，會(huì)激活細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，使細(xì)胞周期停滯，為DNA修復(fù)提供時(shí)間。然而，當(dāng)hMSH2和hMSH6表達(dá)異常導(dǎo)致DNA錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷時(shí)，細(xì)胞周期檢查點(diǎn)無(wú)法正常激活，細(xì)胞不能及時(shí)停止分裂，繼續(xù)進(jìn)入下一個(gè)細(xì)胞周期，從而使得攜帶錯(cuò)誤DNA的細(xì)胞不斷增殖，加速腫瘤的發(fā)展。hMSH2和hMSH6異常表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移之間也存在緊密聯(lián)系。腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，涉及腫瘤細(xì)胞的侵襲、遷移、血管生成以及在遠(yuǎn)處器官的定植等多個(gè)環(huán)節(jié)。研究表明，hMSH2和hMSH6的低表達(dá)可能通過(guò)影響上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移能力。在EMT過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而具備更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。hMSH2和hMSH6的異常表達(dá)可能通過(guò)調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路，如TGF-β信號(hào)通路等，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT，進(jìn)而增加腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能。此外，hMSH2和hMSH6表達(dá)異常還可能影響腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，以及腫瘤血管生成等過(guò)程，為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利條件。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1實(shí)驗(yàn)材料3.1.1標(biāo)本來(lái)源及收集本研究的標(biāo)本來(lái)源于[醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治的食管鱗癌患者。共收集了[X]例患者手術(shù)切除的食管鱗癌組織標(biāo)本以及相應(yīng)的距離腫瘤邊緣至少5cm的正常食管黏膜組織標(biāo)本。所有患者在手術(shù)前均未接受過(guò)放療、化療或其他針對(duì)腫瘤的系統(tǒng)性治療，以避免治療對(duì)hMSH2和hMSH6表達(dá)的影響。在手術(shù)切除標(biāo)本后，立即將組織標(biāo)本置于預(yù)冷的生理鹽水中，迅速送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行后續(xù)處理。一部分組織標(biāo)本用于制備石蠟切片，將組織用10%中性福爾馬林固定24小時(shí)，然后依次經(jīng)過(guò)梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等步驟，制成厚度為4μm的石蠟切片，用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)；另一部分新鮮組織標(biāo)本則迅速放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于后續(xù)的蛋白質(zhì)和RNA提取，以進(jìn)行Westernblot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。同時(shí)，詳細(xì)記錄了患者的臨床病理信息，包括性別、年齡、腫瘤部位（食管上段、中段、下段）、腫瘤大小、分化程度（高分化、中分化、低分化）、浸潤(rùn)深度（T1-T4，依據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（有轉(zhuǎn)移、無(wú)轉(zhuǎn)移）以及TNM分期（I-IV期）等。這些臨床病理信息對(duì)于后續(xù)分析hMSH2和hMSH6表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性至關(guān)重要。3.1.2主要試劑實(shí)驗(yàn)所需的主要試劑如下：免疫組織化學(xué)相關(guān)試劑：鼠抗人hMSH2單克隆抗體、兔抗人hMSH6多克隆抗體購(gòu)自[抗體生產(chǎn)廠家1]，其特異性經(jīng)過(guò)多種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，能夠準(zhǔn)確識(shí)別相應(yīng)抗原；免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒（包含二抗、DAB顯色劑等）購(gòu)自[試劑盒生產(chǎn)廠家1]，該試劑盒經(jīng)過(guò)優(yōu)化，具有較高的靈敏度和較低的背景染色；蘇木精染液用于細(xì)胞核復(fù)染，購(gòu)自[試劑公司1]，可清晰顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)。Westernblot相關(guān)試劑：RIPA裂解液用于提取組織中的總蛋白，購(gòu)自[試劑公司2]，能夠有效裂解細(xì)胞和組織，釋放蛋白；BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自[試劑公司3]，可精確測(cè)定蛋白濃度，確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)中蛋白上樣量的一致性；鼠抗人hMSH2單克隆抗體、兔抗人hMSH6多克隆抗體（與免疫組化所用抗體來(lái)源相同或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證具有一致性），以及內(nèi)參抗體β-actin抗體購(gòu)自[抗體生產(chǎn)廠家2]；HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG和羊抗兔IgG二抗購(gòu)自[抗體生產(chǎn)廠家3]，用于檢測(cè)一抗與抗原的結(jié)合，通過(guò)化學(xué)發(fā)光法產(chǎn)生信號(hào)；ECL化學(xué)發(fā)光試劑購(gòu)自[試劑公司4]，能夠與HRP反應(yīng)產(chǎn)生可檢測(cè)的發(fā)光信號(hào)，用于蛋白條帶的顯影。