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文檔簡介
1、動物實驗:動物實驗是以實驗動物為人體替身進行各種生命科學(xué)實驗的過程。動物實驗操作技術(shù):是開展動物實驗的重要手段,在不同的研究領(lǐng)域有不同的目的和應(yīng)用。一些基本的操作技術(shù)是常見的,基本的動物實驗技術(shù)需要訓(xùn)練。內(nèi)容:動物實驗的準備、動物實驗的基本操作技術(shù)、動物實驗后的管理技術(shù)、應(yīng)注意的因素及影響動物實驗效果的因素等。YHZ,動物實驗結(jié)果,由陳敏-李,動物反應(yīng):R(A B C)DE,其中:R為實驗動物的總反應(yīng),A為實驗動物物種的共同反應(yīng),B為動物品種和品系的特異性反應(yīng),C為動物的個體反應(yīng)(個體差異),D為環(huán)境影響(包括實驗處理),E為實驗誤差(與實驗操作有關(guān)),YHZ,第1節(jié)動物實驗前的準備,1。動物
2、實驗準備的目的是明確的(課題設(shè)計):研究和申報動物實驗的新藥數(shù)據(jù)、設(shè)備、儀器和試劑、標準的實驗動物飼養(yǎng)設(shè)施、YHZ,2。與實驗動物相關(guān)的實驗動物制劑質(zhì)量合格證明,以及在運輸合適的飼料和墊料(高脂肪等特殊飼料)時各種因素對實驗動物的影響。并應(yīng)檢查運輸檢疫證明,證明動物需要隔離觀察(一般為37d適應(yīng)性觀察),YHZ,III。實驗動物分組隨機化原則:樣本具有良好的代表性,非實驗因素具有良好的平衡性,從而提高實驗數(shù)據(jù)的可比性和結(jié)論的說服力。完全隨機化總是最好的嗎?不一定。關(guān)鍵取決于樣本量。如果樣本量大,完全隨機化的效果是理想的;如果樣本量很小,有時完全隨機化的結(jié)果可能會有一些偏差。例如,24只小鼠,包
3、括16只雌性和8只雄性,通過完全隨機化被分成2組。有可能一組中的12只老鼠都是雌性,另一組中的4只雌性和8只雄性?!靶詣e”是一個重要的非實驗因素,嚴重影響實驗。此時,應(yīng)采用“分層隨機化”。隨機化的方法有很多,如“隨機數(shù)表”、“隨機排列表”或“計算機生成的偽隨機數(shù)表”。YHZ,實驗單位隨機分為三組:YHZ,YHZ,早期發(fā)情期可見大量有核上皮細胞,YHZ,發(fā)情期可見大量角質(zhì)化上皮細胞,YHZ,交配后大鼠陰道分泌物,精子可見,YHZ,四組。編號原則是先左后右,從前到后和從上到下。有時使用兩種顏色,一種用于十位數(shù),另一種用于一位數(shù)。常用的染料有3%5%苦味酸(黃色)、2%硝酸銀溶液(棕色)、0.5%中
4、性品紅溶液(紅色)和煤焦油酒精溶液(黑色)。YHZ,YHZ,2。耳緣孔切割法:是在動物的耳緣上切割不同的縫隙或制作不同的孔來做標記的方法。為了防止洞和嘴愈合,通常在打孔后在洞和嘴上涂消毒滑石粉。數(shù)字由打孔或切割位置和孔號表示。一般來說,耳朵上、中、下都有孔,分別代表1、2和3。相應(yīng)位置的切口代表4、5和6,兩個切口代表7、8和9,無孔或切口為10。通常,左耳代表一位數(shù),右耳代表十位數(shù)。3.品牌化方法:在動物無毛或明顯的部位,如耳朵、臉、鼻子和四肢等部位打孔或打品牌。然后將溶解在酒精中的黑色墨水涂在針灸處。該方法適用于大中型實驗動物,操作時應(yīng)注意防止感染。(4)號牌法:用特殊的金屬號牌固定在實驗
