(19)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局(71)申請(qǐng)人中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所地址100700北京市東城區(qū)東直門內(nèi)南小街16號(hào)A61KA61KA61KA61P(72)發(fā)明人楊健何一燕毛宏理羅志強(qiáng)白瑞斌欒美琪陳于童周印(74)專利代理機(jī)構(gòu)北京高沃律師事務(wù)所11569專利代理師王雪A61K9/1271(2025.01)A61K31/4188(2006.01)A61K31/015(2006.01)A61K47/54(2017.01)(54)發(fā)明名稱一種脂質(zhì)體及其應(yīng)用、一種脂質(zhì)體制劑及其制備方法和應(yīng)用本發(fā)明屬于脂質(zhì)體藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脂質(zhì)體及其應(yīng)用、一種脂質(zhì)體制劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體膜上修飾有谷胱甘肽基團(tuán)和吲哚殘基。本發(fā)明提供的脂質(zhì)體具有優(yōu)異的跨膜運(yùn)輸能力，高效的穿透血腦屏障并能夠被膠質(zhì)瘤細(xì)胞攝取，同時(shí)表現(xiàn)出優(yōu)良的內(nèi)涵體逃逸特性，從而有效解決了替莫唑胺治療膠質(zhì)瘤過(guò)程中血腦屏障透過(guò)率低的技術(shù)問題。同時(shí)，本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體制劑，提高了遞送效率與抗腫瘤療效，對(duì)人/鼠源膠質(zhì)瘤細(xì)胞均有抑制作用，展現(xiàn)出廣泛的臨床025μgl分g/mL21.一種脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體膜上修飾有谷胱甘肽基團(tuán)和吲哚殘基。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體包括以下質(zhì)量份數(shù)的制備原所述吲哚-油胺由油胺和吲哚-2-羧酸經(jīng)縮合反應(yīng)制得。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體，其特征在于，所述磷脂包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂和合成磷脂中的一種或多種；所述DSPE-PEG-谷胱甘肽的制備原料包括聚乙二醇，所述聚乙二醇的重均分子量為4.權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)體在制備腦靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用。5.一種脂質(zhì)體制劑，其特征在于，包括權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)體；還包括包封在所述脂質(zhì)體的囊泡中的藥物分子，所述藥物分子包括谷氨酸修飾的替莫唑胺和欖香烯。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的脂質(zhì)體制劑，其特征在于，所述谷氨酸修飾的替莫唑胺包括以下化學(xué)結(jié)構(gòu)中的一種或多種：7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的脂質(zhì)體制劑，其特征在于，所述欖香烯包括α-欖香烯、β-欖香8.根據(jù)權(quán)利要求5~7任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)體制劑，其特征在于，所述脂質(zhì)體制劑包括以下質(zhì)量份數(shù)的制備原料：吲哚-油胺2~8份、DSPE-PEG-谷胱甘肽20~40份、谷氨酸修飾的替莫唑胺20~200份、欖香烯10~40份、磷脂80~120份和膽固醇2~6份。9.權(quán)利要求5~8任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)體制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將所述的脂質(zhì)體制劑的制備原料溶解于有機(jī)溶劑中，得到藥物混合溶液；將所述藥物混合溶液去除有機(jī)溶劑，然后用水化介質(zhì)進(jìn)行水化，得到所述脂質(zhì)體制劑。10.權(quán)利要求5~8任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)體制劑或權(quán)利要求9所述的制備方法制備得到的脂質(zhì)體制劑在制備腦靶向抗癌藥物中的應(yīng)用。3技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于脂質(zhì)體藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脂質(zhì)體及其應(yīng)用、一種脂質(zhì)體制劑及其制備方法和應(yīng)用。背景技術(shù)[0002]腦膠質(zhì)瘤(GBM)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的原發(fā)性惡性腫瘤之一，具有高度的侵襲性和異質(zhì)性。由于其快速增殖、擴(kuò)散性生長(zhǎng)，并且與正常腦組織的邊界不清，導(dǎo)致治療困屏障的存在使得許多化療藥物難以有效到達(dá)腫瘤區(qū)域，從而限制了治療的效果。[0003]替莫唑胺(TMZ)作為治療膠質(zhì)瘤的標(biāo)準(zhǔn)化療藥物，主要通過(guò)烷基化DNA發(fā)揮抗腫瘤作用。盡管替莫唑胺能夠延長(zhǎng)部分患者的生存期，但其療效受到血腦屏障的低滲透性限制，降低了其臨床效果。發(fā)明內(nèi)容[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種脂質(zhì)體及其應(yīng)用、一種脂質(zhì)體制劑及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體具有優(yōu)異的跨膜運(yùn)輸能力，能夠高效的穿透血腦屏障并被膠質(zhì)瘤細(xì)胞攝取，同時(shí)表現(xiàn)出優(yōu)良的內(nèi)涵體逃逸特性，從而有效解決了替莫唑胺治療膠質(zhì)瘤過(guò)程中血腦屏障透過(guò)率低的技術(shù)問題。[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體膜上修飾有谷胱甘肽基團(tuán)和吲哚殘基。