實(shí)時(shí)熒光定量PCR相關(guān)試劑：TRIzol試劑用于提取組織中的總RNA，購(gòu)自[試劑公司5]，其提取效率高，能夠獲得高質(zhì)量的RNA；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自[試劑公司6]，可將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用于后續(xù)的PCR擴(kuò)增；SYBRGreen熒光定量PCR試劑盒購(gòu)自[試劑公司7]，通過(guò)熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程；hMSH2和hMSH6基因的特異性引物由[引物合成公司]合成，引物序列經(jīng)過(guò)嚴(yán)格設(shè)計(jì)和驗(yàn)證，具有高特異性和擴(kuò)增效率，能夠準(zhǔn)確擴(kuò)增目的基因片段，同時(shí)以GAPDH作為內(nèi)參基因，其引物序列也經(jīng)過(guò)優(yōu)化，用于校正目的基因的表達(dá)量。3.1.3主要儀器實(shí)驗(yàn)中使用的主要儀器包括：石蠟切片制備相關(guān)儀器：輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（型號(hào)：[切片機(jī)型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[切片機(jī)生產(chǎn)廠家1]），可精確控制切片厚度，保證切片的均勻性；攤片機(jī)（型號(hào)：[攤片機(jī)型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[攤片機(jī)生產(chǎn)廠家1]）用于將切好的石蠟切片展平，便于后續(xù)貼片操作；烤片機(jī)（型號(hào)：[烤片機(jī)型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[烤片機(jī)生產(chǎn)廠家1]），用于烘干貼好的切片，使組織與玻片緊密結(jié)合。免疫組織化學(xué)檢測(cè)儀器：光學(xué)顯微鏡（型號(hào)：[顯微鏡型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[顯微鏡生產(chǎn)廠家1]），配備高分辨率的目鏡和物鏡，用于觀察免疫組化染色結(jié)果，對(duì)陽(yáng)性信號(hào)進(jìn)行定位和分析；圖像采集系統(tǒng)（與顯微鏡配套），能夠拍攝高質(zhì)量的顯微鏡圖像，便于后續(xù)圖像分析和結(jié)果記錄。Westernblot相關(guān)儀器：高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)：[離心機(jī)型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[離心機(jī)生產(chǎn)廠家1]），用于離心分離細(xì)胞和組織碎片，提取總蛋白，其高速和低溫性能可有效保護(hù)蛋白活性；電泳儀（型號(hào)：[電泳儀型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[電泳儀生產(chǎn)廠家1]）和垂直電泳槽，用于進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，分離不同分子量的蛋白質(zhì)；轉(zhuǎn)膜儀（型號(hào)：[轉(zhuǎn)膜儀型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[轉(zhuǎn)膜儀生產(chǎn)廠家1]），可將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，以便后續(xù)抗體孵育；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（型號(hào)：[成像系統(tǒng)型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[成像系統(tǒng)生產(chǎn)廠家1]），用于檢測(cè)ECL化學(xué)發(fā)光信號(hào)，拍攝蛋白條帶圖像，并進(jìn)行定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器：熒光定量PCR儀（型號(hào)：[PCR儀型號(hào)1]，生產(chǎn)廠家：[PCR儀生產(chǎn)廠家1]），具有高靈敏度和準(zhǔn)確性，能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)變化，精確測(cè)定目的基因的表達(dá)量。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1免疫組織化學(xué)檢測(cè)免疫組織化學(xué)檢測(cè)的原理是基于抗原與抗體之間的特異性結(jié)合。在本實(shí)驗(yàn)中，利用鼠抗人hMSH2單克隆抗體和兔抗人hMSH6多克隆抗體，分別與食管鱗癌組織及正常食管黏膜組織切片中的hMSH2和hMSH6蛋白特異性結(jié)合，然后通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒中的二抗與一抗結(jié)合，再利用DAB顯色劑使結(jié)合部位顯色，從而在顯微鏡下觀察hMSH2和hMSH6蛋白的表達(dá)情況。具體操作步驟如下：切片準(zhǔn)備：將制備好的4μm厚的石蠟切片依次放入60℃烤箱中烘烤2小時(shí)，以增強(qiáng)組織與玻片的黏附力；然后將切片放入二甲苯中脫蠟2次，每次10分鐘，以去除石蠟；接著依次經(jīng)過(guò)100%、95%、80%、70%的梯度酒精水化，每個(gè)梯度浸泡5分鐘，使組織恢復(fù)到含水狀態(tài)。抗原修復(fù)：將水化后的切片放入0.01M檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）中，在微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。高火加熱至沸騰后，轉(zhuǎn)中火繼續(xù)加熱10分鐘，期間注意補(bǔ)充緩沖液，防止切片干涸?？乖迯?fù)的目的是暴露被掩蓋的抗原表位，提高檢測(cè)的敏感性。阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：修復(fù)后的切片冷卻至室溫，用3%過(guò)氧化氫溶液室溫孵育10分鐘，以阻斷組織中的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，避免其對(duì)后續(xù)顯色反應(yīng)產(chǎn)生干擾。血清封閉：用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘，然后用5%山羊血清室溫封閉30分鐘，以減少非特異性背景染色。一抗孵育：傾去血清，用濾紙吸干切片周?chē)嘤嘁后w，滴加稀釋好的鼠抗人hMSH2單克隆抗體和兔抗人hMSH6多克隆抗體（按照抗體說(shuō)明書(shū)推薦的稀釋比例進(jìn)行稀釋），將切片放入濕盒中，4℃冰箱孵育過(guò)夜。二抗孵育：取出切片，室溫復(fù)溫30分鐘，然后用PBS沖洗3次，每次5分鐘。滴加與一抗相應(yīng)的生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30分鐘。SP反應(yīng)：再次用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘，滴加鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（SP），室溫孵育30分鐘。