第2課時(shí)微生物分別和培育的技術(shù)操作(以大腸桿菌為例)

學(xué)習(xí)導(dǎo)航明目標(biāo)、知重點(diǎn)難點(diǎn)

O了解培育基的配制過程及培育基的配制原則。(重點(diǎn))

?駕馭無菌操作和接種技術(shù)。(重、難點(diǎn))

預(yù)習(xí)導(dǎo)學(xué),自⑥

L學(xué)生用書P9」

教材導(dǎo)讀JIAOCAIDAODU

閱讀教材PMM分析大腸桿菌的接種與分別培育

1.配制牛肉者蛋白膾培育基

2.斜面接種和培育大腸桿菌

斜面接種大腸桿菌的主要0的有菌種轉(zhuǎn)移、擴(kuò)大培育和保存純凈菌種等。詳細(xì)操作步驟:

打算接種|一|接種環(huán)滅菌I一|試管口滅菌|一|挑取少許菌種|一卜劃線接種

T培育大腸桿菌1-1保存菌種

3.平板劃線分別和培育大腸桿菌

在試驗(yàn)室中，平板經(jīng)常被用來培育、分別細(xì)菌等微生物。

(D牛肉膏蛋白豚固體培育基的平板制作

配制好的培育基裝瓶”述學(xué)滅菌—倒平板操作(A.打開瓶塞~B.灼燒瓶口滅菌一C.倒培

育基一D倒置平板)

(2)平板劃線分別與培育大腸桿菌

①平板劃線法的含義:用帶有微生物的接種匠在平板培育基表面通過分區(qū)劃線而純化分

別微生物的一種方法。

②留意事項(xiàng)：接種和劃線操作時(shí)須要在迎班火焰旁邊進(jìn)行。

③培育結(jié)果：可以得到由單個(gè)細(xì)菌增殖而形成的睦。

預(yù)習(xí)反饋YUXIFANKUI

----------------------------------------------------0-------

U判一判

(1)錐形瓶的瓶口通過火焰灼燒火菌，防止瓶口的微生物污染培育基。(J)

(2)平板冷凝后，將平板倒置.，既可以使培育基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿

蓋上的水珠落入培育基，造成污染。(V)

⑶制備細(xì)菌培育基的操作依次為配制培育液、調(diào)整pH、滅菌、分裝。(X)

(4)運(yùn)用已滅菌的接種環(huán)、培育基，操作過程中小冉滅菌。(X)

E連一連

rwi

i-----

4

主題探究，窗的師生互動(dòng)?突破重難令

主題1培育基的配制[學(xué)生用書P10]

要點(diǎn)探究AYAODIANTANJIU

--------------“-----------

利用培育基培育微生物首先要把微生物接種到培育基上，在試驗(yàn)室中，平板經(jīng)常被用來

培育、分別細(xì)菌等微生物，結(jié)合教材PgM內(nèi)容完成以下探究。

。探究1下表是牛肉官蛋白腺固體培育基的成分，請說出各成分供應(yīng)的養(yǎng)分

培育基組分供應(yīng)的主要養(yǎng)分物質(zhì)

牛肉膏5.0g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素

蛋白陳10.0g碳源、氮源和維生素

NaCl5.0g無機(jī)鹽

H20定容至1000mL氫元素、氧元素

口探究2完善下面牛肉膏蛋白陳培育基的配制步

驟，學(xué)會(huì)培育基的配制

配制培育基

I

調(diào)整也至乙2

I

分裝：培育基的高度約為試管長度的

包扎

滅菌：高壓蒸汽滅菌是常用的滅菌方法之一

擱置斜面：待試管冷卻至風(fēng)衛(wèi)左右，斜面長度不超過試管總長的1Z?

1.培育基的配制原則

(1)目的明確：不同微生物需求不同，依據(jù)培育目的進(jìn)行配制。

(2)養(yǎng)分要協(xié)調(diào)：養(yǎng)分物質(zhì)的濃度和比例要相宜。

(3)pH要相宜：為維持pH的相對恒定，可在培育基中加入緩沖劑，常用磷酸氫二鉀或

磷酸二氫鉀。

2.培育基配制中的留意事項(xiàng)

(1)用天平稱量時(shí)，留意放等大的稱量紙.

