1、課題2 月季的花藥培養(yǎng),（一）被子植物的花粉發(fā)育,花粉發(fā)育過(guò)程,F. 生殖細(xì)胞游離存在于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中；,G、H. 3細(xì)胞型花粉，生殖細(xì)胞分裂形成2個(gè)精子，游離于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞 的細(xì)胞質(zhì)中；,A.單核花粉粒（單核居中期） B.后期單核花粉粒（單核靠邊期） C.單核花粉粒的核分裂 D.二細(xì)胞花粉期，示營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞 E.生殖細(xì)胞開(kāi)始與花粉內(nèi)壁分離,花粉是由花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。 花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：四分體時(shí)期、單核期（單核居中期、單核靠邊期）、雙核期等階段。,A.花粉是花粉母細(xì)胞經(jīng)有絲分裂形成的 B.花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、單核期

2、和雙核期 C.花粉發(fā)育經(jīng)歷的四分體時(shí)期與減數(shù)分裂的四分體時(shí)期含義相同 D.花粉母細(xì)胞形成花粉粒中精子的過(guò)程是一系列減數(shù)分裂的過(guò)程,1.下列關(guān)于被子植物花粉的形成，說(shuō)法正確的是,B,2.下列關(guān)于被子植物花粉發(fā)育的說(shuō)法，不正確的是,A.被子植物精子的形成是直接減數(shù)分裂的結(jié)果 B.花粉粒是在花藥中的花粉囊中形成的 C.花粉粒在發(fā)育過(guò)程中，核先位于細(xì)胞中央，在移到細(xì)胞的一側(cè) D.被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、單核期和雙核期等階段,A,（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑,移栽,兩種途徑之間無(wú)明顯的界限，主要取決于培養(yǎng)基中的激素的種類及其濃度配比。,體細(xì)胞胚（胚狀體）： 在組織培養(yǎng)過(guò)程中，某些體細(xì)胞

3、在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過(guò)程亦與合子胚類似，被稱為體細(xì)胞胚（胚狀體）。,人工種子,人工種子是指通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得具有胚芽、胚根、胚軸等結(jié)構(gòu)的植物胚狀體，并且用適當(dāng)方法將胚狀體包裹起來(lái)，用以代替天然種子進(jìn)行繁殖的一種結(jié)構(gòu)。 人工種子的概念是1978年在加拿大舉行的第四屆國(guó)際植物組織、細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)議上首次提出來(lái)的。目前研制的人工種子，是由胚狀體、作為保護(hù)性外殼的人工種皮和提供發(fā)育所需營(yíng)養(yǎng)的人工胚乳三部分組成的。,1、材料的選擇 2、培養(yǎng)基的組成（MS培養(yǎng)基+不同比例的激素） 3、親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種密度等對(duì)誘導(dǎo)成功率都有一定影響,三、影響花藥培

4、養(yǎng)的因素,影響花藥培養(yǎng)的因素 1、材料的選擇： 不同種類植物的誘導(dǎo)成功率不同。 同一種植物，親本植株的生理狀況對(duì)誘導(dǎo)成功率有直接影響。 合適的花粉發(fā)育時(shí)期：花期早期時(shí)的花藥最佳。 選擇最合適的花粉發(fā)育時(shí)期 不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎； 不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開(kāi)始松動(dòng)，給材料消毒帶來(lái)困難困難； 挑選單核期花藥方法：應(yīng)當(dāng)選擇完全未開(kāi)放的花蕾，菌少，易消毒。,2、培養(yǎng)基的組成 花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基各成分中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的水平和配比起決定作用。 誘導(dǎo)愈傷組織或胚狀體產(chǎn)生的培養(yǎng)基：廣泛使用2，4-D、IAA和KT； 誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基常除去2，4-D而以IBA或BA等代之。

5、 3、其他因素： 材料的低溫處理、接種密度、培養(yǎng)的環(huán)境條件等對(duì)誘導(dǎo)的成功率都有一定的影響。,3.下列對(duì)產(chǎn)生花粉植株途徑的敘述，不正確的是,A.花粉通過(guò)胚狀體階段直接發(fā)育成植株 B.花粉先形成愈傷組織在誘導(dǎo)分化成植株 C.花粉經(jīng)脫分化形成胚狀體，在分化出根，然后誘導(dǎo)生芽 D.兩種途徑并無(wú)絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類和濃度比例,C,1.花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株。一般月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初到五月中旬，即月季的初花期。 選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。一般來(lái)說(shuō)，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高。 為了挑選到單核期的花藥

6、，通常 選擇完全未開(kāi)放的花蕾。,月季的花藥培養(yǎng),略微開(kāi)放的月季花蕾,完全未開(kāi)放的月季花蕾,培養(yǎng)基的種類因植物的不同而有所變化，如小麥中為N6，馬鈴薯、月季中為MS，油菜中為B5培養(yǎng)基,2.培養(yǎng)基的組成,培養(yǎng)基各成分中，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的水平和配比，常對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞的分裂、生長(zhǎng)和分化起決定作用。,月季花藥培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方 在1000mlMS培養(yǎng)基配方中添加 2，4D 0.4mg KT 0.2mg IAA 4mg 調(diào)節(jié)PH為5.8,一、材料的選取 二、材料的消毒 三、接種和培養(yǎng),選擇花藥時(shí)，一般通過(guò)鏡檢來(lái)確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。 最常用的方法有醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，

7、需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。,4.用醋酸洋紅法確定花粉發(fā)育時(shí)期的原理是,A.醋酸洋紅可使細(xì)胞全部著色 B.醋酸洋紅可使單核期的細(xì)胞著色 C.醋酸洋紅可使花粉細(xì)胞核著色 D.醋酸洋紅可進(jìn)入細(xì)胞顯示放射性標(biāo)記,C,1、花蕾用V/V為70%的酒精浸泡30秒 2、無(wú)菌水清洗 3、無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分 4、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中24分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液） 5、無(wú)菌水沖洗35次,用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可,滅菌后花蕾，要在無(wú)菌條件下除

8、去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上 在剝離花藥時(shí)，要盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織） 同時(shí)還要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。,通常每瓶接種花藥7-10個(gè)，溫度控制在25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 一般經(jīng)過(guò)20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開(kāi)裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。 將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。 如果花藥開(kāi)裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開(kāi)裂后盡快將幼小植株分開(kāi)，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開(kāi)。,在花藥培養(yǎng)中，特別是通過(guò)愈傷組織形成的花粉植株，常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化。（主要原因是營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合造成的。 ）故需對(duì)培養(yǎng)出來(lái)的植株作進(jìn)一步的鑒定和篩選。,植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的 相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無(wú)菌技術(shù)及接種操作等基本相同。 不同之處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾；花藥裂開(kāi)后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。,課題成果評(píng)價(jià),選材是否恰當(dāng) 選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。應(yīng)學(xué)會(huì)通過(guò)顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期