5、動物的耳朵或脖子上,貼標簽時注意避開血管。該方法適用于小動物,尤其是轉(zhuǎn)基因動物的培養(yǎng)和實驗。(5)籠子編號法:對裝有動物的籠子進行編號而不標記它們的身體也稱為替代法。,YHZ,第1節(jié),實驗動物的抓取和固定,YHZ,第2節(jié),實驗動物的抓取和固定,YHZ,第1節(jié),小鼠的抓取和固定:設(shè)備:小鼠飼養(yǎng)箱面罩1套。方法:1 .用右手的拇指和食指抓住老鼠尾巴的中間部分,提起老鼠,放在喂食面罩上。2.用左手的拇指和食指快速準確地抓住耳朵后面和脖子后面的皮膚,然后舉起鼠標。YHZ,3。翻轉(zhuǎn)左手掌,用左手掌和中指夾住鼠標背面的皮膚,使整個鼠標成一直線。4.用左手無名指按壓鼠標背面的皮膚,用小指按壓鼠標尾根。5.松
6、開握住老鼠尾巴的右手的拇指和食指。YHZ,YHZ,手術(shù)固定方法:用乙醚等麻醉藥物麻醉后,用2030厘米長的繩子將四肢綁好,然后將四肢的繩子綁在固定板四角的釘子上,在頭部上顎切牙的地方拉一根繩子,實現(xiàn)完全固定。靜脈給藥時,首先根據(jù)小鼠的大小選擇合適的固定器,打開小鼠桶的蓋子,將小鼠放入其中,只露出尾部;或者用倒置的燒杯扣住老鼠,只露出它的尾巴并按住它。YHZ,2。老鼠的抓取和固定。大鼠的抓取和固定:45周大的大鼠和小鼠;大老鼠尾巴的皮膚很容易剝落,所以用左手從背部中央到胸部捏它。抓握時最好戴上防護手套,但手套不應(yīng)太厚。手固定:和老鼠一樣。手術(shù)固定:和老鼠一樣。靜脈注射或采血與小鼠相同。YHZ,Y
7、HZ,YHZ,3。豚鼠的抓取和固定,抓取方法:抓取小豚鼠時,用手握??;成熟的豚鼠可以用手抓住胸部和肋骨。小心不要粗魯,更別說抓住腰部和腹部,這很容易導(dǎo)致肝臟破裂和死亡。手固定法:將左手食指和中指放在豚鼠頸部和背部兩側(cè),拇指和無名指放在肋骨上,用手指抓住左右前肢。將左手倒置,用右手拇指和食指夾住右后肢,用中指和無名指夾住左后肢,使整個豚鼠伸直成一條直線。當一個人被固定后,他坐在椅子上,用右手將豚鼠的后腿夾在兩腿之間,并用大腿而不是右手夾住它們。手術(shù)固定:大小和老鼠一樣。方法步驟:1 .首先,用左手輕輕扣住并按壓豚鼠背部。2.抓住肩胛骨上方的皮膚,用拇指和食指環(huán)住頸部。3.用你的右手輕輕握住臀部,
8、你可以抓住豚鼠。YHZ,IV。兔子的抓取和固定。抓握方法:一只手抓住頸部和背部的皮膚,另一只手握住臀部,讓重心落在握住臀部的手上。運輸時,抓住頸部和肩部的皮膚,抓住兔子以便運輸。手固定法:胃內(nèi)給藥時,人坐在椅子上,用一只手抓住頸部和背部的皮膚,用另一只手抓住兩條后腿并放在兩腿之間,用大腿夾住兔子的下體,用空手抓住兩條前肢并固定住它們,握住兩只耳朵的同時抓住頸部和背部的手以防止頭部轉(zhuǎn)動。YHZ,fixat or fixat or fixat or fixat or fixat or fixat or fixat or fixat or fixat or fixat or fixat or fix