(2)培育基熔化中的留意事項(xiàng)

①在瓊脂熔化時(shí)要不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯裂開。

②熔化后須要先調(diào)整pH,再分裝，后滅菌。

(3)培育基倒平板時(shí)的留意事項(xiàng)

①培育基滅菌后要冷卻到50C左右時(shí)起先倒平板。其緣由是瓊脂是一種多糖，在98℃

以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板時(shí)高于50C會(huì)燙手，低于50°C時(shí)，若不能皿好操

作，瓊脂會(huì)凝固。

②倒平板時(shí)，要使錐形瓶的瓶口通過火焰。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育

基。倒平板整個(gè)過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避開雜菌污染。

③平板冷凝后，要將平板倒置。因?yàn)槠桨謇淠?，皿蓋上會(huì)凝聚水珠，培育基表面的溫

度也較高，平板倒置后，既可使培育基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入

培育基，造成污染。

④在倒平板的過程中，假如不當(dāng)心將培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么這個(gè)平板

不能用來培育微生物，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培育基上滋生。

命題突破MINGTlTUPO

-------------------------------------------------------------------------0-----------

1.下列有關(guān)培育基配制原則的表述，正確的是()

A.任何培育基都必需含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水及生長因子

B.碳源和氮源必需具有肯定比例，碳元素的含量最多，其次為氮元素

C.微生物的生長除受養(yǎng)分因素影響外，還受到pH、氧氣、滲透壓的影響

D.養(yǎng)分物質(zhì)的濃度越高越好

解析：選配培育基中一般含有碳源、氮源、無機(jī)鹽和水等，有些培育基中還需加入生

長因子。培育基中的碳源和氮源要有肯定的比例，并不肯定碳元素含量最多。養(yǎng)分物質(zhì)濃度

過高會(huì)導(dǎo)致微生物失水死亡.

2.下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白陳固體培育基的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.操作依次為計(jì)算、稱量、熔化、擱置斜面、滅菌

B.將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯

C.待培育基冷卻至E0℃左右時(shí)進(jìn)行擱置斜面

D.斜面培育基形成的斜面的長度不超過試管總長的1/2

答案：A

主題2大腸桿菌的接種】[學(xué)生用書PU]

,要點(diǎn)探究■YAODIANTANJIU

---------------------------------------------------------------------------------0-----------

視察下圖接種操作程序，學(xué)會(huì)斜面接種和培育大腸桿菌。

打算接種：用一只手的大拇指和其他四指夾住菌種試管，管口并齊，管內(nèi)培育基斜面對

±

接種環(huán)滅菌：手持接種環(huán)，將接種環(huán)的坯量和接種時(shí)可能進(jìn)入試管內(nèi)的部分放在酒精燈

火焰上，來回灼燒多次，以達(dá)到快速徹底滅菌的日的

試管口滅菌：在火焰邊用握有接種環(huán)的手的小指、無名指、中指和掌心拔去兩支試管上

的試管塞，快速將試管II通過火焰2?3次，以殺滅試管口上的微生物

I

挑取少量菌種：將接種環(huán)伸入有菌種的試管內(nèi)，讓環(huán)部先接觸培育基斜面頂端或其他無

菌的部位使其冷卻。然后，輕輕挑取少許菌種，在抽出接種環(huán)時(shí)，其帶菌部位不要觸及試管

壁，也小要通過火焰處

劃線接種：將上述帶南的接種環(huán)伸入待接種的試管中，在培育基斜面上由底部向上輕輕

劃“S”型曲線。留意劃曲線時(shí)不要將培育基表面劃破

抽出接種環(huán)：將試管口和試管塞分別通過火焰2?3次，快速塞緊試管。多次灼燒接種

環(huán)確保無菌，冷卻后，放回原處

培育：將接種過菌種為試管放在恒溫箱中(37°C)培育24h,視察接種和培育的結(jié)果

保存菌種：將增殖的菌種放置在冰箱冷藏室中(4°C)保存

1.接種勝利的標(biāo)準(zhǔn)

假如培育基上生長的菌落的顏色、形態(tài)、大小基本一樣，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，

則說明接種操作是符合要求的；假如培育基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操

作還未達(dá)到要求，試驗(yàn)失畋，須要分析緣由，再次接種。

2.接種時(shí)的兒個(gè)留意事項(xiàng)