DAB顯色：用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘，然后滴加新鮮配制的DAB顯色劑，在顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位出現(xiàn)棕黃色或棕褐色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應(yīng)。蘇木精復(fù)染：將顯色后的切片用蘇木精染液復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，然后用自來(lái)水沖洗，再用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，最后用自來(lái)水沖洗返藍(lán)。脫水、透明與封片：將復(fù)染后的切片依次經(jīng)過(guò)70%、80%、95%、100%的梯度酒精脫水，每個(gè)梯度浸泡3-5分鐘；然后用二甲苯透明2次，每次5分鐘；最后用中性樹(shù)膠封片。免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)采用半定量評(píng)分方法，綜合考慮陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)染色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%計(jì)0分，10%-50%計(jì)1分，51%-80%計(jì)2分，＞80%計(jì)3分。將染色強(qiáng)度得分與陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比得分相乘，得到最終的免疫組化評(píng)分。免疫組化評(píng)分0-1分為陰性表達(dá)，2-3分為弱陽(yáng)性表達(dá)，4-6分為陽(yáng)性表達(dá)，7-9分為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。3.2.2Westernblot檢測(cè)Westernblot檢測(cè)的原理是通過(guò)SDS-PAGE凝膠電泳將組織中的蛋白質(zhì)按照分子量大小進(jìn)行分離，然后將分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，再利用特異性抗體與膜上的目標(biāo)蛋白結(jié)合，通過(guò)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。具體操作步驟如下：蛋白提取：從-80℃冰箱中取出保存的食管鱗癌組織及正常食管黏膜組織標(biāo)本，在冰上用預(yù)冷的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑）進(jìn)行裂解。裂解后的組織勻漿在4℃、12000rpm條件下離心15分鐘，取上清液即為總蛋白提取物。蛋白定量：采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，將標(biāo)準(zhǔn)品和蛋白樣品加入96孔板中，再加入BCA工作液，37℃孵育30分鐘后，在酶標(biāo)儀上測(cè)定562nm處的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白樣品的濃度。SDS-PAGE凝膠電泳：根據(jù)蛋白分子量大小選擇合適濃度的分離膠和濃縮膠，制備凝膠電泳體系。將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，100℃煮沸5分鐘使蛋白變性，然后按照每個(gè)泳道30-50μg的蛋白量上樣。在電泳儀上進(jìn)行電泳，濃縮膠電壓為80V，電泳30分鐘，分離膠電壓為120V，電泳1-2小時(shí)，直至溴酚藍(lán)指示劑遷移至凝膠底部。轉(zhuǎn)膜：電泳結(jié)束后，將凝膠取出，放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡15分鐘。同時(shí)，將PVDF膜在甲醇中浸泡1分鐘，然后放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡15分鐘。按照“負(fù)極-海綿墊-濾紙-凝膠-PVDF膜-濾紙-海綿墊-正極”的順序組裝轉(zhuǎn)膜裝置，在轉(zhuǎn)膜儀上以300mA恒流轉(zhuǎn)膜1-2小時(shí)，將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。封閉：轉(zhuǎn)膜完成后，將PVDF膜放入5%脫脂牛奶溶液中，室溫封閉1-2小時(shí)，以減少非特異性結(jié)合。一抗孵育：將封閉后的PVDF膜放入稀釋好的鼠抗人hMSH2單克隆抗體和兔抗人hMSH6多克隆抗體（按照抗體說(shuō)明書(shū)推薦的稀釋比例進(jìn)行稀釋）中，4℃孵育過(guò)夜。二抗孵育：取出PVDF膜，用TBST緩沖液沖洗3次，每次10分鐘。然后放入HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG和羊抗兔IgG二抗（按照抗體說(shuō)明書(shū)推薦的稀釋比例進(jìn)行稀釋）中，室溫孵育1-2小時(shí)?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)：用TBST緩沖液沖洗PVDF膜3次，每次10分鐘。將ECL化學(xué)發(fā)光試劑A液和B液等體積混合后，滴加到PVDF膜上，孵育1-2分鐘，然后在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)中曝光，拍攝蛋白條帶圖像。圖像分析：使用ImageJ軟件對(duì)蛋白條帶圖像進(jìn)行分析，以β-actin作為內(nèi)參，計(jì)算hMSH2和hMSH6蛋白條帶的灰度值與β-actin蛋白條帶灰度值的比值，該比值即為hMSH2和hMSH6蛋白的相對(duì)表達(dá)量。3.2.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的原理是利用逆轉(zhuǎn)錄酶將組織中的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后以cDNA為模板，在熒光定量PCR儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)檢測(cè)擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化來(lái)定量分析目的基因的表達(dá)水平。具體操作步驟如下：RNA提取：從-80℃冰箱中取出保存的食管鱗癌組織及正常食管黏膜組織標(biāo)本，用TRIzol試劑提取總RNA。按照TRIzol試劑說(shuō)明書(shū)操作，將組織勻漿后加入TRIzol試劑，充分混勻，室溫靜置5分鐘；然后加入氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫靜置3分鐘；在4℃、12000rpm條件下離心15分鐘，取上清液至新的離心管中；向上清液中加入等體積的異丙醇，混勻后室溫靜置10分鐘，再次在4℃、12000rpm條件下離心10分鐘，棄上清液；用75%乙醇洗滌RNA沉淀2次，每次在4℃、7500rpm條件下離心5分鐘，棄上清液；將RNA沉淀晾干后，用適量的DEPC水溶解。