[0006]優(yōu)選的，所述脂質(zhì)體包括以下質(zhì)量份數(shù)的制備所述吲哚-油胺由油胺和吲哚-2-羧酸經(jīng)縮合反應(yīng)制得。[0007]優(yōu)選的，所述磷脂包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂和合成磷脂中的一種或多種；所述DSPE-PEG-谷胱甘肽的制備原料包括聚乙二醇，所述聚乙二醇的重均分子量為1000~10000Da。[0008]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體在制備腦靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用。[0009]本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體制劑，包括上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體；還包括包封在所述脂質(zhì)體的囊泡中的藥物分子，所述藥物分子包括谷氨酸修飾的替莫唑胺和欖香烯。[0010]優(yōu)選的，所述谷氨酸修飾的替莫唑胺包括以下化學(xué)結(jié)構(gòu)中的一種或多種：4[0012]優(yōu)選的，所述脂質(zhì)體制劑包括以下質(zhì)量份數(shù)的制備原料：吲哚-油胺2~8份、DSPE-PEG-谷胱甘肽20~40份、谷氨酸修飾的替莫唑胺20~200份、欖香烯10~40份、磷脂80~120份和膽固醇2~6份。[0013]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體制劑的制備方法，包括以下步驟：將所述的脂質(zhì)體制劑的制備原料溶解于有機(jī)溶劑中，得到藥物混合溶液；將所述藥物混合溶液去除有機(jī)溶劑，然后用水化介質(zhì)進(jìn)行水化，得到所述脂質(zhì)體[0014]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體制劑或上述技術(shù)方案所述的制備方法制備得到的脂質(zhì)體制劑在制備腦靶向抗癌藥物中的應(yīng)用。[0015]本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體膜上修飾有谷胱甘肽基團(tuán)和吲哚殘基。本發(fā)明采用谷胱甘肽基團(tuán)和吲哚殘基作為脂質(zhì)體膜上的雙靶向基團(tuán)，其中，谷胱甘肽基團(tuán)能夠通過(guò)谷胱甘肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白使脂質(zhì)體更好地進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)部：吲哚殘基能夠幫助小分子藥物(替莫唑胺和欖香烯)更高效率地通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而透過(guò)血腦屏障，且吲哚殘基能夠破壞腫瘤細(xì)胞膜的膜結(jié)構(gòu)，在進(jìn)入溶酶體后插入溶酶體脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)，破壞溶酶體，增強(qiáng)溶酶體逃逸。本發(fā)明中吲哚殘基和谷胱甘肽基團(tuán)的協(xié)同作用，進(jìn)一步增強(qiáng)了內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的內(nèi)吞，增強(qiáng)了脂質(zhì)體的跨膜入胞能力。綜上，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體具有優(yōu)異的跨膜運(yùn)輸能力，能夠高效的穿透血腦屏障并被膠質(zhì)瘤細(xì)胞攝取，同時(shí)表現(xiàn)出優(yōu)良的內(nèi)涵體逃逸特性，從而有效解決了替莫唑胺治療膠質(zhì)瘤過(guò)程中血腦屏障透過(guò)率低的技術(shù)問題。[0016]本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體制劑，包括上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體；還包括包封在所述脂質(zhì)體的囊泡中的藥物分子，所述藥物分子包括谷氨酸修飾的替莫唑胺和欖香烯。本發(fā)明通過(guò)吲哚和谷胱甘肽修飾的協(xié)同作用，脂質(zhì)體制劑具備高效膠質(zhì)瘤靶向、高效穿透血腦屏障、跨膜運(yùn)輸和內(nèi)涵體逃逸的特性。另一方面，本發(fā)明通過(guò)谷氨酸修飾的替莫唑胺前藥與欖香烯復(fù)配，具有高效協(xié)同作用，降低了兩者聯(lián)用治療的IC?0;還有效降低了替莫唑胺的毒副作用和欖香烯的刺激性，同時(shí)增強(qiáng)了治療效果和安全性，顯著促進(jìn)了靶向效率，顯著降低腫瘤細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，同時(shí)提高了遞送效率與抗腫瘤療效，對(duì)人/鼠源膠質(zhì)瘤細(xì)胞均有抑制作用，展現(xiàn)出廣泛的臨床應(yīng)用潛力，為膠質(zhì)瘤患者提供了一種高效、低毒的新型治療方案。[0017]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體制劑的制備方法。本發(fā)明采用薄膜水化5附圖說(shuō)明[0018]圖1為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑粒徑分布圖；圖2為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑血液相容性評(píng)價(jià)；圖3為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑抗非特異性蛋白吸附評(píng)價(jià)；圖4為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑對(duì)U-87MG(人腦星型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)與GL261(小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)的細(xì)胞毒性評(píng)估；圖5為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑的細(xì)胞攝取效率；圖6為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑在U-87MG(人腦星型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)與GL261(小