(1)接種過程須要兩支試管：一支試管含有菌種，另一支試管含有培育基，用于接種；

(2)接種過程中為殺滅試管口上沾染的微生物要對試管口進(jìn)行滅菌：

(3)帶菌的接種環(huán)抽出試管時(shí)帶菌部分不行觸及試管壁；

(4)接種劃線時(shí)不要招培育基的表面劃破。

----命--題---突--破----------------M-I-N-G-T-l-TU0P-O---

1.下列關(guān)于接種操作過程的敘述，不正確的是()

A.要將接種環(huán)灼燒滅菌

B.取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌

C.將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，先接觸長菌多的部位

D.接種后還要將管口滅菌加塞

解析：選C。接種環(huán)伸入試管內(nèi)后先接觸未長菌的部位，待接種環(huán)冷卻后再接觸長菌部

位。

2.下列關(guān)于接種微生物的敘述，錯(cuò)誤的是()

A.用玻璃涂布器進(jìn)行涂布平板接種

B.用接種針進(jìn)行穿刺接種

C.常用接種工具有坂璃涂布器、接種環(huán)等

D.運(yùn)用接種工具時(shí)不用滅菌

答案：D

主題3大腸桿菌的分別和培育[學(xué)生用書P12]

----要--點(diǎn)---探--究--------------Y-A-。--DI-A-N-T-A0N-JI-U--

完善下面示意圖，學(xué)會(huì)分別和培育大腸桿菌。

在--個(gè)倒有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿的皿

底處刨面中央用記號筆畫一宜線，

劃分區(qū)域

3力再在此線中間畫一垂宜線，將培

養(yǎng)域分成三個(gè)區(qū)域，第1區(qū)域，第

2區(qū)域,第3區(qū)域，分別標(biāo)上“1”

“2”“3”字樣。

接種劃線時(shí)，將帶有微生物樣品

的接種環(huán)，在培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)基的

N第1區(qū)域劃戲，然后再從第1區(qū)域

接種劃線

劃到第2區(qū)域，從第2區(qū)域劃到第

3區(qū)域,,在固體培養(yǎng)荔表面完成

多次“由點(diǎn)到線”的逐步稀釋。

恒溫培養(yǎng)通過培養(yǎng)可以得到由單個(gè)

細(xì)茵增殖而形成的菌落。

歸納提煉

1.平板劃線法的類型：有扇形劃線、連續(xù)劃線、交叉劃線、方格劃線等(如下圖)。

扇形劃線洋續(xù)劃線交叉劃線方格劃線

2.平板劃線操作的留意事項(xiàng)

(1)第一次劃線及每次劃線之前都須要灼燒接種環(huán)，劃線結(jié)束后仍需灼燒接種環(huán)，三次

灼燒的目的不同。

項(xiàng)目目的

第一次劃線前灼燒避開接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物

殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種均來自

每次劃線前灼燒

上次劃線末端

劃線結(jié)束灼燒殺死接種環(huán)上殘留的菌和1,避開細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者

(2)灼燒接種環(huán)之后,要待其冷卻后才能伸入菌液中,以免溫度太高殺死菌種.

(3)除第一次劃線外，每次劃線都從上一次劃線的末端起先，這樣能使細(xì)菌的數(shù)H隨著

劃線次數(shù)的增加而逐步削減，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。

(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培育基劃破。

----命---題---突---破--------------------M-I-N-G-T-l-T-U/P-O-----

1.斜面培育基正確的劃線示意圖是()

^

K7

K

i1

^U

ARCl)

解析：選A°正確的接種方法是將帶菌的接種環(huán)伸入待接種的試管中，在培育基表面上

由底部向上輕劃“S”型曲線，將菌種接種到培育基上。

2.下列有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是（）

A.第?次操作前灼燒接種環(huán)是為了避開接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物

B.每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種

C.在其次區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種干脆來源于菌液

D.劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)能剛好殺死接種環(huán)上的菌利I避開細(xì)菌污染環(huán)境或感染操

作者

解析：選C。平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的

菌種逐步稀釋分散到培育基的表面.，以形成單菌落。因此，每次劃線時(shí)，都應(yīng)將接種環(huán)上原

有的菌體殺死，劃線時(shí)分?jǐn)?shù)的菌體來自上次劃線結(jié)束時(shí)的菌體。

核心學(xué)問小結(jié)

［關(guān)鍵語句］

［網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建］

O在無菌條件下將微生物接入

配制培養(yǎng)與一調(diào)節(jié)pH

配制培養(yǎng)培育基的操作過程叫做接種。

菌

桿基的方法一分裝一包扎一滅菌???

