1、潔凈區(qū)臭氧滅菌驗(yàn)證及方案一、簡述臭氧有很高的能量，很不穩(wěn)定，在常溫，常壓下，臭氧結(jié)構(gòu)易變，很快自行分解為氧和單個氧原子。后者具有極強(qiáng)的氧化作用，臭氧的半衰期為2225min。生成臭氧的原料主要是空氣和電能。臭氧殺菌機(jī)制：（1）作用于細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞膜的通透性增加，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外流，使細(xì)胞失去活動；（2）使細(xì)胞活動必需的酶失去活性；（3）破壞細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或使其失去功能。臭氧殺滅病毒是通過直接破壞核糖核酸或脫氧核酸完成的。而殺滅細(xì)菌、霉菌類微生物則是臭氧首先作用與細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的構(gòu)成收到損傷，導(dǎo)致新陳代謝障礙并抑制其生長，臭氧繼續(xù)滲透破壞膜內(nèi)組織，直到死亡。不同潔凈室可根據(jù)其體積，選用適當(dāng)?shù)某?/p>

2、氧發(fā)生器，將主機(jī)設(shè)置在 HVAC系統(tǒng)的送、回風(fēng)主管道中或凈化空調(diào)箱的中效過濾器后端的合適位置，電源控制系統(tǒng)置于機(jī)房內(nèi)。消毒時，關(guān)閉新風(fēng)進(jìn)口（或關(guān)閉約90%的新風(fēng)進(jìn)口閥門）和回風(fēng)對外排放閥門，是整個被消毒的潔凈室空氣通過凈化系統(tǒng)風(fēng)道形成內(nèi)循環(huán)狀態(tài)。每天開機(jī)11.5h進(jìn)行空氣滅菌；替代化學(xué)藥劑熏蒸消毒及設(shè)備表面滅菌需開機(jī)22.5h。10萬級別的潔凈區(qū)，臭氧投加濃度為10MG/M3。臭氧衰減率為0.375。按空間的大小投加量計(jì)算：臭氧發(fā)生器產(chǎn)量=體積*10/0.375按這計(jì)算出來的臭氧發(fā)生器產(chǎn)量，基本的能達(dá)到10萬級別潔凈區(qū)的潔凈標(biāo)準(zhǔn)。二、目的制劑的生產(chǎn)過程主要在潔凈區(qū)完成，潔凈區(qū)用臭氧滅菌的效果直

3、接影響到產(chǎn)品的質(zhì)量，為確認(rèn)臭氧滅菌的可靠性,用臭氧滅菌取代甲醛熏蒸滅菌，減少對員工身體健康的損害，特制訂本驗(yàn)證方案進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證過程應(yīng)嚴(yán)格按照本方案規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行,若因特殊原因確需變更時,應(yīng)填寫驗(yàn)證方案變更申請及批準(zhǔn)書,報驗(yàn)證小組批準(zhǔn)。三、工藝原理圖 將臭氧氣體引到送風(fēng)主管道中，利用HVAC系統(tǒng)中凈化風(fēng)機(jī)產(chǎn)生的壓力風(fēng)源，擴(kuò)散至所控制的整個潔凈區(qū)域。四、驗(yàn)證計(jì)劃 (1)、潔凈區(qū)空氣消毒方法原理：1.1 是采用臭氧發(fā)生器產(chǎn)生臭氧后，通過 HVAC 系統(tǒng)機(jī)組的正壓送風(fēng)段和送風(fēng)管送入潔凈區(qū)，再通過回風(fēng)管回到機(jī)組，組成一個閉合的空氣循環(huán)系統(tǒng)，控制消毒過程中的循環(huán)時間或密閉時間，從而使一定濃度的臭氧氣體在