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)中的溶酶體逃逸效率；圖7為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑在bEnd.3(小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞)中的溶酶體逃逸效率；圖8為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑的體外血腦屏障滲透性能評(píng)價(jià)；圖9為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑的體內(nèi)分布成像與離體成像；圖10為本發(fā)明制得的負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的腦靶向脂質(zhì)體制劑體內(nèi)治療腦膠質(zhì)瘤的效果；圖11為DSPE-PEG-谷胱甘肽的合成路線；圖12為吲哚-油胺的合成路線。具體實(shí)施方式[0019]本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體膜上修飾有谷胱甘肽基團(tuán)和吲哚殘基。[0020]在本發(fā)明中，所述谷胱甘肽基團(tuán)來(lái)自于DSPE-PEG-谷胱甘肽的谷胱甘肽基團(tuán)。在本發(fā)明中，所述吲哚殘基來(lái)自于吲哚-油胺中的吲哚基團(tuán)。所述吲哚-油胺由油胺和吲哚-2-羧酸經(jīng)縮合反應(yīng)制得。[0021]在本發(fā)明中，若無(wú)特殊說(shuō)明，所有制備原料/組分均為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的市售產(chǎn)品。[0022]在本發(fā)明中，吲哚殘基能夠破壞細(xì)胞膜的完整性，使吲哚功能化的脂質(zhì)體制劑更好的進(jìn)入胞內(nèi)，實(shí)現(xiàn)小分子藥物(欖香烯和替莫唑胺)的遞送。[0023]在本發(fā)明中，所述脂質(zhì)體優(yōu)選包括以下質(zhì)量份數(shù)的制備原料：所述吲哚-油胺由油胺和吲哚-2-羧酸經(jīng)縮合反應(yīng)制得。[0024]以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體的制備原料包括吲哚-油胺2~8份，優(yōu)選為3~7份，更優(yōu)選為4~6份，實(shí)施例中可以為5.4份。所述吲哚-油胺由油胺和吲哚-2-羧酸經(jīng)縮合反應(yīng)制得。6[0025]在本發(fā)明中，所述吲哚-油胺的制備方法優(yōu)選包括以下步驟：將吲哚-2-羧酸、1-羥基苯并三唑(HOBT)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺(EDC)和第一有機(jī)溶劑混合進(jìn)行活化，得到活化溶液；將所述活化溶液、油胺和第二有機(jī)溶劑混合進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到所述吲哚-油胺。在本發(fā)明中，所述吲哚-2-羧酸的所述油胺的摩爾比優(yōu)選為1.5:1。所述HOBT與所述油胺的摩爾比優(yōu)選為1:1、所述EDC與所述油胺的摩爾比優(yōu)選為1:1。所述第一有機(jī)溶劑優(yōu)選為無(wú)水二氯甲烷。所述活化在保護(hù)氣體氣氛中進(jìn)行，所述保護(hù)氣體優(yōu)選為氮?dú)狻Ｋ龌罨瘍?yōu)選在冰[0027]在本發(fā)明的實(shí)施例中，所述吲哚-油胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：[0028]得到活化溶液后，本發(fā)明將所述活化溶液、油胺和第二有機(jī)溶劑混合進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到所述吲哚-油胺。在本發(fā)明中，所述第二有機(jī)溶劑優(yōu)選為無(wú)水將所述油胺溶解于所述第二有機(jī)溶劑中，得到油胺溶液，然后將所述活化溶液和所述油胺溶液混合。所述縮合反應(yīng)優(yōu)選在常溫條件下進(jìn)行。所述縮合反應(yīng)的時(shí)間優(yōu)選為48h。本發(fā)明優(yōu)選通過(guò)TLC檢測(cè)所述縮合反應(yīng)中產(chǎn)物的生成。所述縮合反應(yīng)結(jié)果后，本發(fā)明優(yōu)選將所述所得縮合反應(yīng)液除去有機(jī)溶劑，得到混合物；將所述混合物重溶于三氯甲烷中，依次采用碳酸氫鹽水溶液和飽和氯化鈉水溶液萃取，得到萃取有機(jī)相；將所述萃取有機(jī)相濃縮后進(jìn)行柱層析分離，得到所述吲哚-油胺。所述除去有機(jī)溶劑的方法優(yōu)選為旋蒸。所述碳酸氫鈉水溶液的質(zhì)量含量?jī)?yōu)選為5%。所述濃縮優(yōu)選為旋蒸濃縮。所述柱層析分離使用的流動(dòng)相油煙味正己烷和乙酸乙酯的混合溶劑，所述正己烷和乙酸乙酯的混合溶劑中正己烷和乙酸乙酯的體積比優(yōu)選為4:1。[0029]以所述吲哚-油胺的質(zhì)量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體的制備原料包括DSPE-PEG-谷胱甘肽20~40份，優(yōu)選為25~35份，實(shí)施例中可以為31.4份。在本發(fā)明中，所述DSPE-PEG-谷胱甘肽的制備原料優(yōu)選包括磷酸乙醇胺磷脂(DSPE)、聚乙二醇(PEG)和谷胱甘肽。制備所述DSPE-PEG-谷胱甘肽使用的PEG的重均分子量?jī)?yōu)選為1000~10000Da。[0030]在本發(fā)明中，所述DSPE-PEG-谷胱甘肽優(yōu)選通過(guò)michael型加成反應(yīng)合成。在本發(fā)明的具體實(shí)施例中，所述DSPE-PEG-谷胱甘肽按照“OptimisationofglutathioneconjugationtoliposomesquantifiedwithavalidateReginald-Opara,DarrenSvirskis,SimonJ.O'Carroll,SreevalsanSreJustinM.Dean,ZimeiWu,InternationalJournalofPha118451)公開的具體方法制備。[0031]作為本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例，所述DSPE-PEG-谷胱甘肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：7[0032]以所述吲哚-油胺的質(zhì)量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體的制備原料包括磷脂80~120份，優(yōu)選為90~100份，更優(yōu)選為95~105份，實(shí)施例中可以為10磷脂優(yōu)選包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂和合成磷脂中的一種或多種。