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1、Ki-67簡介,應(yīng)用機理,Ki-67是在細胞G1，S，G2和M期出現(xiàn)的核抗原，由于其半衰期短，可以準確反映細胞的增殖活性，已廣發(fā)應(yīng)用與多種腫瘤的增殖活性測定。但其表達易受炎癥和激素變化的而影響，如月經(jīng)周期的黃體期和妊娠期，鱗狀上皮基底上層細胞ki-67表達增加，,免疫組化簡介,免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochem

2、istry)。,免疫組化染色方法,SP法 將組織切片脫蠟，梯度酒精入水，在檸檬酸鹽抗原修復(fù)液中修復(fù)，PBS緩沖液清洗，加入1:50稀釋的ki-67蛋白抗體室溫下孵育1h,標記辣根過氧化物酶的抗鼠二抗，室溫下孵育45min，DBA顯色，Mayer蘇木精復(fù)染，,染色結(jié)果判定,以棕褐色顆粒位于細胞核內(nèi)判定為陽性染色結(jié)果，并根據(jù)Beesley分級法，按照陽性細胞數(shù)的比例將染色結(jié)果分為四級，0級：陽性細胞數(shù)05%,1級：陽性細胞數(shù)位6%-25%，2級：陽性細胞數(shù)26%-50%，3級：陽性細胞數(shù)為50%以上，同時計算陽性率的方法設(shè)定為：1.陽性率：指一級和一級以上的陽性染色病例百分數(shù)，2.強陽性率：指2級以及2級以上的陽性染色病例百分數(shù)。,在不同癌細胞中表達結(jié)果,Ki-67蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN-1）中的陽性表達率為57.1%，在CIN-2陽性表達率是76.9%，CIN-3陽性表達率是81.8%在子宮鱗癌和腺癌中，ki-67的陽性信號明顯增強，而且陽性表達率鱗癌中為88.5%在腺癌中為93.8%，與正常組織相比，ki-67蛋白在CIN，鱗癌和腺癌的表達率明顯增高，而

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