4、規(guī)定的時間內(nèi)，殺滅潔凈區(qū)內(nèi)的微生物。1.2 為了保證消毒效果，應(yīng)確?？諝庀緯r，HVAC 系統(tǒng)運(yùn)行或消毒劑氣體循環(huán)時，外界新鮮空氣不得進(jìn)入 HVAC 系統(tǒng)內(nèi)，以防止消毒劑氣體濃度下降，達(dá)不到規(guī)定的消毒濃度。 (2)、空氣滅菌機(jī)理及特點(diǎn)： 2.1 臭氧滅菌機(jī)理及特點(diǎn)： 2.1.1 臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧和單個氧原子，后者具有很強(qiáng)的活性，對細(xì)菌有極強(qiáng)的氧化作用，可氧化分解細(xì)菌內(nèi)部氧化葡萄所必需的酶，從而破壞其細(xì)胞膜，將它殺死。多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普遍氧分子，不存在任何有害殘留物，故稱無污染消毒劑；2.1.2 臭氧是一種廣譜殺菌劑，可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒

5、、真菌等，并可破壞肉毒桿菌毒素。但其具有腐蝕性，臭氧為強(qiáng)氧化劑,可損壞多種物品,濃度越高對物品損害越重，故在利用臭氧消毒時，應(yīng)對潔凈區(qū)內(nèi)容易被氧化或加速老化的物品（如塑料、橡膠）、產(chǎn)品等進(jìn)行防護(hù)。2.1.3 臭氧熏蒸消毒時，相對濕度高則效果好，低則效果差，對干燥菌體幾乎無殺菌作用。 2.1.4 空氣中臭氧濃度達(dá).01-0.02mg/L 時即可嗅知，濃度達(dá)到 1mg/L 時，可引起呼吸加速、變、胸悶等癥狀，在.5-5mg/L 時，可引起脈搏加速，疲倦、頭痛，停留小時可發(fā)生肺氣腫，以至死亡，故臭氧消毒時，嚴(yán)禁潔凈區(qū)內(nèi)具有人員在操作。 2.1.5 臭氧穩(wěn)定性極差，常溫下即可自行分解為氧，臭氧發(fā)生器停

6、止發(fā)生后，HVAC 系統(tǒng)繼續(xù)運(yùn)行通風(fēng)分鐘，使臭氧完全分解后，人員才可進(jìn)入潔凈區(qū)進(jìn)行操作。 2.1.6消毒技術(shù)規(guī)范中規(guī)定，對空氣中浮游菌，臭氧滅菌濃度為 2-4PPM，對物體表面的沉降菌，臭氧的滅菌濃度為 10-15PPM，臭氧 1H 的的衰退率約為 62.25%。應(yīng)根據(jù)等消毒的空間體積（V）、要求殺滅微生物的濃度（C）和臭氧 1H 的的衰退率確定臭氧發(fā)生器的發(fā)生量。公式為：W（臭氧發(fā)生量）=（CV）/（1-62.25%）mg/h。 (3)、消毒頻率： 3.1 10萬級潔凈區(qū)內(nèi)的空氣消毒，必須在下列情況下進(jìn)行: 3.1.1 每天消毒：潔凈室和 HVAC 系統(tǒng)日常消毒只采用臭氧消毒進(jìn)行，目的是消滅

7、空氣中的浮游菌； 3.1.2 每月定期消毒：潔凈室和 HVAC 系統(tǒng)每月消毒采用甲醛和臭氧交替使用，防止產(chǎn)生耐藥菌株，目的是消滅環(huán)境中浮游菌和沉降菌； 3.1.3 環(huán)境監(jiān)控：當(dāng)潔凈區(qū)內(nèi)環(huán)境微生物檢測結(jié)果超標(biāo)時，按每月定期消毒執(zhí)行； 3.1.4 停產(chǎn)：潔凈區(qū)內(nèi)停產(chǎn)一周以上，生產(chǎn)前按每月定期消毒一次。 （4）、消毒設(shè)備及消毒劑： 4.1 酒精燈，36%的甲醛溶液； 4.2 臭氧發(fā)生器、臭氧； （5）、消毒方法： 5.1 消毒前準(zhǔn)備工作： 5.1.1 潔凈室內(nèi)應(yīng)進(jìn)行了全面的衛(wèi)生清潔工作，包括廠房、設(shè)備、容器、清潔工具等； 5.1.2 潔凈室內(nèi)應(yīng)無中間體、半成品、原輔料的暴露存放及無操作人員； 5.1