所述氫化卵磷脂優(yōu)選包括氫化大豆卵磷脂和/或氫化蛋黃卵磷脂。所述合成磷脂優(yōu)選包括合成卵磷脂。所述合成磷脂即采用化學(xué)方法合成的磷脂。[0033]以所述吲哚-油胺的質(zhì)量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體的制備原料包括膽固[0034]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體的制備方法，優(yōu)選包括以下步驟：將所述的脂質(zhì)體的制備原料溶解于第三有機(jī)溶劑中，得到混合溶液；將所述混合溶液去除有機(jī)溶劑，然后用水化介質(zhì)進(jìn)行水化，得到所述脂質(zhì)體。[0035]本發(fā)明將所述脂質(zhì)體的制備原料溶解于第三有機(jī)溶劑中，得到混合溶液。在本發(fā)明中，所述第三有機(jī)溶劑優(yōu)選包括三氯甲烷(氯仿)、乙醇、二氯甲烷和甲醇中的一種或多種。所述吲哚-油胺和所述第三有機(jī)溶劑的用量比優(yōu)選為(2~8)mg:100mL。[0036]得到混合溶液后，本發(fā)明將所述混合溶液去除有機(jī)溶劑，然后用水化介質(zhì)進(jìn)行水化，得到所述脂質(zhì)體。在本發(fā)明中，所述去除有機(jī)溶劑的方法優(yōu)選為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。所述混合溶液去除有機(jī)溶劑后得到脂質(zhì)膜。本發(fā)明優(yōu)選將所述脂質(zhì)膜和所述水化介質(zhì)混合進(jìn)行水化。所述水化介質(zhì)優(yōu)選包括水、生理鹽水和pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液中的一種或多種，所述水優(yōu)選為去離子水。所述水化優(yōu)選在攪拌的條件下進(jìn)行，所述水化的溫度優(yōu)選為50℃,時(shí)間優(yōu)選為0.5~1h所述水化結(jié)束后得到水化后溶液；本發(fā)明優(yōu)選還包括：將所述水化后溶液超聲分散后過(guò)濾，得到所述脂質(zhì)體。所述超聲分散優(yōu)選使用探頭超聲儀進(jìn)行。所述超聲分散[0037]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體在制備腦靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用。在本發(fā)明中，所述腦靶向脂質(zhì)體制劑優(yōu)選包括治療腦膠質(zhì)瘤的靶向藥物。[0038]本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體制劑，包括上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體；還包括包封在所述脂質(zhì)體的囊泡中的藥物分子，所述藥物分子包括谷氨酸修飾的替莫唑胺和欖香烯。[0039]本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑包括上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體。[0040]本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑還包括包封在所述脂質(zhì)體囊泡中的藥物分子，所述藥物分子包括谷氨酸修飾的替莫唑胺(Glu-TMZ)和欖香烯。[0041]在本發(fā)明中，所述谷氨酸修飾的替莫唑胺優(yōu)選包括谷氨酸-替莫唑胺、二代樹枝狀谷氨酸-替莫唑胺和三代樹枝狀谷氨酸-替莫唑胺中的一種或多種。[0042]在本發(fā)明中，所述谷氨酸-替莫唑胺、所述二代樹枝狀谷氨酸-替莫唑胺、所述三代樹枝狀谷氨酸-替莫唑胺的化合結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)式如下：8[0043]在本發(fā)明中，所述谷氨酸修飾的替莫唑胺優(yōu)選由谷氨酸制備原料和羧基化替莫唑胺(TMZ-COOH)經(jīng)縮合反應(yīng)制得。所述谷氨酸制備原料優(yōu)選包括以胺基曝露，羧基被保護(hù)的谷氨酸、二代樹枝狀谷氨酸或三代樹枝狀谷氨酸。所述羧基化替莫唑胺的羧基和所述谷氨酸制備原料的胺基的摩爾比優(yōu)選為2:1。[0044]在本發(fā)明中，所述谷氨酸修飾的替莫唑胺的制備方法優(yōu)選包括以下步驟：和第四有機(jī)溶劑混合進(jìn)行活化，得到活化溶液；將所述活化溶液、谷氨酸制備原料和第五有機(jī)溶劑混合進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到所述谷氨酸修飾的替莫唑胺。發(fā)明中，所述羧基化替莫唑胺的羧基和所述谷氨酸制備原料的胺基的摩爾比優(yōu)選為2:1。所述HOBT與所述谷氨酸制備原料的摩爾比優(yōu)選為1:1、所述EDC與所述谷氨酸制備原料的摩爾比優(yōu)選為1:1。所述第四有機(jī)溶劑優(yōu)選為無(wú)水二氯甲烷和無(wú)水DMF。所述活化優(yōu)選在保護(hù)氣體氣氛中進(jìn)行，所述保護(hù)氣體優(yōu)選為氮?dú)?。所述活化?yōu)選在冰浴條件下進(jìn)行，所述活化的時(shí)[0046]得到活化溶液后，本發(fā)明將所述活化溶液、谷氨酸制備原料和第五有機(jī)溶劑混合進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到所述谷氨酸修飾的替莫唑胺。在本發(fā)明中，所述第五有機(jī)溶劑優(yōu)選為無(wú)水二氯甲烷。本發(fā)明優(yōu)選將所述谷氨酸制備原料溶解于所述第五有機(jī)溶劑中，得到谷氨酸制備原料溶液，然后將所述活化溶液和所述谷氨酸制備原料溶液混合。所述縮合反應(yīng)優(yōu)選在常溫條件下進(jìn)行。所述縮合反應(yīng)的時(shí)間優(yōu)選為15h.本發(fā)明優(yōu)選通過(guò)TLC檢測(cè)所述縮合反應(yīng)中產(chǎn)物的生成。所述縮合反應(yīng)結(jié)果后，本發(fā)明優(yōu)選將所述所得縮合反應(yīng)液除去有機(jī)溶劑，得到混合物；將所述混合物重溶于三氯甲烷中，依次采用飽和碳酸氫鹽水溶液、鹽酸和飽和氯化鈉水溶液萃取，得到萃取有機(jī)相；將所述萃取有機(jī)相濃縮后進(jìn)行柱層析分離，得到所述谷氨酸修飾的替莫唑胺。所述除去有機(jī)溶劑的方法優(yōu)選為旋蒸。所述鹽酸的摩爾濃度優(yōu)選為1mol/L。所述濃縮優(yōu)選為旋蒸濃縮。所述柱層析分離使用的流動(dòng)相優(yōu)選為二氯甲烷和甲醇的混合溶劑，所述二氯甲烷和甲醇的混合溶劑中二氯甲烷和甲醇的體積比優(yōu)選為20:1。