ICS65.020.30CCSB405133TechnicalregulationsforartificialinseminationofTibetanpigsIDB5133/T97—2024前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14采精公豬選擇 25采精公豬調(diào)教 26采精公豬采精 37精液質(zhì)量檢測 48精液的稀釋、、、 9人工輸精 510人工授精后母豬管理 6附錄A（資料性）生產(chǎn)記錄表 7DB5133/T97—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由甘孜藏族自治州畜牧站提出。本文件由甘孜藏族自治州農(nóng)牧農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：甘孜藏族自治州畜牧站、稻城縣農(nóng)牧農(nóng)村和科技局、稻城縣一沐天珠牧業(yè)有限公司、稻城康巴情牧業(yè)有限公司。本文件主要起草人：涂永強(qiáng)、王俊杰、毛進(jìn)彬、彭海云、馮勇、王照燕、楊鵬波、巴桑卓瑪、楊甲呷、格桑、馬貴云、曹豐磊、丁真卓瑪、周璞、許新宏。DB5133/T97—20241藏豬人工授精技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了藏豬采精公豬選擇、調(diào)教、采精，精液質(zhì)量檢測、稀釋、分裝、貯存、運(yùn)輸，人工輸精等技術(shù)規(guī)范要求。本文件適用于甘孜州藏豬人工輸精站、養(yǎng)殖大戶、專合社、規(guī)模養(yǎng)殖場。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T32763藏豬NY/T820種豬登記技術(shù)規(guī)范DB5133/T7藏豬主要疫病防治技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1前期調(diào)教earlytrainingofboars在60日齡～180日齡內(nèi)，通過專人飼養(yǎng)管理，與初選采精公豬建立情感聯(lián)系的過程。3.2后期調(diào)教late-stagetrainingofboars對180日齡以上、性成熟和體成熟的終選采精公豬進(jìn)行爬跨假母臺和采精調(diào)教的過程。3.3精子活力spermmotility在顯微鏡下觀察，精液中呈直線運(yùn)動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率。通常采用0-1.0十級評分，鮮精液的精子活力高于0.8為正常。3.4精子密度spermdensity單位體積精液中的精子數(shù)，單位為億/mL，一般用精子密度測定儀或血球計數(shù)板進(jìn)行測定。3.5有效精子數(shù)totalmotilecount精液中呈直線前進(jìn)運(yùn)動的精子總數(shù)。3.6靜立反射standingreflex母豬發(fā)情時,接受其它母豬、試情公豬爬跨或人工壓背,表現(xiàn)出靜立不動的現(xiàn)象。DB5133/T97—202424采精公豬選擇4.1初選應(yīng)參照GB/T32763的規(guī)定，選擇60日齡，已剪獠牙，體重達(dá)5㎏～7㎏，符合藏豬品種特征的健康公豬。