8、.3 用潔凈抹布醮純化水擦拭設(shè)備、墻壁的外表面，用潔凈拖把醮飲用水擦抹地面，保持潔凈區(qū)濕潤； 5.1.4 關(guān)閉車間內(nèi)所有強(qiáng)排風(fēng)口，打開潔凈區(qū)內(nèi)傳遞窗內(nèi)側(cè)門； 5.1.5 關(guān)閉 HVAC 系統(tǒng)的新風(fēng)口閥和全開總回風(fēng)閥門。 5.1.6 臭氧和甲醛消毒前的準(zhǔn)備工作相同，但利用甲醛時，應(yīng)對與產(chǎn)品直接接觸的設(shè)備、容器等內(nèi)表面進(jìn)行防護(hù)，以防止甲醛集合附著在其表面，而臭氧可不必考慮。 5.2 臭氧消毒方法： 5.2.1 HVAC 系統(tǒng)正常運(yùn)行后,接通臭氧發(fā)生器電源，電源指示燈亮，電壓表顯示電壓為220V； 5.3.1 將臭氧發(fā)生器按紐旋至“手動”位時,啟動臭氧發(fā)生器(A、B)消毒按紐，電流表顯示工作電流 3

9、.6A，同時指示燈亮，臭氧發(fā)生器開始工作，記錄開始消毒時間； 5.3.2 消毒時間：臭氧每天消毒時間為 11.5 小時（消滅空氣中的浮游菌），每月定期消毒時間為 22.5 小時（消滅環(huán)境中浮游菌和沉降菌）。 5.3.3 日常消毒或每月定期消毒在規(guī)定消毒時間結(jié)束后，關(guān)閉臭氧發(fā)生器啟動按紐，關(guān)閉總電源，臭氧發(fā)生器停止工作。 5.3.4 臭氧消毒結(jié)束后，潔凈區(qū)內(nèi)需人員進(jìn)行操作時，HVAC 系統(tǒng)應(yīng)繼續(xù)運(yùn)行 30min,再打開工藝排風(fēng)機(jī)和新風(fēng)閥補(bǔ)充新風(fēng)，機(jī)組繼續(xù)運(yùn)行 30min 后，使?jié)崈魠^(qū)內(nèi)臭氧完全分解后，人員方可進(jìn)入潔凈區(qū)。 5.3.5 臭氧消毒結(jié)束后，潔凈區(qū)內(nèi)如不需人員進(jìn)行操作（如當(dāng)天生產(chǎn)結(jié)束后消

10、毒），可直接關(guān)閉 HVAC 系統(tǒng)風(fēng)機(jī)，第二天 HVAC 系統(tǒng)運(yùn)行達(dá)到自凈時間（40min）后，人員可直接進(jìn)入潔凈區(qū)操作。 五、驗(yàn)證方案 5.1 日常臭氧滅菌 5.1.1滅菌周期：3天。 5.1.2 滅菌時間 5.1.2.1 1小時 5.1.2.2 1.5小時 5.1.2.3 2小時 5.1.3 滅菌后檢測(每個時間連續(xù)做三個周期的檢測)5.1.3.1 檢查指標(biāo)5.1.3.1.1 檢測沉降菌5.1.3.1.2生物指示劑進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，生物指示劑菌種選用枯草芽孢桿菌，在使用測定前要測定其初期菌數(shù)，應(yīng)不少于10個。在消毒滅菌前，將裝有生物指示劑表面皿置于被測房間內(nèi)的中央地面，滅菌前打開表皿，滅菌

11、結(jié)束后，回收生物指示劑放入硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中，在37下培養(yǎng)3天。5.1.3.2 認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn): 5.1.3.2.1 沉降菌：100級，沉降菌1個/皿、1萬級，沉降菌3個/皿、10萬級，沉降菌10個/皿5.1.3.2.2 生物指示劑：應(yīng)無菌生長 5.1.4 沉降菌、生物指示劑檢測記錄見驗(yàn)證實(shí)施報告 5.2 大消毒 5.2.1滅菌周期：半個月。 5.2.2 滅菌時間 5.2.2.1 2小時 5.2.2.2 2.5小時 5.2.2.3 3小時 5.2.3 滅菌后檢測(每個時間連續(xù)做三個周期的檢測)5.2.3.1 檢查指標(biāo)5.2.3.1.1 檢測沉降菌5.2.3.1.2生物指示劑進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)性試驗(yàn) 生