的一種或多種。欖香烯(E1E)是一種天然倍半萜類化合物，具有廣泛的抗腫瘤活性。它通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制血管生成和干擾細(xì)胞周期等機(jī)制，抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。[0048]在本發(fā)明中，所述脂質(zhì)體制劑優(yōu)選包括以下質(zhì)量份數(shù)的制備原料：吲哚-油胺2~8份、DSPE-PEG-谷胱甘肽20~40份、谷氨酸修飾的替莫唑胺20~200份、欖香烯10~40份、磷脂80~120份和膽固醇2~6份。9[0049]以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑的制備原料包括吲哚-油胺2~8份，優(yōu)選為3~7份，更優(yōu)選為4~6份，實(shí)施例中可以為5.4份。所述吲哚-油胺由油胺和吲哚-2-羧酸經(jīng)縮合反應(yīng)制得。[0050]以所述吲哚-油胺的質(zhì)量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑的制備原料包括DSPE-PEG-谷胱甘肽20~40份，優(yōu)選為25~35份，實(shí)施例中可以為31.4份。在本發(fā)明中，所述DSPE-PEG-谷胱甘肽中PEG的重均分子量?jī)?yōu)選為1000~10000Da。在本發(fā)明中，所述DSPE-PEG-谷胱甘肽中PEG的重均分子量即制備所述DSPE-PEG-谷胱甘肽時(shí)使用的PEG的重均分子[0051]在本發(fā)明中，所述DSPE-PEG-谷胱甘肽優(yōu)選通過(guò)michael型加成反應(yīng)合成。在本發(fā)明的具體實(shí)施例中，所述DSPE-PEG-谷胱甘肽的合成路線如圖11所示。所述DSPE-PEG-谷胱甘肽按照“OptimisationofglutathioneconjugationtoliposomesquantifiedwithCarroll,SreevalsanSreebhavan,JustinJournalofPharmaceutics567(2019)118451)公開的方法制備。[0052]以所述吲哚-油胺的質(zhì)量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑的制備原料包括磷脂80~120份，優(yōu)選為90~100份，更優(yōu)選為95~105份，實(shí)施例中可以為100份。在本發(fā)明中，所述磷脂優(yōu)選包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂和合成磷脂中的一種或多種。所述氫化卵磷脂優(yōu)選包括氫化大豆卵磷脂和/或氫化蛋黃卵磷脂。所述合成磷脂優(yōu)選包括合成卵磷脂。所述合成磷脂即采用化學(xué)方法合成的磷脂。[0053]以所述吲哚-油胺的質(zhì)量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑的制備原料包括[0054]以所述吲哚-油胺的質(zhì)量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑的制備原料包括谷氨酸修飾的替莫唑胺20~200份，優(yōu)選為21~190份，更優(yōu)選為22~190份，實(shí)施例中可以為[0055]以所述吲哚-油胺的質(zhì)量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑的制備原料包括欖香烯10~40份，優(yōu)選為12~38份，更優(yōu)選為15~36份。實(shí)施例中可以為15.6份或35.2份。[0056]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體制劑的制備方法，包括以下步驟：將所述的脂質(zhì)體制劑的制備原料溶解于第六有機(jī)溶劑中，得到藥物混合溶液；將所述藥物混合溶液去除有機(jī)溶劑，然后用水化介質(zhì)進(jìn)行水化，得到所述脂質(zhì)體[0057]本發(fā)明將所述的脂質(zhì)體制劑的制備原料溶解于第六有機(jī)溶劑中，得到藥物混合溶所述吲哚-油胺和所述第三有機(jī)溶劑的用量比優(yōu)選為(2~8)mg:100mL。所述脂質(zhì)體制劑的制備原料的總質(zhì)量與所述第六有機(jī)溶劑溶劑的用量?jī)?yōu)選為(1~3)mg:1mL。[0058]得到藥物混合溶液后，本發(fā)明將所述藥物混合溶液去除有機(jī)溶劑，然后用水化介質(zhì)進(jìn)行水化，得到所述脂質(zhì)體制劑。在本發(fā)明中，所述去除有機(jī)溶劑的方法優(yōu)選為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。所述藥物混合溶液去除有機(jī)溶劑后得到藥物脂質(zhì)膜。本發(fā)明優(yōu)選將所述藥物脂質(zhì)膜和所述水化介質(zhì)混合進(jìn)行水化。所述水化介質(zhì)優(yōu)選包括水、生理鹽水和pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液中的一種或多種，所述水優(yōu)選為去離子水。所述水化優(yōu)選在攪拌的條件下進(jìn)行，所述水化的溫度優(yōu)選為45~50℃,時(shí)間優(yōu)選為0.5~1h。所述水化結(jié)束后得到水化后溶液；本發(fā)明優(yōu)選還包括：將所述水化后溶液超聲分散后過(guò)濾，得到所述脂質(zhì)體。所述超聲分散優(yōu)選使用探頭超聲儀進(jìn)行。所述超聲分散的條件優(yōu)選包括：超聲時(shí)間優(yōu)選為20~40min、超聲5s,停止5s、超聲溫度≤70℃、超聲功率優(yōu)選為225~300W。所述過(guò)濾優(yōu)選包括依次使用0.45μm[0059]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述的脂質(zhì)體制劑或上述技術(shù)方案所述的制備方法制備得到的脂質(zhì)體制劑在制備腦靶向抗癌藥物中的應(yīng)用。[0060]在本發(fā)明中，所述腦靶向抗癌藥物優(yōu)選包括制備腦膠質(zhì)瘤的靶向藥物。[0061]綜上，本發(fā)明利用吲哚殘基和谷胱甘肽基團(tuán)修飾脂質(zhì)膜，吲哚殘基和谷胱甘肽基團(tuán)具有靶向作用或促進(jìn)跨膜遞送的功能；同時(shí)本發(fā)明對(duì)脂質(zhì)體制備原料的種類進(jìn)行優(yōu)化，增強(qiáng)了脂質(zhì)體對(duì)膠質(zhì)瘤的靶向能力，從而提高所負(fù)載藥物穿透血腦屏障的效率。