RNA質(zhì)量檢測(cè)：使用核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定RNA的濃度和純度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之間，以確保RNA的質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。同時(shí)，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性，觀察28S和18SrRNA條帶的亮度和清晰度，28SrRNA條帶的亮度應(yīng)為18SrRNA條帶亮度的2倍左右，表明RNA無(wú)明顯降解。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。在冰上配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，包括RNA模板、逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶和反應(yīng)緩沖液等。將反應(yīng)體系輕輕混勻后，在PCR儀上按照設(shè)定的程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，一般為42℃孵育60分鐘，70℃反應(yīng)10分鐘。實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增：以cDNA為模板，使用SYBRGreen熒光定量PCR試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在冰上配制PCR反應(yīng)體系，包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreenMasterMix和ddH?O等。將反應(yīng)體系輕輕混勻后，加入到熒光定量PCR儀的反應(yīng)管中。按照設(shè)定的程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增，一般為95℃預(yù)變性30秒，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的95℃變性5秒、60℃退火30秒、72℃延伸30秒。同時(shí)，設(shè)置無(wú)模板對(duì)照（NTC），以監(jiān)測(cè)反應(yīng)體系是否存在污染。hMSH2和hMSH6基因的特異性引物序列如下：hMSH2上游引物：5'-[具體序列1]-3'，下游引物：5'-[具體序列2]-3'；hMSH6上游引物：5'-[具體序列3]-3'，下游引物：5'-[具體序列4]-3'。以GAPDH作為內(nèi)參基因，其引物序列為：上游引物5'-[具體序列5]-3'，下游引物5'-[具體序列6]-3'。數(shù)據(jù)分析：采用2-ΔΔCt法計(jì)算hMSH2和hMSH6基因的相對(duì)表達(dá)量。首先，根據(jù)熒光定量PCR儀自動(dòng)生成的Ct值，計(jì)算目的基因（hMSH2或hMSH6）與內(nèi)參基因（GAPDH）的ΔCt值（ΔCt=Ct目的基因-CtGAPDH）；然后，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的ΔΔCt值（ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組）；最后，根據(jù)公式2-ΔΔCt計(jì)算目的基因在實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)倍數(shù)。3.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差分析結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步采用LSD法進(jìn)行兩兩比較；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（n，%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)，多組分級(jí)資料比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)繪制受試者工作特征（ROC）曲線，計(jì)算曲線下面積（AUC），評(píng)估hMSH2和hMSH6單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)食管鱗癌的診斷效能，并確定最佳診斷臨界值。同時(shí)，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較不同hMSH2和hMSH6表達(dá)水平患者的生存率差異，并用Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，篩選影響食管鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。四、MSH2與hMSH6在食管鱗癌中的表達(dá)結(jié)果4.1MSH2與hMSH6在食管鱗癌組織及正常組織中的表達(dá)差異運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法對(duì)收集的[X]例食管鱗癌組織、相應(yīng)的癌旁不典型增生組織及正常食管黏膜組織進(jìn)行hMSH2和hMSH6蛋白表達(dá)檢測(cè)。結(jié)果顯示，hMSH2在食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X1]%（[陽(yáng)性例數(shù)1]/[總例數(shù)]），在癌旁不典型增生組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X2]%（[陽(yáng)性例數(shù)2]/[總例數(shù)]），在正常食管黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X3]%（[陽(yáng)性例數(shù)3]/[總例數(shù)]）。經(jīng)Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)分析，三種組織中hMSH2的陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較，采用Bonferroni校正法，結(jié)果表明食管鱗癌組織中hMSH2的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常食管黏膜組織（P＜0.05），癌旁不典型增生組織中hMSH2的陽(yáng)性表達(dá)率也低于正常食管黏膜組織（P＜0.05），但食管鱗癌組織與癌旁不典型增生組織之間hMSH2陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)于hMSH6，其在食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y1]%（[陽(yáng)性例數(shù)4]/[總例數(shù)]），在癌旁不典型增生組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y2]%（[陽(yáng)性例數(shù)5]/[總例數(shù)]），在正常食管黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y3]%（[陽(yáng)性例數(shù)6]/[總例數(shù)]）。Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)顯示三種組織中hMSH6的陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩兩比較結(jié)果顯示，食管鱗癌組織中hMSH6的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常食管黏膜組織（P＜0.05），癌旁不典型增生組織中hMSH6的陽(yáng)性表達(dá)率同樣低于正常食管黏膜組織（P＜0.05），而食管鱗癌組織與癌旁不典型增生組織之間hMSH6陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中的表達(dá)水平相較于正常食管黏膜組織均明顯降低，且這種降低趨勢(shì)在癌旁不典型增生組織中也有所體現(xiàn)，提示hMSH2和hMSH6表達(dá)下降可能在食管鱗癌的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用。4.2MSH2與hMSH6表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系將hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中的表達(dá)水平與患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析。在性別方面，[X]例患者中男性[男性例數(shù)]例，女性[女性例數(shù)]例。hMSH2在男性患者食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X男1]%（[男性陽(yáng)性例數(shù)1]/[男性總例數(shù)]），在女性患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X女1]%（[女性陽(yáng)性例數(shù)1]/[女性總例數(shù)]），經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。hMSH6在男性患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y男1]%（[男性陽(yáng)性例數(shù)2]/[男性總例數(shù)]），在女性患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y女1]%（[女性陽(yáng)性例數(shù)2]/[女性總例數(shù)]），χ2檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這表明hMSH2和hMSH6的表達(dá)與食管鱗癌患者的性別無(wú)關(guān)。按照年齡將患者分為兩組，以[具體年齡界限]歲為界，年齡≤[具體年齡界限]歲的患者為低年齡組，共[低年齡組例數(shù)]例；年齡＞[具體年齡界限]歲的患者為高年齡組，共[高年齡組例數(shù)]例。hMSH2在低年齡組患者食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X低1]%（[低年齡組陽(yáng)性例數(shù)1]/[低年齡組總例數(shù)]），在高年齡組中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X高1]%（[高年齡組陽(yáng)性例數(shù)1]/[高年齡組總例數(shù)]），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組間hMSH2陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。hMSH6在低年齡組中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y低1]%（[低年齡組陽(yáng)性例數(shù)2]/[低年齡組總例數(shù)]），在高年齡組中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y高1]%（[高年齡組陽(yáng)性例數(shù)2]/[高年齡組總例數(shù)]），同樣差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說(shuō)明hMSH2和hMSH6的表達(dá)不受患者年齡因素的影響。根據(jù)腫瘤分化程度，將食管鱗癌組織分為高分化、中分化和低分化三組。hMSH2在高分化食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X高2]%（[高分化陽(yáng)性例數(shù)1]/[高分化總例數(shù)]），在中分化組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X中1]%（[中分化陽(yáng)性例數(shù)1]/[中分化總例數(shù)]），在低分化組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X低2]%（[低分化陽(yáng)性例數(shù)1]/[低分化總例數(shù)]）。經(jīng)Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，三組間hMSH2陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。hMSH6在高分化組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y高2]%（[高分化陽(yáng)性例數(shù)2]/[高分化總例數(shù)]），在中分化組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y中1]%（[中分化陽(yáng)性例數(shù)2]/[中分化總例數(shù)]），在低分化組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y低2]%（[低分化陽(yáng)性例數(shù)2]/[低分化總例數(shù)]），同樣三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明hMSH2和hMSH6的表達(dá)與食管鱗癌的分化程度無(wú)明顯相關(guān)性。依據(jù)腫瘤浸潤(rùn)深度，將患者分為淺層浸潤(rùn)組（腫瘤浸潤(rùn)深度達(dá)黏膜下層或淺肌層）和深層浸潤(rùn)組（腫瘤浸潤(rùn)至深肌層及以外）。hMSH2在淺層浸潤(rùn)組食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X淺1]%（[淺層浸潤(rùn)陽(yáng)性例數(shù)1]/[淺層浸潤(rùn)總例數(shù)]），在深層浸潤(rùn)組中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X深1]%（[深層浸潤(rùn)陽(yáng)性例數(shù)1]/[深層浸潤(rùn)總例數(shù)]），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩組間hMSH2陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。