要求被毛黑色，嘴筒長，耳小直立，體軀較長，背腰較平直，四肢結(jié)實(shí)，蹄質(zhì)堅實(shí)直立，陰莖和雙睪生長發(fā)育正常，無傳染性疾病。4.2終選初選公豬飼養(yǎng)至180日齡時，選擇性情膽大溫順、體重≥25kg且符合種用標(biāo)準(zhǔn)的個體。5采精公豬調(diào)教5.1前期調(diào)教5.1.1對終選的采精公豬進(jìn)行分圈飼養(yǎng)。5.1.2固定責(zé)任心強(qiáng)的調(diào)教人員，專人飼喂。5.1.3刷拭豬頸、背、腹部，撫摸陰莖部，2次/日；趕豬鍛煉，1次/日，建立情感聯(lián)系和信任。5.2后期調(diào)教5.2.1假母臺調(diào)教采精5.2.1.1選擇合適的假母臺假母臺高度應(yīng)可調(diào)節(jié)，前端高度40cm～60cm，長度80cm～100cm，傾斜度10°~20°。5.2.1.2爬跨調(diào)教爬跨調(diào)教具體操作如下：a)將采精公豬趕至采精圈，地面鋪上防滑墊，保持環(huán)境安靜和適宜光線強(qiáng)度。讓采精公豬自由熟悉假母臺，同時觀察性欲表現(xiàn)。b)在假母臺鋪上涂抹發(fā)情母豬尿液、陰道分泌物或噴灑公豬誘情劑。c)將帶有發(fā)情母豬尿液的毛巾放在公豬鼻子前方，誘導(dǎo)公豬走向假母臺前端，此時緩慢提升毛巾高度，使公豬抬頭，并爬跨假母臺。d)調(diào)教頻率及時間，3次/周～5次/周，10min/次～15min/次。5.2.1.3采精調(diào)教采精調(diào)教具體操作如下：a)調(diào)教人員先擠凈包皮內(nèi)積尿，再用0.1%高錳酸鉀溶液和溫水（或濕紙巾）依次清洗外陰部，最后雙手使用75%酒精噴霧消毒。b)調(diào)教人員蹲在左（右）后側(cè)，對陰莖鞘進(jìn)行按摩，刺激采精公豬性欲。c)采精公豬陰莖充分勃起后，調(diào)教人員用虎口夾緊陰莖，小拇指刺激龜頭，隨著陰莖的抽動，緩緩拉出陰莖25cm～30cm，待采精公豬完全靜立后，在抓穩(wěn)的同時對陰莖進(jìn)行施壓，刺激采精公豬射精。d)調(diào)教頻率及時間，1次/周～2次/周，10min/次～15min/次。DB5133/T97—20243e)調(diào)教好的公豬不可再進(jìn)行自然交配。針對假母臺調(diào)教失敗的公豬，可在發(fā)情母豬背上調(diào)教采精。5.2.2發(fā)情母豬背上調(diào)教采精5.2.2.1選擇適合的發(fā)情母豬選擇的發(fā)情母豬和采精公豬體型大小要基本一致，靜立反射良好。5.2.2.2消毒調(diào)教人員先使用0.1%高錳酸鉀溶液對發(fā)情母豬整個臀部進(jìn)行消毒后用溫水沖洗；再擠凈采精公豬包皮內(nèi)積尿，用0.1%高錳酸鉀溶液和溫水（或濕紙巾）依次清洗公豬外陰部；最后調(diào)教人員雙手使用75%酒精噴霧消毒。5.2.2.3采精調(diào)教將發(fā)情母豬和采精公豬趕至采精圈，地面鋪上防滑墊，保持環(huán)境安靜和適宜光線強(qiáng)度。待采精公豬爬跨發(fā)情母豬，陰莖充分勃起后，調(diào)教人員應(yīng)快速用虎口夾緊陰莖，隨著陰莖的抽動，緩緩拉出陰莖25cm～30cm，待采精公豬完全靜立后，在抓穩(wěn)的同時對陰莖進(jìn)行施壓，刺激采精公豬射精。5.2.2.4調(diào)教頻率及時間2次/周～3次/周，5min/次～10min/次。