[0062]為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)地描述，但不能將它們理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。[0063]以下實(shí)施例以及說(shuō)明書附圖中使用的脂質(zhì)體簡(jiǎn)稱的具體說(shuō)明如表1所示。[0064]表1實(shí)施例與說(shuō)明書附圖中所用脂質(zhì)體簡(jiǎn)稱的具體說(shuō)明脂質(zhì)體簡(jiǎn)稱具體說(shuō)明負(fù)載了替莫唑胺前藥分子的吲哚和谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的未修飾脂質(zhì)體負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的吲哚修飾的脂質(zhì)體負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的谷胱甘肽修飾的脂質(zhì)體負(fù)載了DOX和替莫唑胺前藥分子的未修飾脂質(zhì)體負(fù)載了DOX和替莫唑胺前藥分子的吲哚修飾的脂質(zhì)體負(fù)載了DOX和替莫唑胺前藥分子的谷胱甘肽修飾的脂質(zhì)體負(fù)載了DOX和替莫唑胺前藥分子的吲哚與谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體負(fù)載了Di和替莫唑胺前藥分子的未修飾脂質(zhì)體負(fù)載了Di和替莫唑胺前藥分子的吲哚與谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體[0065]按照?qǐng)D12的合成路線，以下實(shí)施例中吲哚-油胺的制備方法具體如下：以油胺和吲哚-2-羧酸為原料，油胺和吲哚-2-羧酸的投料摩爾當(dāng)量比為1:1.5。首圍、冰浴條件下活化30min,然后將油胺溶于無(wú)水二氯甲烷加入上述溶液，常溫下反應(yīng)48h,通過(guò)TLC監(jiān)測(cè)產(chǎn)物的生成，反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除二氯甲烷，然后將混合物重溶析分離(流動(dòng)相為V正己烷：V乙酸乙酯=4:1)得到吲哚-油胺分子。[0066]以下實(shí)施例中谷氨酸修飾的替莫唑胺前藥分子的制備方法具體如下：以胺基曝露，羧基被保護(hù)的谷氨酸、二代樹枝狀谷氨酸或三代樹枝狀谷氨酸和羧基化替莫唑胺(TMZ-COOH)為原料，以羧基化替莫唑胺的羧基和谷氨酸原料(胺基曝露，羧基被保護(hù)的谷氨酸、二代樹枝狀谷氨酸或三代樹枝狀谷氨酸)的胺基的摩爾當(dāng)量比為2:1進(jìn)行枝狀谷氨酸或三代樹枝狀谷氨酸等摩爾當(dāng)量)溶于無(wú)水二氯甲烷和無(wú)水DMF的混合溶劑，在氮?dú)夥諊?、冰浴條件下活化30min,然后將胺基曝露，羧基被保護(hù)的谷氨酸、二代樹枝狀谷氨酸或三代樹枝狀谷氨酸溶于無(wú)水二氯甲烷加入上述溶液常溫下反應(yīng)15h,通過(guò)TLC監(jiān)測(cè)產(chǎn)物的生成，反應(yīng)結(jié)束后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，然后將混合物重溶于三氯甲烷用飽和醇=20:1)得到谷氨酸修飾的替莫唑胺前藥分子。[0067]實(shí)施例1本實(shí)施例提供一種負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的吲哚和谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體制劑，制備方法具體包括：枝狀谷氨酸修飾的替莫唑胺(即二代樹枝狀谷氨酸-替莫唑胺)2.33mg、β-欖香烯1.56mg、大豆卵磷脂10mg和膽固醇0.4mg,將上述組分加入三氯甲烷中，得到溶液A;步驟2:將溶液A通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑旋轉(zhuǎn)蒸干，形成脂質(zhì)膜；將pH=7.4的磷酸鹽緩沖液加入溶液A所在容器，60℃水浴旋轉(zhuǎn)水化0.5~時(shí)間30min、超聲5s停止5s、上限溫度70℃、超聲功率為225W,依次通過(guò)0.4μm水系濾膜過(guò)濾，得到負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的吲哚和谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體(簡(jiǎn)稱為PCIGT@β-ELE)。[0068]對(duì)比例1與實(shí)施例1的區(qū)別為不含β-欖香烯，制得負(fù)載了替莫唑胺前藥分子的吲哚和谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體(簡(jiǎn)稱為PCIGT)。[0069]對(duì)比例2與實(shí)施例1的區(qū)別為不含DSPE-PEG-谷胱甘肽，制得負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的吲哚修飾的脂質(zhì)體(簡(jiǎn)稱為PCIT@β-ELE)。[0070]對(duì)比例3與實(shí)施例1的區(qū)別為不含吲哚-油胺，制得負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的谷胱甘肽修飾的脂質(zhì)體(簡(jiǎn)稱為PCGT@β-ELE)。[0071]對(duì)比例4與實(shí)施例1的區(qū)別為不含吲哚-油胺和DSPE-PEG-谷胱甘肽，制得負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的脂質(zhì)體(簡(jiǎn)稱為PCT@β-ELE)。[0072]實(shí)施例2本實(shí)施例提供一種負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的吲哚和谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體制劑，制備方法具體包括：枝狀谷氨酸修飾的替莫唑胺(即三代樹枝狀谷氨酸-替莫唑胺)8.78mg、β-欖香烯1.56mg、大豆卵磷脂10mg和膽固醇0.4mg,上述組分加入三氯甲烷中，得到溶液A;步驟2:將溶液A通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑旋轉(zhuǎn)蒸干，形成脂質(zhì)膜；將pH=7.4的磷酸鹽緩沖液加入溶液A所在容器，50℃水浴旋轉(zhuǎn)水化0.5~時(shí)間30min、超聲5s停止5s、上限溫度70℃、超聲功率為225W,依次通過(guò)0.45μm和0.22μm水系濾膜過(guò)濾，得到負(fù)載了欖香烯和替莫唑胺前藥分子的吲哚和谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體。