接

的一擱置斜面

與

種?細(xì)菌培育基的配制過程：配

肉

分I斜面接種I

養(yǎng)

用制培育基f調(diào)整pH—分裝-*包

平板劃線分高

扎一滅菌一擱置斜面。

知能演練，心函的念即酎M陵二使喳座熨一,

［隨堂檢測］［學(xué)生用書P13］

學(xué)問點(diǎn)一培育基的配制

1.在培育基的配制過程中，具有如下步驟，其正確依次為（）

①熔化②調(diào)pH③加棉塞④包扎⑤分裝

⑥稱量

A.⑤③④

B.⑥0②⑤③④

C.@@@⑤④③

D.④⑥③

解析：選B。上述步騏中，培育基的配制依次為稱量一熔化一調(diào)pH-分裝一加棉塞一包

扎。

2.牛肉育蛋白陳培育基中加入瓊脂這一志向的凝固劑，下列關(guān)于瓊脂的說法，不正確

的是（）

A.不被所培育的微生物分解利用，對所培育的微生物無毒害作用

B.在微生物生長溫度范圍內(nèi)保持固體狀態(tài)

C.瓊脂凝固點(diǎn)低，利于微生物的生長

I）.瓊脂在滅菌過程中不會(huì)被破壞，透亮度好，凝固力強(qiáng)

解析：選C。在液體培育基中加入凝固劑如瓊脂后，制成固體培育基，它是試驗(yàn)室中最

常用的培育基之一。固體培育基中可形成肉眼可見的單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體，即菌

落，用尸微生物的分別、計(jì)數(shù)和菌種鑒定等。瓊脂作為一種志向的凝固劑，是其性質(zhì)確定瓊

脂不會(huì)被微生物利用且對微生物無毒害作用，在滅菌過程中不會(huì)被破壞，透亮度好，凝固力

強(qiáng)。瓊脂在98℃以.上可溶解于水，在45°C以下凝固，所以在微生物生長溫度范圍內(nèi)保持

固體狀態(tài)。

□學(xué)問點(diǎn)二無菌操作和接種技術(shù)

3.做“微生物的分別與培育”試驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是（）

A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋

B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培育基濺到皿蓋上

C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落

D.用記號筆標(biāo)記培育皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上

解析：選I）。A項(xiàng)，在高壓滅菌的操作過程中，加熱結(jié)束后應(yīng)讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降,

待壓力表的壓力降到零時(shí)，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子。B項(xiàng)，倒平板時(shí)，用左手將

培育皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。C項(xiàng)，接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅

菌后應(yīng)在火焰旁冷卻后再挑取菌落。D項(xiàng)，在微生物的培育中，一般將培育皿倒置，在皿底

上用記號筆做標(biāo)記。

4.下圖為試驗(yàn)室培育和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯(cuò)誤的是（）

A.①②③步驟操作時(shí)須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行

B.步驟①中待倒入的培育基冷卻后蓋上培育皿的皿蓋

C.步驟③中，每次劃線前后都需對接種環(huán)進(jìn)行滅菌處理

D.劃線接種結(jié)束后，將圖④平板倒置后放入培育箱中培育

解析：選B。由圖可知，①是倒平板，②是用接種環(huán)沾取菌液，③是進(jìn)行平板劃線，④

是培育。①②③步驟操作時(shí)須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止被雜菌污染，A正確；倒完平板

后馬上蓋上培育皿，冷卻后將平板倒過來放置，B錯(cuò)誤；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死

上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種干脆來源于上次

劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目漸漸削減，以便得到函落,

C正確；劃線接種結(jié)束后，將平板倒置后放入培育箱中培育，有利于表面的水分更好的揮發(fā)

和防止皿蓋上的水珠落入培育基造成污染，D正確。

5.如圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的依次為下列操作方法正確

的是()

A.操作前要將接種以放在火焰邊灼燒滅菌

B.劃線操作應(yīng)在火焰上進(jìn)行

C.在5區(qū)域中才可以得到所需菌落

D.在1、2、3、4、E區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌

解析：選D。在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在火焰上

灼燒，接種時(shí)劃線操作是在火焰旁進(jìn)行。在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過培育即可