5.2.3采精公豬調(diào)教管理每次采精調(diào)教后，補(bǔ)充優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料或1個～2個雞蛋；觀察采精公豬體況，加強(qiáng)運(yùn)動鍛煉；采精公豬的疫病防控應(yīng)符合DB5133/T7的規(guī)定。6采精公豬采精6.1采精前準(zhǔn)備6.1.1溫度調(diào)試采精室和精液檢測室溫度調(diào)至25℃~27℃。6.1.2設(shè)備調(diào)試開啟載物臺恒溫板，將恒溫采精杯、水浴鍋、恒溫干燥箱調(diào)至37℃,精液恒溫貯存箱調(diào)至17℃;調(diào)節(jié)雙顯顯微鏡和精子密度檢測儀；使用實(shí)驗(yàn)室蒸餾水機(jī)備足蒸餾水，提前30min用稀釋粉配好所需量的稀釋液，將量杯、精液稀釋分裝杯、精液瓶、玻棒等放入恒溫干燥箱中預(yù)熱至37℃。在恒溫采精杯中套好集精袋和三層過濾紙。6.2采精6.2.1采精員先擠凈采精公豬包皮內(nèi)積尿，再用0.1%高錳酸鉀溶液和溫水（或濕紙巾）依次清洗外陰部，最后雙手使用75%酒精噴霧消毒。使用發(fā)情母豬背上采精的，還應(yīng)對發(fā)情母豬臀部進(jìn)行清洗消6.2.2采精員站在公豬左（右）后側(cè)，左（右）手持恒溫采精杯，右（左）手戴無屑乳膠手套，按壓DB5133/T97—20244陰莖部5s～10s后，待其伸出陰莖，緊握陰莖螺旋狀龜頭，緩緩拉出陰莖25cm～30cm，輕輕施壓促其射精，收集精液。6.2.3射出的初段精液精膠過多，不收集，待射出乳白色精液時開始收集至射精結(jié)束。6.3采精頻率不超過2次/周，間隔3日及以上。6.4加強(qiáng)管理每次采精后，補(bǔ)充優(yōu)質(zhì)公豬蛋白質(zhì)飼料或1個～2個雞蛋。平常加強(qiáng)運(yùn)動。7精液質(zhì)量檢測7.1采精量采集精液后，將集精袋從恒溫采精杯中取出，放入精液稀釋分裝杯中讀取刻度。藏豬公豬采精量為50mL～200mL。7.2顏色正常精液為乳白色或淡灰色，有異常顏色如帶有綠色、淡紅色、紅褐色的應(yīng)棄用。7.3氣味藏豬精液帶有較濃腥味，有其他異常氣味應(yīng)棄用。7.4精子活力和精子畸形率用玻棒蘸取原精液，滴于載玻片上，用雙顯顯微鏡觀察。藏豬精液精子活力為0.8～0.95。精子畸形率<10%。7.5精子密度用精子密度儀測定，藏豬精液精子密度為1.4億/mL～2.4億/mL。8精液的稀釋、分裝、儲存、運(yùn)輸8.1精液稀釋8.1.1計算有效精子數(shù)、稀釋份數(shù)、稀釋液添加量根據(jù)采精量、精子活力、精子密度計算有效精子數(shù)、稀釋份數(shù)、稀釋液添加量。輸精每頭每次按≥20億個有效精子數(shù)，輸精量30mL～40mL進(jìn)行操作。式中：S——有效精子數(shù)，億；V——采精量，mL；D——精子密度，億/mL；DB5133/T97—20245M——精子活力。式中：N——稀釋份數(shù)；S——有效精子數(shù)，億。式中：L——稀釋液添加量，mL；N——稀釋份數(shù)；V——采精量,mL。8.1.2稀釋操作8.1.2.1精液的稀釋應(yīng)保證在采集后5min～10min以內(nèi)進(jìn)行。8.1.2.2精準(zhǔn)測量精液及稀釋液溫度，保證等溫稀釋，以精液溫度為參照，兩者溫差≤1℃。8.1.2.3將稀釋液沿精液稀釋分裝杯壁緩緩加入精液中，輕輕晃動混合均勻，不能攪拌和劇烈搖晃。8.1.2.4檢測稀釋后精液的精子活力，保證活力達(dá)到≥0.8。8.2精液分裝及儲存8.2.1取出對應(yīng)數(shù)量的一次性精液瓶，與精液同溫。