與實(shí)施例2的區(qū)別為β-欖香烯用量3.52mg、三代樹枝狀谷氨酸修飾的替莫唑胺用[0074]實(shí)施例4[0075]實(shí)施例5與實(shí)施例2的區(qū)別為使用乙醇作為配置A溶液的溶劑。[0076]實(shí)施例6與實(shí)施例2的區(qū)別為使用去離子水作為水化介質(zhì)。[0077]結(jié)果測(cè)試采用激光動(dòng)態(tài)光散射儀檢測(cè)各實(shí)施例和對(duì)比例制得的脂質(zhì)體制劑的粒徑大小及[0078]表2實(shí)施例和對(duì)比例中腦靶向脂質(zhì)體的粒徑大小及其分布和ζ-電位結(jié)果粒徑(nm)電位(mV)實(shí)施例1對(duì)比例1對(duì)比例2對(duì)比例3實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5實(shí)施例6[0079]圖1為實(shí)施例1、對(duì)比例1制得的脂質(zhì)體制劑的粒徑分布圖，從表2和圖1可以看出，本發(fā)明制得的脂質(zhì)體制劑粒徑均低于200nm、粒徑分布均勻。本發(fā)明所制備的脂質(zhì)體制劑[0080]實(shí)施例7:溶血性評(píng)價(jià)取C57小鼠的新鮮全血并置于肝素鈉化采血管中，然后1500r/min離心5~10min,除去離心管中的上清液，加入PBS緩沖液洗滌紅細(xì)胞，并再次離心直至上清液澄清為止。最后用PBS緩沖液將紅細(xì)胞重懸為2%(w/v)的溶液。取實(shí)施例1所述方法制備的脂質(zhì)體制劑，述不同濃度的脂質(zhì)體制劑0.2mL與等體積的2%紅細(xì)胞懸液混合后，于37℃在恒溫?fù)u床中孵育1h,10000rpm離心10min,取上清液用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)540nm處檢測(cè)吸光度A。將1%曲拉通(聚乙二醇辛基苯基醚，TritonX-100)與紅細(xì)胞共孵育的結(jié)果作為陽(yáng)性對(duì)照，即溶血率為100%;以PBS與紅細(xì)胞共同孵育的結(jié)果作為陰性對(duì)照，即溶血率為0%。[0081]各組脂質(zhì)體的溶血率計(jì)算公式為：溶血率=(A-A[0082]結(jié)果如圖2所示，在25~400μg/mL的實(shí)施例1制備的脂質(zhì)體制劑濃度范圍內(nèi)，脂質(zhì)體制劑均沒有引起明顯的血紅蛋白釋放，當(dāng)脂質(zhì)體制劑濃度為400μg/mL時(shí)，溶血率僅為5.23±0.31%,說(shuō)明實(shí)施例1制備的脂質(zhì)體制劑具有良好的血液相容性。[0083]實(shí)施例8:抗非特異性蛋白吸附測(cè)定取實(shí)施例1、對(duì)比例1所述方法制得的脂質(zhì)體制劑分別與牛血清白蛋白(BSA)、組蛋為0.1mg/mL,BSA與Histone濃度為0.1mg/mL。2小時(shí)后取出混合液在10000g轉(zhuǎn)速下離心15min,沉淀被材料吸附的BSA與Histone。用紫外可見近紅外分光光度計(jì)測(cè)定上清液中牛血清白蛋白與組蛋白濃度，測(cè)定其在280nm與275nm波長(zhǎng)處的最大吸光度。然后，根據(jù)BSA與Histone的標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線計(jì)算了BSA與Histone在材料樣品上的吸附量。每次測(cè)量測(cè)三次，結(jié)果取平均值。[0084]結(jié)果如圖3所示，實(shí)施例1所述方法制備的脂質(zhì)體制劑對(duì)BSA的吸附量為17.25±7.06%,對(duì)Histone的吸附量為20.05±9.05%,這是因?yàn)锽SA的等電點(diǎn)為5.4,Histone等電點(diǎn)為10.8,在pH=7.4的溶液條件下BSA帶負(fù)電，Histone帶正電，所以ζ-電體制劑對(duì)BSA的吸附量較低，對(duì)兩種蛋白的吸附量均在21%以下，說(shuō)明材料具有良好的抗蛋白吸附性能。[0085]實(shí)施例9:細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)通過(guò)MTT法，考察腦靶向脂質(zhì)體制劑對(duì)U-87MG(人腦星型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)與GL261(小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)的毒性。將U-87MG和GL261細(xì)胞以5×103個(gè)/孔的濃度分別接莫唑胺前藥組(TMZ-G2E)、二代樹枝狀谷氨酸修飾的替莫唑胺前藥與β-欖香烯混合給藥組(β-ELE/TMZ-G2EMix),其中二代樹枝狀谷氨酸修飾的替莫唑胺前藥與β-欖香烯混合給藥向細(xì)胞孔內(nèi)加入DMSO(100μL),置于酶標(biāo)儀中震蕩均勻并于570nm處測(cè)定其吸光度值0D品。以不加藥處理的細(xì)胞孔的OD值作為空白組，以不加細(xì)胞液并且不加藥的培養(yǎng)基組的OD值作為背景組。計(jì)算給藥組的細(xì)胞存活率公式為：存活率=(0D-0D背景)/(OD-0D背)×[0086]結(jié)果如圖4所示，替莫唑胺單獨(dú)給藥組與β-欖香烯單獨(dú)給藥組對(duì)U-87MG細(xì)胞的IC??值分別為102.54μg/mL、115.42μg/mL,實(shí)施例1所制備的腦靶向脂質(zhì)體對(duì)U-87MG細(xì)胞的IC?0值為50.02μg/mL,僅分別為替莫唑胺與β-欖香烯單獨(dú)給藥組的0.49與0.43倍；替莫唑胺與β-欖香烯單獨(dú)給藥組對(duì)GL261細(xì)例1所制得的腦靶向脂質(zhì)體對(duì)GL261細(xì)胞的IC??值為53.25μg/mL,僅分別為替莫唑胺與β-欖香烯單獨(dú)給藥組的0.49與0.60倍。結(jié)果表明實(shí)施例1所制得的腦靶向脂質(zhì)體對(duì)U-87MG細(xì)胞與GL261細(xì)胞都具有明顯的抑制能力，隨著給藥量的增加，對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制能力逐漸增[0087]實(shí)施例10:細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)按實(shí)施例1、對(duì)比例2、對(duì)比例3、對(duì)比例4中脂質(zhì)體制劑的制備方法，將欖香烯替換為具有紅色熒光的阿霉素(多柔比星，DOX),以實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)體制劑在細(xì)胞內(nèi)的示蹤。將U-87MG細(xì)胞和GL261細(xì)胞以2×10?