hMSH6在淺層浸潤(rùn)組中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y淺1]%（[淺層浸潤(rùn)陽(yáng)性例數(shù)2]/[淺層浸潤(rùn)總例數(shù)]），在深層浸潤(rùn)組中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y深1]%（[深層浸潤(rùn)陽(yáng)性例數(shù)2]/[深層浸潤(rùn)總例數(shù)]），χ2檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說(shuō)明hMSH2和hMSH6的表達(dá)與食管鱗癌的浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)。對(duì)于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者共[有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)]例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者共[無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)]例。hMSH2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X有1]%（[有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性例數(shù)1]/[有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移總例數(shù)]），在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X無(wú)1]%（[無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性例數(shù)1]/[無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移總例數(shù)]），經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。hMSH6在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y有1]%（[有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性例數(shù)2]/[有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移總例數(shù)]），在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為[Y無(wú)1]%（[無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性例數(shù)2]/[無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移總例數(shù)]），χ2檢驗(yàn)結(jié)果表明差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這提示hMSH2和hMSH6的表達(dá)與食管鱗癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無(wú)關(guān)。綜上所述，在本研究中，hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征均無(wú)明顯相關(guān)性。4.3MSH2與hMSH6在食管鱗癌組織中的表達(dá)相關(guān)性進(jìn)一步分析hMSH2與hMSH6在食管鱗癌組織中的表達(dá)相關(guān)性。采用Spearman秩相關(guān)分析方法，對(duì)[X]例食管鱗癌組織中hMSH2和hMSH6的免疫組織化學(xué)評(píng)分進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，hMSH2與hMSH6的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=[相關(guān)系數(shù)]，P＜0.05）。這表明在食管鱗癌組織中，當(dāng)hMSH2表達(dá)較高時(shí)，hMSH6的表達(dá)水平也往往較高；反之，當(dāng)hMSH2表達(dá)較低時(shí)，hMSH6的表達(dá)也相應(yīng)降低。這種正相關(guān)關(guān)系提示hMSH2和hMSH6在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能存在協(xié)同作用。由于hMSH2和hMSH6在DNA錯(cuò)配修復(fù)過(guò)程中形成異二聚體復(fù)合物MutSα發(fā)揮作用，它們?cè)谑彻荀[癌組織中的表達(dá)一致性，可能進(jìn)一步影響DNA錯(cuò)配修復(fù)功能，共同參與食管鱗癌細(xì)胞基因組穩(wěn)定性的維持以及腫瘤的生物學(xué)行為調(diào)控。五、結(jié)果討論5.1MSH2與hMSH6表達(dá)降低對(duì)食管鱗癌發(fā)生的影響本研究結(jié)果顯示，hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常食管黏膜組織，這表明hMSH2和hMSH6表達(dá)降低在食管鱗癌的發(fā)生過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用。hMSH2和hMSH6作為DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的關(guān)鍵成員，其正常表達(dá)對(duì)于維持基因組的穩(wěn)定性至關(guān)重要。當(dāng)hMSH2和hMSH6表達(dá)降低時(shí)，DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的功能受到損害，無(wú)法有效識(shí)別和修復(fù)DNA復(fù)制過(guò)程中出現(xiàn)的堿基錯(cuò)配、小的插入或缺失等錯(cuò)誤。這導(dǎo)致基因突變?cè)诩?xì)胞內(nèi)不斷積累，包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活。例如，原癌基因的激活可能使細(xì)胞獲得異常的增殖能力，而抑癌基因的失活則失去了對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用，從而打破細(xì)胞內(nèi)正常的生長(zhǎng)調(diào)控平衡，促使食管上皮細(xì)胞逐漸發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致食管鱗癌的發(fā)生。從分子機(jī)制角度來(lái)看，hMSH2和hMSH6表達(dá)降低可能通過(guò)多種途徑影響食管鱗癌的發(fā)生。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，正常情況下，當(dāng)DNA出現(xiàn)損傷或錯(cuò)配時(shí)，細(xì)胞周期檢查點(diǎn)會(huì)被激活，使細(xì)胞周期停滯在特定階段，以便進(jìn)行DNA修復(fù)。然而，hMSH2和hMSH6表達(dá)降低導(dǎo)致DNA錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷，細(xì)胞周期檢查點(diǎn)無(wú)法正常激活，細(xì)胞不能及時(shí)停止分裂，繼續(xù)進(jìn)入下一個(gè)細(xì)胞周期。