8.2.2傾斜精液瓶45°,沿瓶壁緩緩倒入30mL～40mL，排出瓶內(nèi)空氣后，加蓋密封。8.2.3精液瓶上貼上標(biāo)簽，標(biāo)明公豬品種、耳號、采精日期、保存有效時間等信息。8.2.4分裝好的精液用干毛巾包裹，放至17℃精液恒溫貯存箱內(nèi)。8.2.5隔10h～12h對分裝好的精液緩慢搖晃均勻，避免精子沉淀死亡。8.3精液運(yùn)輸8.3.1場內(nèi)運(yùn)輸將精液從恒溫儲存箱中取出，放置于水浴鍋中升溫至37℃后進(jìn)行鏡檢，保證精子活力達(dá)到≥0.8。將符合要求的精液放入墊有干毛巾的保溫箱中進(jìn)行運(yùn)輸。8.3.2場外運(yùn)輸將精液從恒溫儲存箱中取出，放入17℃恒溫運(yùn)輸箱中，盡量避免強(qiáng)烈震動或碰撞。8.4記錄填寫采精記錄表，應(yīng)符合NY/T820規(guī)定。采精記錄表參見附錄A。9人工輸精9.1母豬發(fā)情鑒定每日早上10點(diǎn)～11點(diǎn)、下午3點(diǎn)～4點(diǎn)，飼喂后的母豬用試情公豬進(jìn)行試情。發(fā)情初期，發(fā)情母豬爬跨其它母豬或接受其它母豬爬跨，試情公豬試情時，母豬接受爬跨但不靜立；發(fā)情旺期，母豬表現(xiàn)DB5133/T97—20246為食欲降低，晝夜嘶叫，經(jīng)產(chǎn)母豬外陰紅腫，有少量粘液；初配母豬陰戶無明顯表現(xiàn)；試情公豬試情時，母豬弓腰豎耳，呈現(xiàn)交配姿勢，出現(xiàn)明顯的“靜立反射”。9.2精液質(zhì)量檢查從17℃恒溫精液儲存箱中取出精液瓶，放置于水浴鍋中升溫至37℃后進(jìn)行鏡檢，精子活力應(yīng)≥0.8。9.3輸精程序9.3.1將發(fā)情母豬趕至輸精限位欄中，輸精人員先對母豬外陰部、尾根部及臀部周圍進(jìn)行清理消毒，再用濕紙巾擦凈母豬外陰部，最后進(jìn)行雙手消毒。9.3.2在一次性輸精管頭部涂抹上潤滑劑，斜向上45°角插入母豬陰道至子宮頸，此時，輕輕向后拉動輸精管能感到明顯阻力，根據(jù)母豬體型，插入深度約15cm～30cm。9.3.3將精液瓶連接到輸精管上，精液瓶高于陰戶20cm以上，輕輕多次擠壓精液瓶排出輸精管內(nèi)空氣。觀察精液輸入情況，若無流動，則需檢查輸精管是否插入子宮頸，空氣是否排凈。9.3.4撫摸母豬外陰，按壓母豬背部及背側(cè)部，刺激母豬子宮收縮，自主吸收精液。9.3.5輸精時間一般為5min～10min，輸精完畢后，折疊輸精管，打開輸精瓶蓋，將輸精瓶套于折疊處1min～2min，觀察有無倒流，若無，則緩緩拉出輸精管；若倒流量大，需要再次輸精。9.4輸精間隔及次數(shù)發(fā)情母豬出現(xiàn)明顯“靜立反射”后，應(yīng)立即準(zhǔn)備，進(jìn)行第1次輸精。在上午發(fā)情的，5h～8h后在下午進(jìn)行第2次輸精，若次日上午母豬“靜立反射”仍明顯，需進(jìn)行第3次輸精；在下午發(fā)情的，次日上午9點(diǎn)～10點(diǎn)進(jìn)行第2次輸精，若下午母豬仍有明顯“靜立反射”，需進(jìn)行第3次輸精。9.5輸精量根據(jù)母豬體型大小，控制在30mL/頭·次～40mL/頭·次。10人工授精后母豬管理10.1飼養(yǎng)管理母豬進(jìn)行人工授精后，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)管理，分妊娠階段提供相應(yīng)配合飼料；根據(jù)母豬預(yù)產(chǎn)期，