個(gè)/皿分別接種于玻底皿，并于37℃、5%CO?條件下培養(yǎng)24h,棄去舊培養(yǎng)基，將上述4種DOX脂質(zhì)體制劑以及DOX用DMEM完全培養(yǎng)基稀釋后加入玻底皿中，DOX的濃度為10μg/mL,于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育2或4h,隨后棄去含藥培養(yǎng)基，加入提前用DMEM完全培養(yǎng)基稀釋的Hoechst33342,Hoechst33342的終濃度為10μg/mL,置于培養(yǎng)箱強(qiáng)度均大于4h,這是因?yàn)樵?h時(shí)，脂質(zhì)體制劑尚未被細(xì)胞充分內(nèi)化。DOX組觀察到一定的熒光強(qiáng)度，這可能是因?yàn)橛坞xDOX是一種小分子，可以被動(dòng)地穿過(guò)細(xì)胞膜擴(kuò)散到細(xì)胞中；負(fù)載了DOX的脂質(zhì)體制劑組(PCT@DOX)只觀察到微弱的熒光，這可能是因?yàn)閷?duì)比例4方法所制備的PCT脂質(zhì)體的ζ-電位呈負(fù)電位，與細(xì)胞膜的負(fù)電荷相排斥；負(fù)載了DOX的吲哚修飾的脂質(zhì)體制劑組(PCIT@DOX)、負(fù)載了DOX的谷胱甘肽修飾的脂質(zhì)體制劑組(PCGT@DOX)均觀察到了更強(qiáng)的熒光，這可能是因?yàn)镻CIT@DOX脂質(zhì)體制劑因?yàn)檫胚釟埢拇嬖?，可以破壞?xì)胞膜的膜結(jié)構(gòu)。PCGT@DOX脂質(zhì)體制劑因?yàn)楣入赘孰幕鶊F(tuán)的存在，可以通過(guò)谷胱甘肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白更好地進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)部；負(fù)載了DOX的吲哚和谷胱甘肽修飾的腦靶向脂質(zhì)體制劑組(PCIGT@DOX)觀察到了最強(qiáng)的熒光，這是因?yàn)檫胚岷凸入赘孰氖鼋Y(jié)果顯示了實(shí)施例1方法所制得的腦靶向脂質(zhì)體具有優(yōu)異的腦膠質(zhì)瘤靶向能力。[0089]實(shí)施例11:溶酶體逃逸實(shí)驗(yàn)按實(shí)施例1、對(duì)比例2、對(duì)比例3、對(duì)比例4中腦靶向脂質(zhì)體制劑的制備方法，將欖香別接種于玻底皿中，于37℃、5%CO?條件下培養(yǎng)24h,棄去舊培養(yǎng)基，將上述4種D0X脂質(zhì)體制劑以及DOX用DMEM完全培養(yǎng)基稀釋后加入皿中，DOX的濃度為10μg/mL,于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育2h或4h,棄去含藥培養(yǎng)基，加入提前用DMEM完全培養(yǎng)基稀釋的Hoechst33342、Lyso-TrackerGreen,Hoec為50nM,置于培養(yǎng)箱中孵育20min,棄去舊培養(yǎng)基，并用PBS洗滌3次，置于激光共聚焦顯微鏡下觀察。[0090]結(jié)果如圖6所示，在U-87MG細(xì)胞和GL26內(nèi)的綠色熒光強(qiáng)度變化不大，表明游離DOX很難從溶酶體中逃逸出來(lái)；PCT@DOX組因?yàn)楹茈y光，這是因?yàn)檫胚釟埢谶M(jìn)入溶酶體后插入溶酶體脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)，破壞溶酶體觀察到較低的綠色熒光，這可能是因?yàn)橹|(zhì)體與生物膜的基本結(jié)構(gòu)類似，所以可以通過(guò)膜融合的方式進(jìn)行溶酶體逃逸。結(jié)果表明實(shí)施例1方法所制備的腦靶向脂質(zhì)體具有優(yōu)異的溶酶體逃逸性能。[0091]實(shí)施例12:腦內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)性能實(shí)驗(yàn)通過(guò)小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞(bEnd.3)對(duì)腦靶向脂質(zhì)體的內(nèi)吞實(shí)驗(yàn)，評(píng)估腦靶向脂質(zhì)體穿越血腦屏障進(jìn)入腦組織的能力。按實(shí)施例1、對(duì)比例2、對(duì)比例3、對(duì)比例4中腦靶向脂質(zhì)體制劑的制備方法，將欖香烯替換為DOX,制備DOX標(biāo)記的腦靶向脂質(zhì)體制劑。將bEnd.3細(xì)胞以2×10?個(gè)/皿接種于玻底皿中，于37℃、5%CO?條件下培養(yǎng)24h,棄去舊培養(yǎng)基，將上述4種DOX脂質(zhì)體制劑以及純DOX用DMEM完全培養(yǎng)基稀釋后加入玻底皿中，DOX的濃度為10μg/mL,于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育2h或4h,棄去含藥培養(yǎng)基，加入提前用DMEM完全培養(yǎng)基稀釋好的Green的終濃度為50nM,置于培養(yǎng)箱中孵育20min,棄去舊培養(yǎng)基，并用PBS洗滌3次，置于激光共聚焦顯微鏡下觀察。[0092]結(jié)果如圖7所示，在bEnd.3細(xì)胞中，對(duì)于每個(gè)對(duì)照組，2h的紅色熒光強(qiáng)度均大于4h,這是因?yàn)樵?h時(shí)，脂質(zhì)體制劑尚未被內(nèi)皮細(xì)胞充分內(nèi)化。因?yàn)檫胚釟埢凸入赘孰幕鶊F(tuán)DOX組均觀察到較單獨(dú)DOX組更強(qiáng)的熒光，證明吲哚殘基和谷胱甘肽基團(tuán)修飾過(guò)的脂質(zhì)體制察到最強(qiáng)的紅色熒光，這是因?yàn)殡p靶向基團(tuán)的存在進(jìn)一步增強(qiáng)了內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)腦靶向脂質(zhì)體的內(nèi)吞。結(jié)果顯示，實(shí)施例1所制備的腦靶向脂質(zhì)體制劑具有優(yōu)異的血腦屏障透過(guò)能力。[0093]實(shí)施例13:建立體外血腦屏障模型，評(píng)估脂質(zhì)體的穿透血腦屏障的性能按實(shí)施例1、對(duì)比例2、對(duì)比例3、對(duì)比例4中腦靶向脂質(zhì)體制劑的制備方法，將欖香烯替換為D0X,制備DOX標(biāo)記的腦靶向脂質(zhì)體。將5×10?個(gè)bEnd.3細(xì)胞制成200μL培養(yǎng)基混懸液，將其注射到24孔Transwell的上腔室進(jìn)行單層培養(yǎng)。隨后，將2×10?個(gè)GL261細(xì)胞接種在800μL培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基注射到Transwell的下腔室中。當(dāng)單分子膜的