9、at or fixat or fixat or fixat or fixat or fixat or fixa固定臺用于從頸動脈采血或外科實驗。盒子固定方法:將兔子放入只露出頭部的盒子中,轉(zhuǎn)動固定器固定兔子。固定臺方法:將麻醉后的兔子放在背上,依次用紗布條綁住四肢,固定在固定臺的兩側(cè),然后將頭部固定在金屬頭帶和噴嘴環(huán)上。YHZ,兔子抓保定方法1:步驟1。用右手握住兔子的耳朵,抓住脖子后面的皮膚,舉起兔子。2.然后用左手握住兔子的臀部。YHZ,方法2:設(shè)備:兔子固定架步驟1。打開固定架上蓋,抓住兔子放入固定架,迅速合上固定架上蓋。2.用右手抓住兔子的耳朵,YHZ,5。狗的抓取和固定:首先,給狗帶
10、上一個帶有鏈條的項圈。對于性情兇猛的狗,用一只特殊的鉗形長柄狗夾住狗的脖子,然后把狗壓下去,然后系上項圈和鏈子。手固定法:首先,綁住狗的嘴,也就是說,飼養(yǎng)員或狗主人從側(cè)面靠近,輕輕地觸摸它的脖子上的毛,然后迅速用布帶綁住狗的嘴,然后從下顎到上顎打一個結(jié),然后在后頸頭上打一個結(jié),在脖子后面再打一個結(jié),最后打一個活結(jié)。對于未馴服的狗來說,狗的脖子可以用一個長柄的狗夾子夾住,然后強迫它把嘴打結(jié)。手術(shù)臺固定方法:麻醉后,松開布帶,將狗仰臥在手術(shù)臺上,先固定四肢,然后固定頭部。YHZ,YHZ,VI .猴子的抓取和固定:當從籠中抓取時,飼養(yǎng)員應(yīng)該用右手握住短柄網(wǎng),左手靠近門側(cè),以防止籠門打開時猴子逃跑。用
11、右手將網(wǎng)罩放入籠中,從上到下蓋住。當猴子被蓋住時,立即將網(wǎng)蓋從籠子里翻出來,將猴子蓋在地上,從網(wǎng)蓋外面抓住猴子的脖子,提起網(wǎng)蓋,然后抽出猴子的手臂并將其抱回。固定方法:1 .徒手固定:將猴子的前肢放在背后,用一只手抓住它們,用另一只手抓住猴子的后肢。2.固定架的固定:使用“猴子約束椅”或“猴子固定架”進行固定,YHZ、YHZ、VII。豬的抓取和固定。抓取方法:小豬經(jīng)常用雙手抬起后腿,用雙膝將豬背朝下;成年豬可以通過站立來固定。固定方法:可將豬背部放入V型槽內(nèi)固定,或用木制三角固定架和帆布掛包固定(挖四個孔使其四肢向下伸展)。如果你沒有三腳架,你可以用一只狗來修理桌子。(1)常用麻醉劑(1)揮發(fā)
12、性麻醉劑包括乙醚、氯仿和異氟烷。(2)非揮發(fā)性麻醉劑包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙酯、水合氯醛、氯胺、賽拉嗪、速眠新和氨基甲酸乙酯。(3)中藥麻醉劑包括洋金花和氫溴酸東莨菪堿等。第三節(jié):實驗動物麻醉。2.動物麻醉方法(1)全身麻醉1。吸入麻醉:乙醚經(jīng)常被用作麻醉劑。將裝有乙醚的棉球放入玻璃容器中,揮發(fā)后將動物放入容器中46分鐘,失去運動能力后立即取出動物,以免因過度麻醉而死亡。這種方法主要用于短期操作實驗。乙醚麻醉具有快速蘇醒的優(yōu)點,但對呼吸道有刺激性,易窒息而死。2.注射麻醉:大鼠、小鼠和豚鼠常采用腹腔注射進行全身麻醉,狗、貓和兔可采用腹腔注射或靜脈注射。注射時,使用麻醉劑