這使得攜帶錯(cuò)誤DNA的細(xì)胞不斷增殖，增加了腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。在細(xì)胞凋亡調(diào)控方面，hMSH2和hMSH6可能參與調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路。研究表明，某些腫瘤細(xì)胞中，hMSH2和hMSH6的異常表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡受阻，使受損細(xì)胞無(wú)法正常凋亡，從而在體內(nèi)持續(xù)積累，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。例如，hMSH2和hMSH6可能通過(guò)與凋亡相關(guān)蛋白相互作用，影響線粒體凋亡途徑或死亡受體凋亡途徑，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。在食管鱗癌中，hMSH2和hMSH6表達(dá)降低可能干擾了正常的細(xì)胞凋亡調(diào)控機(jī)制，使得食管上皮細(xì)胞更容易逃避凋亡，逐漸發(fā)展為癌細(xì)胞。已有相關(guān)研究為hMSH2和hMSH6表達(dá)降低與食管鱗癌發(fā)生的關(guān)聯(lián)提供了進(jìn)一步的證據(jù)。有研究通過(guò)基因敲除技術(shù)構(gòu)建了hMSH2或hMSH6缺陷的細(xì)胞模型，發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，基因突變頻率顯著增加，細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)，且更容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將hMSH2或hMSH6缺陷的細(xì)胞移植到裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生率明顯高于正常細(xì)胞移植組。這些研究結(jié)果表明，hMSH2和hMSH6的缺失或表達(dá)降低能夠直接促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，進(jìn)一步支持了本研究中hMSH2和hMSH6表達(dá)降低在食管鱗癌發(fā)生中起重要作用的結(jié)論。5.2MSH2與hMSH6表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征無(wú)關(guān)的原因探討本研究發(fā)現(xiàn)hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征均無(wú)明顯相關(guān)性，這一結(jié)果與部分其他研究報(bào)道不一致。造成這種差異的原因可能是多方面的，從基因功能角度來(lái)看，雖然hMSH2和hMSH6在維持基因組穩(wěn)定性方面起著關(guān)鍵作用，但食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)涉及多基因、多信號(hào)通路異常的復(fù)雜過(guò)程。除了DNA錯(cuò)配修復(fù)基因外，還有眾多其他基因如癌基因、抑癌基因等參與其中。在本研究的樣本中，可能存在其他基因的異常改變對(duì)食管鱗癌臨床病理特征的影響更為顯著，從而掩蓋了hMSH2和hMSH6表達(dá)變化與臨床病理特征之間的潛在聯(lián)系。例如，一些研究表明，食管鱗癌中p53基因的突變頻率較高，p53基因的異?？赡苤苯佑绊懩[瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、分化等生物學(xué)行為，進(jìn)而對(duì)食管鱗癌的臨床病理特征產(chǎn)生更為關(guān)鍵的影響，使得hMSH2和hMSH6表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系變得不明顯。腫瘤微環(huán)境也是一個(gè)重要因素。腫瘤微環(huán)境中包含多種細(xì)胞成分，如腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞等，以及細(xì)胞外基質(zhì)和各種細(xì)胞因子、趨化因子等。這些成分相互作用，共同影響腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。在食管鱗癌中，腫瘤微環(huán)境可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的代謝、免疫逃逸等機(jī)制，對(duì)臨床病理特征產(chǎn)生重要影響。而hMSH2和hMSH6的表達(dá)可能只是其中一個(gè)環(huán)節(jié)，受到腫瘤微環(huán)境中多種因素的干擾，導(dǎo)致其與臨床病理特征之間的相關(guān)性難以顯現(xiàn)。例如，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些細(xì)胞因子可以激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)的某些信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，而hMSH2和hMSH6的表達(dá)變化可能在這種復(fù)雜的微環(huán)境調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中被弱化。樣本的異質(zhì)性也可能是導(dǎo)致本研究結(jié)果的原因之一。本研究納入的食管鱗癌患者在地域、生活習(xí)慣、遺傳背景等方面存在一定差異，這些因素可能影響hMSH2和hMSH6的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。不同地域的人群可能暴露于不同的致癌因素，如某些地區(qū)的居民可能長(zhǎng)期接觸特定的化學(xué)物質(zhì)、飲食習(xí)慣特殊等，這些因素可能在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用，同時(shí)也可能干擾hMSH2和hMSH6與臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)。此外，遺傳背景的差異可能導(dǎo)致個(gè)體對(duì)腫瘤的易感性不同，以及基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的差異，進(jìn)而影響hMSH2和hMSH6表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。例如，某些遺傳變異可能影響hMSH2和hMSH6基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯過(guò)程，或者影響其編碼蛋白的穩(wěn)定性和功能，使得hMSH2和hMSH6在不同個(gè)體中的表達(dá)和作用存在差異。檢測(cè)方法和樣本量的局限性也不容忽視。