獲得所需菌落。

6.“創(chuàng)衛(wèi)”是創(chuàng)建衛(wèi)生城市的簡稱。“衛(wèi)生城市”是一個(gè)城市綜合功能和文明程度的重

要標(biāo)記。某同學(xué)欲利用所學(xué)習(xí)的微生物培育學(xué)問，通過試驗(yàn)證明痰液中含有細(xì)菌，來提倡同

學(xué)們不要隨地吐痰，為“創(chuàng)衛(wèi)”添一份力。請回答下列問題：

(1)欲培育細(xì)菌必需先制備可供細(xì)菌生長的培育基。試驗(yàn)室中常用牛肉膏蛋白陳固體

培育基來培育微生物，該漕育基的組成成分包括牛肉百、蛋白陳、NaCl、、H力等;

該培育基中微生物所需的氮源來自________;制備該培育基的步驟是：配制培育基一調(diào)整

pH一分裝一包扎一滅菌一倒平板，其中滅菌常用的方法是;培育基滅菌后，

須要冷卻到________℃左右才能倒平板，等平板冷凝后，還須要將平板倒置，主要目的是

(2)為了使試驗(yàn)更有勸服力，該同學(xué)設(shè)置了空白比照組和若干試驗(yàn)組，其中比照組的

作用是o若在某次調(diào)查中，某一試驗(yàn)組平板上的平均菌落數(shù)為39個(gè)，

而空白比照組的平板上出現(xiàn)了9個(gè)菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了現(xiàn)象。

答案：(】)瓊脂牛肉膏、蛋白陳高壓蒸汽滅菌法50防止皿蓋上的水珠落入培育

基，造成污染

(2)解除試驗(yàn)組中非測試因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響(答案合理即可)污染

［課時(shí)作業(yè)］［學(xué)生用書P63（單獨(dú)成冊）］

一、選擇題

1.下面關(guān)于斜面接種大腸桿菌的主要目的，表述錯(cuò)誤的是（）

A.菌種轉(zhuǎn)移

B.擴(kuò)大培育

C.保存純凈菌種

D.消毒

答案：D

2.下列有關(guān)微生物培育的敘述，正確的是（）

A.培育前均須要對培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

B.均要確保培育基中含有所需的全部養(yǎng)分物質(zhì)

C.平板劃線法和涂布平板法均可用于鑒定菌種

D.均須要放在恒溫培育箱中通入氧氣培育

解析：選C。微生物接種前，要對培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A錯(cuò)誤；培育基中只須要

含有滿意微生物生長須要的養(yǎng)分物質(zhì)，B錯(cuò)誤；平板劃線法和涂布平板法均可用于鑒定南種,

C正確；有些微生物屬于厭氧型，就不須要氧氣，D錯(cuò)誤。

3.某探討小組從有機(jī)廢水中分別微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是（）

A.培育基分裝到培育皿后進(jìn)行滅菌

B.轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線

C.接種后的培育皿需放在光照培育箱中培育

D.培育過程中每隔一周視察一次

解析?：選B。微生物分別中培育基的制備應(yīng)是先滅菌再倒平板，A項(xiàng)錯(cuò)誤；每一次劃線

前都要灼燒接種環(huán)，以殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，B項(xiàng)正確；接種后的培育

皿應(yīng)在恒溫培育箱中進(jìn)行培育，C項(xiàng)錯(cuò)誤；培育過程中視察的間隔時(shí)間不能太長，相宜條件

下視察一次一般不超過24h,D項(xiàng)錯(cuò)誤。

4.斜面培育基形成的斜面的長度不超過試管總長的（）

A.1/5B.2/3

C.1/4D.1/2

解析：選D。擱置斜面長度不超過試管總長度的1/2。

5.測定3類細(xì)菌對氧的需求，讓它們在3個(gè)不同的試管中生長，如圖顯示了細(xì)菌的生

長層。據(jù)此推斷：只能在有氧培育基中繁殖、只能在無氧培育基中繁殖、在有氧和無氟的培

育基中都能繁殖的細(xì)菌依次是（）

今一棉花棉花分一棉花

1n麴細(xì)菌繁殖

-細(xì)菌繁殖

A.IlkI.IIB.IlkII、I

c.i、ii、inD.i、HI、ii

答案：A

6.要從多種細(xì)菌中分別某種細(xì)菌，培育基要用（）

A.加入青霉素的培育基

B.固體培育基

C.加入高濃度食鹽的培育基

D.液體培育基

解析：選B。假如加入青霉素則抑制大部分細(xì)菌生長；若加入高濃度食鹽，則只能選擇

出金黃色葡萄球菌；液體培育基多用于生產(chǎn)，分別鑒定一般不用液體培育基。

7.下列關(guān)于平板劃線操作的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.每次劃線前都要灼燒接種環(huán)