12、物指示劑菌種選用枯草芽孢桿菌，在使用測定前要測定其初期菌數(shù)，應(yīng)不少于10個。在消毒滅菌前，將裝有生物指示劑表面皿置于被測房間內(nèi)的中央地面，滅菌前打開表皿，滅菌結(jié)束后，回收生物指示劑放入硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中，在37下培養(yǎng)3天5.2.3.2 認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn): 5.2.3.2.1 沉降菌：100級，沉降菌1個/皿、1萬級，沉降菌3個/皿、10萬級，沉降菌10個/皿5.2.3.2.2 生物指示劑：應(yīng)無菌生長 5.2.4 沉降菌、生物指示劑檢測記錄見驗(yàn)證實(shí)施報告5.3 擬訂再驗(yàn)證方案周期： 當(dāng)滅菌時間、滅菌設(shè)備發(fā)生變化，或是沉降菌定期監(jiān)控的數(shù)據(jù)有負(fù)面趨勢的情況下，應(yīng)按照前期驗(yàn)證采用的方法對臭氧滅菌進(jìn)行再驗(yàn)證

13、，或根據(jù)實(shí)際情況修補(bǔ)驗(yàn)證方案后進(jìn)行再驗(yàn)證，以確認(rèn)滅菌效果。5.4 驗(yàn)證結(jié)果總評定：5.4.1 質(zhì)保部負(fù)責(zé)收集各項(xiàng)驗(yàn)證，試驗(yàn)結(jié)果報驗(yàn)證小組。驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)對驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行評審，做出驗(yàn)證結(jié)論，發(fā)放證書，并對驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行評審填入“驗(yàn)證結(jié)果完整性總評價記錄表” ,其內(nèi)容包括： 5.4.1.1 驗(yàn)證結(jié)果是否有遺漏? 5.4.1.2 驗(yàn)證實(shí)施過程中對驗(yàn)證方案有無修改,修改原因、依據(jù)、是否經(jīng)過批準(zhǔn)？ 5.4.1.3 驗(yàn)證記錄是否完整？ 5.4.1.4 試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求?偏差及對偏差的說明是否合理?是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)? 5.4.1.5 偏差及對偏差的說明是否合理?是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)? 5.4.

14、2 驗(yàn)證結(jié)果總評價與會簽: 5.4.2.1總評價： 5.4.2.2會簽6驗(yàn)證方案評價及最終批準(zhǔn)： 6.1驗(yàn)證方案評價： 6.2驗(yàn)證方案最終批準(zhǔn)：六、驗(yàn)證原始記錄 沉降菌檢測記錄（日常滅菌） 滅菌日期 滅菌時間 沉降菌 檢測日期 檢測人2010-10-14 1小時1.5小時2小時 15 2010-10-14 鄧XX2010-10-15 10 2010-10-15 梁XX2010-10-16 8 2010-10-16 林XX 綜合評價 該滅菌基本符合要求 確 認(rèn) QA：羅XX日期：2010-10-17 驗(yàn)證小組：楊XX日期：2010-10-17 沉降菌檢測記錄（大消毒） 滅菌日期 滅菌時間 沉降菌

15、 檢測日期 檢測人2010-10-18 2小時2.5小時3小時 8 2010-10-18 楊XX2010-10-19 5 2010-10-19 張XX2010-10-20 3 2010-10-20 張XX 綜合評價 該滅菌基本上符合10000級的要求 確 認(rèn) QA：朱XX日期：2010-10-21 驗(yàn)證小組：諸XX日期：2010-10-21 生物指示劑檢測記錄（大消毒） 滅菌日期 菌落數(shù) 檢測日期 檢測人2010-10-22 5 2010-10-22 鄧XX2010-10-23 4 2010-10-23 梁XX2010-10-24 3 2010-10-24 林XX 綜合評價 該滅菌基本符合要求