13、總量的2/3,并密切觀察動物生命體征的變化。如果麻醉已經(jīng)達到了所需的水平,就不會使用其余的麻醉劑,以免由于麻醉過深而抑制大腦的呼吸中樞而導(dǎo)致動物死亡。各種動物常用的全身麻醉藥的劑量和途徑劑量(mg/kg體重)給動物注射戊巴比妥、巴比妥、硫菌靈、異戊烷、氯胺酮、氯醛、氨基甲酸乙酯途徑、鈉、鈉、鈉和鈉(20%) (1% 3%) (1% 2%) (5%) (10%),小鼠注射I . P 5080 200/1520 100 100200/I . M ./1350大鼠注射I.P 4050 200利多卡因是常用的藥物,通過眼部用藥、鼻腔用藥、咽喉和氣管藥物噴霧和尿道灌注給藥。2.區(qū)域阻滯麻醉:在手術(shù)區(qū)周圍
14、和底部注射麻醉劑以阻斷疼痛的向心傳導(dǎo),稱為區(qū)域阻滯麻醉。常用的普魯卡因。3.神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉:在神經(jīng)干(叢)周圍注射麻醉藥物,阻斷其傳導(dǎo),使其支配區(qū)域的疼痛消失,稱為神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉。利多卡因是常用的。4.局部浸潤麻醉:沿手術(shù)切口逐層注射局部麻醉劑,阻斷組織中的神經(jīng)末梢,稱為局部浸潤麻醉。常用的普魯卡因。YHZ,3。麻醉注意事項,1。一些麻醉劑,如乙醚,具有高度揮發(fā)性和易燃性,因此在使用時應(yīng)遠離火源,平時應(yīng)妥善保存。2.應(yīng)特別注意各種麻醉劑的劑量和給藥途徑,不應(yīng)因劑量過大而導(dǎo)致中毒或死亡。3.注射時,一般要求緩慢注射,并隨時觀察動物的肌肉張力、角膜反射、呼吸頻率、疼痛反射等指標。4.注
15、意保溫,實驗桌采用燈具、電動床墊和臺燈。5.如出現(xiàn)過度麻醉,應(yīng)根據(jù)不同情況采取措施,如人工呼吸、蘇醒或注射強心劑、咖啡因、腎上腺素、氯胺酮等?;蜢o脈注射5%的溫熱葡萄糖溶液。YHZ,1。小鼠給藥方法:(1)灌胃給藥(口服給藥)原則:將藥液直接注入小鼠胃內(nèi)。設(shè)備:1只小鼠胃注射針頭、1只注射器、1個小鼠飼養(yǎng)箱面罩、生理鹽水和燒杯。第4節(jié)管理方法,YHZ,方法步驟:1。將胃灌注針連接到注射器上,并吸入一定量的藥液。2.用左手握住鼠標,使鼠標的頭部朝上。3.用右手從小鼠的嘴角將胃灌注針的尖端插入小鼠的口咽,并沿著咽的后壁輕輕向下推。胃灌注針將沿著食道滑入小鼠的胃中。胃輸注針插入約3厘米。4,用右手食指慢慢壓下針栓,將注射器中的藥液倒入小鼠胃中。YHZ,最大劑量:0.4毫升10克體重。注意:避免在胃灌注時誤插入氣管。YHZ,(2)注射1。皮下注射:原理:藥液注入皮下結(jié)締組織,通過毛細血管和淋巴管吸收到血液循環(huán)中。設(shè)備:1 1m1注射器、生理鹽水、燃燒杯、酒精、碘和棉球。方法步驟:(1)注射部位:選擇小鼠頸背皮下。(2)對注射部位的皮膚進行常規(guī)消毒,并用注射針以銳角刺入皮膚。(3)將針頭輕輕向左和向右擺動,這意味著它已經(jīng)穿透皮膚,然后輕輕吮吸。如果沒有血液回流,可以將藥物緩慢注入皮膚。注射量:0.01毫升10.03毫升體重。,YHZ,2。肌肉注射原理:將藥液注入動物的肌肉組織,通過毛細
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