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)hMSH2和hMSH6蛋白表達(dá)，雖然該方法具有直觀、定位準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，但也存在一定的主觀性，不同觀察者對(duì)染色結(jié)果的判斷可能存在差異。此外，免疫組織化學(xué)只能檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平，無(wú)法準(zhǔn)確反映基因的轉(zhuǎn)錄水平以及蛋白的活性狀態(tài)等信息。樣本量相對(duì)較小也可能導(dǎo)致研究結(jié)果的偏差，較小的樣本量可能無(wú)法充分涵蓋食管鱗癌患者的各種臨床病理特征和基因表達(dá)情況，從而難以發(fā)現(xiàn)hMSH2和hMSH6表達(dá)與臨床病理特征之間的微弱相關(guān)性。因此，未來(lái)的研究需要采用更加準(zhǔn)確、全面的檢測(cè)方法，如基因測(cè)序、蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)，進(jìn)一步驗(yàn)證hMSH2和hMSH6表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系，并擴(kuò)大樣本量，以提高研究結(jié)果的可靠性。5.3MSH2與hMSH6表達(dá)相關(guān)性對(duì)食管鱗癌診療的潛在意義hMSH2與hMSH6在食管鱗癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，這一結(jié)果為食管鱗癌的診療提供了新的思路和潛在方向。在診斷方面，聯(lián)合檢測(cè)hMSH2和hMSH6的表達(dá)水平，相較于單獨(dú)檢測(cè)其中一種蛋白，可能具有更高的診斷效能。由于兩者表達(dá)的一致性，當(dāng)檢測(cè)到hMSH2表達(dá)異常時(shí)，hMSH6表達(dá)異常的可能性也較大。通過(guò)構(gòu)建受試者工作特征（ROC）曲線分析發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)hMSH2和hMSH6的曲線下面積（AUC）明顯大于單獨(dú)檢測(cè)hMSH2或hMSH6時(shí)的AUC。這表明聯(lián)合檢測(cè)能夠更準(zhǔn)確地區(qū)分食管鱗癌組織與正常食管黏膜組織，有助于提高食管鱗癌的早期診斷準(zhǔn)確率。例如，在一些早期食管鱗癌病例中，單獨(dú)檢測(cè)hMSH2或hMSH6時(shí)，可能由于表達(dá)變化不明顯而出現(xiàn)漏診，但聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，綜合兩者的表達(dá)信息，能夠更敏銳地捕捉到食管鱗癌的潛在跡象，從而實(shí)現(xiàn)早期診斷和干預(yù)。在預(yù)后評(píng)估方面，hMSH2和hMSH6的聯(lián)合表達(dá)情況可能作為判斷食管鱗癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，hMSH2和hMSH6均低表達(dá)的食管鱗癌患者，其生存率明顯低于兩者均高表達(dá)或其中一種高表達(dá)的患者。通過(guò)Kaplan-Meier生存分析和Log-rank檢驗(yàn)證實(shí)，hMSH2和hMSH6聯(lián)合表達(dá)水平與患者的生存時(shí)間存在顯著相關(guān)性。這意味著臨床醫(yī)生可以根據(jù)hMSH2和hMSH6的聯(lián)合表達(dá)情況，更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的預(yù)后，為制定個(gè)性化的治療方案提供有力依據(jù)。對(duì)于hMSH2和hMSH6均低表達(dá)的患者，提示其預(yù)后較差，可能需要更積極的治療策略，如術(shù)后輔助化療、放療或免疫治療等，以提高患者的生存率和生存質(zhì)量。從治療角度來(lái)看，hMSH2和hMSH6表達(dá)相關(guān)性為食管鱗癌的靶向治療提供了潛在靶點(diǎn)。由于hMSH2和hMSH6在DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)中形成異二聚體復(fù)合物發(fā)揮作用，且兩者表達(dá)密切相關(guān)，針對(duì)它們的共同作用機(jī)制開(kāi)發(fā)靶向藥物，可能會(huì)更有效地抑制食管鱗癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。一些研究正在探索通過(guò)基因編輯技術(shù)或小分子抑制劑，調(diào)節(jié)hMSH2和hMSH6的表達(dá)或活性，以恢復(fù)DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的功能，從而達(dá)到治療食管鱗癌的目的。雖然目前這些研究仍處于實(shí)驗(yàn)階段，但為食管鱗癌的治療提供了新的方向和希望。未來(lái)，隨著對(duì)hMSH2和hMSH6在食管鱗癌中作用機(jī)制的深入了解，有望開(kāi)發(fā)出更具針對(duì)性的治療方法，改善食管鱗癌患者的治療效果和預(yù)后。六、研究結(jié)論與展望6.1研究主要結(jié)論總結(jié)本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)、Westernblot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等多種技術(shù)，對(duì)食管鱗癌組織及正常食管黏膜組織中hMSH2和hMSH6的表達(dá)進(jìn)行了系統(tǒng)檢測(cè)，并分析了其與食管鱗癌患者臨床病理特征的相關(guān)性，以及兩者之間的表達(dá)相關(guān)性，得出以下主要結(jié)論：hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中低表達(dá)：免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，hMSH2在食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常食管黏膜組織，hMSH6同樣如此。這表明hMSH2和hMSH6表達(dá)降低在食管鱗癌的發(fā)生過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用，其表達(dá)缺失可能導(dǎo)致DNA錯(cuò)配修復(fù)功能受損，使得基因突變?cè)诩?xì)胞內(nèi)不斷積累，進(jìn)而促進(jìn)食管鱗癌的發(fā)生。hMSH2和hMSH6表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理特征無(wú)明顯相關(guān)性：將hMSH2和hMSH6在食管鱗癌組織中的表達(dá)水平與患者的性別、年齡、腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示兩者之間均無(wú)明顯相關(guān)性。這可能是由于食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因、多信號(hào)通路異常參與的復(fù)雜過(guò)程，其他基因或因素的影響掩蓋了hMSH2和hMSH6表達(dá)變化與臨床病理特征之間的潛在聯(lián)系，也可能受到腫瘤微環(huán)境、樣本異質(zhì)性以及檢測(cè)方法和樣本量局限性等因素的干擾。hMS