16、 確 認(rèn) QC：羅XX日期：2010-10-25 驗(yàn)證小組：楊XX日期：2010-10-25驗(yàn)證報告項(xiàng) 目 結(jié)果分析與評價 結(jié) 論 沉降菌檢查 將安裝在風(fēng)機(jī)送風(fēng)口的臭氧發(fā)生器打開,分別以30min、45min、60min、90min滅菌后取樣，其沉降菌均符合GMP要求。 合 格整體評價 根據(jù)驗(yàn)證試驗(yàn)，我公司輸液車間決定采用抽樣滅菌30 min消毒，消毒效果經(jīng)驗(yàn)證達(dá)到預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)。報告審核人： 林XX 日期：2010-11-4驗(yàn)證總結(jié) 臭氧滅菌早被科學(xué)家研究，國家有關(guān)行業(yè)做過肯定和推薦應(yīng)用，但臭氧滅菌在藥品生產(chǎn)環(huán)境中的應(yīng)用才是近幾年逐漸被廣泛使用。 臭氧消毒的特點(diǎn)臭氧消毒滅菌方法與常規(guī)消毒滅菌方法相

17、比具有以下特點(diǎn)：（1）高效性：臭氧消毒不需要其他任何輔助材料和添加劑。消毒進(jìn)行時臭氧發(fā)生裝置產(chǎn)生一定量的臭氧，在相對密封的環(huán)境下，擴(kuò)散均勻，包容性、通透性好，克服了紫外線殺菌存在的消毒死角的問題，達(dá)到全方位、快速、高效的消毒殺菌目的。另外，由于它的滅菌廣譜，既可以殺滅細(xì)菌繁殖體、芽胞、病毒、真菌和原蟲孢體等多種微生物，還可以破壞肉毒桿菌和毒素及立克次氏體等，同時還具有很強(qiáng)的除霉、腥、臭等異味的功能。（2）高潔性：臭臭氧在環(huán)境中可自然分解為氧，這是臭氧作為消毒滅菌劑的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)。臭氧利用空氣中的氧氣產(chǎn)生的，消毒氧化過程中，多余的氧原子在30分鐘后又結(jié)合成為分子氧，不存在任何殘留物質(zhì)，解決了消毒劑消

18、毒時，殘留物的二次污染問題，同時省去了消毒結(jié)束后的再次清潔。（3）方便性：臭氧殺菌設(shè)備一般安裝在室內(nèi)或中央空調(diào)系統(tǒng)、空氣凈化系統(tǒng)中，或者是滅菌設(shè)備中?？筛鶕?jù)滅菌所需濃度及時間，自動設(shè)置臭氧滅菌設(shè)備的定時控制，操作使用方便。而甲醛、環(huán)氧乙酸熏蒸消毒時間長，而臭氧消毒可以天天定時開啟使用。（4）經(jīng)濟(jì)性：通過臭氧消毒滅菌在諸多制藥行業(yè)GMP中的應(yīng)用，以及醫(yī)療衛(wèi)生單位的使用及運(yùn)行比較，臭氧消毒方法與其他方法相比具有很大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。 經(jīng)過實(shí)踐應(yīng)用和總結(jié)臭氧在制藥行業(yè)應(yīng)用廣泛的有以下幾個方面： 1、潔凈區(qū)的消毒滅菌 我國衛(wèi)生部頒布的“毒技術(shù)規(guī)范”，對臭氧的殺菌作用，使用范圍及使用方法都有明確的規(guī)定?？隙顺粞跏且环N廣譜殺菌劑，可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽胞、病毒、真菌等，可破壞肉毒桿菌毒素。臭氧的殺菌速度較氯快。 在制藥廠潔凈區(qū)面積較大，幾乎都有中央空調(diào)凈化系統(tǒng)完成對各潔凈區(qū)的凈化消毒。傳統(tǒng)的消毒方法是用甲醛熏蒸，如上所說，甲醛熏蒸的弊病不少。用臭氧滅菌來代替是最簡便易行的好方法。其方法極為簡單，根據(jù)潔凈廠房空間的大小取選標(biāo)準(zhǔn)定型的臭氧發(fā)生器。然后將臭氧發(fā)生器直接放到空調(diào)凈化系統(tǒng)的風(fēng)道中，稱為內(nèi)置式臭氧發(fā)生器。臭氧隨著風(fēng)道的氣流送入各潔凈區(qū)，對潔凈區(qū)進(jìn)行空間消毒滅菌，剩余臭氧吸入風(fēng)口，由中央空調(diào)帶走。也可以將臭氧發(fā)生器放置在空調(diào)機(jī)組中，將臭氧打入中央空調(diào)的風(fēng)道中，然