B.灼燒接種環(huán)后，要馬上用接種環(huán)接種，防止雜菌污染接種環(huán)

C.要在酒精燈火焰旁進(jìn)行

D.接種前，要將菌種試管口通過火焰

解析：選B。灼燒接種環(huán)后，將接種環(huán)伸入管內(nèi)，讓環(huán)端先接觸培育基上未長菌的部位,

使其冷卻，然后輕輕挑取少量菌體，再進(jìn)行接種。灼燒接種環(huán)后，不行馬上用接種環(huán)接種，

以免接種環(huán)溫度過高，將菌種殺死。

8.微生物培育是微生物工程中的基礎(chǔ)技術(shù)。下列相關(guān)敘述正確的一項(xiàng)是（）

A.病毒和細(xì)菌的培育基成分相同

B.平板劃線法中的劃線是連續(xù)進(jìn)行的

C.微生物培育基中尹不都必需添加碳源或氮源

I）.在培育的過程中，細(xì)胞種類、數(shù)目都不斷地增加

解析?：選C。病毒和細(xì)菌的培育基成分有區(qū)分。平板劃線法中的劃線可以是連續(xù)的，也

可以是間斷的。微生物的培育過程中，細(xì)胞數(shù)目不斷增加，細(xì)胞的種類不變。

9.下列關(guān)于對大腸桿菌的接種的敘述，不正確的是（）

A.接種環(huán)在接種的試管斜面上輕輕劃“S”型曲線

B.在微生物培育操作過程中，為防止雜菌污染，需對培育基、培育皿和接種環(huán)進(jìn)行消

不能用剛剛灼燒過的接種環(huán)干脆挑取菌種

運(yùn)用過的培育基及其培育物必需經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄

解析：選B。滅菌是指采納劇烈的物理或化學(xué)方法使物體內(nèi)外全部的微生物恒久丟失生

長繁殖實(shí)力，所以，對培育基、培育皿和接種環(huán)進(jìn)行滅菌而不是消毒：因?yàn)樽茻^的接種環(huán)

溫度太高，干脆接觸菌種會(huì)將菌種殺死，所以要將接種環(huán)接觸沒有菌種的培育基的頂端待溫

度降低后再挑取菌種；有的大腸桿菌會(huì)釋放一種劇烈的毒素，所以運(yùn)用過的培育基及其培育

物必需經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培育物的擴(kuò)散。

10.如何推斷制作的培育基是否滅菌徹底（）

A.看培育基是否透亮

B.有沒有殲滅細(xì)菌菌體

C.未接種的培育基在恒溫箱中保溫1?2天后檢驗(yàn)有無菌落生長

D.是否殲滅了微生物的芽抱、泡子

解析：選C。配制好的培育基是否滅菌徹底通常在運(yùn)用前'在恒溫箱中保溫1?2天后

檢驗(yàn)有無菌落生長，若無則說明滅菌徹底。

11.下列操作屬于滅菌的是（）

A.接種前用火焰灼燒接種環(huán)

B.接種前用酒精擦拭雙手

C.將平板倒置，放入培育箱中培育

D.接種在酒精燈的火焰旁完成

解析：選A。要正確區(qū)分滅菌、消毒和防止雜菌污染。A項(xiàng)屬于滅菌，B項(xiàng)屬于消毒，C、

D項(xiàng)都是試驗(yàn)操作過程中防止雜菌污染的措施，與滅菌無關(guān)。

12.下列依次表示倒平板、接種的位置，以及劃線法接種的路徑示意圖，其中錯(cuò)誤的是

（）

解析：選D。倒平板時(shí)，用左手將培育皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中

的培育基倒入培育皿，左手馬上蓋上培育皿的皿蓋，防止空氣中的雜菌污染，故A正確：接

種時(shí)，左手將培育皿打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)快速伸入平板內(nèi)，故B正確；

劃線時(shí)要從上一次劃線的末端起先進(jìn)行，讓菌種來源于上一次劃線末端，故C正確，D錯(cuò)誤。

二、非選擇題

13.急性腸胃炎、手足口病分別是由細(xì)菌、病毒通過消化道進(jìn)入人體導(dǎo)致的。因此檢驗(yàn)

飲用水的細(xì)菌、病毒的含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施。請回答下列與檢驗(yàn)飲用水有關(guān)

的問題：

(1)檢驗(yàn)大腸桿菌含量時(shí)，通常將水樣進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水

樣用玻璃涂布器分別涂布到固體培育基的表面進(jìn)行培育，記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為

下圖所示的四種菌落分布圖中，不行能由該方法得到的是________O

⑵用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)量是否須要比照組？________。為什么？

(3)有三種材料或用具須要消毒或滅菌：①培育細(xì)菌用的培育基與培育皿；②玻璃棒、

試管、燒瓶和吸管；③試驗(yàn)操作者的雙手。其中須要消毒的是________,須要滅菌的是

(4)已知大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，現(xiàn)供應(yīng)足量的已滅菌的乳糖蛋白陳培育液和

具塞試管，應(yīng)如何推斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌？

解析：(1)平板劃線法所得菌落集中呈線狀，D的菌落分布狀況可推斷為平板劃線法接

種。

(2)為推斷培育基滅菌是否合格，本試驗(yàn)須要比照。

(3)消毒是指運(yùn)用較溫柔的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括

芽抱和抱子)。滅菌是指運(yùn)用劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽抱和飽子。

對人的手不能進(jìn)行滅菌。

(4)依據(jù)題意大腸桿菌能產(chǎn)生氣體，對培育基進(jìn)行接種視察有無氣泡產(chǎn)生來推斷大腸桿

菌的有無。

答案：(1)涂布平板法D

(2)須要因?yàn)轫氁茢嗯嘤欠癖浑s菌污染(培育基滅菌是否合格)

⑶③

(4)通過無菌操作向試管內(nèi)注入肯定量待測水樣。再注入已滅菌的乳糖蛋白陳培育液將

試管充溢，塞上塞子，混勺后置于370c恒溫箱培育24h。若試管內(nèi)有氣泡生成，則說明水

樣中有大腸桿菌

14.炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排

列，菌落呈卷發(fā)狀。對炭疽病疑似患者，可依據(jù)噬菌體的宿主專一性，通過試驗(yàn)確診。

(1)細(xì)菌培育：采集疑似患者的樣本，分別培育，獲得可疑菌落。

(2)細(xì)菌鑒定：試驗(yàn)流程如圖所示

對照組

?

加入()

35七，6小時(shí)\

?

E人生理拄水配制作

的一消噬菌體液一

35-，6小時(shí)一\

①對配制的液體培育基等需實(shí)行—法滅菌；試驗(yàn)所用液體培育基的碳源為

(填“無機(jī)碳”或“有機(jī)碳”)。

②選擇可疑菌落制片后，用視察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。

③接種可疑菌后，35C培育24小時(shí)，液體培育基變渾濁，緣由是

o比照組試管中應(yīng)加入________,與試驗(yàn)組同時(shí)培育6小時(shí)后，若試

驗(yàn)組液體培育基的渾濁度比比照組(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽

桿菌感染，反之則解除。

解析：(2)①培育可疑炭疽桿菌之前應(yīng)先將液體培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。由于炭疽桿

菌是異養(yǎng)生物，因此培育基中的碳源應(yīng)是有機(jī)碳。②視察細(xì)菌應(yīng)用顯微鏡。③接種可疑菌

24小時(shí)后，液體培育基變渾濁的緣由是細(xì)菌大量繁殖。

答案：(2)①高壓蒸汽滅菌有機(jī)碳

②顯微鏡

③細(xì)菌大量繁殖等量生理鹽水低

15.某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。探討人員用化合物

A、磷酸鹽、鎂鹽以及微晶元素配制的培育基，勝利篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的

菌)。試驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題：

污水池中振蕩培養(yǎng)若干天后，測定皿科

污泥樣品各瓶中化合物A的含址接種

|初選介分

整L一種△Q